Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 ni aina ya bakteria ambayo hapo awali ilitengwa kutoka kwenye maziwa ya yak yaliyoochushwa kwa njia ya jadi na kuchunguzwa kwa sifa zake kama mgombea wa probiotiki. Utafiti huu haukuchunguza matibabu ya koliti ya vidonda kwa binadamu kwa kutumia CD12-1, bali athari yake ya kinga dhidi ya koliti kali ya majaribio iliyosababishwa kwa dextran sulfate sodium (DSS) katika panya jike wa C57BL/6 pekee. Panya waligawanywa katika kundi la udhibiti wa kawaida, kundi la udhibiti wa modeli ya DSS na makundi matatu ya dozi tofauti za CD12-1; uingiliaji wa bakteria ulianza kabla ya mfiduo wa DSS na uliendelea katika wiki ya mwisho ambayo DSS ilitolewa.

Modeli ya DSS ilisababisha kupungua kwa uzito wa mwili, kuongezeka kwa faharasa ya shughuli za ugonjwa (Disease Activity Index, DAI), kufupika kwa koloni, uharibifu wa mucosa na crypt, kupotea kwa seli za goblet, kupungua kwa protini zinazohusiana na kizuizi cha utumbo na kuongezeka kwa sitokini proinflamatori katika panya. Katika makundi matatu yaliyopewa CD12-1, baadhi ya mabadiliko haya yalipungua kwa viwango tofauti. Hata hivyo, mwitikio haukuonyesha uhusiano wa mstari wa “kadiri dozi inavyoongezeka ndivyo manufaa yanavyoongezeka”.

Kundi la dozi ya chini lilipokea 2 × 10⁷ CFU/panya kwa siku, kundi la dozi ya kati 2 × 10⁸ CFU/panya, na kundi la dozi ya juu 2 × 10⁹ CFU/panya ya CD12-1. Dozi ya chini ilionyesha wasifu mpana zaidi wa manufaa katika uharibifu wa histopatolojia, seli za goblet, protini za kizuizi cha epitheliamu kama ZO-1 na Occludin, baadhi ya sitokini za uchochezi na viwango vya asetati/butirati. Kwa upande mwingine, dozi ya juu ilionyesha athari iliyoonekana zaidi katika kupunguza kupotea kwa uzito wa mwili. Kwa hiyo, utafiti hauungi mkono hitimisho la “dozi ya juu zaidi ndiyo bora zaidi” kwa kutegemea kipimo kimoja.

Urefu wa koloni ulipimwa kuwa 8,83 ± 0,32 cm katika kundi la udhibiti wa kawaida na 6,13 ± 0,12 cm katika kundi la modeli ya DSS. Baada ya CD12-1, thamani katika makundi ya dozi ya chini, kati na juu zilikuwa 7,02 ± 0,21 cm, 7,07 ± 0,26 cm na 7,02 ± 0,25 cm, mtawalia. Katika makundi yote matatu ya uingiliaji, urefu wa koloni ulikuwa mkubwa kwa kiwango chenye umuhimu wa kitakwimu kuliko katika kundi la modeli ya DSS (p < 0,05), lakini hakukuwa na tofauti yenye umuhimu kati ya dozi hizo tatu (p > 0,05).

Katika tathmini ya kizuizi cha epitheliamu ya utumbo, dozi ya chini ya CD12-1 iliongeza kwa kiwango chenye umuhimu ishara ya immunohistokemia ya ZO-1 na Occludin ikilinganishwa na kundi la DSS; hakukuwa na tofauti yenye umuhimu kati ya dozi ya chini na udhibiti wa kawaida kwa vipimo hivi viwili. Claudin-1 ilionyesha mwelekeo wa kuongezeka katika makundi ya CD12-1, lakini tofauti dhidi ya kundi la DSS haikufikia umuhimu wa kitakwimu. Tofauti hii ni muhimu: utafiti hauonyeshi kwamba protini zote za tight junction zilirejea katika kiwango sawa.

Katika tishu za koloni, TNF-α, IL-6 na IL-1β ziliongezeka kwa DSS. Katika dozi za chini na za kati, TNF-α na IL-1β zilikuwa chini kwa kiwango chenye umuhimu kuliko kundi la DSS; kupungua kwa IL-6 kwa kiwango chenye umuhimu kulionekana katika dozi ya chini. Ingawa IL-10 iliongezeka kwa thamani za namba katika dozi za chini na za kati, ongezeko hili halikuwa na umuhimu dhidi ya kundi la DSS katika ulinganisho wa kitakwimu wa sehemu ya matokeo (p > 0,05). Kwa hiyo, haiwezi kusemwa kuwa “ongezeko lenye umuhimu la IL-10 limethibitishwa”.

Ufuatiliaji wa jeni ya 16S rRNA ulionyesha kuwa uingiliaji wa CD12-1 uliambatana na mabadiliko katika muundo wa mikrobiota ya utumbo. Mahusiano tofauti kulingana na dozi yalionekana katika Lactobacillus, Bifidobacterium, Allobaculum, Akkermansia, Bacteroides, Sutterella, Desulfovibrio na taksoni nyingine. Katika uchanganuzi wa uhusiano, baadhi ya bakteria zilihusishwa na shughuli ndogo za ugonjwa na viashiria bora vya kizuizi, ilhali nyingine zilihusishwa na viashiria vya juu vya uchochezi. Hata hivyo, mahusiano haya si ushahidi wa usababisho; uchanganuzi wa 16S wa utafiti haukupima moja kwa moja shughuli halisi za kimetaboliki za vijidudu au muda ambao CD12-1 hubaki katika utumbo.

Kwa asidi za mafuta za mnyororo mfupi (Short-Chain Fatty Acids, SCFAs), asetati, propionati na butirati zilipungua kwa kiwango chenye umuhimu katika kundi la modeli ya DSS ikilinganishwa na udhibiti wa kawaida. Dozi ya chini ya CD12-1 iliongeza asetati na butirati kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na kundi la DSS, na vipimo hivi viwili havikutofautiana kwa kiwango chenye umuhimu na kundi la udhibiti wa kawaida. Dozi ya kati iliongeza asetati; dozi ya juu haikuonyesha wasifu mpana sawa wa uboreshaji wa SCFA.

Kikomo muhimu zaidi cha kutafsiri utafiti huu ni kwamba matokeo si ushahidi wa matibabu ya koliti ya vidonda kwa binadamu. Utafiti ulifanywa kwa modeli kali ya DSS katika panya jike pekee, na CD12-1 ilianza kutolewa kabla ya ugonjwa kuanzishwa. Hali sugu na ya kurudia ya koliti ya vidonda kwa binadamu, tofauti za jinsia, usalama wa muda mrefu, dozi bora kwa binadamu na ufanisi wa kliniki havikuamuliwa na jaribio hili.

