Бул изилдөө гемцитабинди (gemcitabine, GEM) жана олапарибди (OLA) бир эле үлгүдө бир убакта сандык аныктоо үчүн иштелип чыккан жана валидацияланган жогорку натыйжалуу суюктук хроматографиясынын ыкмасын карайт. Иштелип чыккан ыкма GEM менен OLAны C18 тескери фазалуу колонкада бөлүп, эки аналитти тең 243 nm толкун узундугунда фотодиоддук массив детектору менен өлчөгөн изократтык, буфер колдонулбаган HPLC ыкмасы болуп саналат. Акыркы кыймылдуу фаза ацетонитрил:суу 50:50 (v/v), агым ылдамдыгы 0,8 mL/мин, колонканын температурасы 30 °C жана инъекция көлөмү 10 µL болгон. GEM болжол менен 3,3 мүнөттө, OLA болжол менен 4,3 мүнөттө элюцияланган. Ыкма 0,5–10,0 µg/mL аралыгында сызыктуу болгон; эки аналит үчүн тең \(R^2>0.999\) алынган, сезгичтик, тактык, тууралык, тандалмалуулук, туруктуулук жана стабилдүүлүк бааланган. Бөлүнүп алынган чычкан уйку бези ткандарындагы калыбына келтирүү GEM үчүн %102,64–104,26 ± 0,56, OLA үчүн %97,80–99,51 ± 0,57 деп билдирилген. Изилдөөнүн негизги чеги — бул дарылоонун натыйжалуулугун же in vivo фармакокинетиканы изилдөө эмес, аналитикалык ыкманы валидациялоо боюнча изилдөө болушу.

Ыкманы иштеп чыгуудагы негизги кыйынчылык GEM менен OLAнын физика-химиялык касиеттеринин бири-биринен кыйла айырмаланганында. GEM көбүрөөк полярдуу, OLA болсо азыраак полярдуу молекула. Изилдөөнүн максаты эки таза стандарттык эритмени гана бөлүү эмес, хитозан менен капталган липосома компоненттери, фосфат-буферленген туздуу эритме жана уйку бези тканы сыяктуу мүмкүн болгон тоскоолдуктар бар чөйрөлөрдө да эки дарыны ишенимдүү аныктоону камсыз кылуу.

Изилдөөнүн илимий көйгөйү

Гемцитабин уйку безинин рагын дарылоодо колдонулган нуклеозид аналогу. Олапариб болсо поли(ADP-рибоза) полимераза, башкача айтканда PARP ингибитору. Булак изилдөө ыкманын колдонуу контексти катары өзгөчө BRCA1 же BRCA2 менен байланышкан ДНКны оңдоо кемчиликтери бар уйку бези шишиктеринде GEM жана OLA айкалышына болгон учурдагы фармакологиялык кызыгууну карайт.

Бирок изилдөөнүн эксперименттик максаты бул айкалыштын шишикке каршы натыйжалуулугун өлчөө эмес. Жаңы липосомалык же нанобөлүкчө ташуучу системалар иштелип чыкса, бир эле биологиялык үлгүдөгү эки дарынын өлчөмүн ишенимдүү аныктай алган аналитикалык ыкма керек. Булак авторлору көрсөткөн адабияттагы боштук — GEM же OLAны өзүнчө өлчөөчү ыкмалар болгону менен, уйку бези тканы же липосомалык формуляция компоненттери сыяктуу татаал тоскоолдуктар бар шартта эки молекуланы бир убакта аныктоого мүмкүндүк берген ыкманын жетишсиздиги.

GEM менен OLAнын ар башка химиялык касиеттери эмне үчүн маанилүү?

Булак изилдөөдө GEM үчүн молекулалык масса 299,7 g/mol, сууда эригичтиги 0,824 mg/mL жана log P мааниси 0,28; OLA үчүн молекулалык масса 434,5 g/mol, сууда эригичтиги 0,060 mg/mL жана log P мааниси 2,72 деп берилет. Бул айырмачылыктар эки молекуланын тескери фазалуу хроматографияда бир эле кыймылдуу фазага ар башкача жооп беришине алып келет.

