Lacticaseibacillus paracasei CD12-1, daha əvvəl ənənəvi fermentləşdirilmiş yak südündən təcrid edilmiş və probiotik namizəd xüsusiyyətləri araşdırılmış bakteriya ştammıdır. Bu tədqiqat CD12-1-in insanlarda xoralı kolitin müalicəsini deyil, yalnız dişi C57BL/6 siçanlarda dekstran sulfat natrium (DSS) ilə yaradılmış kəskin eksperimental kolitə qarşı profilaktik təsirini araşdırmışdır. Siçanlar normal nəzarət, DSS model nəzarəti və üç müxtəlif CD12-1 doza qrupuna ayrılmış; bakterial müdaxilə DSS təsirindən əvvəl başlanmış və DSS verilən son həftə ərzində davam etdirilmişdir.

DSS modeli siçanlarda bədən çəkisinin azalması, xəstəlik aktivliyi indeksinin (Disease Activity Index, DAI) yüksəlməsi, yoğun bağırsağın qısalması, selikli qişa və kript zədələnməsi, goblet hüceyrələrinin itirilməsi, bağırsaq baryeri ilə əlaqəli zülalların azalması və proinflamatuar sitokinlərin artmasına səbəb olmuşdur. CD12-1 verilən üç doza qrupunda bu dəyişənlərin bir hissəsi müxtəlif dərəcələrdə zəifləmişdir. Lakin cavab xətti “doza artdıqca fayda artır” əlaqəsi göstərməmişdir.

Aşağı doza qrupu gündəlik 2 × 10⁷ CFU/siçan, orta doza qrupu 2 × 10⁸ CFU/siçan, yüksək doza qrupu isə 2 × 10⁹ CFU/siçan CD12-1 almışdır. Aşağı doza; histopatoloji zədələnmə, goblet hüceyrələri, ZO-1 və Occludin kimi epitel baryeri zülalları, inflamatuar sitokinlərin bir hissəsi və asetat/bütirat səviyyələri baxımından ən geniş müsbət profili göstərmişdir. Buna qarşı yüksək doza bədən çəkisi itkisini məhdudlaşdırmaqda daha nəzərəçarpan təsir göstərmişdir. Buna görə tədqiqat tək bir meyara əsasən “ən yüksək doza ən yaxşıdır” nəticəsini dəstəkləmir.

Yoğun bağırsağın uzunluğu normal nəzarət qrupunda 8,83 ± 0,32 cm, DSS model qrupunda 6,13 ± 0,12 cm ölçülmüşdür. CD12-1-dən sonra dəyərlər aşağı, orta və yüksək doza qruplarında müvafiq olaraq 7,02 ± 0,21 cm, 7,07 ± 0,26 cm və 7,02 ± 0,25 cm olmuşdur. Bütün üç müdaxilə qrupunda yoğun bağırsaq uzunluğu DSS model qrupundan statistik olaraq əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olmuş (p < 0,05), lakin üç doza arasında əhəmiyyətli fərq görülməmişdir (p > 0,05).

Bağırsaq epitel baryerinin qiymətləndirilməsində aşağı doza CD12-1, ZO-1 və Occludin immunohistokimyəvi siqnalını DSS qrupuna nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə artırmış; aşağı doza ilə normal nəzarət arasında bu iki göstərici üzrə əhəmiyyətli fərq tapılmamışdır. Claudin-1 isə CD12-1 qruplarında artım meyli göstərmiş, lakin DSS qrupu ilə fərq statistik əhəmiyyət səviyyəsinə çatmamışdır. Bu fərq vacibdir: tədqiqat bütün sıx birləşmə zülallarının eyni dərəcədə bərpa olunduğunu göstərmir.

Yoğun bağırsaq toxumasında TNF-α, IL-6 və IL-1β DSS ilə yüksəlmişdir. Aşağı və orta dozalarda TNF-α ilə IL-1β DSS qrupuna nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə aşağı olmuş; IL-6 üçün əhəmiyyətli azalma aşağı dozada görülmüşdür. IL-10 aşağı və orta dozalarda ədədi olaraq artsa da nəticələr bölməsindəki statistik müqayisədə bu artım DSS qrupuna qarşı əhəmiyyətli deyildir (p > 0,05). Buna görə IL-10 üçün “əhəmiyyətli artım sübut edilmişdir” deyilə bilməz.

16S rRNA gen sekvenslənməsi CD12-1 müdaxiləsinin bağırsaq mikrobiotası quruluşu ilə birlikdə dəyişiklik göstərdiyini ortaya qoymuşdur. Lactobacillus, Bifidobacterium, Allobaculum, Akkermansia, Bacteroides, Sutterella, Desulfovibrio və digər taksonlarda dozalara görə fərqli əlaqələr müşahidə olunmuşdur. Korrelyasiya analizində bəzi bakteriyalar daha aşağı xəstəlik aktivliyi və daha yaxşı baryer göstəriciləri ilə əlaqəli olduğu halda, digərləri daha yüksək inflamasiya göstəriciləri ilə əlaqəli tapılmışdır. Lakin bu əlaqələr səbəbiyyət sübutu deyil; tədqiqatın 16S analizi mikroorqanizmlərin real metabolik fəaliyyətini və ya CD12-1-in bağırsaqda nə qədər müddət qalıcı olduğunu birbaşa ölçməmişdir.

Qısa zəncirli yağ turşularında (Short-Chain Fatty Acids, SCFAs) DSS model qrupunda asetat, propionat və bütirat normal nəzarətə nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə azalmışdır. Aşağı doza CD12-1 asetat və bütiratı DSS qrupuna nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə artırmış və bu iki göstərici normal nəzarət qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənməmişdir. Orta doza asetatı artırmış; yüksək doza isə eyni geniş SCFA yaxşılaşma profilini göstərməmişdir.

Tədqiqatın ən vacib şərh sərhədi nəticələrin insanlarda xoralı kolitin müalicəsinə dair sübut olmamasıdır. Araşdırma yalnız dişi siçanlarda kəskin DSS modeli ilə aparılmış, CD12-1 xəstəlik yaradılmadan əvvəl verilməyə başlanmışdır. İnsan xoralı kolitinin xroniki və təkrarlanan xarakteri, cins fərqləri, uzunmüddətli təhlükəsizlik, optimal insan dozası və klinik effektivlik bu təcrübə ilə müəyyən edilməmişdir.

Araşdırmanın əsas sualı nə idi?