Swali kuu la utafiti lilikuwa nini?

Swali kuu la utafiti lilikuwa kama aina ya Lacticaseibacillus paracasei CD12-1, iliyotengwa hapo awali kutoka kwenye maziwa ya yak yaliyoochushwa, inaweza kupunguza uharibifu wa koloni unaosababishwa na DSS ikiwa itatolewa kabla ya uchochezi wa majaribio kuanzishwa katika utumbo na wakati uchochezi unaanzishwa. Waandishi hawakutathmini dalili za ugonjwa pekee, bali pia sehemu nyingi za mwisho zinazokamilishana, kama muundo wa mucosa, seli za goblet, tight junction za epitheliamu, sitokini, mikrobiota ya utumbo na metaboliti za vijidudu.

Je, Panya Walipewa Maziwa ya Yak Yaliyoochushwa?

Hapana. Maziwa ya yak yaliyoochushwa hayakutolewa moja kwa moja kwa panya; aina ya bakteria CD12-1 iliyotumika katika utafiti ilikuwa imetengwa hapo awali kutoka kwenye maziwa ya yak yaliyoochushwa kwa njia ya jadi, na katika utafiti huu panya walipewa kwa gavage ya mdomo suspeni mpya za bakteria CD12-1 zilizoandaliwa katika PBS.

Kwa nini CD12-1 ilichunguzwa?

Katika utafiti wa awali wa waandishi, CD12-1 iliripotiwa kuonyesha ustahimilivu dhidi ya mazingira yenye asidi, chumvi za nyongo na hali za njia ya chakula zilizosanifiwa; pia ilionyesha shughuli ya kioksidishaji na wasifu unaofaa wa usalama. Katika tathmini ya kijeni, jeni teule ambazo zinaweza kuhusishwa na kuzoea mazingira na kazi za probiotiki pia zilitambuliwa. Matokeo haya ya awali yalitumiwa kama msingi wa uwezekano kwamba aina hii inaweza kuishi wakati wa kupita kwenye njia ya chakula na kufanya kazi katika mazingira ya utumbo. Hata hivyo, kwa kuwa sifa za awali za in vitro/kijenomu pekee hazikuwa ushahidi wa athari ya in vivo kwa koliti, jaribio hili la panya lilifanywa.

Modeli ya koliti inayosababishwa na DSS ni nini?

Dextran sulfate sodium (DSS) ni wakala wa majaribio unaoongezwa kwa mkusanyiko maalum katika maji ya kunywa ya wanyama wa majaribio ili kusababisha uharibifu na uchochezi katika mucosa ya koloni. Katika utafiti huu, DSS yenye uzito wa molekuli 36.000–50.000 Da ilitolewa kwa mkusanyiko wa %2,5 (w/v) katika wiki ya mwisho. Katika modeli hiyo, dalili za koliti ya majaribio kama kupotea kwa uzito wa mwili, kuhara, damu kwenye kinyesi, kufupika kwa koloni, uharibifu wa crypt na kupenya kwa seli za uchochezi zilitokea.

Modeli ya DSS inaweza kuiga baadhi ya sifa za kliniki na histopatolojia za koliti ya vidonda kwa binadamu, lakini haiwezi kurudia sifa zote za kinga, kijeni, kimazingira na za muda mrefu zinazojirudia za ugonjwa wa binadamu. Kwa hiyo, haiwezi kudhaniwa kwamba uingiliaji unaofanya kazi katika modeli ya DSS utatoa matokeo sawa katika koliti ya vidonda kwa binadamu.

Je, CD12-1 Ilitibu Koliti Katika Utafiti Huu?

Utafiti huu hauonyeshi matibabu ya koliti ambayo tayari imeanzishwa. CD12-1 ilianza takribani wiki mbili kabla ya mfiduo wa DSS na iliendelea katika wiki ambayo DSS ilitolewa; kwa hiyo, muundo wa jaribio unatathmini hasa athari ya kinga/ya kuzuia, na hitimisho kuhusu ufanisi wa kimatibabu dhidi ya koliti ya vidonda ya binadamu iliyoanzishwa haliwezi kutolewa.

Makundi ya jaribio yaliundwaje?

Jumla ya panya jike 60 wa C57BL/6, wenye umri wa wiki 6 na wasio na vimelea maalum (SPF), walitumika. Uzito wa mwili wa awali ulikuwa 18 ± 2 g. Wanyama walihifadhiwa katika 23 ± 2 °C, unyevu wa jamaa wa %50 ± 5 na mzunguko wa saa 12 mwanga/saa 12 giza; malazi yalibadilishwa kila baada ya siku mbili na ufikiaji huru wa chakula na maji ulitolewa. Kipindi cha wiki moja cha kuzoea mazingira kilifanyika kabla ya jaribio.

Baada ya kuzoea, panya waligawanywa kwa nasibu katika makundi matano ya wanyama 12 kila moja. Hata hivyo, chanzo kinaripoti kwamba panya sita kutoka kila kundi walichaguliwa kwa nasibu kwa kutumia utambulisho wa wanyama kama kohorti ya uchanganuzi wa kibayolojia, na panya hao hao sita walifuatiliwa mfululizo katika uchanganuzi wa fenotipu, histolojia, biokemia, SCFA na mikrobiota ya utumbo. Hivyo, sehemu za mwisho zilioanishwa katika kiwango cha watu wale wale. Ukubwa mkuu wa sampuli ya kibayolojia kwa takwimu na matokeo ya picha ulikuwa n = 6 kwa kila kundi.

CFU ina maana gani?

CFU (colony-forming unit; kitengo kinachounda koloni) ni kitengo cha majaribio kinachotumika kuonyesha kiasi cha vijidudu hai vinavyoweza kuzaliana na kuunda koloni chini ya hali za ukuzaji. Katika utafiti, viwango vya suspeni za bakteria vilirekebishwa kuwa 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ na 1 × 10¹⁰ CFU/mL. Kwa kuwa kila mnyama alipewa 0,2 mL, dozi za kila siku zinazolingana zilikuwa 2 × 10⁷, 2 × 10⁸ na 2 × 10⁹ CFU/panya.

DAI hupima nini?

Faharasa ya Shughuli za Ugonjwa (Disease Activity Index, DAI) ni kipimo cha ukali wa koliti katika jaribio hili kinachotegemea ufuatiliaji wa pamoja wa kupotea kwa uzito wa mwili, uthabiti wa kinyesi na damu katika kinyesi. Uzito wa mwili, uthabiti wa kinyesi na hali ya damu ya kinyesi ya panya vilitathminiwa kila siku. Alama ya juu inaonyesha dalili kali zaidi za ugonjwa wa majaribio.