Булактагы 1-сүрөт GEM жана OLAнын молекулалык түзүлүштөрүн жанаша көрсөтөт. Сүрөттүн илимий милдети молекулаларды кооздук үчүн көрсөтүү эмес; эки аналиттин полярдуулугу жана эригичтиги боюнча эмне үчүн бир эле хроматографиялык ыкмада оптималдаштырууну талап кылган ар башка жүрүм-турум көрсөтүшү мүмкүн экенине түзүмдүк контекст берүү.

Гемцитабин менен олапариб бир эле HPLC ыкмасында кантип бөлүндү?

GEM жана OLA 250 × 4,6 mm өлчөмүндөгү, бөлүкчө диаметри 5 µm болгон тескери фазалуу C18 колонкада ацетонитрил:суу 50:50 (v/v) кыймылдуу фазасы 0,8 mL/мин ылдамдыкта изократтык өткөрүлүп бөлүнүп, 243 nm толкун узундугунда PDA/DAD детекциясы менен өлчөнгөн. Тандалган шарттарда GEM болжол менен 3,3 мүнөттө, OLA болжол менен 4,3 мүнөттө элюцияланган жана эки пиктин ортосундагы ажыроо болжол менен 5,2 болгон.

Эмне үчүн 243 nm тандалды?

Изилдөөчүлөр алгач GEM жана OLA стандарттарын 190–400 nm аралыгында UV–Vis сканерлөө режиминде изилдешкен. GEM үчүн 198, 243 жана 275 nm; OLA үчүн 207, 254 жана 276 nm чамасында максимумдар билдирилген. Андан кийин 254, 275, 243 жана 231 nm HPLC-DAD өлчөөлөрүндө салыштырылган.

Булактагы 2-сүрөт бул тандоонун визуалдык негизи. Эки дары тең изилденген толкун узундуктарында бөлүнө алганы менен, 243 nm GEM жана OLA үчүн жетиштүү күчтүү жана бири-бирине жакын пик жоопторун берип, мүмкүн болгон тоскоолдуктардын абсорбциясын азайткан жалпы детекция толкун узундугу катары тандалган.

Кыймылдуу фаза эмне үчүн метанолдон ацетонитрилге алмаштырылды?

Ыкманы иштеп чыгууда 15 хроматографиялык шарт сыналган. Алгачкы сыноолордо метанол/суу системалары колдонулган; бирок эриткичтен келип чыккан пик GEMдин кармалуу аймагында чыккандыктан толук бөлүнүү камсыздалган эмес. Суунун pH көрсөткүчү 3кө түшүрүлгөн шарттарда болсо GEM пиги бузулган же OLA пиги жоголгон.

Ацетонитрилге өтүү GEM жана OLA пиктери менен эриткич/матрица пиктеринин бөлүнүшүн жакшырткан. Ацетонитрил:суу 60:40 катышындагы сыноолордо ылайыктуу бөлүнүү алынгандан кийин суунун үлүшүн көбөйтүү жана агымды 0,8 mL/минге түшүрүү менен акыркы 50:50 шарт тандалган.

Аналитикалык Максат Профили жана кабыл алуу критерийлери

Изилдөөчүлөр ыкманы алынган жыйынтыктарга гана карап баалабастан, экспериментке чейин бир Аналитикалык Максат Профилин (Analytical Target Profile, ATP) жана кабыл алуу критерийлерин аныкташкан. Максат — GEM жана OLAны липосомалык формуляцияларда жана уйку бези тканында 0,5–10 µg/mL аралыгында бир убакта аныктоо.

Уйку бези матрицасы кантип даярдалды?

Изилдөөдө колдонулган уйку бездери башка эксперименттердин алкагында эвтаназияланган жана уйку безинин функциясына таасир этпеген эксперименттерден алынган чычкандардан берилген. Булак University of Brasília Ethics Committee үчүн 23106.125197/2021-49 протокол номерин көрсөтөт.

Жалпы 200 mg уйку бези тканы 40 mgдан бөлүктөргө бөлүнүп, ар бир бөлүк 1 mL метанолго салынган. Үлгүлөр бөлмө температурасында 300 rpmде 24 саат аралаштырылган; андан кийин 10.000 rpmде 5 мүнөт гомогенизацияланып, 4000 rpmде 10 мүнөт центрифугаланган. Супернатант эксперимент учурунда муз үстүндө кармалган. Инъекциядан мурун 5 mL супернатант 45 mL ацетонитрил:суу 50:50 эритмеси менен аралаштырылган.

