Dpep ni peptidi decoy inayopenya seli, iliyoundwa kuvuka utando wa seli na kuvuruga utendaji wa vipengele vya unukuzi vya bZIP vinavyoitwa ATF5, CEBPB na CEBPD. Utafiti huu, badala ya kutathmini upya tu athari ya Dpep peke yake, unachunguza kama kuunganisha Dpep na BH3-mimetic ya pro-apoptotic ABT-263 pamoja na dawa ya hypomethylating decitabine kunaweza kutoa athari yenye nguvu zaidi katika seli mbalimbali za saratani, na kama michanganyiko hiyo inaweza kufanya kazi pia katika seli zilizopata upinzani dhidi ya Dpep. Utafiti si jaribio la matibabu kwa binadamu; majaribio makuu yalifanywa katika utamaduni wa seli, na mchanganyiko wa Dpep + ABT-263 pia ulijaribiwa katika modeli ya xenograft ya panya wenye upungufu wa kinga iliyoundwa kutoka kwa seli za melanoma A375.

Katika majaribio ya in vitro, seli za A375-ATCC zenye asili ya melanoma, HCT116 za saratani ya koloni, T98G za glioblastoma, MCF7 za saratani ya matiti, K562 za leukemia sugu ya myeloid na MOLM-14 za leukemia kali ya myeloid zilitathminiwa. Dpep peke yake ilionyesha thamani za IC50 za takriban 20 µM katika A375-ATCC, HCT116, T98G na MCF7; takriban 9 µM katika K562 na takriban 10 µM katika MOLM-14. Mchanganyiko wa ABT-263 na Dpep ulionyesha athari ya sinergia yenye umuhimu katika mistari yote sita mikuu ya seli iliyochunguzwa. Mchanganyiko wa Dpep + decitabine ulionyesha sinergia yenye umuhimu katika A375-ATCC, HCT116, T98G, MCF7 na K562; kwa MOLM-14, mwelekeo kuelekea sinergia uliripotiwa.

Watafiti walilenga kuondoa sehemu kubwa ya seli za uvimbe katika utamaduni kwa kutumia michanganyiko inayofaa ya dozi. Katika mchanganyiko wa Dpep + ABT-263, katika mistari minne kati ya sita mikuu ya seli, matumizi ya 20–40 µM Dpep pamoja na 1–2 µM ABT-263 yalipunguza idadi ya seli kwa zaidi ya %90. Katika seli za MOLM-14 ambazo ni nyeti sana kwa ABT-263, 20 µM Dpep + 10 nM ABT-263 ilisababisha upotevu wa seli wa zaidi ya %90, huku katika seli za K562 ambazo zina upinzani wa kiasi kwa ABT-263, 10 µM Dpep + 2 µM ABT-263 ilisababisha upotevu wa seli wa takriban %80.

Katika michanganyiko mitatu ya Dpep + decitabine + ABT-263, kwa kutumia dozi zinazotegemea mstari wa seli, angalau mchanganyiko mmoja uliotambuliwa uliweza kupunguza idadi ya seli kwa zaidi ya %90 katika mistari yote mikuu ya seli iliyochunguzwa. Katika mistari mitano kati ya sita, angalau mchanganyiko mmoja wa dawa tatu ulionyesha sinergia yenye umuhimu; katika MOLM-14, mwelekeo wa kitakwimu kuelekea sinergia uliripotiwa. Kinyume chake, jozi ya ABT-263 + decitabine haikuonyesha sinergia yenye umuhimu katika mistari ya seli iliyojaribiwa isipokuwa K562. Matokeo haya yanaunga mkono kwamba athari katika michanganyiko ya dawa tatu haitokani tu na ABT-263 na decitabine kuimarishana.

Sehemu muhimu ya utafiti ilijikita katika upinzani wa dawa. Seli za HCT116 zilichaguliwa katika mazingira ya in vitro chini ya shinikizo la Dpep lililoanza 5 µM na kuongezwa hadi 10, 15 na 20 µM, na hivyo kuwa sugu; thamani ya Dpep IC50 ya seli hizi ilipanda kutoka takriban 20 µM hadi >40 µM. Licha ya hilo, michanganyiko ya Dpep + ABT-263 na Dpep + decitabine ilitoa mwitikio mkubwa wa sinergia katika seli sugu za HCT116, na hali za michanganyiko ya dawa tatu zilizopunguza idadi ya seli sugu kwa zaidi ya %90 zilipatikana. Katika mistari miwili tofauti ya seli sugu iliyotokana na uvimbe wa A375 melanoma uliokua tena chini ya matibabu ya in vivo ya Dpep au Dpep123, matibabu ya mchanganyiko pia yaliweza kushinda upinzani wa Dpep.

Katika jaribio la xenograft ya melanoma kwa panya, Dpep na ABT-263 kila moja peke yake zilipunguza kasi ya ukuaji wa uvimbe na kuongeza muda wa kuishi; mchanganyiko ulisababisha ukandamizaji mkubwa zaidi wa uvimbe na muda mrefu zaidi wa kuishi kuliko kila monotherapy. Katika kundi la Dpep + ABT-263, panya 4 kati ya 10 walifikia mwisho wa siku 60 za matibabu. Matibabu yalikatishwa baadaye na wanyama wakafuatiliwa kwa siku 30 zaidi; kwa wanyama waliokuwa hai siku ya 60, hakuna uvimbe uliogunduliwa mwishoni mwa ufuatiliaji kwa palpation au histolojia. Ingawa sehemu ya Highlights ya makala inaita matokeo haya, katika alama za nukuu, “%40 cure rate”, usemi huu unahusu tu jaribio hili la xenograft ya panya na hauwezi kutafsiriwa kama kiwango cha kliniki cha kupona kwa binadamu.

Utafiti hauonyeshi kwamba Dpep ni matibabu ya kliniki yenye ufanisi au salama kwa binadamu. Modeli ya nude mouse xenograft haina mfumo kamili wa kinga; aina moja tu ya uvimbe ilijaribiwa in vivo kwa mchanganyiko wa Dpep + ABT-263, na sampuli zilizopatikana moja kwa moja kutoka uvimbe wa wagonjwa hazikuchunguzwa. Hitimisho la utafiti linaunga mkono kwamba michanganyiko inastahili kuchunguzwa zaidi katika hatua ya kabla ya kliniki; halionyeshi ufanisi wa matibabu uliothibitishwa kwa binadamu.

Tatizo kuu la utafiti ni nini?

Ukuaji wa seli za saratani hautegemei njia moja tu ya ishara. Programu za unukuzi zinazosaidia uhai wa seli, protini za anti-apoptotic na mabadiliko ya epijenetiki zinaweza kuanza kufanya kazi kwa wakati mmoja. Hali hii inaweza kusababisha upinzani kuendelea kuibuka baada ya muda hata ikiwa tiba inayolenga shabaha moja ni yenye ufanisi mwanzoni.