Kikomo cha fomula: Makala inaeleza kuwa DAI ilihesabiwa kwa kutumia vigezo hivi, lakini haitoi mlinganyo wa wazi wa kihisabati unaoonyesha jinsi alama za vipengele vitatu zilivyounganishwa kuwa thamani moja ya DAI. Kwa hiyo, fomula inayoweza kutumiwa katika fasihi haijaongezwa hapa kana kwamba ni ya utafiti wa chanzo.

Kwa nini urefu wa koloni ulitathminiwa?

Uchochezi mkali wa koloni unaosababishwa na DSS unaweza kuambatana na kufupika kwa koloni. Kwa hiyo, mwisho wa jaribio koloni ilitolewa bila kunyooshwa na urefu wake ukapimwa. Urefu wa wastani wa 8,83 cm katika kundi la udhibiti wa kawaida ulipungua hadi 6,13 cm katika kundi la DSS, na katika makundi matatu ya CD12-1 uliongezeka hadi takribani 7 cm. Dozi zote tatu zilitofautiana kwa kiwango chenye umuhimu na kundi la DSS, lakini makundi ya dozi hayakutofautiana kwa kiwango chenye umuhimu baina yao.

Hakukuwa na tofauti yenye umuhimu katika urefu wa koloni kati ya makundi matatu ya dozi ya CD12-1 (p > 0,05). Kwa hiyo, kipimo cha urefu wa koloni peke yake hakionyeshi kuwa dozi ya chini, ya kati au ya juu ni bora kuliko nyingine.

Histolojia ya H&E ilionyesha nini?

Sehemu ilichukuliwa kutoka koloni ya distali, takribani 1 cm kutoka kwenye anus; ilifiksishwa katika %4 paraformaldehyde, kupachikwa kwenye parafini, kukatwa na kupakwa rangi ya hematoxylin-eosin (H&E). H&E ilitumika kutathmini usanifu wa tishu na uharibifu wa seli. Katika kundi la modeli ya DSS kulionekana kung’oka kwa epitheliamu ya mucosa, kufunuliwa kwa lamina propria, nekrosisi ya seli iliyoambatana na pyknosis na kugawanyika kwa kiini, atrofia/kupotea kwa crypt na kupenya dhahiri kwa seli za uchochezi.

Ingawa makundi ya dozi ya kati na ya juu yalionyesha uboreshaji wa sehemu katika muundo wa mucosa na idadi ya crypt, mpangilio usio wa kawaida wa crypt, kupenya kwa seli za uchochezi na uvimbe wa maeneo maalum uliendelea. Katika kundi la dozi ya chini, iliripotiwa kwamba muundo wa epitheliamu ulihifadhiwa vizuri zaidi, crypt zilikuwa nyingi na dhahiri zaidi, na kupenya kwa seli za uchochezi kulibaki kwa kiwango kidogo zaidi. Alama ya histopatolojia katika kundi la dozi ya chini haikutofautiana kwa kiwango chenye umuhimu na kundi la udhibiti wa kawaida (p > 0,05).

Kikomo cha uzalishwaji upya: Utafiti unasema kuwa uharibifu wa histopatolojia ulipewa alama kwa kutumia vigezo vya Cooper na wenzake, lakini hautoi tena vipengele vyote vya kipimo hicho cha alama katika sehemu yake ya mbinu. Kwa hiyo, jedwali la alama za histopatolojia lisiloonekana katika chanzo halijaundwa hapa.

Seli za goblet na upakaji wa PAS huonyesha nini?

Seli za goblet ni seli maalum za epitheliamu zinazozalisha kamasi katika mucosa ya utumbo. Tabaka la kamasi huunda kizuizi cha kimwili-kikemia kati ya epitheliamu na vijidudu pamoja na yaliyomo mengine katika lumen ya utumbo. Katika utafiti, vipande vya koloni vyenye unene wa 5 µm vilipakwa rangi kwa mbinu ya periodic acid-Schiff (PAS) na seli za goblet zikatathminiwa.

Katika kundi la DSS, idadi ya seli za goblet ilipungua kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na udhibiti wa kawaida; muundo wa crypt uliharibika, epitheliamu ikawa nyembamba, seli za goblet zikawa ndogo na upakaji wa PAS ukadhoofika. Katika makundi yote matatu ya CD12-1, upotevu wa seli za goblet ulikuwa mdogo kwa kiwango chenye umuhimu kuliko katika kundi la DSS (p < 0,05). Hakukuwa na tofauti yenye umuhimu katika idadi ya seli za goblet kati ya kundi la dozi ya chini na udhibiti wa kawaida (p > 0,05).

Kwa nini ZO-1, Occludin na Claudin-1 zilipimwa?

ZO-1, Occludin na Claudin-1 ni sehemu tofauti za kompleksi ya muunganisho mkali (tight junction) kati ya seli za epitheliamu ya utumbo. Protini hizi huchangia katika udhibiti wa mpaka kati ya seli za epitheliamu na uadilifu wa kizuizi cha utumbo. Utafiti ulipaka protini hizi kwa mbinu ya immunohistokemia (IHC) na kuhesabu wiani wa wastani wa macho (Average Optical Density, AOD) wa maeneo yaliyopakwa rangi chanya kwa kutumia ImageJ.

AOD ni kipimo kinachotegemea picha kinachotumika kulinganisha kwa kiasi nguvu ya ishara ya macho katika picha iliyopakwa rangi. AOD hapa si mkusanyiko kamili wa protini; ilitumika kulinganisha nguvu ya ishara ya immunohistokemia kati ya makundi chini ya hali maalum za upakaji na upigaji picha.

Sitokini za uchochezi zinaeleza nini?

Viwango vya TNF-α, IL-6, IL-1β na IL-10 katika tishu za koloni vilipimwa kwa ELISA. Katika Kielelezo 4 cha chanzo, thamani hizi zinaonyeshwa kwa kitengo cha pg/mL. TNF-α, IL-6 na IL-1β zilitathminiwa kama viashiria vya mwitikio proinflamatori katika muktadha wa jaribio; IL-10 ilitathminiwa kama sitokini inayohusishwa na mwitikio wa udhibiti wa kupinga uchochezi.

Jedwali hili ni muhimu hasa katika kutafsiri IL-10. Ingawa sehemu ya majadiliano ya chanzo inaeleza kwa lugha pana zaidi kwamba usawa wa uchochezi uliimarika kwa dozi ya chini, data ya kitakwimu katika sehemu ya matokeo inaonyesha kwamba ongezeko la IL-10 halikuwa na umuhimu. Katika maelezo ya Verianla, mpaka wa matokeo ya kitakwimu umehifadhiwa.

