Dihydroquercetin (DHQ), pia inayojulikana kama taxifolin, ni flavonoid inayochunguzwa katika tafiti za uharibifu wa mfumo wa neva kutokana na sifa zake za kioksidishaji. Utafiti huu unachunguza ikiwa DHQ ya dozi ndogo hubadilisha viashiria vya kihistolojia, kibayokemia na kitabia vinavyohusiana na ugonjwa katika mifano miwili tofauti ya panya iliyoundwa kijeni ya uharibifu wa mfumo wa neva — mfano wa APPswe/PS1dE9 (APP/PS1) unaofanana na ugonjwa wa Alzheimer na mfano wa FUS[1-359]-Tg unaofanana na amyotrophic lateral sclerosis inayohusiana na FUS. Katika mifano yote miwili, DHQ ilitolewa kupitia maji ya kunywa kwa dozi lengwa ya 0,6 mg/kg/siku. Matokeo yalionyesha manufaa katika baadhi ya viashiria vya kihistolojia na utendaji, lakini sifa nyingi kuu za ugonjwa hazikuboreka; kwa hiyo utafiti unaonyesha si tiba kamili bali ulinzi wa neva wa kabla ya kliniki ulio wa sehemu.

Katika jaribio la APP/PS1 linalofanana na Alzheimer, panya wa kike transgenic wenye umri wa miezi minane na vidhibiti wild-type vya ukoo huo walipokea DHQ au maji ya kawaida kwa miezi minne. Walipofikia umri wa miezi kumi na miwili, panya walifanyiwa open field, conditioned taste aversion, pellet displacement, light–dark box, elevated O-maze, step-down avoidance na Y-maze; baadaye plaques za amyloid katika ubongo zilipimwa kwa Congo red, uanzishaji wa astrocyte kwa GFAP immunofluorescence, na oxidative stress katika prefrontal cortex kwa malondialdehyde (MDA).

DHQ ilipunguza msongamano wa plaques ndogo za amyloid (<100 µm²) katika cortex na thalamus za panya APP/PS1. Kwa plaques ndogo katika cortex, ulinganisho wa post hoc ulikuwa p=0,0469, na katika thalamus p=0,0016. Makundi ya plaques kubwa zaidi hayakubadilika kwa kiasi cha maana, na hakuna athari ya matibabu yenye umuhimu iliyogunduliwa katika hippocampus katika kundi lolote la ukubwa wa plaque. Matokeo haya yanaonyesha si kwamba DHQ iliondoa pathology yote ya amyloid katika ubongo mzima, bali kwamba ilitoa athari ndogo katika maeneo maalum, hasa katika kundi la plaques ndogo.

Kiwango cha MDA katika prefrontal cortex kilikuwa juu katika panya untreated APP/PS1 kuliko katika vidhibiti wild-type. DHQ ilipunguza MDA kwa kiasi cha maana katika kundi la APP/PS1 (p=0,0183). Hata hivyo, kiwango cha MDA katika panya APP/PS1 waliopokea DHQ bado kilibaki juu kwa kiasi cha maana kuliko katika kundi la WT lililopewa DHQ (p=0,0398). Kwa hiyo matokeo yanaunga mkono kupungua kwa nguvu kwa kiashiria cha oxidative stress, lakini hayathibitishi kurejea kikamilifu kwa hali ya kawaida ya kibayokemia katika makundi yote.

Hakukuwa na athari ya wazi ya matibabu katika eneo la GFAP-positive astrocyte. Kwa maneno mengine, katika masharti haya ya jaribio DHQ haikuondoa kwa wazi astrogliosis katika mfano wa APP/PS1. Matokeo haya ni muhimu kwa sababu, ingawa kulikuwa na maboresho ya kibayokemia na baadhi ya tabia, si viashiria vyote vya neuroinflammation/histology vilibadilika katika mwelekeo mmoja.

