Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 avval an’anaviy fermentlangan yak sutidan ajratib olingan va probiotik nomzod xususiyatlari o‘rganilgan bakteriya shtammidir. Ushbu tadqiqot CD12-1 ning odamlardagi yarali kolitni davolashini emas, faqat urg‘ochi C57BL/6 sichqonlarda dekstran sulfat natriy (DSS) yordamida chaqirilgan o‘tkir eksperimental kolitga qarshi profilaktik ta’sirini o‘rgangan. Sichqonlar normal nazorat, DSS model nazorati va CD12-1 ning uch xil doza guruhiga ajratilgan; bakterial aralashuv DSS ta’siridan oldin boshlangan va DSS berilgan oxirgi hafta davomida davom ettirilgan.

DSS modeli sichqonlarda tana vaznining yo‘qolishi, kasallik faolligi indeksi (Disease Activity Index, DAI) oshishi, yo‘g‘on ichakning qisqarishi, shilliq qavat va kriptalarning shikastlanishi, goblet hujayralarining yo‘qolishi, ichak to‘sig‘i bilan bog‘liq oqsillarning kamayishi va proinflamatuar sitokinlarning ko‘payishiga sabab bo‘lgan. CD12-1 berilgan uch doza guruhida ushbu o‘zgaruvchilarning bir qismi turli darajada yumshagan. Biroq javob chiziqli “doza oshgani sari foyda ortadi” munosabatini ko‘rsatmagan.

Past doza guruhi kuniga 2 × 10⁷ CFU/sichqon, o‘rta doza guruhi 2 × 10⁸ CFU/sichqon, yuqori doza guruhi esa 2 × 10⁹ CFU/sichqon CD12-1 olgan. Past doza gistopatologik shikastlanish, goblet hujayralari, ZO-1 va Occludin kabi epitelial to‘siq oqsillari, ayrim yallig‘lanish sitokinlari hamda asetat/butirat darajalari bo‘yicha eng keng qamrovli ijobiy profilni ko‘rsatgan. Aksincha, yuqori doza tana vazni yo‘qolishini cheklashda aniqroq ta’sir ko‘rsatgan. Shu sababli tadqiqot bitta mezon asosida “eng yuqori doza eng yaxshisi” degan xulosani qo‘llab-quvvatlamaydi.

Yo‘g‘on ichak uzunligi normal nazorat guruhida 8,83 ± 0,32 cm, DSS model guruhida 6,13 ± 0,12 cm deb o‘lchangan. CD12-1 dan keyin qiymatlar past, o‘rta va yuqori doza guruhlarida mos ravishda 7,02 ± 0,21 cm, 7,07 ± 0,26 cm va 7,02 ± 0,25 cm bo‘lgan. Uchala aralashuv guruhida ham yo‘g‘on ichak uzunligi DSS model guruhiga nisbatan sezilarli darajada yuqori bo‘lgan (p < 0,05), biroq uch doza o‘rtasida sezilarli farq kuzatilmagan (p > 0,05).

Ichak epitelial to‘sig‘ini baholashda past doza CD12-1, ZO-1 va Occludin immunogistokimyoviy signalini DSS guruhiga nisbatan sezilarli oshirgan; past doza bilan normal nazorat o‘rtasida ushbu ikki ko‘rsatkich bo‘yicha sezilarli farq aniqlanmagan. Claudin-1 esa CD12-1 guruhlarida oshish tendensiyasini ko‘rsatgan, ammo DSS guruhiga nisbatan farq statistik ahamiyatga yetmagan. Bu tafovut muhim: tadqiqot barcha tight junction oqsillari bir xil darajada tiklanganini ko‘rsatmaydi.

Yo‘g‘on ichak to‘qimasida TNF-α, IL-6 va IL-1β DSS bilan oshgan. Past va o‘rta dozalarda TNF-α va IL-1β DSS guruhiga nisbatan sezilarli darajada past bo‘lgan; IL-6 uchun sezilarli kamayish past dozada kuzatilgan. IL-10 past va o‘rta dozalarda son jihatdan oshgan bo‘lsa-da, natijalar bo‘limidagi statistik taqqoslashda bu oshish DSS guruhiga nisbatan ahamiyatli emas (p > 0,05). Shu sababli IL-10 uchun “sezilarli oshish isbotlandi” deb bo‘lmaydi.

16S rRNA gen sekvensiyasi CD12-1 aralashuvi ichak mikrobiotasi tuzilishidagi o‘zgarishlar bilan birga kechganini ko‘rsatgan. Lactobacillus, Bifidobacterium, Allobaculum, Akkermansia, Bacteroides, Sutterella, Desulfovibrio va boshqa taksonlarda dozaga qarab turli munosabatlar kuzatilgan. Korrelyatsiya tahlilida ayrim bakteriyalar kasallik faolligining pastligi va to‘siq ko‘rsatkichlarining yaxshiroqligi bilan bog‘liq bo‘lsa, boshqalari yallig‘lanish ko‘rsatkichlarining yuqoriligi bilan bog‘liq bo‘lgan. Biroq bu munosabatlar sababiylikning isboti emas; tadqiqotdagi 16S tahlili mikroorganizmlarning haqiqiy metabolik faolligini yoki CD12-1 ichakda qancha vaqt saqlanib qolishini to‘g‘ridan-to‘g‘ri o‘lchamagan.

Qisqa zanjirli yog‘ kislotalarida (Short-Chain Fatty Acids, SCFAs) DSS model guruhida asetat, propionat va butirat normal nazoratga nisbatan sezilarli kamaygan. Past doza CD12-1 asetat va butiratni DSS guruhiga nisbatan sezilarli oshirgan va ushbu ikki ko‘rsatkich normal nazorat guruhidan sezilarli farq qilmagan. O‘rta doza asetatni oshirgan; yuqori doza esa xuddi shunday keng SCFA yaxshilanish profilini ko‘rsatmagan.

Tadqiqotning eng muhim talqin chegarasi — natijalar odamlarda yarali kolitni davolash isboti emasligidir. Tadqiqot faqat urg‘ochi sichqonlarda o‘tkir DSS modeli bilan o‘tkazilgan va CD12-1 kasallik chaqirilishidan oldin berila boshlangan. Odamlardagi yarali kolitning surunkali va qaytalanuvchi xususiyati, jinsiy farqlar, uzoq muddatli xavfsizlik, optimal inson dozasi va klinik samaradorlik ushbu tajriba orqali aniqlanmagan.