Ufuatiliaji wa 16S rRNA hupima nini?

Ufuatiliaji wa jeni ya 16S ribosomal RNA ni mbinu inayotumika kuchunguza muundo wa kitaksonomia wa jamii za bakteria katika sampuli. Katika utafiti huu, DNA ya vijidudu ilitolewa kutoka yaliyomo kwenye cecum ya panya wale wale sita, eneo la V3–V4 la jeni ya bakteria 16S rRNA likaongezwa, na kisha likafuatiliwa kwenye jukwaa la Illumina NovaSeq 6000.

Uchanganuzi wa 16S husaidia kuonyesha muundo wa jamaa wa jamii za bakteria; hata hivyo, peke yake hauamui moja kwa moja ni jeni zipi vijidudu vinaonyesha kwa shughuli, ni metaboliti zipi huzalisha kwa kasi gani, au aina ya CD12-1 hubaki hai kwenye utumbo kwa muda gani. Utafiti wenyewe pia unasisitiza kwamba kutokea kwa wakati mmoja kwa mabadiliko ya muundo wa mikrobiota na SCFA hakuthibitishi moja kwa moja mnyororo wa usababisho wa mikrobiota → SCFA → kizuizi.

Tofauti kati ya faharasa za Chao1 na Shannon ni nini?

Chao1 ni kiashiria cha utofauti wa alfa kinachojaribu kuzingatia utajiri wa taksoni ndani ya sampuli, hasa taksoni ambazo hazijaonekana au ni nadra. Faharasa ya Shannon haiathiriwi tu na idadi ya taksoni, bali pia na usambazaji wao wa jamaa. Katika utafiti, faharasa ya Chao1 ya kundi la dozi ya chini ilikuwa juu kwa kiwango chenye umuhimu kuliko makundi mengine, huku faharasa ya Shannon ya kundi la dozi ya juu ikiwa chini kwa kiwango chenye umuhimu.

Kuongezeka au kupungua kwa faharasa moja ya utofauti peke yake hakumaanishi moja kwa moja “afya bora” au “madhara zaidi”. Vipimo hivi vinaelezea muundo wa kihisabati wa jamii, na tafsiri ya kibaolojia lazima ifanywe pamoja na muundo wa taksoni na viashiria vingine vya ugonjwa.

Bray–Curtis PCoA ilionyesha nini?

Umbali wa Bray–Curtis ni kipimo cha utofauti wa beta kinachoweka kwa kiasi kiwango ambacho muundo wa vijidudu katika sampuli unafanana au kutofautiana. Principal Coordinates Analysis (PCoA) huonyesha umbali huu wa vipimo vingi kwenye mhimili miwili au kadhaa. Katika grafu ya PCoA ya chanzo, kundi la udhibiti wa kawaida lilitengana wazi na makundi yaliyokumbwa na DSS. Makundi D, L na M yalifunikana kwa kiasi kikubwa, huku usambazaji wa kundi H ukionekana kutengana zaidi.

Kutengana kwenye PCoA kunaonyesha kwamba muundo wa vijidudu wa makundi unaweza kutofautiana; peke yake hakuthibitishi ni bakteria ipi ilisababisha mabadiliko au kwamba tofauti hiyo ilisababisha uboreshaji wa ugonjwa.

Je, Mabadiliko ya Mikrobiota Yanathibitisha Mfumo wa Kinga wa CD12-1?

Hapana. Utafiti ulionyesha mahusiano ya kitakwimu kati ya baadhi ya jenasi za bakteria, viashiria vya ugonjwa na asidi za mafuta za mnyororo mfupi; lakini uchanganuzi wa 16S rRNA haukupima shughuli za kimetaboliki moja kwa moja, kudumu na shughuli za CD12-1 katika utumbo hazikufuatiliwa, na uchanganuzi wa uhusiano haukuanzisha usababisho. Kwa hiyo, matokeo ya mikrobiota na SCFA yanapaswa kutafsiriwa kama majibu yanayohusiana yanayoambatana na uingiliaji wa CD12-1.

Ni makundi gani ya bakteria yalionyesha mabadiliko?

Katika kiwango cha phylum, Bacteroidetes, Firmicutes, Actinobacteria na Proteobacteria zilikuwa miongoni mwa makundi makuu katika makundi yote. Katika modeli ya DSS, wingi wa jamaa wa Firmicutes na Actinobacteria ulikuwa chini kwa kiwango chenye umuhimu, huku Bacteroidetes na Proteobacteria zikiwa juu kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na udhibiti wa kawaida.

Baada ya CD12-1, Actinobacteria ilikuwa juu kwa kiwango chenye umuhimu katika kundi la dozi ya juu kuliko katika kundi la DSS. Kinyume chake, Bacteroidetes ilibaki juu kuliko udhibiti wa kawaida katika makundi yote ya uingiliaji na haikutofautiana kwa kiwango chenye umuhimu na kundi la DSS. Wingi wa Firmicutes ulikuwa wa kulinganishwa kati ya makundi D, L, M na H.

Katika uchanganuzi wa jumla wa wingi wa jamaa katika kiwango cha jenasi, kundi la DSS lilionyesha Allobaculum, Lactobacillus, Bifidobacterium na Ruminococcus kidogo, na Bacteroides pamoja na Oscillibacter nyingi zaidi kuliko udhibiti wa kawaida. Katika kundi la dozi ya juu, Allobaculum ilikuwa juu kwa kiwango chenye umuhimu kuliko kundi la DSS, huku Oscillibacter ikiwa chini kwa kiwango chenye umuhimu. Katika uchanganuzi huu wa jumla, hakukuwa na tofauti yenye umuhimu baada ya CD12-1 kwa Lactobacillus na Ruminococcus; Bacteroides ilionyesha mwelekeo wa namba wa chini na Bifidobacterium mwelekeo wa namba wa juu, lakini tofauti hazikuwa na umuhimu.

Katika uchanganuzi wa ziada wa wingi tofauti wa chanzo, muundo tofauti wa ulinganisho ulitumiwa: Turicibacter na Lactobacillus ziliripotiwa kuongezeka katika kundi la dozi ya chini; Parabacteroides na Prevotella katika kundi la dozi ya kati; na Akkermansia, Parabacteroides, Turicibacter, Bifidobacterium na Allobaculum katika kundi la dozi ya juu. Katika dozi ya juu, Oscillospira na Desulfovibrio zilikuwa chini zaidi. Matokeo haya kutoka aina tofauti za uchanganuzi hayapaswi kupunguzwa kuwa sentensi moja ya “bakteria wazuri waliongezeka”.

Matriksi ya uhusiano inapaswa kusomwaje?

