Ин таҳқиқот усули хроматографияи моеъи баландсамарро меомӯзад, ки барои муайянкунии ҳамзамони миқдории гемситабин (gemcitabine, GEM) ва олапариб (OLA) дар як намуна таҳия ва валидатсия шудааст. Усули таҳияшуда HPLC-и изократӣ ва бебуфер мебошад, ки GEM ва OLA-ро дар сутуни фазаи баръакси C18 ҷудо карда, ҳар ду аналитро дар 243 nm бо детектори массиви фотодиодӣ чен мекунад. Фазаи ниҳоии ҳаракаткунанда ацетонитрил:об 50:50 (v/v), суръати ҷараён 0,8 mL/дақ, ҳарорати сутун 30 °C ва ҳаҷми тазриқ 10 µL мебошад. GEM тақрибан дар 3,3 дақиқа ва OLA тақрибан дар 4,3 дақиқа элюсия шудааст. Усул дар фосилаи 0,5–10,0 µg/mL рафтори хаттӣ нишон додааст; барои ҳар ду аналит \(R^2>0.999\) ба даст омада, ҳассосият, дақиқӣ, саҳеҳӣ, интихобпазирӣ, устуворӣ ва стабильность арзёбӣ шудаанд. Барқарорсозӣ аз бофтаи ҷудошудаи гадуди зери меъдаи муш барои GEM %102,64–104,26 ± 0,56 ва барои OLA %97,80–99,51 ± 0,57 гузориш шудааст. Маҳдудияти асосии таҳқиқот он аст, ки ин на омӯзиши самаранокии табобат ва на фармакокинетикаи in vivo, балки таҳқиқоти валидатсияи усули аналитикӣ мебошад.

Мушкилии асосӣ дар таҳияи усул аз он иборат аст, ки хусусиятҳои физикӣ-химиявии GEM ва OLA аз ҳамдигар ба таври равшан фарқ мекунанд. GEM бештар қутбӣ, OLA бошад камтар қутбӣ мебошад. Ҳадафи таҳқиқот танҳо ҷудо кардани ду маҳлули стандарти тоза нест, балки таъмин намудани муайянкунии боэътимоди ҳар ду дору дар муҳитҳое низ мебошад, ки дар онҳо халалҳои эҳтимолӣ, аз қабили ҷузъҳои липосомаҳои бо хитозан пӯшонидашуда, маҳлули намакии буферии фосфатӣ ва бофтаи гадуди зери меъда мавҷуданд.

Масъалаи илмии таҳқиқот

Гемситабин аналоги нуклеозидӣ мебошад, ки дар табобати саратони гадуди зери меъда истифода мешавад. Олапариб бошад ингибитори поли(ADP-рибоза) полимераза, яъне PARP мебошад. Таҳқиқоти манбаъ таваҷҷуҳи мавҷудаи фармакологиро ба комбинатсияи GEM ва OLA, махсусан дар омосҳои гадуди зери меъда бо нуқсонҳои таъмири ДНК вобаста ба BRCA1 ё BRCA2, ҳамчун заминаи татбиқи усул баррасӣ мекунад.

Аммо ҳадафи таҷрибавии таҳқиқот чен кардани самаранокии зиддиомосии ин комбинатсия нест. Агар системаҳои нави интиқолдиҳандаи липосомалӣ ё нанозарраӣ таҳия шаванд, усули аналитикие лозим аст, ки миқдори ҳар ду доруро дар як намунаи биологӣ боэътимод чен карда тавонад. Холигии адабиёт, ки муаллифони манбаъ нишон медиҳанд, ин аст, ки гарчанде усулҳои ченкунии GEM ё OLA ба таври алоҳида мавҷуданд, усуле, ки ҳар ду молекуларо дар ҳузури халалҳои мураккаб, аз қабили бофтаи гадуди зери меъда ё ҷузъҳои формулятсияи липосомалӣ, ҳамзамон муайян кунад, намерасад.

Чаро хусусиятҳои химиявии гуногуни GEM ва OLA муҳиманд?