Dpep ilitengenezwa awali kama peptidi ya majaribio inayokandamiza ukuaji na uhai katika aina nyingi za seli za uvimbe. Hata hivyo, tafiti za awali zilionyesha kuwa ingawa matibabu ya Dpep yanaweza kukandamiza baadhi ya uvimbe kwa muda mrefu, sehemu ya uvimbe inaweza kuanza kukua tena wakati matibabu yanaendelea. Hali hii inaonyesha kuwa upinzani wa Dpep unapaswa pia kuchunguzwa kwa namna inayofanana na tatizo la upinzani linaloonekana katika matibabu mengine ya saratani.

Utafiti huu una maswali mawili makuu:

1. Je, Dpep inapounganishwa na mawakala wengine wa kupambana na saratani inaweza kutoa athari yenye nguvu zaidi kuliko inavyotarajiwa ikiwa peke yake, yaani athari ya sinergia?
2. Je, michanganyiko hii inaweza pia kukandamiza seli za saratani ambazo zimepata upinzani dhidi ya Dpep?

Dpep ni Nini na Inalengaje ATF5, CEBPB na CEBPD?

Dpep ni peptidi ya majaribio inayounganisha mfuatano wa penetratin unaowezesha kuingia ndani ya seli na mfuatano wa decoy uliotokana na eneo la leucine-zipper la CEBPD, na imeundwa kushindana na dimerization ya kiutendaji ya ATF5, CEBPB na CEBPD ili kukandamiza shughuli za vipengele hivi vya unukuzi.

ATF5, CEBPB na CEBPD ni nini?

ATF5, CEBPB na CEBPD ni basic leucine zipper — bZIP vipengele vya unukuzi vya familia hiyo. Kipengele cha unukuzi ni protini inayodhibiti kiwango ambacho jeni fulani huonyeshwa.

Ili kudhibiti ekspresheni ya jeni, protini hizi tatu lazima ziunde dimer na kila mmoja au na wenzao kupitia maeneo ya leucine zipper. Kwa maneno mengine, protini mbili huungana kupitia kiolesura fulani cha kimuundo na kuunda kompleks yenye kazi.

Dpep hutumia hitaji hili la kimuundo. Peptidi imeundwa kufanya kazi kama “decoy”, yaani mshirika wa kuunganika wa bandia, unaoweza kuingiliana na maeneo ya leucine zipper ya protini lengwa. Kwa njia hii inalenga kuvuruga mtandao wa kawaida wa dimerization wa ATF5/CEBPB/CEBPD na kupunguza shughuli zao za unukuzi.

Peptidi inayopenya seli ina maana gani?

Protini au peptidi nyingi haziwezi kuvuka utando wa seli kwa ufanisi zenyewe. Mfuatano wa penetratin uliopo kwenye sehemu ya N-terminal ya Dpep hufanya kazi kama cell-penetrating motif inayosaidia peptidi kufika ndani ya seli.

Kwa hiyo Dpep inaweza kufikiriwa kama muunganiko wa sehemu mbili za kiutendaji:

• eneo la penetratin linalowezesha kuingia ndani ya seli,
• eneo la decoy linalolenga mwingiliano wa leucine zipper wa ATF5/CEBPB/CEBPD.

Mifuatano ya peptidi iliyotumiwa katika utafiti

Peptidi ziliyeyushwa katika PBS pH 7,2 yenye %10 glycerol, zikahifadhiwa kama aliquot za 2 mM katika −80 °C, na kupunguzwa hadi konsentrasheni zinazohitajika katika majaribio.

Kwa nini jaribio la Dpepmut ni muhimu?

Kupungua kwa idadi ya seli za saratani kwa peptidi hakuthibitishi peke yake kwamba mekanizimu lengwa ya leucine zipper ni sahihi; peptidi inaweza pia kuwa na athari nyingine zisizo maalumu.

Kwa hiyo watafiti walitumia Dpepmut inayovuruga amino asidi muhimu za mwingiliano wa leucine zipper. Katika seli za T98G, Dpepmut peke yake ilionyesha shughuli ndogo sana kuliko Dpep na haikuunda sinergia na ABT-263.

Waandishi wanatafsiri matokeo haya kama msaada kwamba muundo wa leucine zipper ni muhimu ili sinergia ya Dpep + ABT-263 ionekane kikamilifu, na kwamba athari haiwezi kuelezwa tu na athari ya jumla au ya bahati nasibu ya peptidi.

Ingawa jaribio hili ni udhibiti wenye nguvu wa umaalumu, si uchoraji ramani wa kina wa molekuli unaoondoa peke yake mekanizimu zote zinazowezekana za off-target.

Kwa nini ABT-263 ilichaguliwa kuwa mshirika wa mchanganyiko?

ABT-263, inayojulikana pia kama navitoclax, ni kiwanja cha BH3-mimetic kinacholenga protini BCL2, BCLXL na BCL-W/BCL2L2 za familia ya pro-survival BCL2.

Apoptosis ni mekanizimu ya kifo kilichopangwa cha seli. Seli za saratani zinaweza kutumia protini za anti-apoptotic kama familia ya BCL2 kupinga ishara za kifo.

Katika tafiti za awali za Dpep, iliripotiwa kuwa BMF ya pro-apoptotic iliongezeka na protini zinazosaidia uhai kama survivin/BIRC5 zilipungua. Kwa sababu hiyo watafiti walitabiri kuwa katika mazingira ambayo Dpep inasukuma seli kuelekea apoptosis, kukandamiza zaidi familia ya BCL2 kwa ABT-263 kunaweza kusababisha kifo kikubwa zaidi cha seli.

Hata hivyo, utafiti wa sasa haujathibitisha moja kwa moja maelezo haya ya “apoptotic threshold” kwa majaribio ya kina ya molekuli. Katika sehemu ya majadiliano, mekanizimu hii imewasilishwa wazi kama hipotesi na msingi wa kibiolojia.

Kwa nini Decitabine ilichaguliwa kuwa mshirika wa mchanganyiko?

Decitabine ni wakala wa hypomethylating unaoweza kupunguza kiwango cha DNA methylation. Katika seli za saratani, kunyamazishwa kwa baadhi ya jeni za tumor suppressor na pro-apoptotic kutokana na hypermethylation kunaweza kuchangia upinzani wa matibabu.

Katika ulinganisho wa transcriptome wa seli za A375 zinazopinga Dpep, ilionekana kuwa jeni mbalimbali za tumor suppressor zilikuwa zimepungua udhibiti na sehemu muhimu ya jeni hizi imehusishwa na hypermethylation katika fasihi. Uchunguzi huu ulitoa msingi wa kibiolojia wa kuchanganya decitabine na Dpep.

Hata hivyo, utafiti haukupima moja kwa moja hali ya methylation ya kila jeni katika seli sugu wala kuonyesha mnyororo wa mekanizimu wa aina ya “decitabine ilivunja upinzani kwa kuondoa methylation hasa kwenye jeni hii”.

Sinergia Inamaanisha Nini Katika Utafiti Huu?