Tədqiqatın əsas sualı əvvəllər fermentləşdirilmiş yak südündən təcrid edilmiş Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 ştammının bağırsaqda eksperimental inflamasiya yaradılmadan əvvəl və inflamasiya yaradılarkən verildiyi halda DSS mənşəli yoğun bağırsaq zədəsini azaldıb-azalda bilməməsi idi. Müəlliflər yalnız xəstəlik əlamətlərini deyil; selikli qişa quruluşu, goblet hüceyrələri, epitel sıx birləşmələri, sitokinlər, bağırsaq mikrobiotası və mikrob metabolitləri kimi bir-birini tamamlayan çoxsaylı sonlanım nöqtələrini birlikdə qiymətləndirmişlər.

Siçanlara Fermentləşdirilmiş Yak Südü Verildimi?

Xeyr. Fermentləşdirilmiş yak südü siçanlara birbaşa tətbiq edilməmişdir; tədqiqatda istifadə olunan CD12-1 bakteriya ştammı daha əvvəl ənənəvi fermentləşdirilmiş yak südündən təcrid edilmiş və bu tədqiqatda siçanlara PBS içində hazırlanmış təzə CD12-1 bakteriya suspenziyaları oral qavajla verilmişdir.

CD12-1 niyə araşdırılmışdır?

Müəlliflərin əvvəlki tədqiqatında CD12-1-in turş mühitə, öd duzlarına və simulyasiya edilmiş mədə-bağırsaq şəraitinə davamlılıq göstərdiyi; antioksidant aktivlik və uyğun təhlükəsizlik profili nümayiş etdirdiyi bildirilmişdir. Genomik qiymətləndirmədə ətraf mühitə uyğunlaşma və probiotik funksiyalarla əlaqəli ola biləcək namizəd genlər də müəyyən edilmişdir. Bu əvvəlki nəticələr ştammın mədə-bağırsaq keçidi zamanı yaşaya bilməsi və bağırsaq mühitində funksiya göstərə bilməsi ehtimalını dəstəkləyən əsaslandırma kimi istifadə edilmişdir. Lakin əvvəlki in vitro/genomik xüsusiyyətlər təkbaşına kolit üzərində in vivo təsirin sübutu olmadığı üçün mövcud siçan təcrübəsi aparılmışdır.

DSS ilə induksiya edilən kolit modeli nədir?

Dekstran sulfat natrium (DSS), təcrübə heyvanlarının içməli suyuna müəyyən konsentrasiyada əlavə edilərək yoğun bağırsaq selikli qişasında zədələnmə və inflamasiya yaratmaq üçün istifadə olunan eksperimental agentdir. Bu tədqiqatda molekulyar çəkisi 36.000–50.000 Da olan DSS son həftə ərzində %2,5 (w/v) konsentrasiyada verilmişdir. Modeldə bədən çəkisi itkisi, ishal, nəcisdə qan, yoğun bağırsağın qısalması, kript zədələnməsi və inflamatuar hüceyrə infiltrasiyası kimi eksperimental kolit əlamətləri inkişaf etmişdir.

DSS modeli insan xoralı kolitinin bəzi klinik və histopatoloji xüsusiyyətlərini təqlid edə bilər; lakin insan xəstəliyinin bütün immunoloji, genetik, ətraf mühit və xroniki-təkrarlanan xüsusiyyətlərini yenidən yaratmır. Buna görə DSS modelində təsirli olan müdaxilənin insan xoralı kolitində eyni nəticə verəcəyi fərz edilə bilməz.

CD12-1 Bu Tədqiqatda Koliti Müalicə Etdimi?

Bu tədqiqat artıq yaranmış kolitin müalicəsini sübut etmir. CD12-1 DSS təsirindən təxminən iki həftə əvvəl başlanmış və DSS verilən həftə ərzində davam etdirilmişdir; buna görə eksperimental dizayn əsasən profilaktik/qoruyucu təsiri qiymətləndirir və artıq formalaşmış insan xoralı kolitinə qarşı terapevtik effektivlik nəticəsi çıxarıla bilməz.

Təcrübə qrupları necə qurulmuşdur?

Cəmi 60 ədəd, 6 həftəlik, spesifik patogendən azad (SPF) dişi C57BL/6 siçan istifadə edilmişdir. Başlanğıc bədən çəkisi 18 ± 2 g olmuşdur. Heyvanlar 23 ± 2 °C temperatur, %50 ± 5 nisbi rütubət və 12 saat işıq/12 saat qaranlıq dövründə saxlanılmış; yataq materialı iki gündən bir dəyişdirilmiş və qida ilə suya sərbəst çıxış təmin edilmişdir. Təcrübədən əvvəl bir həftəlik adaptasiya dövrü tətbiq edilmişdir.

Adaptasiyadan sonra siçanlar hər birində 12 heyvan olan beş qrupa təsadüfi şəkildə təyin edilmişdir. Bununla belə mənbə, hər qrupdan heyvan identifikatorları üzrə təsadüfi seçilən altı siçanın bioloji analiz kohortu kimi istifadə olunduğunu və eyni altı siçanın fenotipik, histoloji, biokimyəvi, SCFA və bağırsaq mikrobiotası analizlərində ardıcıl izlənildiyini bildirir. Beləliklə sonlanım nöqtələri eyni fərdlər səviyyəsində uyğunlaşdırılmışdır. Şəkil və statistik nəticələrin əsas bioloji nümunə ölçüsü hər qrup üçün n = 6 olmuşdur.

CFU nə deməkdir?

CFU (colony-forming unit; koloniya əmələ gətirən vahid), kultura şəraitində çoxalaraq koloniya yarada bilən canlı mikroorqanizmlərin miqdarını ifadə edən eksperimental sayım vahididir. Tədqiqatda hazırlanmış bakteriya suspenziyalarının konsentrasiyaları 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ və 1 × 10¹⁰ CFU/mL səviyyələrinə tənzimlənmişdir. Hər heyvana 0,2 mL verildiyi üçün müvafiq gündəlik dozalar 2 × 10⁷, 2 × 10⁸ və 2 × 10⁹ CFU/siçan olmuşdur.

DAI nəyi ölçür?

Xəstəlik Aktivliyi İndeksi (Disease Activity Index, DAI), bu təcrübədə bədən çəkisi itkisi, nəcis konsistensiyası və nəcisdə qan əlamətlərinin birlikdə izlənməsinə əsaslanan kolit ağırlığı göstəricisidir. Siçanların bədən çəkisi, nəcis konsistensiyası və fekal qan vəziyyəti hər gün qiymətləndirilmişdir. Yüksək bal daha ağır eksperimental xəstəlik əlamətlərini göstərir.