Хитозан менен капталган липосомалар эмне үчүн даярдалды?

Липосомалар бул изилдөөдө терапиялык ийгиликти көрсөтүү үчүн эмес, иштелип чыккан ыкма келечекте липосомалык дары ташуу системаларынан GEM жана OLAны өлчөгөндө формуляция компоненттеринин таасирине кабылабы же жокпу, текшерүү үчүн даярдалган.

Фосфатидилхолин жука пленканы гидратациялоо ыкмасы менен липосомага айландырылган; пленка 55 °Cде PBS менен гидратацияланып, гомогенизацияланган жана кезеги менен 600, 200 жана 100 nm тешикчелүү мембраналардан экструзияланган. Андан кийин липосомалар %0,1 хитозан олигосахарид эритмеси менен капталган. Бул компоненттер тандалмалуулук сыноолорунда аналитикалык тоскоолдук катары колдонулган.

Ыкманын тандалмалуулугу кантип тастыкталды?

Тандалмалуулук эки дары тең 5,0 µg/mL болгон үлгүлөрдө PBS, хитозан менен капталган липосома компоненттери жана уйку бези гомогенаты бар жана жок шарттарда пик аянттарын, кармалуу убакыттарын жана пик тазалыгын салыштыруу менен бааланган; негизги GEM жана OLA кармалуу аймактарында байкаларлык ко-элюция билдирилген эмес жана пик тазалыгынын индекстери болжол менен 0,999–1,000 деңгээлинде калган.

Булактагы 3-сүрөт контролдук хроматограммаларды PBS, липосомалык компоненттер жана уйку бези матрицасынын хроматограммалары менен үстү-үстүнө көрсөтөт. Негизги GEM жана OLA пиктери тоскоолдук пиктеринен бөлүнгөн. 4-сүрөт болсо пик аянтын жана кармалуу убактысын сандык салыштырат.

Булак ичиндеги статистикалык эскертүү: Ыкма бөлүмүндө бир факторлуу ANOVA олуттуу матрица таасирин көрсөтпөгөнү айтылып, 4-сүрөттөгү салыштыруулар “ns” деп белгиленген. Бирок жыйынтыктар текстиндеги бир сүйлөмдө “p < 0.05, ANOVA” деген билдирүү бар. Бул эки билдирүү бири-бирине шайкеш эмес. Verianla бул маанини булактан тышкаркы божомол менен оңдобойт; булактын жалпы тандалмалуулук чечмелөөсү менен жарыяланган p-маани билдирүүсүнүн ортосундагы айырманы көрүнүктүү бойдон сактайт.

Системанын жарактуулугу

Алты кайталоо менен жасалган системанын жарактуулугу өлчөөлөрүндө теориялык табакчалардын саны GEM үчүн \(5808\pm76\), OLA үчүн \(7966\pm56\) деп билдирилген. Tailing факторлору тиешелүүлүгүнө жараша \(1.44\pm0.01\) жана \(1.36\pm0.01\), сыйымдуулук факторлору болжол менен \(2.0\pm0.0\) жана \(2.6\pm0.2\), эки пиктин ортосундагы ажыроо болсо \(5.22\pm0.01\) деп берилген. CV маанилери %2ден төмөн калган.

Сызыктуулук

GEM жана OLA үчүн үч көз карандысыз сток эритмеден даярдалган калибрлөө ийри сызыктары 0,5–10,0 µg/mL аралыгында изилденген. Эң кичине квадраттардын сызыктуу регрессиясы менен алынган теңдемелер төмөнкүдөй:

\[ \text{GEM:}\quad y=20703x-897.76,\qquad R^2=0.9991 \]

\[ \text{OLA:}\quad y=25209x-710.11,\qquad R^2=0.9993 \]

Бул жерде \(x\) аналиттин концентрациясын, \(y\) болсо хроматографиялык пик аянты түрүндөгү аспап жообун билдирет. Булактагы 5-сүрөттүн калдык графиктеринде салыштырмалуу каталар нөл сызыгынын айланасында туш келди таралып, ±%5 кабыл алуу чектеринде калган.

LOD жана LOQ кантип эсептелди?