Дар таҳқиқоти манбаъ барои GEM массаи молекулавӣ 299,7 g/mol, ҳалшавӣ дар об 0,824 mg/mL ва арзиши log P 0,28; барои OLA массаи молекулавӣ 434,5 g/mol, ҳалшавӣ дар об 0,060 mg/mL ва арзиши log P 2,72 оварда шудааст. Ин фарқиятҳо боис мешаванд, ки ду молекула дар хроматографияи фазаи баръакс ба як фазаи ҳаракаткунанда ба таври гуногун ҷавоб диҳанд.

Шакли 1-и манбаъ сохторҳои молекулавии GEM ва OLA-ро паҳлу ба паҳлу нишон медиҳад. Вазифаи илмии шакл намоиши ороишии молекулаҳо нест; он заминаи сохторӣ медиҳад, ки чаро ду аналит аз ҷиҳати қутбият ва ҳалшавӣ метавонанд рафтори гуногун нишон диҳанд ва дар як усули хроматографӣ ба оптимизатсия ниёз дошта бошанд.

Гемситабин ва олапариб дар як усули HPLC чӣ гуна ҷудо шуданд?

GEM ва OLA дар сутуни фазаи баръакси C18 бо андозаи 250 × 4,6 mm ва диаметри заррача 5 µm, бо фазаи ҳаракаткунандаи ацетонитрил:об 50:50 (v/v) ва суръати 0,8 mL/дақ ба таври изократӣ гузаронда ҷудо ва дар 243 nm бо детексияи PDA/DAD чен карда шуданд. Дар шароити интихобшуда GEM тақрибан дар 3,3 дақиқа, OLA тақрибан дар 4,3 дақиқа элюсия шуда, резолютсияи байни ду пик тақрибан 5,2 буд.

Чаро 243 nm интихоб шуд?

Муҳаққиқон аввал стандартҳои GEM ва OLA-ро дар фосилаи 190–400 nm дар режими сканкунии UV–Vis таҳқиқ карданд. Барои GEM максимумҳо дар атрофи 198, 243 ва 275 nm; барои OLA дар атрофи 207, 254 ва 276 nm гузориш шуданд. Сипас онҳо дар ченкуниҳои HPLC-DAD дар 254, 275, 243 ва 231 nm муқоиса шуданд.

Шакли 2-и манбаъ асоси визуалии ин интихоб аст. Гарчанде ҳар ду дору дар дарозии мавҷҳои санҷидашуда ҷудо мешуданд, 243 nm ҳамчун дарозии мавҷи умумии детексия интихоб шуд, зеро барои GEM ва OLA ҷавобҳои пикаи кофӣ қавӣ ва ба ҳам наздик медиҳад ва ҳамзамон абсорбсияи халалҳои эҳтимолиро кам мекунад.

Чаро фазаи ҳаракаткунанда аз метанол ба ацетонитрил иваз карда шуд?

Ҳангоми таҳияи усул 15 шароити хроматографӣ санҷида шуд. Дар санҷишҳои аввал системаҳои метанол/об истифода шуданд; аммо азбаски пике, ки аз ҳалкунанда ба вуҷуд омада буд, дар минтақаи нигоҳдории GEM пайдо шуд, ҷудошавии пурра ба даст наомад. Дар шароите, ки pH-и об то 3 паст карда шуд, пикаи GEM вайрон ё пикаи OLA гум шуд.

Гузариш ба ацетонитрил ҷудошавии пикҳои GEM ва OLA аз пикҳои ҳалкунанда/матрицаро беҳтар кард. Пас аз ба даст овардани ҷудошавии муносиб дар нисбати ацетонитрил:об 60:40, бо зиёд кардани ҳиссаи об ва паст кардани ҷараён то 0,8 mL/дақ шароити ниҳоии 50:50 интихоб шуд.

Профили Ҳадафи Аналитикӣ ва меъёрҳои қабул

Муҳаққиқон усулро танҳо аз рӯи натиҷаҳои бадастомада арзёбӣ накарданд, балки пеш аз таҷриба як Профили Ҳадафи Аналитикӣ (Analytical Target Profile, ATP) ва меъёрҳои қабулро муайян карданд. Ҳадаф муайянкунии ҳамзамони GEM ва OLA дар формулятсияҳои липосомалӣ ва бофтаи гадуди зери меъда дар фосилаи 0,5–10 µg/mL мебошад.