Formula sərhədi: Məqalə DAI-nin bu meyarlara görə hesablandığını bildirir, lakin üç komponent balının vahid DAI dəyərində necə birləşdirildiyinə dair açıq riyazi tənlik vermir. Buna görə burada ədəbiyyatda istifadə oluna biləcək mümkün DAI formulası mənbə tədqiqata aid imiş kimi əlavə edilməmişdir.

Yoğun bağırsaq uzunluğu niyə qiymətləndirilmişdir?

DSS ilə yaradılmış kəskin kolon inflamasiya yoğun bağırsağın qısalması ilə müşayiət oluna bilər. Buna görə təcrübənin sonunda yoğun bağırsaq dartılmadan çıxarılmış və uzunluğu ölçülmüşdür. Normal nəzarət qrupunda orta 8,83 cm uzunluq DSS qrupunda 6,13 cm-ə düşmüş, üç CD12-1 qrupunda təxminən 7 cm səviyyəsinə yüksəlmişdir. Üç dozanın hamısı DSS qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə fərqli olmuş, lakin doza qrupları öz aralarında əhəmiyyətli şəkildə fərqlənməmişdir.

Üç CD12-1 doza qrupu arasında yoğun bağırsaq uzunluğu baxımından əhəmiyyətli fərq aşkar edilməmişdir (p > 0,05). Buna görə yoğun bağırsaq uzunluğu göstəricisi təkbaşına aşağı, orta və ya yüksək dozanı bir-birindən üstün göstərmir.

H&E histologiyası nə göstərmişdir?

Distal yoğun bağırsaqdan, anusdan təxminən 1 cm məsafədəki segment götürülmüş; %4 paraformaldehiddə fiksasiya edilmiş, parafinə yerləşdirilmiş, kəsilmiş və hematoksilin-eozin (H&E) ilə boyanmışdır. H&E toxuma arxitekturasını və hüceyrə zədəsini qiymətləndirmək üçün istifadə edilmişdir. DSS model qrupunda selikli qişa epitelinin soyulması, lamina proprianın üzə çıxması, nüvə piknozu və parçalanma ilə birlikdə hüceyrə nekrozu, kript atrofiyası/itkisi və nəzərəçarpan inflamatuar hüceyrə infiltrasiyası görülmüşdür.

Orta və yüksək doza qruplarında selikli qişa quruluşu və kript sayında qismən yaxşılaşma görülsə də nizamsız kript təşkili, inflamatuar hüceyrə infiltrasiyası və fokal ödem davam etmişdir. Aşağı doza qrupunda epitel quruluşunun daha yaxşı qorunduğu, kriptlərin daha çox və nəzərəçarpan olduğu, inflamatuar hüceyrə infiltrasiyasının isə daha məhdud qaldığı bildirilmişdir. Histopatoloji bal aşağı doza qrupunda normal nəzarət qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə fərqli olmamışdır (p > 0,05).

Təkrar istehsal oluna bilmə sərhədi: Tədqiqat histopatoloji zədənin Cooper və həmkarlarının meyarları ilə ballandığını bildirir, lakin bu qiymətləndirmə şkalasının bütün maddələrini öz metod bölməsində təkrar vermir. Buna görə mənbədə görünməyən histopatologiya qiymətləndirmə cədvəli burada yaradılmamışdır.

Goblet hüceyrələri və PAS boyanması nə göstərir?

Goblet hüceyrələri, bağırsaq selikli qişasında selik istehsal edən ixtisaslaşmış epitel hüceyrələridir. Selik qatı bağırsaq lümenindəki mikroorqanizmlər və digər məzmunla epitel arasında fiziki-kimyəvi baryer yaradır. Tədqiqatda 5 µm qalınlığındakı yoğun bağırsaq kəsikləri periodik turşu-Schiff (PAS) üsulu ilə boyanaraq goblet hüceyrələri qiymətləndirilmişdir.

DSS qrupunda goblet hüceyrələrinin sayı normal nəzarətə nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə azalmış; kript quruluşu pozulmuş, epitel nazilmiş, goblet hüceyrələri kiçilmiş və PAS boyanması zəifləmişdir. Üç CD12-1 qrupunun hamısında DSS qrupuna nisbətən goblet hüceyrəsi itkisi əhəmiyyətli dərəcədə az olmuşdur (p < 0,05). Aşağı doza qrupu ilə normal nəzarət arasında goblet hüceyrəsi sayı baxımından əhəmiyyətli fərq tapılmamışdır (p > 0,05).

ZO-1, Occludin və Claudin-1 niyə ölçülmüşdür?

ZO-1, Occludin və Claudin-1 bağırsaq epitel hüceyrələri arasındakı sıx birləşmə (tight junction) kompleksinin müxtəlif komponentləridir. Bu zülallar epitel hüceyrələri arasındakı sərhədin tənzimlənməsinə və bağırsaq baryerinin bütövlüyünə töhfə verir. Tədqiqat bu zülalları immunohistokimya (IHC) üsulu ilə boyamış və müsbət boyanmış sahələrin orta optik sıxlığını (Average Optical Density, AOD) ImageJ ilə hesablamışdır.

AOD, boyanmış görüntünün optik siqnal intensivliyini kəmiyyətcə müqayisə etməyə yarayan görüntü əsaslı ölçüdür. AOD burada mütləq zülal konsentrasiyası deyil; müəyyən boyama və görüntüləmə şəraitində qruplar arasındakı immunohistokimyəvi siqnal intensivliyini müqayisə etmək üçün istifadə edilmişdir.

İnflamatuar sitokinlər nəyi göstərir?

Yoğun bağırsaq toxumasında TNF-α, IL-6, IL-1β və IL-10 konsentrasiyaları ELISA ilə ölçülmüşdür. Mənbə Şəkil 4-də bu dəyərlər pg/mL vahidi ilə təqdim olunur. TNF-α, IL-6 və IL-1β eksperimental kontekstdə proinflamatuar cavabın göstəriciləri kimi; IL-10 isə antiinflamatuar tənzimləyici cavabla əlaqəli sitokin kimi qiymətləndirilmişdir.

Bu cədvəl xüsusilə IL-10 şərhində vacibdir. Mənbənin müzakirə bölməsində aşağı doza ilə inflamatuar tarazlığın yaxşılaşdığı daha ümumi dillə ifadə edilsə də nəticələr bölməsindəki statistik məlumat IL-10 artımının əhəmiyyətli olmadığını göstərir. Verianla mətnində statistik nəticənin sərhədi qorunmuşdur.