Tadqiqotning asosiy savoli nima edi?

Tadqiqotning asosiy savoli avval fermentlangan yak sutidan ajratib olingan Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 shtammi ichakda eksperimental yallig‘lanish hosil qilinishidan oldin va yallig‘lanish hosil qilinayotgan paytda berilganda DSS sababli yo‘g‘on ichak shikastlanishini kamaytira oladimi, degan savol edi. Mualliflar faqat kasallik belgilarini emas, balki shilliq qavat tuzilishi, goblet hujayralari, epitelial tight junctionlar, sitokinlar, ichak mikrobiotasi va mikrob metabolitlari kabi bir-birini to‘ldiruvchi ko‘plab yakuniy nuqtalarni birgalikda baholagan.

Sichqonlarga Fermentlangan Yak Suti Berildimi?

Yo‘q. Fermentlangan yak suti sichqonlarga bevosita berilmagan; tadqiqotda ishlatilgan CD12-1 bakteriya shtammi avval an’anaviy fermentlangan yak sutidan ajratib olingan va ushbu tadqiqotda sichqonlarga PBS ichida tayyorlangan yangi CD12-1 bakteriya suspenziyalari oral gavaj orqali berilgan.

CD12-1 nima uchun o‘rganilgan?

Mualliflarning avvalgi tadqiqotida CD12-1 kislotali sharoitlarga, o‘t tuzlariga va simulyatsiya qilingan gastrointestinal sharoitlarga chidamlilik ko‘rsatgani; antioksidant faollik va maqbul xavfsizlik profilini namoyon qilgani bildirilgan. Genomik baholashda muhitga moslashuv va probiotik funksiyalar bilan bog‘liq bo‘lishi mumkin bo‘lgan nomzod genlar ham aniqlangan. Ushbu avvalgi natijalar shtammning gastrointestinal o‘tish vaqtida yashab qolishi va ichak muhitida faoliyat ko‘rsatishi ehtimolini qo‘llab-quvvatlovchi asos sifatida ishlatilgan. Biroq avvalgi in vitro/genomik xususiyatlar o‘z-o‘zicha kolitga in vivo ta’sirning isboti bo‘lmagani uchun mazkur sichqon tajribasi o‘tkazilgan.

DSS bilan induksiya qilingan kolit modeli nima?

Dekstran sulfat natriy (DSS) tajriba hayvonlarining ichimlik suviga ma’lum konsentratsiyada qo‘shilib, yo‘g‘on ichak shilliq qavatida shikastlanish va yallig‘lanish hosil qilish uchun ishlatiladigan eksperimental agentdir. Ushbu tadqiqotda molekulyar massasi 36.000–50.000 Da bo‘lgan DSS oxirgi hafta davomida %2,5 (w/v) konsentratsiyada berilgan. Modelda tana vazni yo‘qolishi, diareya, najasda qon, yo‘g‘on ichakning qisqarishi, kripta shikastlanishi va yallig‘lanish hujayralari infiltratsiyasi kabi eksperimental kolit belgilar rivojlangan.

DSS modeli odamdagi yarali kolitning ayrim klinik va gistopatologik xususiyatlarini taqlid qilishi mumkin, biroq inson kasalligining barcha immunologik, genetik, ekologik va surunkali-qaytalanuvchi xususiyatlarini qayta yaratmaydi. Shu sababli DSS modelida samarali bo‘lgan aralashuv odamdagi yarali kolitda ham xuddi shunday natija beradi deb taxmin qilib bo‘lmaydi.

CD12-1 Ushbu Tadqiqotda Kolitni Davoladimi?

Ushbu tadqiqot shakllanib bo‘lgan kolitni davolashni isbotlamaydi. CD12-1 DSS ta’siridan taxminan ikki hafta oldin berila boshlangan va DSS berilgan hafta davomida davom ettirilgan; shu sababli tajriba dizayni asosan profilaktik/himoya ta’sirini baholaydi va shakllanib bo‘lgan odam yarali kolitiga qarshi terapevtik samaradorlik haqida xulosa chiqarib bo‘lmaydi.

Tajriba guruhlari qanday tuzilgan?

Jami 60 ta, 6 haftalik, maxsus patogendan xoli (SPF) urg‘ochi C57BL/6 sichqon ishlatilgan. Boshlang‘ich tana vazni 18 ± 2 g bo‘lgan. Hayvonlar 23 ± 2 °C harorat, %50 ± 5 nisbiy namlik va 12 soat yorug‘lik/12 soat qorong‘ilik siklida saqlangan; to‘shama har ikki kunda almashtirilgan va oziq hamda suvga erkin kirish ta’minlangan. Tajribadan oldin bir haftalik moslashuv davri o‘tkazilgan.

Moslashuvdan keyin sichqonlar har biri 12 hayvondan iborat besh guruhga tasodifiy taqsimlangan. Shu bilan birga manba har bir guruhdan hayvon identifikatorlari asosida tasodifiy tanlangan olti sichqon biologik tahlil kohorti sifatida ishlatilganini va ayni olti sichqon fenotipik, gistologik, biokimyoviy, SCFA va ichak mikrobiotasi tahlillarida doimiy kuzatilganini bildiradi. Shu tariqa yakuniy nuqtalar bir xil individlar darajasida moslashtirilgan. Rasm va statistik natijalarning asosiy biologik namuna hajmi har bir guruh uchun n = 6 bo‘lgan.

CFU nimani anglatadi?

CFU (colony-forming unit; koloniya hosil qiluvchi birlik) kultura sharoitida ko‘payib koloniya hosil qila oladigan tirik mikroorganizmlar miqdorini ifodalovchi eksperimental hisob birligidir. Tadqiqotda tayyorlangan bakteriya suspenziyalarining konsentratsiyalari 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ va 1 × 10¹⁰ CFU/mL darajalariga sozlangan. Har bir hayvonga 0,2 mL berilgani sababli mos kunlik dozalar 2 × 10⁷, 2 × 10⁸ va 2 × 10⁹ CFU/sichqon bo‘lgan.

DAI nimani o‘lchaydi?

Kasallik Faolligi Indeksi (Disease Activity Index, DAI) ushbu tajribada tana vazni yo‘qolishi, najas konsistensiyasi va najasdagi qon belgilari birgalikda kuzatilishiga asoslangan kolit og‘irligi ko‘rsatkichidir. Sichqonlarning tana vazni, najas konsistensiyasi va fekal qon holati har kuni baholangan. Yuqori ball og‘irroq eksperimental kasallik belgilarini anglatadi.