Vipimo vya kujifunza pia vilionyesha picha ya kuchagua. Katika conditioned taste aversion, panya untreated APP/PS1 waliendelea kuonyesha upendeleo wa sucrose juu ya kiwango cha bahati baada ya kuoanisha na LiCl, hali inayoashiria upungufu wa kujifunza; katika kundi la APP/PS1 lililopewa DHQ, upendeleo wa sucrose haukuwa tena tofauti kwa kiasi cha maana na kiwango cha bahati cha %50. Katika Y-maze, panya APP/PS1 waliopokea DHQ walikuwa na asilimia kubwa zaidi ya chaguo sahihi kuliko mutant untreated (p=0,0233), na katika baadhi ya trials muda wa kufikia tuzo ya maji ulipungua. Kinyume chake, katika pellet displacement na step-down avoidance, DHQ haikurekebisha kwa kiasi cha maana upungufu wa utendaji unaotegemea hippocampus katika mutant.

Katika jaribio la pili, panya wa kiume FUS[1-359]-Tg wenye umri wa miezi miwili na vidhibiti wild-type littermate walitumika. Mfano wa FUS[1-359]-Tg huonyesha katika seli za neva aina iliyokatwa ya protini ya binadamu FUS na huleta pathology ya motor neuron inayofanana na ALS na kuendelea haraka. Baada ya DHQ, motor neurons katika lumbar spinal cord zilipimwa kwa Nissl staining, motor function kwa pole test, wire test na rotarod; pia dalili zinazofanana na kupooza, mabadiliko ya uzito wa mwili, matumizi ya maji/chakula na hali ya manyoya vilitathminiwa.

Katika panya untreated FUS[1-359]-Tg, msongamano wa motor neuron katika ventral horn ulipungua kwa kiasi cha maana ukilinganishwa na vidhibiti WT. Katika panya FUS waliopokea DHQ, msongamano wa motor neuron ulikuwa juu kuliko katika kundi untreated FUS (p=0,0471), na msongamano wa neuron katika kundi DHQ FUS haukuweza kutofautishwa kitakwimu na kundi WT (p=0,6964). Hili ndilo tokeo la kihistolojia la ALS lililo wazi zaidi katika utafiti.

Hata hivyo, ulinzi wa kihistolojia haukutafsiriwa kikamilifu kuwa utendaji bora wa motor. Panya FUS waliopokea na wasiopokea DHQ waliendelea kufanya vibaya zaidi kwa kiasi cha maana kuliko panya WT katika pole, wire na rotarod. Aidha, mwisho wa utafiti, uwiano wa panya wenye dalili zinazofanana na ALS haukutofautiana kwa kiasi cha maana kati ya makundi ya DHQ na vehicle FUS (p=0,3405). Kwa hiyo “idadi ya motor neuron ilihifadhiwa” na “motor function ya ALS iliboreka” si matokeo sawa.

DHQ ilileta baadhi ya maboresho katika hali ya jumla ya kisaikolojia. Kuongezeka kidogo kwa uzito wa mwili katika panya untreated FUS kuliboreka kwa sehemu kwa DHQ (p=0,0482), matumizi ya maji yaliongezeka (p=0,0406), matumizi ya chakula yaliongezeka ukilinganishwa na kundi untreated FUS (p=0,0146), na uwiano wa panya wenye hali mbaya ya manyoya ulipungua (p=0,0481). Hata hivyo, kuongezeka kwa alama ya jumla ya coat-state kulikuwa tu katika kiwango cha mwelekeo mkubwa wa kitakwimu (p=0,0707).

Kikomo cha tafsiri ya utafiti kwa afya ya binadamu ni muhimu sana. Mifano ya kijeni ya APP/PS1 na FUS[1-359]-Tg haiwakilishi biolojia yote ya ugonjwa wa Alzheimer au ALS kwa binadamu. Pia, dozi moja tu ya DHQ ilitumika; pharmacokinetics, kupenya kwa kizuizi cha damu–ubongo, uhusiano wa dose-response, aina za soluble Aβ na synaptic proteins hazikupimwa moja kwa moja. Dozi ya panya ya 0,6 mg/kg/siku si dozi ya matibabu inayopendekezwa kwa binadamu na haiwezi kubadilishwa moja kwa moja kuwa dozi ya binadamu.

Swali kuu la utafiti ni lipi?

Swali kuu la utafiti ni ikiwa matumizi ya muda mrefu ya DHQ kwa dozi ndogo yanaweza kutoa athari ya neuroprotective inayoweza kupimika si tu katika mifano bandia ya uharibifu wa mfumo wa neva iliyotengenezwa kwa sumu, bali pia katika mifano ya panya inayobeba sifa za kijeni za ugonjwa.