Katika Kielelezo 6 cha chanzo, uhusiano kati ya jenasi za bakteria na urefu wa koloni, DAI, alama ya histopatolojia, seli za goblet, ZO-1, Occludin, Claudin-1 na sitokini nne umeonyeshwa. Mwelekeo mwekundu unaonyesha uhusiano chanya, mwelekeo wa bluu uhusiano hasi, na nyota zinaonyesha umuhimu wa kitakwimu. Mahusiano yenye umuhimu yaliyotajwa wazi katika maandishi ya utafiti yamefupishwa katika jedwali huru lililo hapa chini.

Hakuna uhusiano wenye umuhimu ulioripotiwa kati ya Prevotella, Turicibacter au Akkermansia na viashiria vilivyochunguzwa. Aidha, hakuna jenasi yoyote ya bakteria iliyochunguzwa iliyoonyesha uhusiano wenye umuhimu na TNF-α au IL-10.

Pengo la kimetodolojia: Chanzo kinatoa kielelezo cha uhusiano na thamani za p, lakini hakielezi wazi katika sehemu ya mbinu kama mgawo wa uhusiano ulihesabiwa kwa Pearson, Spearman au mbinu nyingine. Kwa hiyo, maandishi ya Verianla hayajakisia mbinu ya uhusiano.

Kwa nini asidi za mafuta za mnyororo mfupi ni muhimu?

Asidi za mafuta za mnyororo mfupi (SCFAs) ni asidi ndogo za kikaboni zinazohusishwa na kimetaboliki ya vijidudu vya utumbo. Katika utafiti, asetati, propionati, butirati, isobutirati, valerati na isovalerati zilipimwa. Katika Kielelezo 7 cha chanzo, viwango vinaonyeshwa kwa kitengo cha µg/g.

Je, Dozi ya Juu Zaidi ya CD12-1 Ilitoa Kinga Yenye Nguvu Zaidi?

Hapana. Mwitikio wa CD12-1 haukuonyesha uhusiano wa dozi-mwitikio unaoongezeka kwa mpangilio mmoja: ingawa dozi ya juu ilizuia kupotea kwa uzito wa mwili vizuri zaidi, dozi ya chini ilionyesha wasifu mpana zaidi wa uboreshaji katika kundi kubwa la sehemu za mwisho, ikiwa ni pamoja na histolojia, seli za goblet, ZO-1/Occludin, viashiria vya uchochezi na asetati/butirati. Utafiti haukuamua dozi bora na ulisisitiza kwamba dozi ya juu haiwezi kuchukuliwa moja kwa moja kuwa yenye manufaa zaidi.

Matokeo yanayoungwa mkono na utafiti

• Dozi zote tatu za CD12-1 zilipunguza baadhi ya viashiria vya shughuli za ugonjwa zilizosababishwa na DSS ikilinganishwa na kundi la modeli.
• Dozi zote tatu zilipunguza kwa sehemu kufupika kwa koloni kunakosababishwa na DSS.
• Dozi ya chini ilionyesha wasifu mpana zaidi wa kinga katika muundo wa histolojia na seli za goblet.
• Katika dozi ya chini, thamani za AOD za ZO-1 na Occludin ziliongezeka kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na kundi la DSS.
• Dozi za chini na za kati zilipunguza viwango vya TNF-α na IL-1β kwa kiwango chenye umuhimu ikilinganishwa na kundi la DSS.
• Dozi ya chini ilipunguza IL-6 kwa kiwango chenye umuhimu.
• Dozi ya chini iliongeza asetati na butirati; dozi ya kati iliongeza asetati kwa kiwango chenye umuhimu.
• Matumizi ya CD12-1 yaliambatana na mabadiliko katika muundo wa mikrobiota ya utumbo ambayo hayakuwa na mwelekeo wa moja kwa moja unaotegemea dozi.

Ujumlishaji ambao utafiti hauungi mkono

• Haiwezi kuhitimishwa kuwa CD12-1 hutibu koliti ya vidonda kwa binadamu.
• Utafiti haukupima matibabu ya koliti iliyokuwa tayari imeanzishwa; uingiliaji ulianza kabla ya DSS.
• Haiwezi kusemwa kwamba dozi ya juu zaidi ndiyo dozi bora.
• Haiwezi kusemwa kwamba Claudin-1 ilirudi katika hali ya kawaida kwa kiwango chenye umuhimu.
• Haiwezi kusemwa kwamba IL-10 iliongezeka kwa kiwango chenye umuhimu wa kitakwimu katika dozi ya chini.
• Haijathibitishwa kwamba mabadiliko ya mikrobiota ndiyo sababu ya moja kwa moja ya athari ya kinga.
• Haijathibitishwa kwamba ongezeko la butirati lilitokana moja kwa moja na kuongezeka kwa kundi fulani la bakteria.
• Haikupimwa moja kwa moja kama CD12-1 ilikoloni utumbo, ilikaa kwa muda gani au ilionyesha shughuli gani ya kimetaboliki.
• Matokeo hayo hayo hayawezi kudhaniwa kwa panya dume, modeli za koliti sugu au idadi ya watu.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

1. Uandaaji wa suspeni ya bakteria CD12-1

CD12-1 iliamshwa na kuingizwa kwenye subculture. Bakteria zilikusanywa kwa centrifuge katika 4500 rpm kwa dakika 10 na kuoshwa mara tatu kwa phosphate-buffered saline (PBS) tasa. Suspeni zilirekebishwa kuwa 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ na 1 × 10¹⁰ CFU/mL. Katika kipindi chote cha jaribio, suspeni mpya iliandaliwa kila siku na kutolewa mara moja kwa gavage ya mdomo kwa kutumia sindano tasa za matumizi ya mara moja.

2. Sampuli ya wanyama na kohorti ya uchanganuzi wa kibayolojia

Panya jike sitini wa C57BL/6 wa SPF, wenye umri wa wiki 6, walitumika. Kila kundi lilianza na n = 12 wanyama. Chanzo kinaeleza kwamba panya sita kutoka kila kundi walichaguliwa kwa nasibu kwa kutumia utambulisho binafsi wa wanyama, bila kuzingatia uzito wa mwili, DAI au matokeo mengine ya jaribio, ili kuwa kohorti ya uchanganuzi wa kibayolojia. Panya hao hao sita walitumika katika uchanganuzi wote wa fenotipu, histolojia, biokemia, SCFA na mikrobiota.

Pengo la kuripoti: Makala haielezi kwa kina matumizi ya uchanganuzi ya panya wengine sita waliokuwa katika kila kundi mwanzoni. Picha za matokeo na uchanganuzi wa kitakwimu ziliripotiwa kwa msingi wa panya sita huru kibayolojia kwa kila kundi.