Аныктоо чеги (LOD) жана сандык аныктоо чеги (LOQ) калибрлөө жообунун стандарттык четтөөсү \(\sigma\) жана калибрлөө сызыгынын эңкейиши \(S\) аркылуу эсептелген; булак \(LOD=(3.3\times\sigma)/S\) жана \(LOQ=(10\times\sigma)/S\) теңдемелерин колдонот.

\[ LOD=\frac{3.3\times\sigma}{S} \]

\[ LOQ=\frac{10\times\sigma}{S} \]

\(\sigma\)жооптун стандарттык четтөөсү; \(S\) калибрлөө сызыгынын эңкейиши. Эңкейиш чоңойгон сайын бирдей жооп өзгөрмөлүүлүгүндө LOD жана LOQ төмөндөйт; демек ыкма төмөнүрөөк концентрацияларды айырмалай ала турган болот.

Эки LOQ мааниси тең валидацияланган калибрлөө аралыгынын эң төмөнкү чекити болгон 0,5 µg/mLден төмөн. Булак ошондой эле ICH Q2(R2) бардык аналитикалык ыкмалар үчүн бирдиктүү универсалдуу LOD/LOQ кабыл алуу маанисин бербей турганын белгилейт.

Тактык кантип эсептелди?

Тактык кайталоочулук жана аралык тактык катары сыналган. 1,0; 5,0 жана 10,0 µg/mL деңгээлдериндеги GEM жана OLA үлгүлөрү үч жолудан анализденген; аралык тактык эки башка күн жана эки башка аналитик боюнча бааланган.

Вариация коэффициенти төмөнкү теңдеме менен эсептелген:

\[ CV(\%)=\frac{\text{standart sapma}}{\text{ortalama}}\times100 \]

Булактагы 2-таблицадагы бардык CV маанилери %5 кабыл алуу чегинен төмөн калган. Бул жыйынтык изилденген концентрация аралыгында ыкма аналитик жана күн өзгөргөнүнө карабастан кайталоого жарамдуу жооп бергенин колдойт.

Тууралык кантип эсептелди?

Тууралык экспериментте өлчөнгөн концентрациянын теориялык концентрацияга катышы менен эсептелген:

\[ \text{Doğruluk}(\%)= \frac{\text{deneysel konsantrasyon}} {\text{teorik konsantrasyon}}\times100 \]

Булактын баяндоо тексти GEM үчүн %97,50–101,82 жана OLA үчүн %96,89–103,15 аралыгын билдирет, ал эми 3-таблицада көрүнгөн четки маанилер GEM үчүн болжол менен %97,51–101,97 жана OLA үчүн %96,83–103,15. Бул кичине текст–таблица айырмасы булакта кандай болсо, ошондой сакталууга тийиш. Эки көрсөтүүдө тең жыйынтыктар алдын ала белгиленген %95–105 кабыл алуу аралыгында.

Бекемдик тести

Бекемдик One-Factor-at-a-Time (OFAT) ыкмасы менен сыналган. Кыймылдуу фазанын курамы ±%5, колонканын температурасы ±5 °C жана агым ылдамдыгы ±0,1 mL/мин өзгөртүлгөн. Сыноо үлгүлөрү 5,0 µg/mL GEM жана OLA камтыган жана эксперименттер үч кайталоо менен жүргүзүлгөн.

Ацетонитрил үлүшү өскөн сайын азыраак полярдуу OLAнын кармалуу убактысы кыскарган; агым ылдамдыгы жогорулаганда эки аналиттин тең кармалуу убактысы азайган. Ошого карабастан, tailing фактору, табакчалардын саны жана сыйымдуулук фактору сыяктуу системанын жарактуулугу параметрлери кабыл алуу чектеринде калган.

Аналитикалык стабилдүүлүк

Эки дары тең 5,0 µg/mL деңгээлинде үч температура шартында 30 күн көзөмөлдөнгөн: 4 °C, бөлмө температурасы жана 40 °C. Өлчөөлөр 0, 7, 15, 21 жана 30-күндөрү жүргүзүлгөн.

Булактагы 6-сүрөткө ылайык, 4 °C жана бөлмө температурасындагы эритмелер 21-күнгө чейин кабыл алынган %85–115 аралыгында калган. 40 °Cде эритмелер 15-күнгө чейин кабыл алуу критерийине жооп берген; кийинки өлчөөлөрдө байкалган концентрациянын жогорулашы авторлор тарабынан органикалык суюлтуучунун микро-буулануусу менен түшүндүрүлгөн.