16S rRNA sekvenslənməsi nəyi ölçür?

16S ribosomal RNA gen sekvenslənməsi nümunədəki bakterial icmaların taksonomik quruluşunu araşdırmaq üçün istifadə olunan üsuldur. Bu araşdırmada eyni altı siçandan alınmış kor bağırsaq möhtəviyyatından mikrob DNT-si çıxarılmış, bakterial 16S rRNA geninin V3–V4 bölgəsi amplifikasiya edilmiş və Illumina NovaSeq 6000 platformasında sekvenslənmişdir.

16S analizi bakteriyaların nisbi icma quruluşunu göstərməyə kömək edir; lakin təkbaşına mikroorqanizmlərin hansı genləri aktiv şəkildə ifadə etdiyini, hansı metabolitləri hansı sürətlə istehsal etdiyini və ya CD12-1 ştammının bağırsaqda nə qədər canlı qaldığını birbaşa müəyyən etmir. Tədqiqatın özü də mikrobiota tərkibi ilə SCFA dəyişikliklərinin eyni vaxtda olmasının birbaşa mikrobiota → SCFA → baryer səbəbiyyət zəncirini sübut etmədiyini vurğulayır.

Chao1 və Shannon indeksləri arasındakı fərq nədir?

Chao1, nümunə daxilində takson zənginliyini, xüsusən müşahidə olunmamış və ya nadir taksonları nəzərə almağa çalışan alfa müxtəliflik göstəricisidir. Shannon indeksi isə yalnız neçə taksonun olduğuna deyil, onların nisbi paylanmasına da həssasdır. Tədqiqatda aşağı doza qrupunun Chao1 indeksi digər qruplardan əhəmiyyətli dərəcədə yüksək, yüksək doza qrupunun Shannon indeksi isə əhəmiyyətli dərəcədə aşağı olmuşdur.

Müxtəliflik indeksinin təkbaşına yüksəlməsi və ya azalması avtomatik olaraq “daha sağlam” və ya “daha zərərli” demək deyil. Bu göstəricilər icmanın riyazi quruluşunu təsvir edir və bioloji şərh takson tərkibi və digər xəstəlik göstəriciləri ilə birlikdə aparılmalıdır.

Bray–Curtis PCoA nə göstərmişdir?

Bray–Curtis məsafəsi nümunələrin mikrob tərkiblərinin bir-birinə nə qədər oxşar və ya fərqli olduğunu kəmiyyətləşdirən beta müxtəliflik ölçüsüdür. Principal Coordinates Analysis (PCoA) bu çoxölçülü məsafələri iki və ya bir neçə oxda vizuallaşdırır. Mənbə PCoA qrafikində normal nəzarət qrupu DSS-yə məruz qalan qruplardan aydın şəkildə ayrılmışdır. D, L və M qrupları böyük ölçüdə üst-üstə düşdüyü halda H qrupunun paylanması daha ayrı görünmüşdür.

PCoA üzərində ayrılma qrupların mikrob tərkiblərinin fərqlənə biləcəyini göstərir; təkbaşına hansı bakteriyanın dəyişikliyə səbəb olduğunu və ya bu fərqin xəstəliyin yaxşılaşmasına səbəb olduğunu sübut etmir.

Mikrobiota Dəyişiklikləri CD12-1-in Qoruyucu Mexanizmini Sübut Edirmi?

Xeyr. Tədqiqat müəyyən bakteriya cinsləri, xəstəlik göstəriciləri və qısa zəncirli yağ turşuları arasında statistik əlaqələr göstərmişdir; lakin 16S rRNA analizi metabolik fəaliyyəti birbaşa ölçməmiş, CD12-1-in bağırsaqdakı davamlılığı və aktivliyi izlənməmiş və korrelyasiya analizi səbəbiyyət yaratmamışdır. Buna görə mikrobiota və SCFA nəticələri CD12-1 müdaxiləsinə müşayiət edən əlaqəli cavablar kimi şərh edilməlidir.

Hansı bakteriya qruplarında dəyişiklik görülmüşdür?

Filum səviyyəsində Bacteroidetes, Firmicutes, Actinobacteria və Proteobacteria bütün qruplarda dominant qruplar arasındadır. DSS modelində normal nəzarətlə müqayisədə Firmicutes və Actinobacteria nisbi bolluqları əhəmiyyətli dərəcədə aşağı, Bacteroidetes və Proteobacteria isə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olmuşdur.

CD12-1-dən sonra Actinobacteria yüksək doza qrupunda DSS qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olmuşdur. Buna qarşı Bacteroidetes bütün müdaxilə qruplarında normal nəzarətdən yüksək qalmış və DSS qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənməmişdir. Firmicutes bolluğu D, L, M və H qrupları arasında müqayisə edilə bilən olmuşdur.

Cins səviyyəsində ümumi nisbi bolluq analizində DSS qrupu normal nəzarətlə müqayisədə daha aşağı Allobaculum, Lactobacillus, Bifidobacterium və Ruminococcus; daha yüksək Bacteroides və Oscillibacter göstərmişdir. Yüksək doza qrupunda Allobaculum DSS qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə yüksək, Oscillibacter isə əhəmiyyətli dərəcədə aşağı olmuşdur. Bu ümumi analizdə Lactobacillus və Ruminococcus üçün CD12-1-dən sonra əhəmiyyətli fərq görülməmiş; Bacteroides daha aşağı, Bifidobacterium isə daha yüksək istiqamətdə ədədi meyl göstərmiş, lakin fərqlər əhəmiyyətli olmamışdır.

Mənbənin əlavə diferensial bolluq analizində fərqli müqayisə quruluşundan istifadə edilmişdir: aşağı doza qrupunda Turicibacter və Lactobacillus; orta doza qrupunda Parabacteroides və Prevotella; yüksək doza qrupunda Akkermansia, Parabacteroides, Turicibacter, Bifidobacterium və Allobaculum zənginləşmiş kimi bildirilmişdir. Yüksək dozada Oscillospira və Desulfovibrio daha aşağı olmuşdur. Bu fərqli analiz nəticələri tək bir “yaxşı bakteriyalar artdı” cümləsinə endirilməməlidir.

Korrelyasiya matrisi necə oxunmalıdır?