Sinergia ni hali ambapo athari ya kupunguza seli inayotokana na mawakala wawili au watatu kwa pamoja ni kubwa kuliko athari ya pamoja inayotarajiwa ikiwa mawakala hao wangefanya kazi kwa kujitegemea; utafiti ulitathmini hili hasa kwa modeli ya Bliss independence na, kwa Dpep/Bpep–ABT-263, pia kwa isobologram za CompuSyn zinazotegemea Chou–Talalay.

Mkabala wa Bliss independence

Chanzo kinatumia modeli ya Bliss lakini hakiandiki kwa muundo wa mlinganyo. Usemi ulio hapa chini ni uwakilishi wa kawaida wa dhana uliotolewa tu kufundisha jinsi mbinu inavyofanya kazi; si ugunduzi mpya wa utafiti.

Iwapo sehemu za seli zinazobaki hai baada ya matibabu mawili ni \(V_A\) na \(V_B\) kati ya 0 na 1, basi uhai wa pamoja unaotarajiwa ikiwa mawakala watafanya kazi kwa kujitegemea ni takriban:

\[ V_{A+B,\mathrm{beklenen}}=V_A\times V_B \]

huonyeshwa hivyo.

Kwa mfano, ikiwa baada ya matibabu A %60 ya seli hubaki na baada ya matibabu B %50 hubaki, uhai wa pamoja unaotarajiwa chini ya kujitegemea ni:

\[ 0{,}60\times0{,}50=0{,}30 \]

yaani %30.

Ikiwa kwa kweli baada ya mchanganyiko seli chache zaidi kwa kiwango kinachoonekana hubaki hai, athari hiyo ni kubwa kiasi kwamba haiwezi kuelezwa kwa kujumlisha tu athari mbili zinazojitegemea na hutathminiwa kuwa inaunga mkono sinergia.

Nguzo zenye mistari katika grafu za chanzo zinaonyesha idadi ya seli inayotarajiwa iliyohesabiwa kwa dhana hii ya kujitegemea. Nyota za kitakwimu katika paneli nyingi zinalinganisha tofauti kati ya matokeo ya mchanganyiko yaliyoonekana na thamani hii huru inayotarajiwa.

Isobologram ya Chou–Talalay ni nini?

Utafiti pia ulichanganua michanganyiko ya Dpep/Bpep na ABT-263 katika seli za T98G na MCF7 kwa programu ya CompuSyn 1.0 na mbinu ya Chou–Talalay median-effect.

Katika isobologram, michanganyiko tofauti ya dozi za dawa mbili zinazotoa athari ileile ya kibiolojia huonyeshwa kijiometria. Katika tafsiri ya normalized isobologram iliyotumiwa na makala, kuwepo kwa nukta upande wa kushoto wa mstari wa rejea wa diagonal wa independent/additive kunaendana na sinergia.

Chanzo hakiripoti jedwali la thamani maalumu za combination-index; kwa hiyo Verianla haitengenezi namba za CI ambazo hazipo katika chanzo.

IC50 ina maana gani?

IC50 ni konsentrasheni ya wakala inayopunguza mwitikio wa seli unaopimwa kwa takriban %50 katika hali za majaribio zinazochunguzwa. Katika utafiti huu, seli zilitibiwa kwa siku 5–6 na idadi ya seli zilizobaki ilitathminiwa.

Kwa hiyo IC50 hapa haimaanishi moja kwa moja dozi ya matibabu kwa binadamu. Ni konsentrasheni ya mazingira ya utamaduni wa seli kwa kipimo cha µM.

Kwa nini uhai wa seli ulipimwa kwa kuhesabu badala ya kipimo cha kimetaboliki?

Watafiti walitumia hemocytometer au Countess II automatic cell counter katika seli za solid-tumor. Sababu ni kwamba Dpep ilikuwa imeonekana awali kubadilisha metaboli ya seli. Baadhi ya viability assay zinazotegemea shughuli za kimetaboliki zinaweza kutafsiriwa vibaya kwa sababu hali ya kimetaboliki hubadilika hata kama seli bado inaendelea kuishi.

Katika seli za suspension kama K562 na MOLM-14, Trypan Blue ilitumika kutenganisha moja kwa moja seli hai na zilizokufa.

Kwa mujibu wa ufafanuzi wa chanzo, mantiki ya msingi ya asilimia ya uhai ni:

\[ \text{Canlılık (\%)}= \frac{\text{canlı hücre sayısı}} {\text{toplam hücre sayısı}} \times100 \]

kwa namna hiyo.

“WT” ina maana gani hapa?

Usemi uliotumiwa katika makala WT — wild type katika muktadha huu hutumiwa hasa kutofautisha mistari ya mwanzo ya seli za saratani ambayo haikuchaguliwa mahsusi kwa upinzani wa Dpep na vizazi vyake sugu. “WT” hapa haimaanishi kwamba seli ni za kawaida au hazina saratani; zote ni mistari ya seli yenye asili ya saratani.

“Liquid tumor” ina maana gani?

Usemi wa chanzo “liquid tumor” unarejelea seli zenye asili ya malignancy ya hematolojia kama K562 na MOLM-14. K562 ni modeli ya leukemia sugu ya myeloid, na MOLM-14 ni modeli ya leukemia kali ya myeloid. Usemi “uvimbe wa kimiminika” haumaanishi kimwili kwamba kuna molekuli ya uvimbe iliyo kimiminika.

Upinzani wa Dpep Uliundwaje na Ulishindwaje?

Utafiti uliunda modeli ya upinzani wa Dpep kwa njia mbili tofauti: seli za HCT116 zilichaguliwa in vitro kwa kuwekwa kwenye konsentrasheni za Dpep zinazoongezeka hatua kwa hatua katika maabara, huku seli sugu za A375 zikipatikana kutoka xenograft za melanoma za panya zilizokua tena chini ya Dpep au Dpep123; katika modeli zote mbili, mchanganyiko wa Dpep na ABT-263 na/au decitabine ulikandamiza seli sugu kwa nguvu zaidi kuliko Dpep peke yake.

Modeli ya upinzani ya HCT116

Seli za HCT116 ziliwekwa kwanza kwenye 5 µM Dpep. Kadiri seli zilizosalia zilivyofikia tena proliferesheni thabiti, dozi iliongezwa kwa mpangilio hadi 10, 15 na 20 µM.

Utamaduni sambamba wa udhibiti ulihifadhiwa kwa muda huo huo chini ya masharti yale yale ya passage lakini ulipokea %10 glycerol/PBS vehicle badala ya Dpep.

Seli sugu za HCT116 zilizopatikana baadaye zilihifadhiwa katika mazingira yenye 10 µM Dpep.

Katika seli za udhibiti za HCT116, Dpep IC50 ilikuwa takriban 20 µM, ilhali katika seli sugu ilikuwa >40 µM. Hii inaonyesha kwamba unyeti wa seli kwa Dpep ulipungua kwa kiasi kikubwa.