Ugonjwa wa Alzheimer na amyotrophic lateral sclerosis ni magonjwa tofauti ya uharibifu wa mfumo wa neva. Hata hivyo, yote mawili yana michakato ya kibayolojia inayokutana, kama oxidative stress, inflammation, kuharibika kwa cellular stress response na neuronal damage.

Ingawa sifa za antioxidant na anti-inflammatory za DHQ zimechunguzwa hapo awali katika mifumo mingi ya majaribio, watafiti wanaeleza kuwa data za matumizi ya muda mrefu ya dozi ndogo katika mifano ya kijeni ya neurodegeneration ni chache. Sababu ya kutumia mifano miwili katika utafiti ni kutathmini ikiwa molekuli hiyo hiyo inaonyesha sifa za ulinzi zinazofanana au tofauti katika mazingira mawili tofauti ya kijeni ya neurodegeneration.

Dihydroquercetin (DHQ) ni Nini na Kwa Nini Dozi ya 0,6 mg/kg/siku Ilichaguliwa?

DHQ au taxifolin ni flavonoid inayopatikana katika vyanzo vya asili; katika utafiti, dozi ya 0,6 mg/kg/siku ilichaguliwa kwa kuwa iko katikati ya athari za neuroprotective/anti-inflammatory za dozi ndogo zilizoripotiwa awali katika kiwango cha 0,25–1,0 mg/kg/siku, na inalenga kusawazisha uwezekano wa ufanisi katika matumizi ya muda mrefu na lengo la kupunguza athari zisizohitajika.

Mojawapo ya sifa za kemikali na kifamasia za DHQ ni uwezo mkubwa wa antioxidant. Reactive oxygen species (ROS), katika viwango vya juu, zinaweza kuharibu DNA, protini na lipid. Kwa sababu neurons zina mahitaji makubwa ya nishati na mfumo mkuu wa neva una unyeti kwa oxidative damage, oxidative stress ni sehemu ya kawaida katika michakato mingi ya neurodegeneration.

Mojawapo ya matatizo muhimu katika matumizi ya DHQ ni umumunyifu mdogo katika maji, bioavailability ndogo na elimination ya haraka. Hata hivyo, watafiti walichagua matumizi ya mdomo ya dozi ndogo na endelevu badala ya dozi kubwa sana.

Dozi lengwa katika utafiti:

0,6 mg DHQ / kg uzito wa mwili / siku

ndivyo ilivyowekwa.

DHQ iliyeyushwa katika maji ya kunywa, na mkusanyiko wa DHQ katika maji ulirekebishwa kwa kufuatilia mara kwa mara matumizi halisi ya maji ya kila siku na uzito wa mwili wa wanyama. Mkusanyiko wa mwisho katika maji ulikuwa takriban 0,0045 mg/mL. Thamani hii ni zaidi ya viwango viwili vya ukubwa chini ya kikomo cha 1 mg/mL aqueous solubility kilichoripotiwa na chanzo.

Mmumunyo ulibadilishwa kila baada ya 4–5 siku, na kwa vitendo uliandaliwa upya mara mbili kwa wiki. Chupa maalum za kunywea zisizo na sehemu za chuma zilitumika, mmumunyo ulihifadhiwa chini ya takriban 22 °C, na uliandaliwa kwa pH ya karibu na upande wowote ya maji ya bomba.

Watafiti walitumia maji ya kawaida ya bomba badala ya distilled/deionized water; sababu ilikuwa kwamba matumizi ya muda mrefu ya maji yaliyotolewa ioni pekee yanaweza kuathiri homeostasis ya maji na elektroliti katika rodents.

Neno “continuous administration” hapa halimaanishi kwamba mnyama alidungwa sindano mfululizo. Panya walikuwa na ufikiaji wa ad libitum wa maji yenye DHQ wakati wa tabia yao ya kawaida ya kunywa kila siku.

Mifano ya APPswe/PS1dE9 na FUS[1-359]-Tg Inawakilisha Nini?