Матритсаи гадуди зери меъда чӣ гуна омода шуд?

Гадудҳои зери меъдаи истифодашуда аз мушҳое гирифта шуданд, ки дар доираи таҷрибаҳои дигар эвтаназия шуда буданд ва ин таҷрибаҳо ба фаъолияти гадуди зери меъда таъсир намерасонданд. Манбаъ барои University of Brasília Ethics Committee рақами протоколи 23106.125197/2021-49-ро медиҳад.

Дар маҷмӯъ 200 mg бофтаи гадуди зери меъда ба қисмҳои 40 mg тақсим шуда, ҳар қисм ба 1 mL метанол гирифта шуд. Намунаҳо дар ҳарорати хонагӣ дар 300 rpm 24 соат омехта; сипас дар 10.000 rpm 5 дақиқа гомогенизатсия ва дар 4000 rpm 10 дақиқа центрифуга шуданд. Супернатант ҳангоми таҷриба рӯи ях нигоҳ дошта шуд. Пеш аз тазриқ 5 mL супернатант бо 45 mL маҳлули ацетонитрил:об 50:50 омехта шуд.

Чаро липосомаҳои бо хитозан пӯшонидашуда омода карда шуданд?

Липосомаҳо дар ин таҳқиқот барои нишон додани муваффақияти терапевтӣ не, балки барои санҷидани он омода шуданд, ки оё усули таҳияшуда ҳангоми чен кардани GEM ва OLA аз системаҳои липосомалии интиқоли дору аз ҷузъҳои формулятсия таъсир мегирад ё не.

Фосфатидилхолин бо усули гидрататсияи плёнкаи тунук ба липосома табдил дода шуд; плёнка дар 55 °C бо PBS гидрататсия, гомогенизатсия ва пайдарпай аз мембранаҳои дорои сӯрохии 600, 200 ва 100 nm экструзия шуд. Сипас липосомаҳо бо маҳлули %0,1 олигосахариди хитозан пӯшонида шуданд. Ин ҷузъҳо дар озмоишҳои интихобпазирӣ ҳамчун халали аналитикӣ истифода шуданд.

Интихобпазирии усул чӣ гуна тасдиқ шуд?

Интихобпазирӣ дар намунаҳое, ки ҳар ду дору 5,0 µg/mL буданд, тавассути муқоисаи масоҳати пик, вақтҳои нигоҳдорӣ ва софии пик дар ҳузур ва набудани PBS, ҷузъҳои липосомаи бо хитозан пӯшонидашуда ва гомогенати гадуди зери меъда арзёбӣ шуд; дар минтақаҳои асосии нигоҳдории GEM ва OLA ко-элюсияи назаррас гузориш нашуд ва индексҳои софии пик тақрибан дар сатҳи 0,999–1,000 монданд.

Шакли 3-и манбаъ хроматограммаҳои назоратиро бо хроматограммаҳои PBS, ҷузъҳои липосомалӣ ва матритсаи гадуди зери меъда рӯйи ҳам нишон медиҳад. Пикҳои асосии GEM ва OLA аз пикҳои халалкунанда ҷудо шудаанд. Шакли 4 масоҳати пик ва вақти нигоҳдориро ба таври миқдорӣ муқоиса мекунад.

Ёддошти омории дохилии манбаъ: Дар бахши усул гуфта мешавад, ки ANOVA-и яксамта таъсири назарраси матритсаро нишон надодааст ва муқоисаҳои Шакли 4 ҳамчун “ns” ишора шудаанд. Баръакс, дар як ҷумлаи матни натиҷаҳо ифодаи “p < 0.05, ANOVA” мавҷуд аст. Ин ду изҳорот бо ҳам мувофиқ нестанд. Verianla ин қиматро бо фарзияи берун аз манбаъ ислоҳ намекунад; фарқи байни тафсири умумии интихобпазирии манбаъ ва ифодаи нашршудаи p-қиматро ошкор нигоҳ медорад.