Formula chegarasi: Maqola DAI ushbu mezonlarga ko‘ra hisoblanganini bildiradi, biroq uch komponent balli yagona DAI qiymatiga qanday birlashtirilganiga oid aniq matematik tenglama bermaydi. Shu sababli bu yerda adabiyotlarda ishlatilishi mumkin bo‘lgan ehtimoliy DAI formulasi manba tadqiqotiga tegishli kabi qo‘shilmagan.

Yo‘g‘on ichak uzunligi nima uchun baholangan?

DSS yordamida chaqirilgan o‘tkir yo‘g‘on ichak yallig‘lanishi yo‘g‘on ichakning qisqarishi bilan birga kechishi mumkin. Shu sababli tajriba yakunida yo‘g‘on ichak cho‘zmasdan chiqarilgan va uzunligi o‘lchangan. Normal nazorat guruhidagi o‘rtacha 8,83 cm uzunlik DSS guruhida 6,13 cm gacha tushgan, uch CD12-1 guruhida esa taxminan 7 cm darajaga ko‘tarilgan. Uchala doza ham DSS guruhidan sezilarli farq qilgan, biroq doza guruhlari o‘zaro sezilarli farqlanmagan.

Uch CD12-1 doza guruhi o‘rtasida yo‘g‘on ichak uzunligi bo‘yicha sezilarli farq aniqlanmagan (p > 0,05). Demak, yo‘g‘on ichak uzunligi mezoni o‘z-o‘zicha past, o‘rta yoki yuqori dozani bir-biridan ustun ko‘rsatmaydi.

H&E gistologiyasi nimani ko‘rsatgan?

Distal yo‘g‘on ichakdan, anusdan taxminan 1 cm masofadagi segment olingan; %4 paraformaldegidda fiksatsiya qilingan, parafinga joylashtirilgan, kesilgan va gematoksilin-eozin (H&E) bilan bo‘yalgan. H&E to‘qima arxitekturasi va hujayraviy shikastlanishni baholash uchun ishlatilgan. DSS model guruhida shilliq qavat epitelining ko‘chishi, lamina proprianing ochilib qolishi, yadro piknozi va parchalanish bilan birga hujayra nekrozi, kripta atrofiyasi/yo‘qolishi va aniq yallig‘lanish hujayralari infiltratsiyasi kuzatilgan.

O‘rta va yuqori doza guruhlarida shilliq qavat tuzilishi va kriptalar soni qisman yaxshilangan bo‘lsa-da, tartibsiz kripta tashkiloti, yallig‘lanish hujayralari infiltratsiyasi va fokal shish davom etgan. Past doza guruhida epitelial tuzilish yaxshiroq saqlangani, kriptalar ko‘proq va aniqroq bo‘lgani hamda yallig‘lanish hujayralari infiltratsiyasi cheklanganroq qolganligi bildirilgan. Gistopatologik ball past doza guruhida normal nazorat guruhidan sezilarli farq qilmagan (p > 0,05).

Takror ishlab chiqarish chegarasi: Tadqiqot gistopatologik shikastlanish Cooper va hamkasblari mezonlari asosida ballanganini bildiradi, biroq ushbu baholash shkalasining barcha bandlarini o‘z usul bo‘limida takror bermaydi. Shu sababli manbada ko‘rsatilmagan gistopatologiya ballash jadvali bu yerda yaratilmagan.

Goblet hujayralari va PAS bo‘yash nimani ko‘rsatadi?

Goblet hujayralari ichak shilliq qavatida shilliq ishlab chiqaradigan ixtisoslashgan epitelial hujayralardir. Shilliq qatlam ichak lümenidagi mikroorganizmlar va boshqa tarkib bilan epiteliy o‘rtasida fizik-kimyoviy to‘siq hosil qiladi. Tadqiqotda 5 µm qalinlikdagi yo‘g‘on ichak kesimlari periodik kislota-Schiff (PAS) usuli bilan bo‘yalib, goblet hujayralari baholangan.

DSS guruhida goblet hujayralari soni normal nazoratga nisbatan sezilarli kamaygan; kripta tuzilishi buzilgan, epiteliy yupqalashgan, goblet hujayralari kichraygan va PAS bo‘yalishi susaygan. Uchala CD12-1 guruhida ham DSS guruhiga nisbatan goblet hujayralari yo‘qolishi sezilarli kam bo‘lgan (p < 0,05). Past doza guruhi bilan normal nazorat o‘rtasida goblet hujayralari soni bo‘yicha sezilarli farq aniqlanmagan (p > 0,05).

ZO-1, Occludin va Claudin-1 nima uchun o‘lchangan?

ZO-1, Occludin va Claudin-1 ichak epitelial hujayralari orasidagi tight junction (zich birikma) kompleksining turli komponentlaridir. Ushbu oqsillar epitelial hujayralar orasidagi chegarani tartibga solish va ichak to‘sig‘i yaxlitligini saqlashga hissa qo‘shadi. Tadqiqot ushbu oqsillarni immunogistokimyo (IHC) usuli bilan bo‘yagan va musbat bo‘yalgan sohalarning o‘rtacha optik zichligini (Average Optical Density, AOD) ImageJ yordamida hisoblagan.

AOD bo‘yalgan tasvirning optik signal intensivligini miqdoriy taqqoslashga xizmat qiluvchi tasvirga asoslangan o‘lchovdir. AOD bu yerda mutlaq oqsil konsentratsiyasi emas; ma’lum bo‘yash va tasvirlash sharoitlarida guruhlar o‘rtasidagi immunogistokimyoviy signal intensivligini taqqoslash uchun ishlatilgan.

Yallig‘lanish sitokinlari nimani anglatadi?

Yo‘g‘on ichak to‘qimasida TNF-α, IL-6, IL-1β va IL-10 konsentratsiyalari ELISA bilan o‘lchangan. Manbaning 4-rasmida ushbu qiymatlar pg/mL birligida berilgan. TNF-α, IL-6 va IL-1β tajriba kontekstida proinflamatuar javob ko‘rsatkichlari sifatida; IL-10 esa antiinflamatuar tartibga soluvchi javob bilan bog‘liq sitokin sifatida baholangan.

Ushbu jadval ayniqsa IL-10 talqinida muhim. Manba muhokama bo‘limida past doza bilan yallig‘lanish muvozanati yaxshilangani umumiyroq tilda ifodalangan bo‘lsa-da, natijalar bo‘limidagi statistik ma’lumot IL-10 oshishi ahamiyatli emasligini ko‘rsatadi. Verianla bayonida statistik natija chegarasi saqlangan.