Hata hivyo, unyeti wa seli sugu za HCT116 kwa ABT-263 na decitabine ulibaki karibu sawa na wa seli za udhibiti. Michanganyiko ya Dpep + ABT-263 na Dpep + decitabine iliunda tena sinergia kubwa katika seli sugu; kwa michanganyiko inayofaa ya dawa tatu, idadi ya seli iliweza kupunguzwa kwa zaidi ya %90.

Modeli ya in vivo ya upinzani ya A375

Modeli ya pili ya upinzani ilitokana moja kwa moja na uvimbe wa melanoma A375-ATCC uliokua katika panya.

Xenograft zilizotibiwa kwa Dpep au umbo hai la Dpep123 lililofupishwa amino asidi 10 kutoka C-terminal zilidhibitiwa mwanzoni, lakini baada ya matibabu ya muda mrefu baadhi ya uvimbe ulianza kukua tena.

Kutoka kwenye uvimbe huu, tamaduni ziliundwa na:

• A375 Dpep-resistant#1,
• A375 Dpep-resistant#2

mistari ilipatikana.

Kutoka kwa uvimbe wa panya waliotibiwa kwa vehicle, tamaduni za A375 Dpep-responsive#1 na A375 Dpep-responsive#2 ziliundwa kwa ajili ya kulinganisha.

Katika mistari yote miwili sugu ya A375, thamani ya Dpep IC50 ilikuwa takriban 40 µM au zaidi, huku unyeti kwa decitabine na ABT-263 ukibaki karibu zaidi na seli za mwanzo.

Mchanganyiko wa Dpep na ABT-263 na/au decitabine ulionyesha mwitikio wa sinergia katika mistari yote miwili sugu ya A375, na hali za michanganyiko ya dawa tatu zilipatikana ambazo zilisababisha upotevu wa seli wa zaidi ya %90.

Ulinganisho wa transcriptome ulionyesha nini kuhusu upinzani?

Watafiti, badala ya kufanya RNA sequencing mpya, walichanganua upya seti ya data ya Plate-seq iliyochapishwa hapo awali. Transcriptome za seli za A375 Dpep-resistant#1 na A375 Dpep-responsive#1 zililinganishwa kabla ya matibabu ya Dpep na baada ya matibabu ya saa 48 kwa 20 µM Dpep.

Upinzani haukuendelea kwa njia ya kupotea kwa majibu yote ya molekuli kwa Dpep. Kati ya jeni 37 zilizojibu Dpep katika A375-ATCC na seli responsive, 21 zilionyesha kwa ujumla mwitikio unaofanana pia katika seli sugu.

Kabla ya Dpep kutolewa, kati ya seli resistant na responsive jeni zaidi ya 200 zenye ekspresheni tofauti zilitambuliwa na takriban %70 yake zilikuwa na ekspresheni ya chini zaidi katika seli sugu.

Kwa kuongeza, jeni 26 zilizokuwa tofauti kabla ya matibabu ya Dpep na ambazo zilijibu Dpep tu katika seli responsive na hivyo kuongeza tofauti zaidi zilitambuliwa; 20 kati yake zilikuwa downregulated katika seli sugu.

Miongoni mwa jeni zilizokuwa upregulated katika seli sugu kulikuwa na jeni 8 zilizotambuliwa katika fasihi kama oncogene, huku miongoni mwa jeni zilizokuwa downregulated kulikuwa na jeni 14 zilizotambuliwa kama tumor suppressor.

Waandishi wanatafsiri muundo huu kama unaounga mkono uwezekano kwamba sehemu ya upinzani wa Dpep inaweza kuhusishwa na kuongezeka kwa programu za pro-survival oncogenic na kupungua kwa programu za tumor-suppressor zinazoweza kuunga mkono apoptosis.

Hata hivyo, ulinganisho wa transcriptome ulifanywa kwa kina kwa jozi moja tu ya A375 responsive/resistant. Kwa hiyo haiwezi kusemwa kuwa muundo huu wa kijeni/kiepijenetiki ni mekanizimu ya pamoja katika saratani zote sugu kwa Dpep.

Kwa nini jaribio la NK-92MI lilifanywa?

Natural killer — seli za NK ni seli za mfumo wa kinga wa asili zinazoweza kuua seli malignant. Utafiti wa awali wa watafiti ulionyesha kuwa seli za uvimbe zilizotibiwa mapema kwa Dpep zilikuwa nyeti zaidi kwa athari ya kuua ya seli za NK-92MI.

Katika utafiti huu, seli za HCT116 zilitibiwa mapema kwa saa 48 chini ya masharti haya:

• 20 µM Dpep,
• 20 µM Dpep + 1 µM ABT-263,
• 20 µM Dpep + 1 µM decitabine

.

Kisha seli za NK-92MI ziliongezwa kwa uwiano wa effector-to-target wa 2,5:1 na kukuzwa pamoja kwa saa 24 zaidi chini ya masharti yale yale ya dawa.

Matibabu ya awali ya ABT-263 na decitabine kila moja peke yake yalifanya seli za HCT116 ziwe nyeti kwa kuuliwa na NK-92MI kwa namna inayofanana na Dpep. Matibabu ya awali ya Dpep + ABT-263 na Dpep + decitabine yalionyesha uongezaji wa unyeti wenye nguvu zaidi kuliko ulivyotarajiwa kutokana na athari huru za mawakala.

Athari ya saa 24 ya 1 µM decitabine au ABT-263 kwenye seli za NK-92MI zenyewe iliripotiwa mtawalia kuwa takriban %92 ± 2 uhai (N=6) na %100 ± 4 (N=3).

Kwa kuwa matibabu ya awali ya moja kwa moja ya seli za NK-92MI kwa decitabine hayakubadilisha kwa kiasi kikubwa matokeo ya kuua HCT116, waandishi walitafsiri kwamba athari ya kuongeza unyeti ya decitabine ilitokea zaidi upande wa seli za uvimbe HCT116 kuliko upande wa seli za NK.

Matokeo haya yalionyeshwa tu kwa mfumo wa HCT116 + NK-92MI; utafiti huu haukuonyesha kwamba athari hiyo hiyo hutokea katika uvimbe mwingine au katika kiumbe hai kwa seli endogenous za NK.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Masharti ya utamaduni wa seli

A375-ATCC, HCT116, T98G, MCF7 na seli nyingine adherent zilizotajwa katika sehemu ya mbinu zilihifadhiwa katika DMEM + %10 FBS + 100 U/mL penicillin–streptomycin katika 37 °C na %5 CO2. Seli za K562 na MOLM-14 zilikuzwa katika RPMI 1640 + %10 FBS + penicillin–streptomycin katika joto na hali zilezile za CO2.

Seli husika zilipimwa kwa mycoplasma na kuthibitishwa kuwa hazikuwa na uchafuzi.

Dokezo la orodha ya seli ndani ya chanzo: Sehemu ya Cell Culture inaorodhesha T98G, A375-ATCC, HCT116, MDA-MB-231 na MCF7, ilhali orodha katika sehemu ya Cell Viability pia inajumuisha jina A549 katika muktadha huo badala ya T98G, A375-ATCC, HCT116. A549 haitumiki tena katika vielelezo vikuu vya matokeo; MDA-MB-231 inaonekana katika jaribio la Dpep123. Tofauti hii haijaelezwa kando katika chanzo.