3. Ukusanyaji wa sampuli mwishoni mwa jaribio

Mwishoni mwa uingiliaji wa majaribio wa wiki tatu, panya walinyimwa chakula kwa saa 12 na kufanyiwa euthanasia kwa dislokeshini ya shingo. Koloni yote ilitolewa, urefu wake ukapimwa bila kunyooshwa na kuoshwa kwa PBS tasa. Sehemu ya koloni ilifiksishwa katika %4 paraformaldehyde kwa uchanganuzi wa histolojia; tishu zilizobaki za koloni na yaliyomo kwenye cecum yaligandishwa haraka kwa nitrojeni kioevu na kuhifadhiwa katika −80 °C hadi uchanganuzi uliofuata.

4. Histolojia ya H&E na PAS

Kwa uchanganuzi wa H&E, sehemu ya koloni ya distali takribani 1 cm kutoka kwenye anus ilitumika. Tishu ilifiksishwa katika %4 paraformaldehyde, kupachikwa kwenye parafini na kupakwa H&E. Uharibifu wa histopatolojia ulipewa alama kwa msingi wa vigezo vya Cooper na wenzake.

Kwa uchanganuzi wa PAS, tishu za koloni zilifiksishwa katika %4 paraformaldehyde usiku kucha, kupachikwa kwenye parafini na kukatwa kwa unene wa 5 µm. Baada ya kupakwa PAS, zilipigwa picha kwa darubini ya mwanga na seli za goblet zikatathminiwa.

5. Uchanganuzi wa immunohistokemia wa kizuizi

Vipande vya parafini viliondolewa parafini mara mbili kwa dakika 15 katika xylene na kurejeshwa maji kupitia mfululizo wa ethanol wa viwango tofauti. Urejeshaji wa antigen ulifanywa katika bafa ya citrate ya pH 6,0 kwa microwave: kupashwa kwa dakika 8, mapumziko ya dakika 8 na kupashwa tena kwa dakika 7. Vipande vilipozwa hadi joto la kawaida na kuoshwa mara tatu kwa PBS ya pH 7,4, dakika tano kila mara.

Shughuli ya endogenous peroxidase ilizuiwa kwa %3 H₂O₂ gizani kwa dakika 25; kufungamana kusiko maalum kulizuiwa kwa %3 bovine serum albumin (BSA) kwa dakika 30. Uingizaji wa antibodi ya msingi uliendelea usiku kucha katika mazingira yenye unyevunyevu katika 4 °C. Antibodi ya pili ilitumika kwa dakika 50 gizani katika joto la kawaida, immunoreactivity ikaonekana kwa 3,3′-diaminobenzidine (DAB) kwa dakika 5 na counterstaining ya hematoxylin ikafanywa.

Picha zilirekodiwa kwa CaseViewer 2.4; wiani wa wastani wa macho wa maeneo yaliyopakwa rangi chanya ulihesabiwa kwa ImageJ 1.54p.

6. Upimaji wa sitokini

Viwango vya IL-1β, IL-6, IL-10 na TNF-α katika tishu za koloni vilipimwa kwa seti za ELISA zilizotolewa na Elabscience Biotechnology kwa kufuata maelekezo ya mtengenezaji. Sehemu ya mbinu ya chanzo hairipoti namba za katalogi za seti hizi au mikunjo ya kina ya urekebishaji.

7. Uchanganuzi wa mikrobiota kwa 16S rRNA

Yaliyomo kwenye cecum ya panya wale wale sita yalitumika. DNA ya vijidudu ilitolewa kwa MagBeads FastDNA Kit for Soil; uadilifu wa DNA ulitathminiwa kwa %0,8 agarose gel electrophoresis, na mkusanyiko pamoja na usafi kwa NanoDrop spectrophotometer.

Eneo la V3–V4 la jeni ya bakteria 16S rRNA liliongezwa kwa primer zifuatazo:

• 338F: 5′-barcode-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′
• 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′

Bidhaa za PCR ziliunganishwa kwa kiasi cha equimolar kulingana na viwango vyake na kufuatiliwa kwenye jukwaa la Illumina NovaSeq 6000. Mifuatano ghafi ilitenganishwa kwa sampuli kwa programu-jalizi ya QIIME 2 demux, na primer zikaondolewa kwa cutadapt. Uchujaji wa ubora, denoising, kuunganisha mifuatano ya paired-end na kuondoa chimera vilifanywa kwa DADA2; muundo wa amplicon sequence variant (ASV) na jedwali la vipengele-wingi viliundwa kutoka mifuatano iliyofanyiwa denoise.

Uchanganuzi wa chini wa mikrobayomu ulifanywa kwa QIIME 2 toleo 2024.5. Chanzo kinaeleza kwamba kilitumia “dataset-specific parameter settings” lakini hakichapishi vigezo vyote vya QIIME 2/DADA2 kimoja baada ya kingine; kwa hiyo, vigezo vilivyokosekana havikujazwa na Verianla.

8. Upimaji wa SCFA na maandalizi ya LC–MS/MS

Katika kila uchanganuzi, 20 mg ya yaliyomo kwenye utumbo yalichakatwa kwa shanga mbili za chuma cha pua na 800 µL ya suluhisho la uchimbaji lenye kiwango cha ndani. Sampuli ilifanywa vortex kwa sekunde 60, kuhomojenishwa mara mbili kwa sekunde 60 katika 55 Hz na kuwekwa centrifuge kwa 4000 × g, 10 °C kwa dakika 10.

Kwa 40 µL ya supernatant, 20 µL ya 200 mM 3-nitrophenylhydrazine (3-NPH) na 20 µL ya 120 mM 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC·HCl) yenye %6 pyridine viliongezwa. Derivatization ilifanywa katika 40 °C, 1200 rpm kwa dakika 30.

Mchanganyiko ulipozwa kwenye barafu kwa dakika 3 na kuwekwa centrifuge katika 12.000 × g, 4 °C kwa dakika 10. Kisha 50 µL ya supernatant ilipunguzwa kwa 150 µL ya maji yenye %0,1 (v/v) formic acid, ikafanywa vortex kwa sekunde 60 na kuwekwa tena centrifuge katika hali zile zile. Supernatant ya mwisho ilipitishwa kwenye kichujio cha membrane cha 0,22 µm, kuhamishiwa kwenye vial ya autosampler na kuchanganuliwa kwa mfumo wa SCIEX LC–MS/MS.

Lengo la uchanganuzi la hatua ya derivatization ya 3-NPH/EDC·HCl ni kutengeneza derivatives za kemikali zinazowezesha kutenganisha na kugundua kwa urahisi zaidi asidi ndogo za kaboksili kwa LC–MS/MS. Maelezo haya yanafafanua kazi ya uchanganuzi ya mbinu; si matokeo mapya ya utafiti.