Мутобиқати система

Дар ченкуниҳои мутобиқати система бо шаш такрор шумораи лавҳаҳои назариявӣ барои GEM \(5808\pm76\), барои OLA \(7966\pm56\) гузориш шудааст. Омилҳои tailing мутаносибан \(1.44\pm0.01\) ва \(1.36\pm0.01\), омилҳои иқтидор тақрибан \(2.0\pm0.0\) ва \(2.6\pm0.2\), резолютсияи байни ду пик бошад \(5.22\pm0.01\) буд. Қиматҳои CV камтар аз %2 монданд.

Хаттият

Каҷҳои калибровкаи GEM ва OLA, ки аз се маҳлули мустақили захиравӣ омода шудаанд, дар фосилаи 0,5–10,0 µg/mL санҷида шуданд. Муодилаҳои бадастомада бо регрессияи хаттии хурдтарин квадратҳо чунинанд:

\[ \text{GEM:}\quad y=20703x-897.76,\qquad R^2=0.9991 \]

\[ \text{OLA:}\quad y=25209x-710.11,\qquad R^2=0.9993 \]

Дар ин ҷо \(x\) консентратсияи аналит ва \(y\) ҷавоби асбобро дар шакли масоҳати пикаи хроматографӣ ифода мекунад. Дар графикҳои боқимондаи Шакли 5-и манбаъ хатогиҳои нисбӣ дар атрофи хатти сифр ба таври тасодуфӣ паҳн шуда, дар ҳудуди қабули ±%5 монданд.

LOD ва LOQ чӣ гуна ҳисоб шуданд?

Ҳадди ошкоркунӣ (LOD) ва ҳадди муайянкунии миқдорӣ (LOQ) бо истифода аз инҳирофи стандартии ҷавоби калибровка \(\sigma\) ва нишебии хатти калибровка \(S\) ҳисоб шуданд; манбаъ муодилаҳои \(LOD=(3.3\times\sigma)/S\) ва \(LOQ=(10\times\sigma)/S\)-ро истифода мебарад.

\[ LOD=\frac{3.3\times\sigma}{S} \]

\[ LOQ=\frac{10\times\sigma}{S} \]

\(\sigma\)инҳирофи стандартии ҷавоб аст; \(S\) нишебии хатти калибровка аст. Бо зиёд шудани нишебӣ, барои ҳамон тағйирпазирии ҷавоб LOD ва LOQ кам мешаванд; яъне усул метавонад консентратсияҳои пасттарро фарқ кунад.

Ҳар ду қимати LOQ аз нуқтаи пасттарини фосилаи калибровкаи валидатсияшуда, яъне 0,5 µg/mL, камтаранд. Манбаъ инчунин қайд мекунад, ки ICH Q2(R2) барои ҳамаи усулҳои аналитикӣ як қимати универсалии ягонаи қабули LOD/LOQ намедиҳад.

Дақиқӣ чӣ гуна ҳисоб шуд?

Дақиқӣ ҳамчун такроршавандагӣ ва дақиқии мобайнӣ санҷида шуд. Намунаҳои GEM ва OLA дар сатҳҳои 1,0; 5,0 ва 10,0 µg/mL бо се такрор таҳлил шуданд; дақиқии мобайнӣ дар ду рӯзи гуногун ва аз ҷониби ду аналитики гуногун арзёбӣ шуд.

Коэффисиенти вариатсия бо муодилаи зерин ҳисоб шуд:

\[ CV(\%)=\frac{\text{standart sapma}}{\text{ortalama}}\times100 \]

Ҳамаи қиматҳои CV дар Ҷадвали 2-и манбаъ аз ҳадди қабули %5 камтар монданд. Ин натиҷа дастгирӣ мекунад, ки усул дар фосилаи консентратсияи санҷидашуда сарфи назар аз тағйирёбии аналитик ва рӯз ҷавоби такроршаванда медиҳад.

Саҳеҳӣ чӣ гуна ҳисоб шуд?