Majaribio ya uhai wa seli

Seli zilipandikizwa kwenye sahani za 96-well na kuachwa usiku kucha katika mazingira ya kawaida. Kisha mazingira yalibadilishwa kuwa DMEM au RPMI yenye %2 FBS, na Dpep, ABT-263, decitabine au michanganyiko yake ikaongezwa.

Katika majaribio makuu ya uhai wa seli, muda wa matibabu kwa ujumla ulikuwa siku 5–6.

Idadi iliyobaki ya seli za solid-tumor iliamuliwa kwa hemocytometer au Countess II automatic cell counter. Seli za K562 na MOLM-14 zilihesabiwa kwa Trypan Blue exclusion.

Majibu kwa mawakala mmoja mmoja

Unyeti mkubwa zaidi wa MOLM-14 kwa ABT-263 kuliko seli nyingine unaeleza kwa nini dozi inayohitajika ya ABT-263 katika jaribio la mchanganyiko pia ilikuwa ndogo zaidi.

Mchanganyiko wa jozi Dpep + decitabine

Sinergia yenye umuhimu:

• A375-ATCC,
• HCT116,
• T98G,
• MCF7,
• K562

ilionekana katika seli hizi.

Kwa MOLM-14, mwelekeo kuelekea sinergia uliripotiwa lakini haukufikia kiwango kilekile cha uhakika wa kitakwimu.

Katika A375-ATCC, HCT116, T98G na MCF7, zaidi ya %90 ya seli ziliweza kuondolewa kwa michanganyiko ya 10–40 µM Dpep na 0,5–2 µM decitabine.

Katika K562, 10 µM Dpep + 0,5 µM decitabine, na katika MOLM-14, 10 au 20 µM Dpep + 1 µM decitabine zilisababisha zaidi ya %80 upotevu wa seli.

Mchanganyiko wa jozi Dpep + ABT-263

Mchanganyiko huu ulionyesha shughuli ya sinergia yenye umuhimu katika mistari yote sita mikuu ya seli iliyochunguzwa.

Katika mistari minne kati ya sita, michanganyiko ya 20–40 µM Dpep + 1–2 µM ABT-263 ilipunguza idadi ya seli kwa zaidi ya %90.

MOLM-14:

20 µM Dpep + 10 nM ABT-263 → zaidi ya %90 upotevu wa seli.

K562:

10 µM Dpep + 2 µM ABT-263 → takriban %80 upotevu wa seli.

Katika T98G na MCF7, isobologram za CompuSyn pia ziliunga mkono mwingiliano wa sinergia.

Je, mpangilio wa matibabu ulikuwa muhimu?

Kwa seli za A375-ATCC, itifaki mbili zililinganishwa:

1. matibabu ya pamoja ya siku 5 kamili kwa 20 µM Dpep + 1 µM ABT-263,
2. kwanza siku 2 za 20 µM Dpep, kisha siku 3 za 20 µM Dpep + 1 µM ABT-263.

Hakukuwa na tofauti yenye umuhimu wa ufanisi kati ya itifaki hizo mbili. Jaribio hili lilifanywa kwa sharti la N=3.

Matokeo ya Bpep

Ingawa Bpep ina mfuatano tofauti wa leucine zipper kuliko Dpep, inalenga kundi lilelile la ATF5/CEBPB/CEBPD. Mchanganyiko wa Bpep + ABT-263 ulionyesha tabia ya sinergia inayofanana na Dpep katika seli za T98G na MCF7.

Ugunduzi huu unaunga mkono umuhimu wa mtandao wa vipengele lengwa vya unukuzi katika mwitikio wa mchanganyiko; lakini haumaanishi kwamba athari zote za molekuli za Dpep na Bpep ni sawa.

Je, ABT-263 + decitabine peke yake ilikuwa na sinergia?

Kwa ujumla hapana. Isipokuwa K562, jozi ya ABT-263 + decitabine haikuonyesha sinergia yenye umuhimu katika mistari ya seli iliyojaribiwa.

Ulinganisho huu ni muhimu; kwa sababu unaonyesha kwamba athari kubwa ya michanganyiko ya dawa tatu yenye Dpep haitokani tu na ABT-263 na decitabine kuwa tayari zina sinergia kubwa zenyewe.

Matibabu ya dawa tatu Dpep + ABT-263 + decitabine

Athari ya mchanganyiko wa dawa tatu hutegemea mstari wa seli na dozi.

Katika mistari yote mikuu ya seli iliyochunguzwa, hali inayotoa zaidi ya %90 upotevu wa idadi ya seli ilitambuliwa wakati mchanganyiko unaofaa wa dozi ulichaguliwa.

Katika mistari mitano kati ya sita, angalau mchanganyiko mmoja wa dawa tatu ulionyesha sinergia yenye umuhimu, huku MOLM-14 ikionyesha mwelekeo kuelekea umuhimu wa kitakwimu.

Chanzo pia kinabainisha kuwa katika baadhi ya majaribio ambako zaidi ya %90 ya seli ziliondolewa, seli chache sana zilibaki, jambo ambalo linaweza kufanya iwe vigumu kwa tofauti kati ya michanganyiko kufikia umuhimu wa kitakwimu.

Jaribio la Dpep123

Dpep123 ni umbo hai la Dpep lililofupishwa amino asidi 10 kutoka C-terminal. Majaribio ya dose–response ya Dpep123 yalifanywa katika A375-ATCC, T98G na MDA-MB-231.

Zaidi ya hayo, panya waliobeba xenograft ya A375-ATCC walipewa vehicle au 10 mg/kg Dpep123. Katika jaribio hili dogo kila kundi lilikuwa N=3. Chanzo kinaripoti p=0,042 kwa ukuaji wa uvimbe na p=0,0495 kwa uhai.

Jaribio hili linaunga mkono shughuli ya kibiolojia ya Dpep123; usanifu mdogo wa N=3 hautoshi kwa ujumlishaji mpana wa usalama au ufanisi.

Usemi “%40 Kupona” Katika Jaribio la Xenograft ya Panya Kwa Hakika Unamaanisha Nini?

Usemi “%40 cure rate” uliowekwa katika alama za nukuu kwenye sehemu ya Highlights ya makala unamaanisha kwamba panya 4 kati ya 10 nude waliopokea Dpep + ABT-263 walifika mwisho wa matibabu ya siku 60 bila kufikia mwisho wa kimaadili wa uvimbe, na kwamba katika wanyama waliosalia hai hakuna uvimbe uliogunduliwa kwa palpation au histolojia mwishoni mwa ufuatiliaji wa siku 30 baada ya matibabu kusitishwa; hii si kiwango cha %40 cha kupona kliniki kwa binadamu.

Modeli ya panya iliundwaje?