9. Uchanganuzi wa kitakwimu

Data zilipangwa kwa Microsoft Excel 2021 na kuchanganuliwa kwa IBM SPSS Statistics 27.0. Uchanganuzi wa kitakwimu ulitegemea panya sita huru kibayolojia kwa kila kundi na matokeo yaliwasilishwa kama wastani ± kosa la kawaida la wastani (SEM).

• Usambazaji wa kawaida: jaribio la Shapiro–Wilk.
• Usawa wa variance: jaribio la Levene.
• Usambazaji wa kawaida + variance sawa: one-way ANOVA + jaribio la kulinganisha mara nyingi la Duncan.
• Ikiwa usawa wa variance hautimizwi: Welch ANOVA + jaribio la Games–Howell.
• Data zisizo na usambazaji wa kawaida: Kruskal–Wallis + jaribio la kulinganisha mara nyingi la Dunn.
• Mfululizo wa muda wa uzito wa mwili na DAI: two-way repeated-measures ANOVA + ulinganisho mwingi wa Sidak.
• Kiwango cha umuhimu wa kitakwimu: p < 0,05.

SEM si sawa na standard deviation, ambayo ni kipimo cha moja kwa moja cha mtawanyiko wa kibaolojia kati ya sampuli; katika utafiti huu SEM iliwasilishwa kama kiashiria cha kosa kinachoonyesha kutokuwa na uhakika katika makadirio ya wastani wa kundi.

10. Matokeo ya uzito wa mwili na DAI

Uzito wa kundi la udhibiti wa kawaida uliongezeka taratibu katika kipindi cha DSS. Katika kundi la modeli ya DSS, kupotea kwa uzito kulianza kuwa dhahiri kuanzia siku ya tatu na kupungua kulikokuwa kukubwa zaidi kulionekana siku ya saba. Makundi yote matatu ya CD12-1 yalionyesha viwango tofauti vya kinga dhidi ya kupotea kwa uzito unaosababishwa na DSS; majadiliano ya chanzo yanaeleza kwamba kundi la dozi ya juu lilipunguza kupotea kwa uzito kwa ufanisi zaidi.

Katika kundi la modeli ya DSS, DAI iliongezeka kadiri siku zilivyopita na ilikuwa juu kwa kiwango chenye umuhimu kuliko udhibiti wa kawaida siku ya saba. Siku hiyo hiyo, thamani za DAI za makundi L, M na H zilikuwa chini kwa kiwango chenye umuhimu kuliko kundi D (p < 0,05), lakini zilibaki juu kuliko udhibiti wa kawaida. Matokeo haya yanaonyesha kwamba uingiliaji ulipunguza shughuli za ugonjwa lakini haukuondoa kabisa athari ya DSS.

11. Matokeo ya histolojia na seli za goblet

Kwa kuwa picha za H&E na PAS zenyewe ni ushahidi wa msingi wa histolojia, hakuna mikroskopia bandia iliyotengenezwa ndani ya Verianla. Matokeo ya kisayansi ya picha za chanzo yaliwasilishwa kupitia maandishi na ulinganisho: DSS iliharibu uadilifu wa epitheliamu, crypt na seli za goblet; dozi ya chini ya CD12-1 ilionyesha wasifu mpana zaidi wa kinga katika vipimo hivi.

12. Kusoma kwa usahihi matokeo ya mikrobiota

Matokeo ya mikrobiota yanajumuisha tabaka tofauti za uchanganuzi. Grafu kuu za wingi wa jamaa, uchanganuzi wa utofauti wa alfa/beta na uchanganuzi wa ziada wa wingi tofauti hazipimi swali lile lile. Kwa hiyo, kwa mfano, kutokuwepo kwa tofauti yenye umuhimu kwa Lactobacillus kati ya makundi ya uingiliaji na D katika ulinganisho mkuu wa wingi wa jamaa, na kuripotiwa kwa kuongezeka kwa Lactobacillus katika kundi L katika uchanganuzi wa ziada wa tofauti, havipaswi kuunganishwa kana kwamba ni matokeo moja ya kitakwimu.

13. Kikomo cha mfumo wa mikrobiota–SCFA

Katika makundi yaliyopewa CD12-1, wingi wa baadhi ya taksoni za vijidudu na viwango vya baadhi ya SCFA vilibadilika kwa sambamba. Chanzo kinajadili hasa kwamba miongoni mwa washiriki wa Ruminococcaceae kuna wazalishaji wanaojulikana wa butirati. Hata hivyo, kwa kuwa shughuli ya kimetaboliki ya vijidudu haikupimwa moja kwa moja katika utafiti huu, hitimisho la kisababishi la “Ruminococcaceae iliongezeka na kwa hiyo butirati ikaongezeka” haliwezi kufanywa.

14. Kikomo cha uhusiano wa dozi-mwitikio

Jambo kwamba dozi ya juu haikuwa na ufanisi zaidi kuliko dozi ya chini katika kila sehemu ya mwisho ni mojawapo ya matokeo muhimu ya utafiti. Kwa kuwa wingi halisi, kudumu na shughuli za kimetaboliki za CD12-1 katika utumbo hazikufuatiliwa kwa mbinu mahususi kwa aina hiyo, sababu ya kibaolojia ya mwitikio huu usio wa mstari haikuamuliwa. Waandishi wanaeleza kuwa dozi katika wigo mpana zaidi, ufuatiliaji mahususi wa aina na uchanganuzi wa kiutendaji vinahitajika.

15. Vikwazo vikuu

• Panya jike wa C57BL/6 pekee walitumika.
• Modeli ni koliti kali ya DSS; haiwakilishi kikamilifu hali sugu na ya kurudia ya koliti ya vidonda kwa binadamu.
• CD12-1 ilianza kabla ya DSS; matokeo yanaunga mkono athari ya kuzuia, si matibabu ya ugonjwa ambao tayari umeanzishwa.
• Katika uchanganuzi wa mikrobiota, kuwa na n = 6 marudio ya kibayolojia kwa kila kundi kunaweza kupunguza nguvu ya kitakwimu ya kugundua tofauti ndogo za taksoni.
• Uchanganuzi wa 16S rRNA haupimi moja kwa moja shughuli za kimetaboliki za vijidudu.
• Ukolonishaji, kudumu au shughuli za kimetaboliki za CD12-1 katika utumbo hazikufuatiliwa moja kwa moja.
• Mbinu ya uhusiano haikutajwa wazi katika sehemu ya mbinu ya chanzo kama Pearson/Spearman.
• Hakuna mlinganyo wa wazi wa kihisabati uliotolewa kwa kuunganisha vipengele vya DAI kuwa alama moja.
• Vipengele vyote vya kipimo cha alama za histopatolojia havikuripotiwa ndani ya makala na vilielekezwa kwenye rejea ya nje.
• Vigezo vyote mahususi kwa seti ya data vilivyotumika kwa QIIME 2 havikuripotiwa kimoja baada ya kingine.
• Usalama, dozi bora, ufanisi wa kliniki na matumizi ya muda mrefu kwa binadamu havikutathminiwa.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Utafiti asilia: Preventive Effects of Fermented Yak Milk-Derived Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 Against DSS-Induced Colitis in Mice

Waandishi: Hongqiang Li; Teng Zhen; Junyang Li; Furong Han; Xian Guo; Defu Tang; Cheng Peng.