Саҳеҳӣ ҳамчун нисбати консентратсияи ба таври таҷрибавӣ ченшуда ба консентратсияи назариявӣ ҳисоб шуд:

\[ \text{Doğruluk}(\%)= \frac{\text{deneysel konsantrasyon}} {\text{teorik konsantrasyon}}\times100 \]

Матни тавсифии манбаъ барои GEM фосилаи %97,50–101,82 ва барои OLA %96,89–103,15-ро гузориш медиҳад, дар ҳоле ки қиматҳои канории намоёни Ҷадвали 3 барои GEM тақрибан %97,51–101,97 ва барои OLA %96,83–103,15 мебошанд. Ин фарқи хурди матн–ҷадвал бояд ҳамон тавре ки дар манбаъ аст, нигоҳ дошта шавад. Дар ҳар ду пешниҳод натиҷаҳо дар фосилаи қабули пешакӣ муайяншудаи %95–105 мебошанд.

Озмоиши устуворӣ

Устуворӣ бо равиши One-Factor-at-a-Time (OFAT) санҷида шуд. Таркиби фазаи ҳаракаткунанда ±%5, ҳарорати сутун ±5 °C ва суръати ҷараён ±0,1 mL/дақ тағйир дода шуд. Намунаҳои санҷишӣ 5,0 µg/mL GEM ва OLA доштанд ва таҷрибаҳо бо се такрор анҷом ёфтанд.

Бо зиёд шудани ҳиссаи ацетонитрил вақти нигоҳдории OLA-и камтар қутбӣ кӯтоҳ шуд; бо афзоиши суръати ҷараён вақти нигоҳдории ҳар ду аналит кам гардид. Бо вуҷуди ин, параметрҳои мутобиқати система, аз қабили омили tailing, шумораи лавҳаҳо ва омили иқтидор, дар ҳудуди қабул монданд.

Стабилнокии аналитикӣ

Ҳар ду дору дар сатҳи 5,0 µg/mL дар се шароити ҳароратӣ 30 рӯз пайгирӣ шуданд: 4 °C, ҳарорати хонагӣ ва 40 °C. Ченкуниҳо дар рӯзҳои 0, 7, 15, 21 ва 30 анҷом дода шуданд.

Мувофиқи Шакли 6-и манбаъ, маҳлулҳо дар 4 °C ва ҳарорати хонагӣ то рӯзи 21 дар фосилаи қабулшудаи %85–115 монданд. Дар 40 °C маҳлулҳо то рӯзи 15 ба меъёри қабул ҷавоб доданд; афзоиши консентратсия дар ченкуниҳои баъдӣ аз ҷониби муаллифон бо микро-бухоршавии ҳалкунандаи органикӣ шарҳ дода шуд.

Таҷзияи маҷбурӣ

Маҳлулҳои захиравии 200 µg/mL-и GEM ва OLA як соат ба стрессҳои кислотаӣ, ишқорӣ, оксидкунанда, ферментативӣ, фотолитикӣ ва гармӣ дучор карда шуданд. Стресси кислота ва ишқор бо 0,1 N HCl ё NaOH; стресси оксидкунанда бо %3 H₂O₂; стресси ферментативӣ бо трипсин; стресси фотолитикӣ бо 1,2 миллион lux/h нури UV; стресси гармӣ бошад дар 80 °C татбиқ шуд.

Аз ҳама таҷзияи равшан зери стресси гармӣ мушоҳида шуд. Дар Шакли 7 пайдо шудани маҳсулоти таҷзия дар вақтҳои нигоҳдории аз пикҳои асосии GEM ва OLA фарқкунанда нишон медиҳад, ки усул ҳатто дар ҳузури маҳсулоти таҷзия аналитҳои асосиро ҷудо карда метавонад.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Системаи аналитикӣ ва таҷҳизот

Сканкуниҳои спектралии UV бо дастгоҳи Shimadzu UV-1800 дар фосилаи 190–400 nm ва бо кюветаи кварсӣ бо дарозии роҳи оптикӣ 10 mm анҷом дода шуданд. Таҳлилҳои хроматографӣ дар системаи хроматографияи моеъи Shimadzu LC-20AD гузаронида шуданд; система насоси чоркомпонентӣ, инжектори худкори намуна SIL-20AD, танӯри сутун CTO-20AS, дегазатор ва детектори массиви фотодиодии SPD-M20A-ро дар бар мегирифт. Барои ҷамъоварӣ ва таҳлили маълумот Shimadzu LC Software Version 1.25 SP4 истифода шуд.