Mənbə Şəkil 6-da bakteriya cinsləri ilə yoğun bağırsaq uzunluğu, DAI, histopatologiya balı, goblet hüceyrələri, ZO-1, Occludin, Claudin-1 və dörd sitokin arasındakı korrelyasiyalar göstərilmişdir. Qırmızı istiqamət müsbət, mavi istiqamət mənfi korrelyasiyanı; ulduzlar isə statistik əhəmiyyətliliyi göstərir. Tədqiqat mətnində açıq şəkildə bildirilən əhəmiyyətli əlaqələr aşağıdakı müstəqil cədvəldə ümumiləşdirilmişdir.

Prevotella, Turicibacter və Akkermansia üçün araşdırılan göstəricilərlə əhəmiyyətli korrelyasiya bildirilməmişdir. Həmçinin araşdırılan bakteriya cinslərinin heç biri TNF-α və ya IL-10 ilə əhəmiyyətli korrelyasiya göstərməmişdir.

Metodoloji çatışmazlıq: Mənbə korrelyasiya şəklini və p dəyərlərini verir, lakin metod bölməsində korrelyasiya əmsalının Pearson, Spearman və ya başqa üsulla hesablandığını açıq şəkildə göstərmir. Buna görə Verianla mətni korrelyasiya üsulunu təxmin etməmişdir.

Qısa zəncirli yağ turşuları niyə vacibdir?

Qısa zəncirli yağ turşuları (SCFAs), bağırsaq mikrob metabolizması ilə əlaqəli kiçik üzvi turşulardır. Tədqiqatda asetat, propionat, bütirat, izobütirat, valerat və izovalerat ölçülmüşdür. Mənbə Şəkil 7-də konsentrasiyalar µg/g vahidi ilə göstərilmişdir.

Daha Yüksək CD12-1 Dozası Daha Güclü Qoruma Təmin Etdimi?

Xeyr. CD12-1 cavabı monoton doza-cavab əlaqəsi göstərməmişdir: yüksək doza bədən çəkisi itkisini daha yaxşı məhdudlaşdırdığı halda aşağı doza histologiya, goblet hüceyrələri, ZO-1/Occludin, inflamatuar göstəricilər və asetat/bütirat kimi daha geniş sonlanım qrupunda ən əhatəli yaxşılaşma profilini göstərmişdir. Tədqiqat optimal dozanı müəyyən etməmiş və daha yüksək dozanın avtomatik olaraq daha faydalı hesab edilə bilməyəcəyini vurğulamışdır.

Tədqiqatın dəstəklədiyi nəticələr

• CD12-1-in üç dozası da DSS ilə induksiya edilmiş xəstəlik aktivliyinin bəzi göstəricilərini model qrupuna nisbətən zəiflətmişdir.
• Üç dozanın hamısı DSS mənşəli yoğun bağırsaq qısalmasını qismən azaltmışdır.
• Aşağı doza histoloji quruluş və goblet hüceyrələrində ən əhatəli qoruyucu profili göstərmişdir.
• Aşağı dozada ZO-1 və Occludin AOD dəyərləri DSS qrupuna nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə yüksəlmişdir.
• Aşağı və orta doza TNF-α və IL-1β səviyyələrini DSS qrupuna nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə azaltmışdır.
• Aşağı doza IL-6-nı əhəmiyyətli dərəcədə azaltmışdır.
• Aşağı doza asetat və bütiratı; orta doza asetatı əhəmiyyətli dərəcədə artırmışdır.
• CD12-1 tətbiqi bağırsaq mikrobiotası tərkibində doza-asılı olmayan dəyişikliklərlə birlikdə müşahidə edilmişdir.

Tədqiqatın dəstəkləmədiyi ümumiləşdirmələr

• CD12-1-in insanlarda xoralı koliti müalicə etdiyi nəticəsi çıxarıla bilməz.
• Tədqiqat artıq yaranmış kolitin müalicəsini sınaqdan keçirməmişdir; müdaxilə DSS-dən əvvəl başlamışdır.
• Ən yüksək dozanın ən yaxşı doza olduğu deyilə bilməz.
• Claudin-1-in əhəmiyyətli dərəcədə normal səviyyəyə qayıtdığı deyilə bilməz.
• IL-10-un aşağı dozada statistik olaraq əhəmiyyətli yüksəldiyi deyilə bilməz.
• Mikrobiota dəyişikliklərinin qoruyucu təsirin birbaşa səbəbi olduğu sübut edilməmişdir.
• Artan bütiratın müəyyən bakteriya qrupunun artımından birbaşa qaynaqlandığı sübut edilməmişdir.
• CD12-1-in bağırsaqda kolonizasiya etdiyi, nə qədər qaldığı və ya hansı metabolik fəaliyyəti göstərdiyi birbaşa ölçülməmişdir.
• Erkək siçanlar, xroniki kolit modelləri və ya insan populyasiyaları üçün eyni nəticələr fərz edilə bilməz.

Tədqiqatın Metodu və Nəticələri

1. CD12-1 bakteriya suspenziyasının hazırlanması

CD12-1 aktivləşdirilmiş və subkulturaya alınmışdır. Bakteriyalar 4500 rpm-də 10 dəqiqə sentrifuqalanaraq toplanmış və steril fosfat tamponlu salin (PBS) ilə üç dəfə yuyulmuşdur. Suspenziyalar 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ və 1 × 10¹⁰ CFU/mL səviyyələrinə tənzimlənmişdir. Təcrübə boyunca təzə suspenziya hər gün hazırlanmış və birdəfəlik steril şprislərlə oral qavaj yolu ilə dərhal tətbiq edilmişdir.

2. Heyvan nümunəsi və bioloji analiz kohortu

Altmış ədəd 6 həftəlik SPF dişi C57BL/6 siçan istifadə edilmişdir. Hər qrup başlanğıcda n = 12 heyvandan ibarət olmuşdur. Mənbə hər qrupdan fərdi heyvan identifikatorları əsasında və bədən çəkisi, DAI və ya başqa təcrübə nəticəsinə baxılmadan altı heyvanın təsadüfi bioloji analiz kohortuna seçildiyini bildirir. Eyni altı heyvan bütün fenotipik, histoloji, biokimyəvi, SCFA və mikrobiota analizlərində istifadə edilmişdir.

Hesabat boşluğu: Məqalə başlanğıcda hər qrupda olan digər altı siçanın sonrakı analitik istifadəsini ətraflı izah etmir. Nəticə şəkilləri və statistik analizlər hər qrup üçün altı bioloji müstəqil siçan əsasında hesabat verilmişdir.