Мажбурланган деградация

GEM жана OLAнын 200 µg/mL сток эритмелери бир саат бою кычкыл, щелочтук, кычкылдандыруучу, ферментативдик, фотолитикалык жана термалык стресстерге кабылган. Кычкыл жана щелочтук стресс 0,1 N HCl же NaOH; кычкылдандыруучу стресс %3 H₂O₂; ферментативдик стресс трипсин; фотолитикалык стресс 1,2 миллион lux/h UV нуру; термалык стресс 80 °C шартында колдонулган.

Эң айкын деградация термалык стресс астында байкалган. 7-сүрөттө деградация продуктыларынын негизги GEM жана OLA пиктеринен башка кармалуу убакыттарында пайда болушу ыкма деградация продуктылары бар шартта да негизги аналиттерди бөлө аларын көрсөтөт.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Аналитикалык система жана аспаптар

UV спектралдык сканерлөө Shimadzu UV-1800 аспабы менен 190–400 nm аралыгында жана 10 mm оптикалык жол узундугу бар кварц кювета менен жүргүзүлгөн. Хроматографиялык анализдер Shimadzu LC-20AD суюктук хроматография системасында жүргүзүлгөн; система төрт компоненттүү насос, SIL-20AD автоматтык үлгү инъектору, CTO-20AS колонка меши, дегазатор жана SPD-M20A фотодиоддук массив детекторун камтыган. Маалыматтарды чогултуу жана анализдөөдө Shimadzu LC Software Version 1.25 SP4 колдонулган.

Калибрлөө стандарттары

GEM жана OLA сток эритмелери өз-өзүнчө 200 µg/mL концентрацияда, суу:ацетонитрил 50:50 (v/v) ичинде даярдалган. Калибрлөө эритмелери ошол эле эриткич системасында суюлтулуп, 0,5–10,0 µg/mL иштөө аралыгы түзүлгөн.

Тандалмалуулук эксперименти

Эки дары тең 5,0 µg/mL деңгээлинде алты кайталоо менен контролдук эритме, PBS, хитозан менен капталган липосома компоненттери жана уйку бези гомогенаты чөйрөлөрүндө анализденген. Изилдөөчүлөр кармалуу убакыттарын, пик аянттарын жана PDA аркылуу пик тазалыгын салыштырышкан.

Тактык жана аралык тактык

1,0; 5,0 жана 10,0 µg/mL концентрациялар үч кайталоо менен анализденген; аралык тактык эки башка аналитик жана эки башка күн колдонулуп сыналган. Булактагы 2-таблицада бардык CV маанилери %5тен төмөн.

Уйку бези тканында калыбына келтирүү эксперименти

Калыбына келтирүү колдонмосунда чычкан уйку бези тканына GEM жана OLAнын белгилүү өлчөмдөрү кошулган. 1,0 mL 250,0 µg/mL GEM+OLA эритмеси ткань үлгүсүнө кошулуп, эриткич алынгандан кийин ткань майда бөлүктөргө бөлүнүп, 50,0 mL суу:ацетонитрил 50:50 ичинде кайра суспензияланып, эки дары үчүн тең акыркы концентрация 5,0 µg/mLге туураланган.

Үлгүлөр Multi Bio RS-24 аспабында бөлмө температурасында 30 rpmде түн бою айландырылып, чыпкаланып, валидацияланган HPLC-DAD ыкмасы менен анализденген. Эксперимент алты кайталоо менен жүргүзүлгөн.

Уйку бези тканындагы калыбына келтирүү жыйынтыгы эмнени көрсөтөт?

Бөлүнүп алынган чычкан уйку бези тканына белгилүү өлчөмдө кошулган GEMдин %102,64–104,26 ± 0,56 бөлүгү, OLAнын болсо %97,80–99,51 ± 0,57 бөлүгү аналитикалык процесстин аягында өлчөнгөн; бул маанилер ыкманын татаал уйку бези матрицасында эки аналитти бирге сандык аныктоого ылайыктуу экенин колдойт, бирок чыныгы тирүү организмде дарынын бөлүштүрүлүшүн же уйку бези шишигиндеги терапиялык натыйжалуулукту көрсөтпөйт.