Panya APPswe/PS1dE9 hubeba mabadiliko yanayohusiana na Alzheimer katika jeni za binadamu APP na presenilin-1 na huunda pathology ya Alzheimer-like yenye msisitizo wa amyloid-plaque, huku panya FUS[1-359]-Tg wakionyesha aina iliyokatwa ya protini ya binadamu FUS na kutengeneza mfano tofauti wa kijeni wa neurodegeneration wenye kupotea kwa haraka kwa motor neurons na motor impairment inayofanana na ALS.

Mfano wa APPswe/PS1dE9

Panya APP/PS1 hubeba mutant human amyloid precursor protein (APP) gene pamoja na mutant human presenilin-1 (PS1) gene. Chanzo kinaeleza kuwa APP ina Swedish mutation K594N/M595L na PS1 ina exon 9 deletion.

Kadiri panya hawa wanavyozeeka, extracellular amyloid plaques hutokea, na karibu na umri wa miezi 10 pathology ya amyloid huonekana wazi. Mfano pia unaweza kuonyesha mabadiliko yanayofanana na Alzheimer katika vipimo vya learning, memory na emotionality.

Katika utafiti, panya APP/PS1 wa kike wenye umri wa miezi minane walichaguliwa. Waandishi wanaeleza kuwa panya transgenic wa kike katika mfano huu huwa na unyeti mkubwa zaidi kwa pathology inayofanana na Alzheimer kuliko panya wa kiume.

Mfano wa FUS[1-359]-Tg

FUS ni RNA-binding protein inayoitwa “fused in sarcoma”. Kwa binadamu, baadhi ya mabadiliko ya FUS yanahusishwa na ALS.

Katika mfano wa FUS[1-359]-Tg, aina iliyokatwa ya protini ya binadamu FUS huonyeshwa katika seli za neva. Mfano huu huendeleza sifa zinazohusiana na ALS kama synaptic dysfunction, protein aggregation, kuharibika kwa cellular stress response, mitochondrial dysfunction na kupotea kwa motor neurons.

Katika utafiti huu, panya wa kiume walitumiwa katika jaribio la FUS na matibabu yalianza katika umri wa miezi miwili.

Majaribio ya APP/PS1 na FUS yanatofautiana kwa jinsia, umri, mfano wa ugonjwa, muda wa matibabu na vipimo vya mwisho. Kwa hiyo mifano hii miwili haikuundwa kwa ajili ya ulinganisho wa moja kwa moja wa kiasi kuhusu swali “DHQ ina nguvu zaidi katika mfano upi?”.

Randomization, blinding na ukubwa wa sampuli

Katika tafiti zote mbili, panya waligawanywa kwa randomization kabla ya matibabu kulingana na uzito wa mwili na tarehe ya kuzaliwa. Wajaribishaji walihifadhiwa bila kujua ugawaji wa makundi katika vipimo vyote; utambulisho wa panya ulitumia nambari binafsi pekee, na taarifa ya matibabu au genotype haikuonyeshwa katika msimbo.

Utafiti wa APP/PS1 una makundi manne:

Jumla ya panya 29 walitumika. Chanzo kinaeleza kutolingana kwa idadi ya makundi kwa vikwazo vya transgenic breeding, upatikanaji mdogo wa wanyama wanaolingana kwa umri/jinsia na kuzingatia kanuni za kimaadili za 3Rs.

Utafiti wa FUS una makundi matatu:

Katika jaribio hili, jumla ya panya 40 walitumika.

Kwa nini power analysis ni muhimu?

Watafiti walifanya a priori power analysis kabla ya jaribio. Kwa kuzingatia matokeo ya awali katika mifano hiyo hiyo ya panya, athari kubwa za Cohen's f ≥0,6 zilidhaniwa.

Kwa kutumia G*Power 3.1.9.7 pamoja na α=0,05 na 1−β=0,80, angalau wanyama 25 walihitajika kwa muundo wa vipengele viwili wa APP/PS1 na angalau 30 kwa muundo wa njia moja wa FUS. Kwa kweli, wanyama 29 na 40 mtawalia waliingizwa katika utafiti.