3. Təcrübənin sonunda nümunələrin toplanması

Üç həftəlik eksperimental müdaxilənin sonunda siçanlar 12 saat ac saxlanılmış və servikal dislokasiya yolu ilə evtanaziya edilmişdir. Bütün yoğun bağırsaq çıxarılmış, dartılmadan uzunluğu ölçülmüş və steril PBS ilə yuyulmuşdur. Yoğun bağırsağın bir hissəsi histoloji analiz üçün %4 paraformaldehiddə fiksasiya edilmiş; qalan yoğun bağırsaq toxumaları və kor bağırsaq möhtəviyyatı maye azotla sürətlə dondurulmuş və sonrakı analizlərə qədər −80 °C-də saxlanılmışdır.

4. H&E və PAS histologiyası

H&E analizi üçün distal yoğun bağırsaqdan anusdan təxminən 1 cm məsafədəki segment istifadə edilmişdir. Toxuma %4 paraformaldehiddə fiksasiya edilmiş, parafinə yerləşdirilmiş və H&E ilə boyanmışdır. Histopatoloji zədə Cooper və həmkarlarının meyarları əsasında ballanmışdır.

PAS analizi üçün yoğun bağırsaq toxumaları %4 paraformaldehiddə gecə boyunca fiksasiya edilmiş, parafinə yerləşdirilmiş və 5 µm qalınlığında kəsilmişdir. PAS boyanmasından sonra işıq mikroskopunda görüntülənmiş və goblet hüceyrələri qiymətləndirilmişdir.

5. İmmunohistokimyəvi baryer analizi

Parafin kəsikləri iki dəfə 15 dəqiqə ksilendə deparafinizasiya edilmiş və pilləli etanol sıralarında rehidratasiya edilmişdir. Antigenin bərpası pH 6,0 sitrat tamponunda mikrodalğa ilə 8 dəqiqə isitmə, 8 dəqiqə fasilə və yenidən 7 dəqiqə isitmə şəklində həyata keçirilmişdir. Kəsiklər otaq temperaturuna soyudulmuş və pH 7,4 PBS ilə üç dəfə, hər biri beş dəqiqə olmaqla yuyulmuşdur.

Endogen peroksidaza aktivliyi %3 H₂O₂ ilə qaranlıqda 25 dəqiqə bloklanmış; qeyri-spesifik bağlanma %3 bovin serum albumini (BSA) ilə 30 dəqiqə əngəllənmişdir. Primer anticisim inkubasiyası rütubətli mühitdə 4 °C-də gecə boyunca davam etdirilmişdir. Sekonder anticisim otaq temperaturunda qaranlıqda 50 dəqiqə tətbiq edilmiş, immunoreaktivlik 3,3′-diaminobenzidin (DAB) ilə 5 dəqiqə görünən hala gətirilmiş və hematoksilinlə əks boyama aparılmışdır.

Görüntülər CaseViewer 2.4 ilə qeydə alınmış; müsbət boyanan bölgələrin orta optik sıxlığı ImageJ 1.54p ilə hesablanmışdır.

6. Sitokin ölçülməsi

Yoğun bağırsaq toxumalarında IL-1β, IL-6, IL-10 və TNF-α konsentrasiyaları Elabscience Biotechnology tərəfindən təmin edilmiş ELISA dəstləri ilə və istehsalçının təlimatlarına uyğun ölçülmüşdür. Mənbənin metod bölməsi bu dəstlərin kataloq nömrələrini və ya ətraflı kalibrləmə əyrilərini bildirmir.

7. 16S rRNA mikrobiota analizi

Eyni altı siçanın kor bağırsaq möhtəviyyatı istifadə edilmişdir. Mikrob DNT-si MagBeads FastDNA Kit for Soil ilə çıxarılmış; DNT bütövlüyü %0,8 agaroz gel elektroforezi ilə, konsentrasiyası və saflığı NanoDrop spektrofotometri ilə qiymətləndirilmişdir.

Bakterial 16S rRNA geninin V3–V4 bölgəsi aşağıdakı primerlərlə amplifikasiya edilmişdir:

• 338F: 5′-barcode-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′
• 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′

PCR məhsulları konsentrasiyalarına görə ekvimolyar miqdarlarda birləşdirilmiş və Illumina NovaSeq 6000 platformasında sekvenslənmişdir. Xam ardıcıllıqlar QIIME 2 demux plagini ilə nümunələrə ayrılmış, primerlər cutadapt ilə çıxarılmışdır. Keyfiyyət filtrlənməsi, denoising, paired-end ardıcıllıqların birləşdirilməsi və ximeraların çıxarılması DADA2 ilə həyata keçirilmiş; denoise edilmiş ardıcıllıqlardan amplicon sequence variant (ASV) quruluşu və xüsusiyyət-bolluq cədvəli yaradılmışdır.

Aşağı axın mikrobiom analizləri QIIME 2 versiyası 2024.5 ilə aparılmışdır. Mənbə “dataset-specific parameter settings” istifadə etdiyini bildirir, lakin bütün QIIME 2/DADA2 parametrlərini ayrı-ayrılıqda dərc etmir; buna görə çatışmayan parametrlər Verianla tərəfindən tamamlanmamışdır.

8. SCFA ölçülməsi və LC–MS/MS hazırlığı

Hər analizdə 20 mg bağırsaq möhtəviyyatı, iki paslanmayan polad muncuq və daxili standart olan 800 µL ekstraksiya məhlulu ilə işlənmişdir. Nümunə 60 saniyə vortekslənmiş, 55 Hz-də iki dəfə 60 saniyə homogenləşdirilmiş və 4000 × g, 10 °C-də 10 dəqiqə sentrifuqalanmışdır.

Supernatantın 40 µL-nə 20 µL 200 mM 3-nitrofenilhidrazin (3-NPH) və %6 piridin olan 20 µL 120 mM 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroxlorid (EDC·HCl) əlavə edilmişdir. Törəmələşdirmə 40 °C-də, 1200 rpm-də 30 dəqiqə həyata keçirilmişdir.

Qarışıq buz üzərində 3 dəqiqə soyudulmuş və 12.000 × g, 4 °C-də 10 dəqiqə sentrifuqalanmışdır. Daha sonra 50 µL supernatant, %0,1 (v/v) qarışqa turşusu olan 150 µL su ilə durulaşdırılmış, 60 saniyə vortekslənmiş və eyni şəraitdə yenidən sentrifuqalanmışdır. Son supernatant 0,22 µm membran filtrdən keçirilərək avtonümunəgötürücü vialına köçürülmüş və SCIEX LC–MS/MS sistemi ilə analiz edilmişdir.