Katika maeneo ya flank ya panya jike wa NCR nude wenye umri wa wiki 6–8, 1 × 10⁶ seli za melanoma A375-ATCC ziliingizwa kwa njia ya subcutaneous.

Ujazo wa uvimbe ulipofikia 100–200 mm³, wanyama waligawanywa kwa randomization katika makundi ya matibabu.

Katika utafiti wa mchanganyiko wa Dpep + ABT-263, kwa ujumla xenograft tatu tofauti za A375 ziliundwa katika maeneo ya flank ya kila panya.

Ujazo wa uvimbe ulihesabiwaje?

Chanzo kilihesabu ujazo wa uvimbe kwa fomula ifuatayo:

\[ V= \frac{\text{uzunluk}\times\text{genişlik}^{2}}{2} \]

Hapa \(V\) ni ujazo wa uvimbe wa kukadiria kwa mm³. Urefu na upana ni vipimo viwili vikuu vya uvimbe vinavyopimwa kutoka nje.

Fomula huruhusu ujazo wa uvimbe kufuatiliwa kwa kukadiria kutoka vipimo viwili vya caliper; si ujenzi kamili wa ujazo wa jiometri halisi ya uvimbe ya pande tatu kwa upigaji picha wa moja kwa moja.

Makundi ya matibabu

*Kutolingana kwa dozi ndani ya chanzo: Sehemu ya mbinu na maelezo ya Kielelezo 10 yanaandika 20 mg/kg kwa Dpep. Sentensi moja katika sehemu 3.6 ya Matokeo inaandika 20 µg/kg. Hapa thamani ya 20 mg/kg inayolingana katika sehemu mbili tofauti za chanzo imeonyeshwa, huku mgongano huo ukihifadhiwa kando.

Majaribio mawili huru yalifanywa na mwanzoni mwa kila jaribio kwa ujumla wanyama 5 walitumika kwa kila kundi. Kwa kuwa uvimbe haukuundwa kwa mnyama mmoja katika kundi la vehicle, mnyama huyo aliondolewa na vehicle ya mwisho ikawa N=9.

Wakati uvimbe wowote mmoja ulipofikia 1000 mm³ kama ujazo wa mwisho wa kimaadili, panya husika alifanyiwa euthanasia na tukio hilo likachukuliwa kuwa mwisho katika uchanganuzi wa survival.

Matokeo ya ukuaji wa uvimbe na uhai in vivo

Monotherapy za Dpep na ABT-263 zilipunguza ukuaji wa uvimbe kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na vehicle na kuongeza muda wa survival.

Mchanganyiko ulikandamiza ukuaji wa uvimbe kwa nguvu zaidi kuliko Dpep au ABT-263 peke yake.

Kufikia mwisho wa siku 60 za matibabu, panya 2/10 walifika katika kundi la monotherapy ya Dpep na 4/10 katika kundi la Dpep + ABT-263.

Katika siku ya 60, hakuna uvimbe unaoweza kupapasa uliogunduliwa katika wanyama waliokuwa hai. Matibabu yalisitishwa na wanyama wakafuatiliwa kwa siku 30 zaidi. Chanzo kinaeleza kuwa mwishoni mwa ufuatiliaji hakuna uvimbe uliogunduliwa kwa palpation au histolojia na uvimbe ulionekana kuwa umeondolewa.

Chanzo pia kinaripoti kuwa Dpep, ABT-263 au mchanganyiko havikuathiri kwa kiasi kikubwa wastani wa uzito wa mwili wa wanyama na hakukuwa na athari mbaya dhahiri.

Hata hivyo, kutobadilika kwa uzito wa mwili si uchanganuzi mpana wa toksikolojia. Utoxicity wa viungo, toxicity ya hematolojia, usalama wa pharmacokinetics au usalama kwa binadamu hauwezi kuhitimishwa kutokana na jaribio hili.

Uchambuzi wa kitakwimu

Chanzo kinaeleza kuwa majaribio ya jumla ya utamaduni wa seli yalifanywa kwa marudio matatu huru na matokeo yalitolewa kama wastani ± SEM. Thamani za N katika vielelezo ziliripotiwa kando kulingana na hali ya majaribio.

Vipimo vikuu:

• two-tailed Student t-test: ulinganisho wa utamaduni wa seli,
• Mann–Whitney test: ulinganisho wa ukuaji wa uvimbe wa xenograft ya Dpep123 na Dpep/ABT-263,
• Kaplan–Meier: mikunjo ya survival,
• log-rank test: tofauti kati ya mikunjo ya survival,
• Bliss independence: tathmini ya sinergia ya michanganyiko ya dawa dhidi ya matarajio ya kujitegemea,
• CompuSyn 1.0 / Chou–Talalay: uchanganuzi wa isobologram wa michanganyiko iliyochaguliwa ya Dpep/Bpep + ABT-263.

Kwa umuhimu wa kitakwimu, kizingiti cha p < 0,05 kilitumika.

Matokeo yanayoungwa mkono na utafiti

• Dpep ilikandamiza ukuaji/uhai wa seli katika mistari yote sita mikuu ya seli za saratani iliyochunguzwa.
• Mchanganyiko wa Dpep + ABT-263 ulionyesha athari ya sinergia katika mistari yote sita mikuu ya seli.
• Mchanganyiko wa Dpep + decitabine ulionyesha sinergia yenye umuhimu katika mistari mitano mikuu ya seli na mwelekeo kuelekea sinergia katika MOLM-14.
• Michanganyiko inayofaa ya dawa tatu ya Dpep + ABT-263 + decitabine iliweza kupunguza idadi ya seli kwa zaidi ya %90 katika mistari yote mikuu ya seli iliyochunguzwa.
• Katika seli za HCT116 zilizochaguliwa in vitro kuwa sugu kwa Dpep na seli sugu za A375 zilizotokana na uvimbe in vivo, matibabu ya mchanganyiko yalikuwa yenye ufanisi zaidi kuliko monotherapy ya Dpep.
• Kutokuwepo kwa sinergia kati ya Dpepmut na ABT-263 kunaunga mkono umuhimu wa muundo wa leucine zipper katika shughuli kamili ya Dpep.
• Sinergia ya Bpep + ABT-263 inaunga mkono kwamba peptidi nyingine ya decoy inayotumia mtandao uleule wa vipengele lengwa vya unukuzi inaweza pia kuonyesha athari ya mchanganyiko.
• Dpep + ABT-263 ilitoa ukandamizaji mkubwa zaidi wa ukuaji wa uvimbe na survival kuliko monotherapy zote mbili katika modeli ya xenograft ya A375 kwa panya.
• Katika kundi la mchanganyiko, wanyama 4/10 walifikia mwisho wa siku 60 na katika ufuatiliaji wa ziada wa siku 30 bila matibabu hakuna uvimbe uliogunduliwa kwa wanyama waliobaki hai.