Mpangilio wa waandishi: Mpangilio katika PDF ya chanzo umehifadhiwa bila kubadilishwa.

Mchango sawa: Hakuna tamko la uandishi wa kwanza wa pamoja/mchango sawa linaloonekana katika makala ya chanzo.

Waandishi wa mawasiliano: Defu Tang na Cheng Peng.

Uhusiano wa taasisi 1: College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China.

Uhusiano wa taasisi 2: Gansu Animal Husbandry Technology Extension Station, Lanzhou 730030, China.

Uhusiano wa taasisi 3: Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding on Tibetan Plateau, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Key Laboratory of Yak Breeding Engineering of Gansu Province; Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, China.

Jarida: Foods.

Mchapishaji: MDPI, Basel, Switzerland.

Juzuu / toleo / namba ya makala: 15 / 17 / 3120.

DOI: 10.3390/foods15173120.

Kiungo rasmi: https://doi.org/10.3390/foods15173120

Kuwasilishwa: 5 Agosti 2026.

Marekebisho: 25 Agosti 2026.

Kukubaliwa: 31 Agosti 2026.

Kuchapishwa: 2 Septemba 2026.

Aina ya chanzo: Makala ya utafiti wa majaribio kwa wanyama.

Hali ya mapitio: version of record iliyochapishwa katika jarida la kisayansi lililopitiwa na wataalamu.

Hali ya preprint: Faili iliyopakiwa si preprint, bali ni toleo lililochapishwa la jarida. Makala ya chanzo hairipoti namba tofauti ya preprint.

Leseni: Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).

Modeli kuu ya utafiti: Modeli ya koliti kali iliyosababishwa na %2,5 DSS; panya jike wa C57BL/6 pekee.

Kamati ya maadili: Gansu Agricultural University, Ethics Committee of Laboratory Animal Management and Animal Welfare; No. GSAU-Eth-VMC-2022-016; tarehe ya idhini 10 Machi 2022.

Ridhaa yenye taarifa: Haitumiki; utafiti ni jaribio la wanyama.

Upatikanaji wa data: Imeelezwa kwamba michango asilia ya utafiti ipo ndani ya makala na Supplementary Materials, na maombi ya taarifa za ziada yanaweza kuelekezwa kwa waandishi wa mawasiliano.

Nyenzo za ziada: Figure S1 ina ulinganisho wa wingi wa jamaa wa phylum na jenasi mbalimbali; Figure S2 ina matokeo ya wingi tofauti katika kiwango cha jenasi kwa ulinganisho wa C–D, D–L, D–M na D–H.

Ufadhili: Science and Technology Project of the Department of Agriculture and Rural Affairs of Gansu Province (GNKJ-2026-24); Fostering Foundation for the Excellent Ph.D. Dissertation of Gansu Agricultural University (YB2025002); Gansu Province University Graduate “Innovation Star” Project (2026CXZX-779); Science and Technology Project of Gansu Province (26ZDNA010).

Mgongano wa maslahi: Waandishi wametangaza kuwa hakuna mgongano wa maslahi.

Michango ya waandishi: Uundaji wa dhana H.L., T.Z. na F.H.; mbinu H.L., T.Z., X.G. na J.L.; programu T.Z. na X.G.; uchanganuzi rasmi H.L. na T.Z.; usimamizi wa data H.L., T.Z. na J.L.; uandishi wa rasimu ya awali H.L., C.P. na D.T.; mapitio na uhariri yalifanywa na H.L. na D.T.

Dokezo la tafsiri ndani ya chanzo: Sehemu ya matokeo inaeleza kuwa IL-10 iliongezeka kwa namba katika makundi L na M, lakini haikutofautiana kwa kiwango chenye umuhimu na kundi D au C (p > 0,05). Kauli pana zaidi ya “ongezeko la IL-10” katika majadiliano haiondoi mpaka huu wa kitakwimu; katika maandishi ya Verianla, matokeo yasiyo na umuhimu hayajawasilishwa kana kwamba ni yenye umuhimu.

Dokezo la uhusiano: Chanzo kinaripoti mahusiano yenye umuhimu ya mikrobiota–fenotipu, lakini hakielezi wazi katika sehemu ya mbinu kama mgawo wa uhusiano ulikuwa Pearson, Spearman au mbinu nyingine. Taarifa hii haikukamilishwa kutoka nje ya chanzo.

Dokezo la fomula ya DAI: Imeelezwa wazi kuwa DAI inategemea alama za kupotea kwa uzito, uthabiti wa kinyesi na damu katika kinyesi; lakini fomula ya wazi ya kihisabati inayounganisha vipengele hivyo kuwa thamani moja ya DAI haijaandikwa katika makala. Verianla haijaongeza fomula kutoka nje ya chanzo.

Mbinu ya vielelezo: Kwa kuwa picha za H&E, PAS na immunohistokemia ni ushahidi wa msingi wa majaribio wa raster, hazikuigwa. Mstari wa muda wa jaribio uliundwa kutoka mwanzo kama SVG kwa kutumia mahusiano ya mbinu ya chanzo; matokeo ya uhusiano na SCFA yaliwasilishwa kwa majedwali huru ya HTML kulingana na mahusiano yenye umuhimu yaliyoelezwa wazi katika chanzo. Thamani sahihi za namba hazikutolewa kutoka kwenye grafu pale ambapo data ghafi hazikupatikana.

Kikomo kikuu cha tafsiri: Utafiti huu si jaribio la kliniki la matibabu kwa binadamu na hauonyeshi kwamba CD12-1 hutibu koliti ya vidonda ambayo tayari imeanzishwa. Matokeo yalipatikana katika modeli kali ya DSS, kwa panya jike pekee na katika mpangilio wa uingiliaji wa kinga. Kwa matumizi ya kliniki, modeli za ziada za wanyama zinazojumuisha jinsia zote mbili, sampuli kubwa zaidi na baadaye tafiti za kliniki kwa binadamu zinahitajika.