16S rRNA sekvensiyasi nimani o‘lchaydi?

16S ribosomal RNA gen sekvensiyasi namunadagi bakterial hamjamiyatlarning taksonomik tuzilishini o‘rganish uchun ishlatiladigan usuldir. Ushbu tadqiqotda ayni olti sichqonning ko‘r ichak tarkibidan mikrob DNKsi ajratib olingan, bakterial 16S rRNA genining V3–V4 hududi amplifikatsiya qilingan va Illumina NovaSeq 6000 platformasida sekvensiya qilingan.

16S tahlili bakteriyalarning nisbiy hamjamiyat tuzilishini ko‘rsatishga yordam beradi; biroq o‘z-o‘zicha mikroorganizmlar qaysi genlarni faol ifodalashini, qaysi metabolitlarni qanday tezlikda ishlab chiqarishini yoki CD12-1 shtammi ichakda qancha vaqt tirik qolishini bevosita aniqlamaydi. Tadqiqotning o‘zi ham mikrobiota tarkibi bilan SCFA o‘zgarishlarining bir vaqtda kuzatilishi to‘g‘ridan-to‘g‘ri mikrobiota → SCFA → to‘siq sababiylik zanjirini isbotlamasligini ta’kidlaydi.

Chao1 va Shannon indekslari o‘rtasidagi farq nima?

Chao1 namuna ichidagi takson boyligini, ayniqsa kuzatilmagan yoki kam uchraydigan taksonlarni hisobga olishga intiladigan alfa xilma-xillik ko‘rsatkichidir. Shannon indeksi esa faqat nechta takson borligiga emas, ularning nisbiy taqsimotiga ham sezgir. Tadqiqotda past doza guruhining Chao1 indeksi boshqa guruhlardan sezilarli yuqori, yuqori doza guruhining Shannon indeksi esa sezilarli past bo‘lgan.

Xilma-xillik indeksining o‘z-o‘zicha oshishi yoki kamayishi avtomatik ravishda “sog‘lomroq” yoki “zararliroq” degani emas. Ushbu ko‘rsatkichlar hamjamiyatning matematik tuzilishini tavsiflaydi va biologik talqin takson tarkibi hamda boshqa kasallik ko‘rsatkichlari bilan birgalikda qilinishi kerak.

Bray–Curtis PCoA nimani ko‘rsatgan?

Bray–Curtis masofasi namunalardagi mikrob kompozitsiyalari bir-biriga qanchalik o‘xshash yoki farqli ekanini miqdoriy ifodalovchi beta xilma-xillik o‘lchovidir. Principal Coordinates Analysis (PCoA) ushbu ko‘p o‘lchovli masofalarni ikki yoki bir necha o‘qda vizuallashtiradi. Manbadagi PCoA grafigida normal nazorat guruhi DSS ta’siriga uchragan guruhlardan aniq ajralgan. D, L va M guruhlari katta darajada ustma-ust tushgan, H guruhining taqsimoti esa alohidaroq ko‘ringan.

PCoA dagi ajralish guruhlarning mikrob kompozitsiyalari farqlanishi mumkinligini ko‘rsatadi; o‘z-o‘zicha qaysi bakteriya o‘zgarishga sabab bo‘lganini yoki bu farq kasallikning yaxshilanishiga sabab bo‘lganini isbotlamaydi.

Mikrobiota O‘zgarishlari CD12-1 ning Himoya Mexanizmini Isbotlaydimi?

Yo‘q. Tadqiqot ma’lum bakteriya avlodlari, kasallik ko‘rsatkichlari va qisqa zanjirli yog‘ kislotalari o‘rtasida statistik munosabatlarni ko‘rsatgan; biroq 16S rRNA tahlili metabolik faollikni bevosita o‘lchamagan, CD12-1 ning ichakdagi saqlanishi va faolligi kuzatilmagan hamda korrelyatsiya tahlili sababiylikni o‘rnatmagan. Shu sababli mikrobiota va SCFA topilmalari CD12-1 aralashuviga hamroh bo‘lgan bog‘liq javoblar sifatida talqin qilinishi kerak.

Qaysi bakteriya guruhlarida o‘zgarish kuzatilgan?

Filum darajasida Bacteroidetes, Firmicutes, Actinobacteria va Proteobacteria barcha guruhlarda ustun guruhlar qatoriga kirgan. DSS modelida normal nazorat bilan taqqoslaganda Firmicutes va Actinobacteria ning nisbiy ko‘pligi sezilarli past, Bacteroidetes va Proteobacteria esa sezilarli yuqori bo‘lgan.

CD12-1 dan keyin Actinobacteria yuqori doza guruhida DSS guruhiga nisbatan sezilarli yuqori bo‘lgan. Bunga qarshi Bacteroidetes barcha aralashuv guruhlarida normal nazoratdan yuqori bo‘lib qolgan va DSS guruhidan sezilarli farqlanmagan. Firmicutes ko‘pligi D, L, M va H guruhlari o‘rtasida taqqoslanadigan darajada bo‘lgan.

Avlod darajasidagi umumiy nisbiy ko‘plik tahlilida DSS guruhi normal nazoratga nisbatan kamroq Allobaculum, Lactobacillus, Bifidobacterium va Ruminococcus; ko‘proq Bacteroides va Oscillibacter ko‘rsatgan. Yuqori doza guruhida Allobaculum DSS guruhidan sezilarli yuqori, Oscillibacter esa sezilarli past bo‘lgan. Ushbu umumiy tahlilda Lactobacillus va Ruminococcus uchun CD12-1 dan keyin sezilarli farq kuzatilmagan; Bacteroides pastroq, Bifidobacterium esa yuqoriroq yo‘nalishda sonli tendensiya ko‘rsatgan, biroq farqlar ahamiyatli bo‘lmagan.

Manbaning qo‘shimcha differensial ko‘plik tahlilida boshqa taqqoslash tuzilmasi ishlatilgan: past doza guruhida Turicibacter va Lactobacillus; o‘rta doza guruhida Parabacteroides va Prevotella; yuqori doza guruhida Akkermansia, Parabacteroides, Turicibacter, Bifidobacterium va Allobaculum boyigan deb bildirilgan. Yuqori dozada Oscillospira va Desulfovibrio pastroq bo‘lgan. Ushbu turli tahlil natijalari bitta “foydali bakteriyalar ko‘paydi” jumlasiga qisqartirilmasligi kerak.