3-NPH/EDC·HCl törəmələşdirmə addımının analitik məqsədi kiçik karboksil turşularının LC–MS/MS ilə daha uyğun şəkildə ayrılmasına və aşkarlanmasına imkan verən kimyəvi törəmələr yaratmaqdır. Bu izah metodun analitik funksiyasını açıqlayır; tədqiqata aid yeni nəticə deyil.

9. Statistik analiz

Məlumatlar Microsoft Excel 2021 ilə təşkil edilmiş və IBM SPSS Statistics 27.0 ilə analiz edilmişdir. Statistik analizlər hər qrup üçün altı bioloji müstəqil siçana əsaslanmış və nəticələr orta ± ortanın standart xətası (SEM) kimi təqdim edilmişdir.

• Normal paylanma: Shapiro–Wilk testi.
• Dispersiya homogenliyi: Levene testi.
• Normal + homogen dispersiya: bir istiqamətli ANOVA + Duncan çoxsaylı müqayisə testi.
• Dispersiya homogenliyi təmin olunmadıqda: Welch ANOVA + Games–Howell testi.
• Normal paylanmayan məlumatlar: Kruskal–Wallis + Dunn çoxsaylı müqayisə testi.
• Bədən çəkisi və DAI zaman sıraları: iki istiqamətli təkrarlanan ölçmələr ANOVA + Sidak çoxsaylı müqayisəsi.
• Statistik əhəmiyyətlilik həddi: p < 0,05.

SEM nümunələr arasındakı bioloji yayılmanın birbaşa ölçüsü olan standart sapma ilə eyni deyil; bu tədqiqatda SEM qrup ortasının qiymətləndirilməsindəki qeyri-müəyyənliyi ifadə edən xəta göstəricisi kimi təqdim edilmişdir.

10. Bədən çəkisi və DAI nəticələri

Normal nəzarət qrupunun çəkisi DSS dövrü boyunca tədricən artmışdır. DSS model qrupunda çəki itkisi üçüncü gündən etibarən aydınlaşmış və ən böyük azalma yeddinci gündə görülmüşdür. Üç CD12-1 qrupu da DSS mənşəli çəki itkisinə qarşı müxtəlif dərəcələrdə qoruma göstərmişdir; mənbənin müzakirəsi yüksək doza qrupunun çəki itkisini daha effektiv məhdudlaşdırdığını bildirir.

DSS model qrupunda DAI günlər irəlilədikcə yüksəlmiş və yeddinci gündə normal nəzarətdən əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olmuşdur. Həmin gün L, M və H qruplarının DAI dəyərləri D qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə aşağı (p < 0,05), lakin normal nəzarətdən yüksək qalmışdır. Bu nəticə müdaxilənin xəstəlik aktivliyini zəiflətdiyini, lakin DSS təsirini tam aradan qaldırmadığını göstərir.

11. Histologiya və goblet hüceyrəsi nəticələri

H&E və PAS görüntülərinin özü ilkin histoloji sübut olduğuna görə Verianla daxilində saxta mikroskopiya yaradılmamışdır. Mənbə görüntülərinin elmi nəticəsi mətn və müqayisələr vasitəsilə ötürülmüşdür: DSS epitel bütövlüyünü, kriptləri və goblet hüceyrələrini pozmuş; aşağı doza CD12-1 bu göstəricilərdə ən əhatəli qoruyucu profili göstərmişdir.

12. Mikrobiota nəticələrinin düzgün oxunması

Mikrobiota nəticələri müxtəlif analiz qatlarından ibarətdir. Əsas nisbi bolluq qrafikləri, alfa/beta müxtəliflik analizi və əlavə diferensial bolluq analizləri eyni sualı ölçmür. Buna görə, məsələn, əsas nisbi bolluq müqayisəsində Lactobacillus üçün müdaxilə qrupları ilə D arasında əhəmiyyətli fərq görülməməsi ilə əlavə diferensial analizdə L qrupunda Lactobacillus zənginləşməsinin bildirilməsi vahid statistik nəticə kimi birləşdirilməməlidir.

13. Mikrobiota–SCFA mexanizminin sərhədi

CD12-1 verilən qruplarda bəzi mikrob taksonlarının bolluğu və bəzi SCFA səviyyələri paralel şəkildə dəyişmişdir. Mənbə xüsusilə Ruminococcaceae üzvləri arasında məlum bütirat istehsalçılarının olduğunu müzakirə edir. Bununla belə bu tədqiqatda mikrob metabolik fəaliyyəti birbaşa ölçülmədiyi üçün “Ruminococcaceae artdı və buna görə bütirat artdı” şəklində səbəbiyyət nəticəsi qurula bilməz.

14. Doza-cavab əlaqəsinin sərhədi

Yüksək dozanın hər sonlanım nöqtəsində aşağı dozadan daha təsirli olmaması tədqiqatın əsas nəticələrindən biridir. CD12-1-in bağırsaqdakı real bolluğu, davamlılığı və metabolik fəaliyyəti ştamma spesifik üsullarla izlənmədiyi üçün bu xətti olmayan cavabın bioloji səbəbi müəyyən edilməmişdir. Müəlliflər daha geniş doza aralığı, ştamma spesifik izləmə və funksional analizlərin lazım olduğunu bildirirlər.

15. Başlıca məhdudiyyətlər

• Yalnız dişi C57BL/6 siçanlar istifadə edilmişdir.
• Model kəskin DSS kolitidir; insan xoralı kolitinin xroniki və təkrarlanan təbiətini tam təmsil etmir.
• CD12-1 DSS-dən əvvəl başlanmışdır; nəticələr profilaktik təsiri dəstəkləyir, artıq yaranmış xəstəliyin müalicəsini deyil.
• Mikrobiota analizində hər qrup üçün n = 6 bioloji təkrarın olması daha kiçik takson fərqlərini aşkar etmək üçün statistik gücü məhdudlaşdıra bilər.
• 16S rRNA analizi mikrob metabolik fəaliyyətini birbaşa ölçmür.
• CD12-1-in bağırsaqda kolonizasiyası, davamlılığı və ya metabolik fəaliyyəti birbaşa izlənməmişdir.
• Korrelyasiya üsulu mənbənin metod bölməsində Pearson/Spearman kimi açıq adla göstərilməmişdir.
• DAI komponentlərinin vahid skora çevrilməsi üçün açıq riyazi tənlik verilməmişdir.
• Histopatoloji qiymətləndirmə şkalasının bütün maddələri məqalədə hesabat edilməmiş, xarici istinada bağlanmışdır.
• QIIME 2 üçün istifadə olunan bütün məlumat dəstinə spesifik parametrlər ayrı-ayrılıqda bildirilməmişdir.
• İnsanlarda təhlükəsizlik, optimal doza, klinik effektivlik və uzunmüddətli istifadə qiymətləndirilməmişdir.