Matokeo yasiyoungwa mkono na utafiti

• Haijathibitishwa kwamba Dpep ni tiba yenye ufanisi ya saratani kwa binadamu.
• Haiwezi kusemwa kwamba mchanganyiko wa Dpep + ABT-263 utatoa %40 ya kupona kwa binadamu.
• Utafiti si jaribio la kliniki la awamu I, II au III.
• Kutobadilika kwa uzito wa mwili katika panya si ushahidi mpana wa usalama kwa binadamu au wanyama.
• Haijaonyeshwa kwamba michanganyiko ya Dpep itafanya kazi kwa namna ileile katika aina zote za saratani.
• Matokeo ya transcriptome hayaonyeshi kwamba mekanizimu zote za upinzani wa Dpep ni sawa.
• Mekanizimu kamili ya molekuli ya sinergia ya Dpep + ABT-263 haijatatuliwa.
• Haijaonyeshwa moja kwa moja ni jeni zipi maalumu za tumor-suppressor ambazo decitabine huzifanyia demethylate ili kuvunja upinzani wa Dpep.
• Matokeo ya kuongeza unyeti wa NK-92MI yameonyeshwa tu katika mfumo wa HCT116; hayajathibitishwa katika kiumbe hai kwa seli endogenous za NK.
• Modeli ya cell-line-derived nude mouse xenograft haiundwi upya kikamilifu heterogeneity ya uvimbe wa binadamu wala mazingira kamili ya kinga ya uvimbe.
• Seli msingi zilizopatikana hivi karibuni kutoka uvimbe wa wagonjwa au modeli za patient-derived xenograft hazikutumika katika utafiti huu.

Mapungufu makuu ya utafiti

Upeo wa washirika wa mchanganyiko: Utafiti ulilenga hasa ABT-263 na decitabine. Mawakala wengine wanaolenga familia ya BCL2 na dawa mbadala za hypomethylating hazikutathminiwa.

Uchanganuzi wa mekanizimu ni mdogo: Kwa kuwa lengo kuu la utafiti lilikuwa kutambua michanganyiko yenye ufanisi, mekanizimu za molekuli za sinergia hazikujaribiwa kwa kina.

Idadi ya modeli za upinzani ni ndogo: Ni idadi ndogo tu ya mistari ya seli Dpep-resistant iliyoundwa.

Ulinganisho wa transcriptome ni mdogo: Tofauti za udhibiti wa jeni zililinganishwa kwa kina katika jozi moja tu ya A375 responsive/resistant.

Upeo wa in vivo ni mdogo: Rasilimali ziliruhusu jaribio pana la xenograft tu kwa A375 melanoma na mchanganyiko wa Dpep + ABT-263.

Modeli ya nude mouse: Modeli ya cell-line-derived xenograft haiakisi heterogeneity ya uvimbe endogenous wa binadamu, mazingira kamili ya uvimbe wala host immune response kamili.

Hakuna nyenzo za mgonjwa: Seli kutoka uvimbe mpya wa mgonjwa au xenograft zinazotokana na wagonjwa hazikujaribiwa.

Jaribio la NK ni dogo: Uongezaji wa unyeti wa NK-92MI kwa Dpep/ABT-263/decitabine ulichunguzwa tu katika seli za HCT116.

Usawa wa dozi ya kliniki haujaonyeshwa: Watafiti wanajadili kuwa konsentrasheni za utamaduni zilizochaguliwa kwa ABT-263 na decitabine ziliwekwa ndani ya mipaka inayolingana na viwango vya seramu ya binadamu vilivyoripotiwa katika fasihi; hata hivyo hali hii haithibitishi kwamba mchanganyiko wa Dpep utakuwa salama, wenye ufanisi au utaonyesha tabia ileile ya pharmacodynamics kwa binadamu.

Utafiti wa baadaye

Hatua zinazofuata zilizopendekezwa na waandishi ni pamoja na kujaribu vizuizi mbalimbali vya BCL2-family na mawakala mbadala wa hypomethylating pamoja na Dpep, kuchunguza kwa kina mekanizimu ya molekuli ya sinergia, kuunda mistari zaidi huru ya seli sugu na kupanua uchanganuzi wa transcriptome.

Kwa upande wa wanyama, matumizi ya aina nyingi za uvimbe, modeli za orthotopic, nyenzo za patient-derived xenograft na modeli za syngeneic zenye mfumo kamili wa kinga yanapendekezwa.

Pia, michanganyiko inapaswa kujaribiwa katika nyenzo heterogeneous zilizopatikana kutoka uvimbe mpya wa wagonjwa na uongezaji wa unyeti unaosababishwa na Dpep kwa seli za NK unapaswa kuchunguzwa in vivo kwa NK-92MI na seli endogenous za NK.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Kichwa asilia: Dpep, a Cell-Penetrating Peptide Targeting ATF5, CEBPB and CEBPD, Synergistically Combines with ABT-263 and Decitabine to Inhibit Cancer Cell Growth and Overcome Dpep Resistance

Waandishi: Qing Zhou; Trang Thi Thu Nguyen; James M. Angelastro; Markus D. Siegelin; Lloyd A. Greene.

Mpangilio wa waandishi: Imetolewa katika chanzo kwa mpangilio ulio hapo juu.

Mchango sawa / uandishi wa kwanza wa pamoja: Haujatajwa katika chanzo.

Mwandishi anayewasiliana: Lloyd A. Greene.

Barua pepe ya mwandishi anayewasiliana: lag3@cumc.columbia.edu

Taasisi 1: Department of Pathology and Cell Biology, Vagelos College of Physicians & Surgeons, Columbia University Irving Medical Center, New York, USA.

Taasisi 2: Ronald O. Perelman Department of Dermatology, Perlmutter Cancer Center, NYU Grossman School of Medicine, NYU Langone Health, New York, USA.

Taasisi 3: Department of Molecular Biosciences, School of Veterinary Medicine, University of California Davis, Davis, USA.

Jarida: Cells.

Sehemu: Cellular Pathology.

Mchapishaji: MDPI.

Juzuu / toleo / namba ya makala: 15(9), 826.

DOI: 10.3390/cells15090826.

Uwasilishaji: 7 Aprili 2026.

Marekebisho: 24 Aprili 2026.

Kukubaliwa: 27 Aprili 2026.

Uchapishaji: 1 Mei 2026.

Academic Editor: Alessandro Poggi.

Aina ya chanzo: Makala asilia ya utafiti; hasa utafiti wa michanganyiko katika seli za saratani in vitro na uthibitishaji mdogo wa preclinical mouse xenograft.

Uhakiki: Cells ni jarida linalopitiwa na wahakiki. Sera rasmi ya sasa ya jarida inaeleza matumizi ya single-anonymized peer review na ukusanyaji wa angalau ripoti mbili za wahakiki kwa kazi zinazoingia katika hatua ya peer review.

Leseni: Creative Commons Attribution 4.0 — CC BY 4.0.

Hali ya preprint: PDF ya chanzo haitaji rekodi tofauti ya preprint. Katika ukaguzi mahususi wa bibliografia, hakuna rekodi tofauti ya preprint yenye kichwa kilekile iliyotambuliwa.