Korrelyatsiya matritsasi qanday o‘qilishi kerak?

Manbaning 6-rasmida bakteriya avlodlari bilan yo‘g‘on ichak uzunligi, DAI, gistopatologiya balli, goblet hujayralari, ZO-1, Occludin, Claudin-1 va to‘rtta sitokin o‘rtasidagi korrelyatsiyalar ko‘rsatilgan. Qizil yo‘nalish musbat, ko‘k yo‘nalish manfiy korrelyatsiyani; yulduzchalar esa statistik ahamiyatni bildiradi. Tadqiqot matnida aniq keltirilgan ahamiyatli munosabatlar quyidagi mustaqil jadvalda umumlashtirilgan.

Prevotella, Turicibacter va Akkermansia uchun tekshirilgan ko‘rsatkichlar bilan sezilarli korrelyatsiya bildirilmagan. Shuningdek, o‘rganilgan bakteriya avlodlarining hech biri TNF-α yoki IL-10 bilan sezilarli korrelyatsiya ko‘rsatmagan.

Usuliy bo‘shliq: Manba korrelyatsiya rasmini va p qiymatlarini beradi, biroq usul bo‘limida korrelyatsiya koeffitsiyenti Pearson, Spearman yoki boshqa usul bilan hisoblanganini aniq ko‘rsatmaydi. Shu sababli Verianla matni korrelyatsiya usulini taxmin qilmagan.

Qisqa zanjirli yog‘ kislotalari nima uchun muhim?

Qisqa zanjirli yog‘ kislotalari (SCFAs) ichak mikrob metabolizmi bilan bog‘liq kichik organik kislotalardir. Tadqiqotda asetat, propionat, butirat, izobutirat, valerat va izovalerat o‘lchangan. Manbaning 7-rasmida konsentratsiyalar µg/g birligida ko‘rsatilgan.

Yuqoriroq CD12-1 Dozasi Kuchliroq Himoya Ta’minladimi?

Yo‘q. CD12-1 javobi monoton doza-javob munosabatini ko‘rsatmagan: yuqori doza tana vazni yo‘qolishini yaxshiroq cheklagan bo‘lsa, past doza gistologiya, goblet hujayralari, ZO-1/Occludin, yallig‘lanish ko‘rsatkichlari va asetat/butirat kabi kengroq yakuniy nuqtalar guruhida eng qamrovli yaxshilanish profilini ko‘rsatgan. Tadqiqot optimal dozani aniqlamagan va yuqori doza avtomatik ravishda foydaliroq deb qabul qilinmasligini ta’kidlagan.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlaydigan xulosalar

• CD12-1 ning uchala dozasi ham DSS bilan induksiya qilingan kasallik faolligining ayrim ko‘rsatkichlarini model guruhiga nisbatan yumshatgan.
• Uchala doza ham DSS sababli yo‘g‘on ichak qisqarishini qisman kamaytirgan.
• Past doza gistologik tuzilma va goblet hujayralarida eng qamrovli himoya profilini ko‘rsatgan.
• Past dozada ZO-1 va Occludin AOD qiymatlari DSS guruhiga nisbatan sezilarli oshgan.
• Past va o‘rta doza TNF-α hamda IL-1β darajalarini DSS guruhiga nisbatan sezilarli kamaytirgan.
• Past doza IL-6 ni sezilarli kamaytirgan.
• Past doza asetat va butiratni; o‘rta doza asetatni sezilarli oshirgan.
• CD12-1 qo‘llanilishi ichak mikrobiotasi kompozitsiyasidagi doza bilan bog‘liq bo‘lmagan o‘zgarishlar bilan birga kuzatilgan.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlamaydigan umumlashtirishlar

• CD12-1 odamlarda yarali kolitni davolaydi, degan xulosa chiqarib bo‘lmaydi.
• Tadqiqot shakllanib bo‘lgan kolitni davolashni sinamagan; aralashuv DSS dan oldin boshlangan.
• Eng yuqori doza eng yaxshi doza deb bo‘lmaydi.
• Claudin-1 sezilarli ravishda normal holatga qaytgan deb bo‘lmaydi.
• IL-10 past dozada statistik jihatdan sezilarli oshgan deb bo‘lmaydi.
• Mikrobiota o‘zgarishlari himoya ta’sirining bevosita sababi ekani isbotlanmagan.
• Butiratning oshishi ma’lum bakteriya guruhining ko‘payishidan bevosita kelib chiqqani isbotlanmagan.
• CD12-1 ning ichakda kolonizatsiya qilgani, qancha vaqt saqlangani yoki qanday metabolik faollik ko‘rsatgani bevosita o‘lchanmagan.
• Erkak sichqonlar, surunkali kolit modellari yoki inson populyatsiyalari uchun xuddi shu natijalarni taxmin qilib bo‘lmaydi.

Tadqiqot Usuli va Natijalari

1. CD12-1 bakteriya suspenziyasini tayyorlash

CD12-1 faollashtirilgan va subkulturaga o‘tkazilgan. Bakteriyalar 4500 rpm da 10 daqiqa sentrifugalab yig‘ilgan va steril fosfat-buferli fiziologik eritma (PBS) bilan uch marta yuvilgan. Suspenziyalar 1 × 10⁸, 1 × 10⁹ va 1 × 10¹⁰ CFU/mL darajalariga sozlangan. Tajriba davomida yangi suspenziya har kuni tayyorlangan va bir martalik steril shpritslar bilan oral gavaj orqali darhol berilgan.

2. Hayvon namunasi va biologik tahlil kohorti

Oltmishta 6 haftalik SPF urg‘ochi C57BL/6 sichqon ishlatilgan. Har bir guruh dastlab n = 12 hayvondan iborat bo‘lgan. Manba har bir guruhdan individual hayvon identifikatorlari bo‘yicha va tana vazni, DAI yoki boshqa tajriba natijalariga qaramasdan olti hayvon tasodifiy biologik tahlil kohortiga tanlanganini bildiradi. Ayni olti hayvon barcha fenotipik, gistologik, biokimyoviy, SCFA va mikrobiota tahlillarida ishlatilgan.

Hisobot bo‘shlig‘i: Maqola dastlab har bir guruhda bo‘lgan boshqa olti sichqonning keyingi analitik ishlatilishini batafsil tushuntirmaydi. Natija rasmlari va statistik tahlillar har bir guruhda oltita biologik mustaqil sichqon asosida berilgan.