Негизги валидация жыйынтыктарынын кыскача мазмуну

Изилдөө колдогон жыйынтыктар

• GEM жана OLA 243 nmде бир эле HPLC ыкмасында бири-биринен бөлүнүп, сандык өлчөнө алат.
• 0,5–10,0 µg/mL аралыгында эки аналит үчүн тең \(R^2>0.999\) деңгээлинде сызыктуу жооп алынган.
• LOD жана LOQ маанилери валидацияланган иштөө аралыгынын төмөнкү чеги болгон 0,5 µg/mLден төмөн.
• Тактык сыноолорунда CV маанилери кабыл алынган %5 чегинен төмөн калган.
• Хитозан менен капталган липосома компоненттери, PBS жана уйку бези матрицасы негизги аналит пиктери менен байкаларлык ко-элюция түзгөн эмес.
• Кыймылдуу фаза, температура жана агым ылдамдыгындагы көзөмөлдөнгөн өзгөрүүлөр системанын жарактуулугун кабыл алуу чегинен чыгарган эмес.
• Мажбурланган деградация продуктылары GEM жана OLAнын негизги хроматографиялык пиктеринен бөлүнгөн.
• Бөлүнүп алынган чычкан уйку бези тканынан калыбына келтирүү маанилери алдын ала белгиленген кабыл алуу аралыгына шайкеш.

Изилдөө колдобогон жыйынтыктар

• GEM жана OLA айкалышы адамдарда уйку безинин рагын натыйжалуураак дарылай турганын далилдебейт.
• Хитозан менен капталган липосомалык формуляция шишикке багытталган дары жеткирүүдө клиникалык жактан ийгиликтүү экенин көрсөтпөйт.
• Чычкан уйку бези тканындагы калыбына келтирүү тестин чыныгы in vivo фармакокинетикалык изилдөөнүн ордуна койбойт.
• Адамдын уйку бези тканында ошол эле калыбына келтирүү көрсөткүчтөрү автоматтык түрдө алынарын көрсөтпөйт.
• Узак мөөнөттүү дары коопсуздугун же терапиялык уулуулукту баалабайт.
• Иштелип чыккан аналитикалык ыкма бардык лабораториялык системаларда кайра валидациясыз эле бирдей көрсөткүчтөрдү берет деп кепилдик бербейт.

Методологиялык күчтүү жактар жана чектөөлөр

Ыкманын күчтүү жактары — физика-химиялык жактан ар башка эки аналитти бир изократтык шартта, бир толкун узундугунда жана сегиз мүнөттөн кыска иштөө максаты менен өлчөө мүмкүнчүлүгү; буфер колдонулбашы; фармацевтикалык формуляция тоскоолдуктары менен биологиялык уйку бези матрицасынын тең бааланышы; ошондой эле мажбурланган деградация продуктыларынын катышуусунда пик тазалыгынын сыналышы.

Ошол эле учурда уйку безинен калыбына келтирүү эксперименти ex vivo мүнөздө жана дарылар тканга көзөмөлдөнгөн түрдө кошулган. Чыныгы организмде сиңүү, бөлүштүрүлүү, метаболизм, чыгарылуу жана шишик ичиндеги гетерогендүүлүк сыяктуу факторлор бул изилдөөнүн алкагында сыналган эмес. Ошондуктан ыкманын келечектеги фармакокинетикалык изилдөөлөрдө колдонулушу мүмкүн болушу менен мындай in vivo изилдөөнүн ушул макалада аткарылганын бири-биринен ажыратуу керек.

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Түпнуска изилдөө: Chromatographic Method for Simultaneous Quantification of Gemcitabine and Olaparib Recovered from Isolated Pancreatic Tissue.

Авторлор: Mateus T. Silva; Breno N. Matos; Moacyr J. B. Melo Rego; Tais Gratieri; Marcilio Cunha-Filho; Guilherme M. Gelfuso.

Жооптуу автор: Guilherme M. Gelfuso.

Мекемелер: Laboratory of Food, Drugs, and Cosmetics (LTMAC), School of Health Sciences, University of Brasília, Brasília, Brazil; Laboratory of Immunomodulation and New Therapeutical Approaches, Research Centre for Therapeutic Innovation Suely Galdino (NUPIT-SG), Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil.

Журнал: Chemistry.

Басмакана: MDPI.

Библиографиялык жазуу: Chemistry 2026, 8(5), 63.

DOI: 10.3390/chemistry8050063.