Mənbə və Metod Qeydi

Orijinal tədqiqat: Preventive Effects of Fermented Yak Milk-Derived Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 Against DSS-Induced Colitis in Mice

Müəlliflər: Hongqiang Li; Teng Zhen; Junyang Li; Furong Han; Xian Guo; Defu Tang; Cheng Peng.

Müəllif sırası: Mənbə PDF-dəki sıra olduğu kimi qorunmuşdur.

Bərabər töhfə: Mənbə məqalədə ortaq birinci müəlliflik/bərabər töhfə bəyanı görünmür.

Məsul müəlliflər: Defu Tang və Cheng Peng.

Affiliasiya 1: College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China.

Affiliasiya 2: Gansu Animal Husbandry Technology Extension Station, Lanzhou 730030, China.

Affiliasiya 3: Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding on Tibetan Plateau, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Key Laboratory of Yak Breeding Engineering of Gansu Province; Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, China.

Jurnal: Foods.

Nəşriyyat: MDPI, Basel, Switzerland.

Cild / nömrə / məqalə nömrəsi: 15 / 17 / 3120.

DOI: 10.3390/foods15173120.

Rəsmi keçid: https://doi.org/10.3390/foods15173120

Göndərilmə: 5 Avqust 2026.

Reviziya: 25 Avqust 2026.

Qəbul: 31 Avqust 2026.

Nəşr: 2 Sentyabr 2026.

Mənbə növü: Eksperimental heyvan araşdırması məqaləsi.

Resenziya statusu: Resenziyalı elmi jurnalda dərc edilmiş version of record.

Preprint statusu: Yüklənmiş fayl preprint deyil, dərc edilmiş jurnal versiyasıdır. Mənbə məqalə ayrıca preprint nömrəsi bildirmir.

Lisenziya: Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).

Tədqiqatın əsas modeli: %2,5 DSS ilə yaradılmış kəskin kolit modeli; yalnız dişi C57BL/6 siçanlar.

Etika komitəsi: Gansu Agricultural University, Ethics Committee of Laboratory Animal Management and Animal Welfare; No. GSAU-Eth-VMC-2022-016; təsdiq tarixi 10 Mart 2022.

Məlumatlandırılmış razılıq: Tətbiq edilmir; araşdırma heyvan təcrübəsidir.

Məlumatların əlçatanlığı: Tədqiqatın orijinal töhfələrinin məqalə və Supplementary Materials daxilində olduğu, əlavə məlumat tələblərinin məsul müəlliflərə yönəldilə biləcəyi bildirilmişdir.

Əlavə materiallar: Figure S1 müxtəlif filum və cinslərin nisbi bolluq müqayisələrini; Figure S2 isə C–D, D–L, D–M və D–H müqayisələrində cins səviyyəsində diferensial bolluq nəticələrini ehtiva edir.

Maliyyələşdirmə: Science and Technology Project of the Department of Agriculture and Rural Affairs of Gansu Province (GNKJ-2026-24); Fostering Foundation for the Excellent Ph.D. Dissertation of Gansu Agricultural University (YB2025002); Gansu Province University Graduate “Innovation Star” Project (2026CXZX-779); Science and Technology Project of Gansu Province (26ZDNA010).

Maraqlar toqquşması: Müəlliflər maraqlar toqquşmasının olmadığını bəyan etmişlər.

Müəllif töhfələri: Konseptuallaşdırma H.L., T.Z. və F.H.; metodologiya H.L., T.Z., X.G. və J.L.; proqram təminatı T.Z. və X.G.; formal analiz H.L. və T.Z.; məlumatların idarə edilməsi H.L., T.Z. və J.L.; ilkin layihənin yazılması H.L., C.P. və D.T.; nəzərdən keçirmə və redaktə H.L. və D.T. tərəfindən aparılmışdır.

Mənbədaxili şərh qeydi: Nəticələr bölməsində IL-10-un L və M qruplarında ədədi olaraq artdığı, lakin D və ya C qrupundan əhəmiyyətli şəkildə fərqlənmədiyi (p > 0,05) bildirilir. Müzakirədəki daha ümumi “IL-10 artımı” ifadəsi bu statistik sərhədi aradan qaldırmır; Verianla mətnində əhəmiyyətli olmayan nəticə əhəmiyyətli imiş kimi təqdim edilməmişdir.

Korrelyasiya qeydi: Mənbə əhəmiyyətli mikrobiota–fenotip əlaqələrini bildirir, lakin korrelyasiya əmsalının Pearson, Spearman və ya başqa üsul olduğunu metod bölməsində açıq yazmır. Bu məlumat mənbədən kənar tamamlanmamışdır.

DAI formula qeydi: DAI-nin çəki itkisi, nəcis konsistensiyası və nəcisdə qan ballarına əsaslandığı açıq şəkildə verilib; lakin vahid DAI dəyərini formalaşdıran açıq riyazi birləşdirmə formulası məqalədə yazılmayıb. Verianla mənbədən kənar formula əlavə etməyib.

Vizual metod: H&E, PAS və immunohistokimya görüntüləri ilkin raster eksperimental sübut olduğu üçün təqlid edilməmişdir. Təcrübə zaman xətti mənbə metod əlaqələrindən sıfırdan SVG olaraq qurulmuş; korrelyasiya və SCFA nəticələri isə mənbədə açıq ifadə olunan əhəmiyyətli əlaqələr əsasında müstəqil HTML cədvəlləri ilə təqdim edilmişdir. Qrafiklərdən xam məlumat olmadığı halda dəqiq ədədi dəyərlər çıxarılmamışdır.

Əsas şərh sərhədi: Bu tədqiqat insanlarda klinik müalicə sınağı deyil və CD12-1-in artıq formalaşmış xoralı koliti müalicə etdiyini göstərmir. Nəticələr kəskin DSS modelində, yalnız dişi siçanlarda və qoruyucu müdaxilə quruluşunda əldə edilmişdir. Klinik istifadə üçün hər iki cinsi əhatə edən əlavə heyvan modelləri, daha böyük nümunələr və daha sonra insan klinik tədqiqatları tələb olunur.