Стандартҳои калибровка

Маҳлулҳои захиравии GEM ва OLA алоҳида дар консентратсияи 200 µg/mL дар об:ацетонитрил 50:50 (v/v) омода шуданд. Маҳлулҳои калибровка дар ҳамон системаи ҳалкунанда суюл карда шуда, фосилаи кории 0,5–10,0 µg/mL ташкил шуд.

Озмоиши интихобпазирӣ

Ҳар ду дору дар сатҳи 5,0 µg/mL бо шаш такрор дар муҳитҳои маҳлули назоратӣ, PBS, ҷузъҳои липосомаи бо хитозан пӯшонидашуда ва гомогенати гадуди зери меъда таҳлил шуданд. Муҳаққиқон вақтҳои нигоҳдорӣ, масоҳати пик ва софии пикро бо PDA муқоиса карданд.

Дақиқӣ ва дақиқии мобайнӣ

Консентратсияҳои 1,0; 5,0 ва 10,0 µg/mL бо се такрор таҳлил шуданд; дақиқии мобайнӣ бо истифода аз ду аналитики гуногун ва ду рӯзи гуногун санҷида шуд. Дар Ҷадвали 2-и манбаъ ҳамаи қиматҳои CV аз %5 камтаранд.

Озмоиши барқарорсозӣ дар бофтаи гадуди зери меъда

Дар таҷрибаи барқарорсозӣ ба бофтаи гадуди зери меъдаи муш миқдорҳои маълуми GEM ва OLA илова шуданд. 1,0 mL маҳлули 250,0 µg/mL GEM+OLA ба намунаи бофта илова шуда, пас аз хориҷ кардани ҳалкунанда бофта ба қисмҳои хурд ҷудо ва дар 50,0 mL об:ацетонитрил 50:50 бозсуспензия шуд, то консентратсияи ниҳоии ҳар ду дору 5,0 µg/mL шавад.

Намунаҳо дар дастгоҳи Multi Bio RS-24 дар ҳарорати хонагӣ бо 30 rpm шабона чархонда, филтр ва бо усули валидатсияшудаи HPLC-DAD таҳлил шуданд. Таҷриба бо шаш такрор анҷом ёфт.

Натиҷаи барқарорсозӣ дар бофтаи гадуди зери меъда чиро нишон медиҳад?

Аз GEM, ки ба бофтаи ҷудошудаи гадуди зери меъдаи муш ба миқдори маълум илова шуда буд, %102,64–104,26 ± 0,56 ва аз OLA %97,80–99,51 ± 0,57 дар охири раванди аналитикӣ чен карда шуд; ин қиматҳо мувофиқ будани усулро барои муайянкунии ҳамзамони миқдории ду аналит дар матритсаи мураккаби гадуди зери меъда дастгирӣ мекунанд, аммо тақсимшавии дору дар организми зинда ё самаранокии терапевтиро дар омоси гадуди зери меъда нишон намедиҳанд.

Хулосаи натиҷаҳои асосии валидатсия

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ мекунад

• GEM ва OLA метавонанд дар 243 nm дар як усули HPLC аз ҳам ҷудо ва ба таври миқдорӣ чен карда шаванд.
• Дар фосилаи 0,5–10,0 µg/mL барои ҳар ду аналит ҷавоби хаттӣ дар сатҳи \(R^2>0.999\) гирифта шуд.
• Қиматҳои LOD ва LOQ аз ҳадди поёнии фосилаи кории валидатсияшуда, яъне 0,5 µg/mL, камтаранд.
• Дар озмоишҳои дақиқӣ қиматҳои CV аз ҳадди қабулшудаи %5 камтар монданд.
• Ҷузъҳои липосомаи бо хитозан пӯшонидашуда, PBS ва матритсаи гадуди зери меъда бо пикҳои асосии аналит ко-элюсияи назаррас ба вуҷуд наоварданд.
• Тағйироти назоратшуда дар фазаи ҳаракаткунанда, ҳарорат ва суръати ҷараён мутобиқати системаро аз ҳудуди қабул берун набароварданд.
• Маҳсулоти таҷзияи маҷбурӣ аз пикҳои асосии хроматографии GEM ва OLA ҷудо шуданд.
• Қиматҳои барқарорсозӣ аз бофтаи ҷудошудаи гадуди зери меъдаи муш ба фосилаи қабули пешакӣ муайяншуда мувофиқанд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ намекунад