Расмий жарыя шилтемеси: https://www.mdpi.com/2624-8549/8/5/63

Жарыя датасы: 7 май 2026. Макала 4 апрель 2026да алынган, 29 апрель 2026да кайра каралып, 4 май 2026да кабыл алынган.

Булактын түрү: Рецензияланган аналитикалык химия / фармацевтикалык анализ боюнча изилдөө макаласы; эксперименттик ыкма иштеп чыгуу жана валидациялоо изилдөөсү.

Негизги ыкма: Тескери фазалуу C18 HPLC, изократтык ацетонитрил:суу кыймылдуу фазасы, PDA/DAD детекциясы; ICH Q2(R2) валидациялоо ыкмасы жана USP <621> системанын жарактуулугу принциптери.

Матрицалар: Стандарттык эритмелер, PBS, хитозан менен капталган липосома компоненттери жана бөлүнүп алынган чычкан уйку бези тканы.

Этикалык булак маалыматы: Уйку бези ткандары башка эксперименттер үчүн эвтаназияланган жана уйку безинин функциясына таасир этпеген изилдөөлөрдөн калган чычкандардан алынган; булак University of Brasília Ethics Committee протокол номерин 23106.125197/2021-49 деп көрсөтөт.

Лицензия: Creative Commons Attribution (CC BY).

Каржылоо: Изилдөө CNPq тарабынан 310291/2021-6 жана 402518/2025-0 номерлүү гранттар жана University of Brasíliaнын Edital Interno nº 005/2025/PPGCS колдоосу менен каржыланган. CAPES студенттер үчүн стипендиялык колдоо көрсөткөн.

Маалыматтардын жеткиликтүүлүгү: Макаланын жыйынтыктарын колдогон чийки маалыматтар суроо-талап боюнча авторлор тарабынан берилери билдирилген.

Кызыкчылыктардын кагылышы: Авторлор кызыкчылыктардын кагылышы жок экенин билдиришкен.

Ыраазычылык: Авторлор уйку бези үлгүлөрүн берген Marcia Mortariге ыраазычылык билдиришет.

Авторлордун салымы: Концептуалдаштыруу G.M.G. жана M.J.B.M.R.; ыкма жана валидация M.T.S. жана B.N.M.; формалдык анализ M.T.S. жана G.M.G.; изилдөө M.T.S. жана B.N.M.; ресурстар T.G., M.C.-F., M.J.B.M.R. жана G.M.G.; баштапкы долбоор M.T.S. жана B.N.M.; карап чыгуу жана редакциялоо T.G., M.C.-F., M.J.B.M.R. жана G.M.G.; жетекчилик M.J.B.M.R. жана G.M.G.; долбоорду башкаруу G.M.G.; каржылоону алуу M.J.B.M.R. жана G.M.G. деп билдирилген.

Булак ичиндеги дал келбестик 1: Тандалмалуулук бөлүмүндө тексттин бир бөлүгү контаминанттарды салыштырууну “p < 0.05, ANOVA” деп берет, ошол эле изилдөө 4-сүрөттө аларды “ns” деп белгилеп, ыкма бөлүмүндө олуттуу матрица таасири жок экенин билдирет. Verianla бул айырманы булактан тышкаркы божомол менен оңдобойт.

Булак ичиндеги дал келбестик 2: Тууралык бөлүмүндөгү баяндоо аралыктары менен 3-таблицада көрүнгөн четки маанилердин ортосунда кичине сандык айырмачылыктар бар. Verianla таблица маанилерин жана тексттеги маанилерди бири-бирине айландырган эмес.

Негизги методологиялык чек: Изилдөөнүн биологиялык матрица колдонмосу бөлүнүп алынган чычкан уйку бези тканына кошулган белгилүү дары өлчөмдөрүнүн калыбына келтирилишине негизделет. Чыныгы in vivo фармакокинетикалык бөлүштүрүлүү, шишикке багыттоо, адам тканында валидация жана клиникалык дарылоо натыйжалуулугу бул изилдөөнүн алкагына кирбейт.

Илимий колдонуу чеги: Бул Verianla тексти ыкманын дизайнын, валидациясын, сандык жыйынтыктарын жана булактагы чектөөлөрдү окутуучу түрдө түшүндүрөт. Регулятордук валидация, ыкманы башка лабораторияга өткөрүү же академиялык шилтеме үчүн түпнуска макала жана тиешелүү ICH/USP документтери каралышы керек.