3. Tajriba yakunida namuna to‘plash

Uch haftalik eksperimental aralashuv yakunida sichqonlar 12 soat och qoldirilgan va servikal dislokatsiya yo‘li bilan evtanaziya qilingan. Butun yo‘g‘on ichak chiqarilgan, cho‘zmasdan uzunligi o‘lchangan va steril PBS bilan yuvilgan. Yo‘g‘on ichakning bir qismi gistologik tahlil uchun %4 paraformaldegidda fiksatsiya qilingan; qolgan yo‘g‘on ichak to‘qimalari va ko‘r ichak tarkibi suyuq azot bilan tez muzlatilgan va keyingi tahlillargacha −80 °C da saqlangan.

4. H&E va PAS gistologiyasi

H&E tahlili uchun distal yo‘g‘on ichakdan anusga taxminan 1 cm masofadagi segment ishlatilgan. To‘qima %4 paraformaldegidda fiksatsiya qilingan, parafinga joylashtirilgan va H&E bilan bo‘yalgan. Gistopatologik shikastlanish Cooper va hamkasblari mezonlari asosida ballangan.

PAS tahlili uchun yo‘g‘on ichak to‘qimalari %4 paraformaldegidda tun davomida fiksatsiya qilingan, parafinga joylashtirilgan va 5 µm qalinlikda kesilgan. PAS bo‘yashdan so‘ng yorug‘lik mikroskopida tasvirlangan va goblet hujayralari baholangan.

5. Immunogistokimyoviy to‘siq tahlili

Parafin kesimlari ikki marta 15 daqiqa ksilolda deparafinatsiya qilingan va darajali etanol qatorlarida rehidratatsiya qilingan. Antigenni qayta tiklash pH 6,0 sitrat buferida mikroto‘lqin bilan 8 daqiqa qizdirish, 8 daqiqa tanaffus va yana 7 daqiqa qizdirish tarzida bajarilgan. Kesimlar xona haroratiga sovutilgan va pH 7,4 PBS bilan uch marta, har safar besh daqiqadan yuvilgan.

Endogen peroksidaza faolligi %3 H₂O₂ bilan qorong‘ida 25 daqiqa bloklangan; nospetsifik bog‘lanish %3 bovin serum albumini (BSA) bilan 30 daqiqa to‘silgan. Birlamchi antitana inkubatsiyasi nam muhitda 4 °C da tun davomida davom ettirilgan. Ikkilamchi antitana xona haroratida qorong‘ida 50 daqiqa qo‘llangan, immunoreaktivlik 3,3′-diaminobenzidin (DAB) bilan 5 daqiqa ko‘rinadigan holga keltirilgan va gematoksilin bilan qarshi bo‘yash bajarilgan.

Tasvirlar CaseViewer 2.4 bilan qayd etilgan; musbat bo‘yalgan hududlarning o‘rtacha optik zichligi ImageJ 1.54p bilan hisoblangan.

6. Sitokinlarni o‘lchash

Yo‘g‘on ichak to‘qimalaridagi IL-1β, IL-6, IL-10 va TNF-α konsentratsiyalari Elabscience Biotechnology taqdim etgan ELISA to‘plamlari yordamida va ishlab chiqaruvchi ko‘rsatmalariga muvofiq o‘lchangan. Manbaning usul bo‘limida ushbu to‘plamlarning katalog raqamlari yoki batafsil kalibrlash egri chiziqlari berilmagan.

7. 16S rRNA mikrobiota tahlili

Ayni olti sichqonning ko‘r ichak tarkibi ishlatilgan. Mikrob DNKsi MagBeads FastDNA Kit for Soil bilan ajratib olingan; DNK yaxlitligi %0,8 agaroz gel elektroforezi, konsentratsiyasi va tozaligi NanoDrop spektrofotometri bilan baholangan.

Bakterial 16S rRNA genining V3–V4 hududi quyidagi primerlar bilan amplifikatsiya qilingan:

• 338F: 5′-barcode-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′
• 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′

PCR mahsulotlari konsentratsiyalariga qarab ekvimolyar miqdorlarda birlashtirilgan va Illumina NovaSeq 6000 platformasida sekvensiya qilingan. Xom ketma-ketliklar QIIME 2 demux plagini orqali namunalar bo‘yicha ajratilgan, primerlar cutadapt bilan olib tashlangan. Sifat filtrlash, denoising, paired-end ketma-ketliklarni birlashtirish va ximeralarni olib tashlash DADA2 bilan bajarilgan; denoise qilingan ketma-ketliklardan amplicon sequence variant (ASV) tuzilishi va xususiyat-ko‘plik jadvali yaratilgan.

Quyi oqim mikrobiom tahlillari QIIME 2 versiyasi 2024.5 bilan o‘tkazilgan. Manba “dataset-specific parameter settings” ishlatilganini bildiradi, biroq barcha QIIME 2/DADA2 parametrlarini alohida e’lon qilmaydi; shu sababli yetishmayotgan parametrlar Verianla tomonidan to‘ldirilmagan.

8. SCFA o‘lchovi va LC–MS/MS tayyorlash

Har bir tahlilda 20 mg ichak tarkibi, ikkita zanglamaydigan po‘lat sharcha va ichki standart saqlovchi 800 µL ekstraksiya eritmasi bilan ishlov berilgan. Namuna 60 soniya vorteks qilingan, 55 Hz da ikki marta 60 soniya homogenizatsiya qilingan va 4000 × g, 10 °C da 10 daqiqa sentrifugalangan.

Supernatantning 40 µL qismiga 20 µL 200 mM 3-nitrofenilgidrazin (3-NPH) va %6 piridin saqlovchi 20 µL 120 mM 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid gidroxlorid (EDC·HCl) qo‘shilgan. Derivatizatsiya 40 °C da, 1200 rpm da 30 daqiqa amalga oshirilgan.

Aralashma muz ustida 3 daqiqa sovutilgan va 12.000 × g, 4 °C da 10 daqiqa sentrifugalangan. Keyin 50 µL supernatant %0,1 (v/v) chumoli kislotasi saqlovchi 150 µL suv bilan suyultirilgan, 60 soniya vorteks qilingan va xuddi shu sharoitlarda qayta sentrifugalangan. Yakuniy supernatant 0,22 µm membrana filtridan o‘tkazilib, avtonamuna oluvchi vialga ko‘chirilgan va SCIEX LC–MS/MS tizimi bilan tahlil qilingan.