• Исбот намекунад, ки комбинатсияи GEM ва OLA саратони гадуди зери меъдаро дар одамон самараноктар табобат мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки формулятсияи липосомалии бо хитозан пӯшонидашуда дар интиқоли ҳадафманди дору ба омос аз ҷиҳати клиникӣ муваффақ аст.
• Озмоиши барқарорсозӣ аз бофтаи гадуди зери меъдаи мушро ҷойгузини омӯзиши воқеии фармакокинетикии in vivo намекунад.
• Нишон намедиҳад, ки ҳамон сатҳҳои барқарорсозӣ дар бофтаи гадуди зери меъдаи инсон ба таври худкор ба даст меоянд.
• Амнияти дарозмуддати дору ё заҳролудии терапевтиро арзёбӣ намекунад.
• Кафолат намедиҳад, ки усули аналитикии таҳияшуда дар ҳамаи системаҳои лабораторӣ бидуни валидатсияи такрорӣ ҳамон натиҷаро нишон медиҳад.

Ҷиҳатҳои қавӣ ва маҳдудиятҳои методологӣ

Ҷиҳатҳои қавии усул инҳоянд: имкони чен кардани ду аналити аз ҷиҳати физикӣ-химиявӣ гуногун дар як шароити изократӣ, дар як дарозии мавҷ ва бо ҳадафи вақти кории камтар аз ҳашт дақиқа; истифода нашудани буфер; арзёбии ҳам халалҳои формулятсияи фармасевтӣ ва ҳам матритсаи биологии гадуди зери меъда; инчунин санҷидани софии пик дар ҳузури маҳсулоти таҷзияи маҷбурӣ.

Бо вуҷуди ин, озмоиши барқарорсозии гадуди зери меъда хусусияти ex vivo дорад ва доруҳо ба бофта ба таври назоратшуда илова шудаанд. Дар организми воқеӣ омилҳо ба монанди ҷаббиш, тақсимшавӣ, метаболизм, хориҷшавӣ ва гетерогении дохилиомосӣ дар доираи ин таҳқиқот санҷида нашудаанд. Аз ин рӯ, қобили истифода будани усул барои таҳқиқоти фармакокинетикии оянда бояд аз анҷом шудани чунин як таҳқиқоти in vivo дар худи ин мақола ҷудо карда шавад.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Таҳқиқоти аслӣ: Chromatographic Method for Simultaneous Quantification of Gemcitabine and Olaparib Recovered from Isolated Pancreatic Tissue.

Муаллифон: Mateus T. Silva; Breno N. Matos; Moacyr J. B. Melo Rego; Tais Gratieri; Marcilio Cunha-Filho; Guilherme M. Gelfuso.

Муаллифи масъул: Guilherme M. Gelfuso.

Муассисаҳо: Laboratory of Food, Drugs, and Cosmetics (LTMAC), School of Health Sciences, University of Brasília, Brasília, Brazil; Laboratory of Immunomodulation and New Therapeutical Approaches, Research Centre for Therapeutic Innovation Suely Galdino (NUPIT-SG), Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil.

Маҷалла: Chemistry.

Ношир: MDPI.

Сабти библиографӣ: Chemistry 2026, 8(5), 63.

DOI: 10.3390/chemistry8050063.

Пайванди расмии нашр: https://www.mdpi.com/2624-8549/8/5/63

Санаи нашр: 7 майи 2026. Мақола 4 апрели 2026 гирифта, 29 апрели 2026 бознигарӣ ва 4 майи 2026 қабул шудааст.

Навъи манбаъ: Мақолаи рецензияшудаи таҳқиқотӣ дар химияи аналитикӣ / таҳлили фармасевтӣ; таҳқиқоти таҷрибавии таҳия ва валидатсияи усул.

Усули асосӣ: HPLC-и фазаи баръакси C18, фазаи ҳаракаткунандаи изократии ацетонитрил:об, детексияи PDA/DAD; равиши валидатсияи ICH Q2(R2) ва принсипҳои мутобиқати системаи USP <621>.