Maneno muhimu: cancer; anti-cancer; cell-penetrating peptide; Dpep; Bpep; ABT-263; decitabine; overcoming resistance; apoptosis; combination therapy.

Lengo kuu la majaribio: Kutathmini kama michanganyiko ya Dpep na ABT-263 pamoja na decitabine huunda sinergia katika seli mbalimbali za uvimbe na kama hushinda upinzani wa Dpep.

Mistari mikuu ya seli za saratani: A375-ATCC; HCT116; T98G; MCF7; K562; MOLM-14.

Mstari wa ziada wa seli uliotumika: MDA-MB-231, katika uainishaji wa Dpep123.

Tofauti ya kuripoti mistari ya seli ndani ya chanzo: MDA-MB-231 imeorodheshwa katika sehemu ya Cell Culture, huku A549 ikionekana katika mstari mmoja wa orodha ya Cell Viability; A549 haionekani tena katika matokeo makuu.

Joto la utamaduni wa seli: 37 °C.

CO2: %5.

Muda mkuu wa matibabu: siku 5–6.

Kipimo cha Cell viability: Kuhesabu seli moja kwa moja kwa hemocytometer au Countess II katika seli za solid-tumor; Trypan Blue exclusion katika K562 na MOLM-14.

Mbinu za Synergy: Bliss independence; CompuSyn 1.0 na isobologram za Chou–Talalay median-effect katika majaribio teule ya Dpep/Bpep + ABT-263.

Takwimu: Two-tailed Student's t-test; Mann–Whitney kwa ukuaji wa uvimbe in vivo; Kaplan–Meier na log-rank kwa survival.

Kizingiti cha umuhimu: p < 0,05.

GraphPad Prism: 10.4.2.

R: 4.1.2.

Uundaji wa HCT116 Dpep-resistant: stepwise in vitro selection kwa 5 → 10 → 15 → 20 µM Dpep; seli sugu ziliendelea kuhifadhiwa katika mazingira yenye 10 µM Dpep.

Modeli ya upinzani ya A375: Kuunda utamaduni kutoka A375-ATCC mouse xenograft zilizokua tena chini ya Dpep au Dpep123.

Chanzo cha data za Transcriptome: Seti ya data ya Plate-seq iliyochapishwa hapo awali; GEO accession GSE244579.

Modeli ya NK: NK-92MI.

Uwiano wa NK co-culture: E:T = 2,5:1.

Matibabu ya awali ya HCT116 katika jaribio la NK: Saa 48 za Dpep na/au ABT-263/decitabine, kisha saa 24 na NK-92MI mbele ya mawakala wale wale.

Modeli ya in vivo: Xenograft ya melanoma A375-ATCC ya subcutaneous katika panya jike NCR nude wa wiki 6–8.

Inokulamu: 1 × 10⁶ seli za A375-ATCC.

Ujazo wa uvimbe wa randomization: 100–200 mm³.

Utafiti wa Dpep + ABT-263: Kwa ujumla xenograft katika maeneo matatu ya flank kwa kila panya.

Vehicle: %10 glycerol/PBS.

Dozi ya Dpep: 20 mg/kg katika mbinu na maelezo ya Kielelezo 10, intraperitoneal, mara tatu kwa wiki.

Kutolingana kwa dozi ya Dpep ndani ya chanzo: Sentensi moja katika maandishi ya Matokeo 3.6 inaandika 20 µg/kg. Tofauti hii haijaelezwa katika chanzo.

Dozi ya ABT-263: 50 mg/kg, intraperitoneal, mara tatu kwa wiki.

Muda wa matibabu: Hadi siku 60.

Mwisho wa kimaadili wa uvimbe: Uvimbe wowote mmoja kufikia 1000 mm³.

Ufuatiliaji wa ziada: Siku 30 baada ya kusitisha matibabu kwa panya waliokuwa hai siku ya 60.

Uhai wa mchanganyiko: 4/10 panya walifikia mwisho wa matibabu ya siku 60.

Uhai wa monotherapy ya Dpep: 2/10 panya walifikia mwisho wa matibabu ya siku 60.

Kikomo cha tafsiri ya “40% cure rate”: Ni usemi uliowekwa katika alama za nukuu katika sehemu ya Highlights ya makala; unaeleza matokeo ya uhai endelevu/kutogunduliwa kwa uvimbe katika modeli ya xenograft ya panya na si kiwango cha kliniki cha kupona kwa binadamu.

Idhini ya maadili ya wanyama: Columbia University IACUC, protocol AC-AABU1656; idhini 28 Desemba 2022.

Informed consent: Haitumiki; si utafiti wenye washiriki wa binadamu.

Upatikanaji wa data: Data ghafi na zilizochakatwa za utafiti rejea wa RNA-seq zinapatikana chini ya GEO GSE244579; data ghafi za utafiti wa sasa zimetolewa katika Supplementary File S2.

Supplementary File S1: Ulinganisho wa transcriptome wa A375 Dpep-resistant#1 na Dpep-responsive#1.

Supplementary Figure S1: Matibabu ya awali ya Dpep + decitabine au Dpep + ABT-263 kuifanya HCT116 iwe nyeti kwa njia ya sinergia kwa kuuliwa na NK-92MI.

Ufadhili: NIH R01NS083795 (J.M.A.), R01NS113793 (M.D.S.), R21NS137660 (M.D.S.) na R01NS072050 (L.A.G.).

Mgongano wa maslahi / miliki ya kiakili: J.M.A. na L.A.G. wameorodheshwa kama wavumbuzi katika hati miliki inayofafanua Bpep na Dpep. J.M.A., Q.Z. na L.A.G. wameorodheshwa kama wavumbuzi katika maombi ya hati miliki yanayofafanua Dpep123. Waandishi wanaripoti kuwa wafadhili hawakuwa na jukumu katika usanifu wa utafiti, ukusanyaji wa data, uchanganuzi, tafsiri, uandishi wa makala au uamuzi wa kuchapisha.

Michango ya waandishi: Conceptualization: Q.Z., M.D.S., L.A.G.; validation: Q.Z.; formal analysis: Q.Z., L.A.G.; investigation: Q.Z., T.T.T.N., J.M.A.; resources: J.M.A., M.D.S.; data curation: Q.Z., L.A.G.; original draft: L.A.G.; review/editing: waandishi wote; visualization: Q.Z., L.A.G.; supervision na project administration: L.A.G.; funding acquisition: J.M.A., M.D.S., L.A.G.

Kikomo kikuu cha kliniki: Dpep au michanganyiko ya Dpep haikujaribiwa kwa binadamu katika utafiti huu.

Kikomo kikuu cha modeli: Modeli ya nude mouse cell-line-derived xenograft haiwakilishi heterogeneity ya uvimbe wa binadamu, mazingira ya orthotopic wala host immune system kamili.

Kikomo kikuu cha mekanizimu: Mekanizimu ya kina ya molekuli ya sinergia ya Dpep + ABT-263 na Dpep + decitabine haijatatuliwa moja kwa moja katika utafiti huu.