3-NPH/EDC·HCl derivatizatsiya bosqichining analitik maqsadi kichik karboksil kislotalarni LC–MS/MS yordamida qulayroq ajratish va aniqlashga imkon beruvchi kimyoviy hosilalarni yaratishdir. Ushbu izoh usulning analitik funksiyasini tushuntiradi; tadqiqotning yangi topilmasi emas.

9. Statistik tahlil

Ma’lumotlar Microsoft Excel 2021 da tartibga solingan va IBM SPSS Statistics 27.0 da tahlil qilingan. Statistik tahlillar har bir guruh uchun oltita biologik mustaqil sichqonga asoslangan va natijalar o‘rtacha ± o‘rtachaning standart xatosi (SEM) ko‘rinishida berilgan.

• Normal taqsimot: Shapiro–Wilk testi.
• Dispersiya bir xilligi: Levene testi.
• Normal + bir xil dispersiya: bir yo‘nalishli ANOVA + Duncan ko‘p taqqoslash testi.
• Dispersiya bir xilligi ta’minlanmasa: Welch ANOVA + Games–Howell testi.
• Normal taqsimlanmagan ma’lumotlar: Kruskal–Wallis + Dunn ko‘p taqqoslash testi.
• Tana vazni va DAI vaqt qatorlari: ikki yo‘nalishli takroriy o‘lchovlar ANOVA + Sidak ko‘p taqqoslash.
• Statistik ahamiyat chegarasi: p < 0,05.

SEM namunalar orasidagi biologik tarqalishning bevosita o‘lchovi bo‘lgan standart og‘ish bilan bir xil emas; ushbu tadqiqotda SEM guruh o‘rtachasini baholashdagi noaniqlikni ifodalovchi xato ko‘rsatkichi sifatida berilgan.

10. Tana vazni va DAI natijalari

Normal nazorat guruhining vazni DSS davri davomida bosqichma-bosqich oshgan. DSS model guruhida vazn yo‘qotish uchinchi kundan boshlab aniq bo‘lgan va eng katta kamayish yettinchi kuni kuzatilgan. Uchala CD12-1 guruhi ham DSS sababli vazn yo‘qotishga qarshi turli darajada himoya ko‘rsatgan; manba muhokamasida yuqori doza guruhi vazn yo‘qotishni samaraliroq cheklagani aytiladi.

DSS model guruhida DAI kunlar o‘tishi bilan oshgan va yettinchi kuni normal nazoratdan sezilarli yuqori bo‘lgan. Shu kuni L, M va H guruhlarining DAI qiymatlari D guruhidan sezilarli past (p < 0,05), biroq normal nazoratdan yuqori bo‘lib qolgan. Bu natija aralashuv kasallik faolligini yumshatganini, ammo DSS ta’sirini to‘liq bartaraf etmaganini ko‘rsatadi.

11. Gistologiya va goblet hujayralari natijalari

H&E va PAS tasvirlarining o‘zi birlamchi gistologik dalil bo‘lgani uchun Verianla ichida soxta mikroskopiya yaratilmagan. Manba tasvirlarining ilmiy natijasi matn va taqqoslashlar orqali yetkazilgan: DSS epiteliy yaxlitligini, kriptalarni va goblet hujayralarini buzgan; past doza CD12-1 ushbu ko‘rsatkichlarda eng qamrovli himoya profilini ko‘rsatgan.

12. Mikrobiota natijalarini to‘g‘ri o‘qish

Mikrobiota topilmalari turli tahlil qatlamlaridan iborat. Asosiy nisbiy ko‘plik grafiklari, alfa/beta xilma-xillik tahlili va qo‘shimcha differensial ko‘plik tahlillari bir xil savolni o‘lchamaydi. Shu sababli, masalan, asosiy nisbiy ko‘plik taqqoslashida Lactobacillus uchun aralashuv guruhlari bilan D o‘rtasida sezilarli farq kuzatilmasligi va qo‘shimcha differensial tahlilda L guruhida Lactobacillus boyishi bildirilishi bitta statistik natija sifatida birlashtirilmasligi kerak.

13. Mikrobiota–SCFA mexanizmining chegarasi

CD12-1 berilgan guruhlarda ayrim mikrob taksonlarining ko‘pligi va ayrim SCFA darajalari parallel ravishda o‘zgargan. Manba ayniqsa Ruminococcaceae a’zolari orasida ma’lum butirat ishlab chiqaruvchilar borligini muhokama qiladi. Shunga qaramay, ushbu tadqiqotda mikrob metabolik faolligi bevosita o‘lchanmagani uchun “Ruminococcaceae ko‘paydi va shu sababli butirat ko‘paydi” shaklida sababiy xulosa chiqarib bo‘lmaydi.

14. Doza-javob munosabatining chegarasi

Yuqori doza har bir yakuniy nuqtada past dozadan samaraliroq bo‘lmagani tadqiqotning asosiy topilmalaridan biridir. CD12-1 ning ichakdagi haqiqiy ko‘pligi, saqlanishi va metabolik faolligi shtammga xos usullar bilan kuzatilmagani sababli ushbu chiziqli bo‘lmagan javobning biologik sababi aniqlanmagan. Mualliflar kengroq doza oralig‘i, shtammga xos kuzatuv va funksional tahlillar zarurligini bildiradilar.

15. Asosiy cheklovlar

• Faqat urg‘ochi C57BL/6 sichqonlar ishlatilgan.
• Model o‘tkir DSS kolitidir; odamdagi yarali kolitning surunkali va qaytalanuvchi tabiatini to‘liq ifodalamaydi.
• CD12-1 DSS dan oldin boshlangan; natijalar profilaktik ta’sirni qo‘llab-quvvatlaydi, shakllanib bo‘lgan kasallikni davolashni emas.
• Mikrobiota tahlilida har bir guruh uchun n = 6 biologik takror bo‘lishi kichikroq takson farqlarini aniqlash uchun statistik quvvatni cheklashi mumkin.
• 16S rRNA tahlili mikrob metabolik faolligini bevosita o‘lchamaydi.
• CD12-1 ning ichakda kolonizatsiyasi, saqlanishi yoki metabolik faolligi bevosita kuzatilmagan.
• Korrelyatsiya usuli manba usul bo‘limida Pearson/Spearman kabi aniq nom bilan ko‘rsatilmagan.
• DAI komponentlarini yagona ballga aylantirish uchun aniq matematik tenglama berilmagan.
• Gistopatologik ballash shkalasining barcha bandlari maqolada berilmagan va tashqi manbaga havola qilingan.
• QIIME 2 uchun ishlatilgan barcha ma’lumot to‘plamiga xos parametrlar alohida berilmagan.
• Odamlarda xavfsizlik, optimal doza, klinik samaradorlik va uzoq muddatli foydalanish baholanmagan.