Матритсаҳо: Маҳлулҳои стандартӣ, PBS, ҷузъҳои липосомаи бо хитозан пӯшонидашуда ва бофтаи ҷудошудаи гадуди зери меъдаи муш.

Маълумоти ахлоқии манбаъ: Бофтаҳои гадуди зери меъда аз мушҳое гирифта шудаанд, ки барои таҷрибаҳои дигар эвтаназия шуда буданд ва аз таҳқиқоте монда буданд, ки ба фаъолияти гадуди зери меъда таъсир намерасонданд; манбаъ рақами протоколи University of Brasília Ethics Committee-ро 23106.125197/2021-49 нишон медиҳад.

Иҷозатнома: Creative Commons Attribution (CC BY).

Маблағгузорӣ: Таҳқиқот аз ҷониби CNPq бо грантҳои 310291/2021-6 ва 402518/2025-0 ва бо дастгирии Edital Interno nº 005/2025/PPGCS-и University of Brasília маблағгузорӣ шудааст. CAPES барои донишҷӯён дастгирии стипендиявӣ пешниҳод кардааст.

Дастрасии маълумот: Гузориш шудааст, ки маълумоти хоми дастгиркунандаи натиҷаҳои мақола бо дархост аз ҷониби муаллифон пешниҳод карда мешавад.

Бархӯрди манфиатҳо: Муаллифон изҳор кардаанд, ки бархӯрди манфиатҳо вуҷуд надорад.

Сипосгузорӣ: Муаллифон ба Marcia Mortari барои пешниҳоди намунаҳои гадуди зери меъда сипос мегӯянд.

Саҳми муаллифон: Консептуализатсия G.M.G. ва M.J.B.M.R.; усул ва валидатсия M.T.S. ва B.N.M.; таҳлили формалӣ M.T.S. ва G.M.G.; таҳқиқот M.T.S. ва B.N.M.; захираҳо T.G., M.C.-F., M.J.B.M.R. ва G.M.G.; лоиҳаи аввалия M.T.S. ва B.N.M.; бозбинӣ ва таҳрир T.G., M.C.-F., M.J.B.M.R. ва G.M.G.; роҳбарӣ M.J.B.M.R. ва G.M.G.; идоракунии лоиҳа G.M.G.; гирифтани маблағгузорӣ M.J.B.M.R. ва G.M.G. гузориш шудааст.

Номувофиқии дохилии манбаъ 1: Дар бахши интихобпазирӣ як қисми матн муқоисаҳои контаминантҳоро ҳамчун “p < 0.05, ANOVA” медиҳад, дар ҳоле ки ҳамон таҳқиқот онҳоро дар Шакли 4 ҳамчун “ns” ишора мекунад ва дар бахши усул набудани таъсири назарраси матритсаро хабар медиҳад. Verianla ин фарқро бо фарзияи берун аз манбаъ ислоҳ намекунад.

Номувофиқии дохилии манбаъ 2: Байни фосилаҳои матни тавсифии бахши саҳеҳӣ ва қиматҳои канории намоёни Ҷадвали 3 фарқиятҳои хурди рақамӣ мавҷуданд. Verianla қиматҳои ҷадвал ва қиматҳои матнро ба ҳам табдил надодааст.

Маҳдудияти асосии методологӣ: Татбиқи матритсаи биологии таҳқиқот ба барқарорсозии миқдорҳои маълуми дору, ки ба бофтаи ҷудошудаи гадуди зери меъдаи муш илова шудаанд, асос меёбад. Тақсимшавии воқеии фармакокинетикии in vivo, ҳадафгирии омос, валидатсия дар бофтаи инсон ва самаранокии клиникии табобат ба доираи ин таҳқиқот дохил намешаванд.

Маҳдудияти истифодаи илмӣ: Ин матни Verianla тарҳи усул, валидатсия, натиҷаҳои миқдорӣ ва маҳдудиятҳои дохили манбаъро ба шакли омӯзишӣ шарҳ медиҳад. Барои валидатсияи танзимкунанда, интиқоли усул ба лабораторияи дигар ё истиноди академӣ бояд мақолаи аслӣ ва ҳуҷҷатҳои дахлдори ICH/USP баррасӣ шаванд.