Manba va Usul Haqida Izoh

Asl tadqiqot: Preventive Effects of Fermented Yak Milk-Derived Lacticaseibacillus paracasei CD12-1 Against DSS-Induced Colitis in Mice

Mualliflar: Hongqiang Li; Teng Zhen; Junyang Li; Furong Han; Xian Guo; Defu Tang; Cheng Peng.

Mualliflar tartibi: Manba PDF dagi tartib aynan saqlangan.

Teng hissa: Manba maqolada teng birinchi mualliflik/teng hissa bayonoti ko‘rinmaydi.

Mas’ul mualliflar: Defu Tang va Cheng Peng.

Affiliatsiya 1: College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China.

Affiliatsiya 2: Gansu Animal Husbandry Technology Extension Station, Lanzhou 730030, China.

Affiliatsiya 3: Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding on Tibetan Plateau, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Key Laboratory of Yak Breeding Engineering of Gansu Province; Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, China.

Jurnal: Foods.

Nashriyot: MDPI, Basel, Switzerland.

Jild / son / maqola raqami: 15 / 17 / 3120.

DOI: 10.3390/foods15173120.

Rasmiy havola: https://doi.org/10.3390/foods15173120

Yuborilgan: 5 Avgust 2026.

Tahrir: 25 Avgust 2026.

Qabul: 31 Avgust 2026.

Nashr: 2 Sentyabr 2026.

Manba turi: Eksperimental hayvon tadqiqoti maqolasi.

Taqriz holati: Taqrizdan o‘tgan ilmiy jurnalda chop etilgan version of record.

Preprint holati: Yuklangan fayl preprint emas, chop etilgan jurnal versiyasidir. Manba maqola alohida preprint raqamini bildirmaydi.

Litsenziya: Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).

Tadqiqotning asosiy modeli: %2,5 DSS bilan chaqirilgan o‘tkir kolit modeli; faqat urg‘ochi C57BL/6 sichqonlar.

Etika qo‘mitasi: Gansu Agricultural University, Ethics Committee of Laboratory Animal Management and Animal Welfare; No. GSAU-Eth-VMC-2022-016; tasdiqlangan sana 10 Mart 2022.

Axborotli rozilik: Qo‘llanilmaydi; tadqiqot hayvon tajribasidir.

Ma’lumotlar mavjudligi: Tadqiqotning asl hissalari maqola va Supplementary Materials ichida berilgani, qo‘shimcha ma’lumot so‘rovlari mas’ul mualliflarga yo‘naltirilishi mumkinligi bildirilgan.

Qo‘shimcha materiallar: Figure S1 turli filum va avlodlarning nisbiy ko‘plik taqqoslashlarini; Figure S2 esa C–D, D–L, D–M va D–H taqqoslashlarida avlod darajasidagi differensial ko‘plik natijalarini o‘z ichiga oladi.

Moliyalashtirish: Science and Technology Project of the Department of Agriculture and Rural Affairs of Gansu Province (GNKJ-2026-24); Fostering Foundation for the Excellent Ph.D. Dissertation of Gansu Agricultural University (YB2025002); Gansu Province University Graduate “Innovation Star” Project (2026CXZX-779); Science and Technology Project of Gansu Province (26ZDNA010).

Manfaatlar to‘qnashuvi: Mualliflar manfaatlar to‘qnashuvi yo‘qligini bildirgan.

Muallif hissalari: Konseptualizatsiya H.L., T.Z. va F.H.; metodologiya H.L., T.Z., X.G. va J.L.; dasturiy ta’minot T.Z. va X.G.; formal tahlil H.L. va T.Z.; ma’lumotlarni boshqarish H.L., T.Z. va J.L.; dastlabki qoralamani yozish H.L., C.P. va D.T.; ko‘rib chiqish va tahrirlash H.L. va D.T. tomonidan bajarilgan.

Manba ichidagi talqin izohi: Natijalar bo‘limida IL-10 L va M guruhlarida son jihatdan oshgani, ammo D yoki C guruhidan sezilarli farq qilmagani (p > 0,05) bildiriladi. Muhokamadagi umumiyroq “IL-10 oshishi” ifodasi ushbu statistik chegarani bekor qilmaydi; Verianla matnida ahamiyatli bo‘lmagan natija ahamiyatli kabi taqdim etilmagan.

Korrelyatsiya izohi: Manba ahamiyatli mikrobiota–fenotip munosabatlarini bildiradi, biroq korrelyatsiya koeffitsiyenti Pearson, Spearman yoki boshqa usul ekanini usul bo‘limida aniq yozmaydi. Ushbu ma’lumot manbadan tashqaridan to‘ldirilmagan.

DAI formula izohi: DAI tana vazni yo‘qolishi, najas konsistensiyasi va najasdagi qon ballariga asoslanishi aniq berilgan; biroq yagona DAI qiymatini hosil qiluvchi aniq matematik birlashtirish formulasi maqolada yozilmagan. Verianla manbadan tashqari formula qo‘shmagan.

Vizual usul: H&E, PAS va immunogistokimyo tasvirlari birlamchi raster eksperimental dalil bo‘lgani sababli taqlid qilinmagan. Tajriba vaqt chizig‘i manba usulidagi munosabatlardan noldan SVG ko‘rinishida qurilgan; korrelyatsiya va SCFA natijalari esa manbada aniq ifodalangan ahamiyatli munosabatlar asosida mustaqil HTML jadvallari bilan berilgan. Grafiklardan xom ma’lumot bo‘lmaganda aniq sonli qiymatlar chiqarilmagan.

Asosiy talqin chegarasi: Ushbu tadqiqot odamlarda klinik davolash sinovi emas va CD12-1 shakllanib bo‘lgan yarali kolitni davolashini ko‘rsatmaydi. Natijalar o‘tkir DSS modelida, faqat urg‘ochi sichqonlarda va himoya aralashuvi tartibida olingan. Klinik qo‘llash uchun har ikki jinsni qamrab oluvchi qo‘shimcha hayvon modellari, kattaroq namunalar va undan keyin inson klinik tadqiqotlari talab etiladi.