Hata hivyo, sensitivity analysis inaonyesha kwamba hasa ukubwa wa sampuli wa n=5–6 katika makundi transgenic ya APP/PS1 haukutosha kugundua athari ndogo:

• APP/PS1 n=5–6/kundi: takriban athari za Cohen's d ≥1,9,
• WT n=9/kundi: d ≥1,4,
• FUS vehicle–FUS DHQ n=14/kundi: baada ya multiple-comparison correction d ≥1,3

zinaweza kugunduliwa kwa kiwango cha nguvu cha %80.

Ujumbe wa pamoja wa thamani hizi ni huu: utafiti una uwezo hasa wa kugundua athari kubwa; athari halisi za kibayolojia za ukubwa mdogo au wa kati zinaweza kuwa hazikufikia matokeo ya “statistically significant”.

Utunzaji wa wanyama na masharti ya kimaadili

Panya walipitia acclimatization kwa siku saba kabla ya majaribio. Joto la chumba lilikuwa 22 ± 1 °C, unyevu %55 ± 2 na mzunguko wa mwanga–giza 12 saa / 12 saa. Reverse light cycle ilitumika; taa ziliwashwa saa 20:00 na kuzimwa saa 08:00, na majaribio ya tabia yalifanywa wakati wa awamu ya giza ambapo wanyama walikuwa hai.

Panya APP/PS1 waliwekwa watatu kwa kila cage, huku panya FUS waliwekwa mmoja mmoja.

Vigezo vya mwisho vya kibinadamu vilijumuisha motor dysfunction kali, kutoweza kujigeuza ndani ya sekunde 30, kutoweza kufikia chakula au maji, na kupungua kwa zaidi ya %20 kwa uzito wa mwili.

Uchambuzi wa amyloid plaques kwa Congo red

Congo red staining ilifanywa kwenye brain sections na maeneo ya cortex, hippocampus na thalamus yakachunguzwa kwa confocal microscopy.

Plaques ziligawanywa katika madaraja manne ya eneo la uso:

• <100 µm²,
• 100–200 µm²,
• 200–500 µm²,
• >500 µm².

Brain sections kumi zilitathminiwa kwa kila mnyama. Idadi ya plaques ilirekebishwa kulingana na eneo la region of interest husika na kuripotiwa kama plaques/mm².

Image threshold haikuwekwa katika thamani moja isiyobadilika kwa picha zote kutokana na tofauti ndogo za kiufundi katika nguvu ya staining; katika kila picha, iliwekwa katika kiwango cha 60–80 kwenye skeli ya 0–255 ili kutenganisha plaque signal na background.

Kama maelezo muhimu ya bias-control, picha zilipewa misimbo ya nambari ya nasibu kabla ya quantification na makundi yalifunguliwa baada ya vipimo vyote kukamilika.

GFAP inapima nini?

GFAP — Glial Fibrillary Acidic Protein, ni marker inayotumika sana kwa astrocytes. Katika muktadha wa neuroinflammation inayofanana na Alzheimer, kuongezeka kwa eneo la GFAP-positive huchukuliwa kuwa sambamba na reactive astrocyte activation au astrogliosis.

Brain sections ziliwekewa anti-GFAP antibody; cell nuclei ziliwekwa alama kwa DAPI na eneo la GFAP-positive likatathminiwa kwa QuPath 0.4.3.

Sections nne zilichambuliwa kwa kila mnyama na matokeo ya kila section yakabadilishwa kuwa wastani katika kiwango cha mnyama.

MDA inapima nini?

Malondialdehyde (MDA), ni molekuli inayoweza kutengenezwa wakati wa lipid peroxidation na hutumika mara nyingi kama kiashiria cha oxidative stress katika tishu za kibaolojia.

Katika utafiti huu, MDA ilipimwa katika tishu za prefrontal cortex kwa competitive inhibition ELISA. Absorbance ilisomwa katika 450 nm, mkusanyiko ukahesabiwa kutoka standard curve ya pointi tano na matokeo yakarekebishwa kwa wet tissue mass na kuwasilishwa kama ng/mg tissue.

DHQ Iliboresha Nini na Haikuboresha Nini Katika Mfano Unaofanana na Alzheimer?

Katika panya APP/PS1, DHQ iliathiri kwa njia chanya plaques ndogo za amyloid katika cortex na thalamus, kiwango cha MDA, baadhi ya viashiria vya kujifunza vilivyopimwa kwa Y-maze na conditioned taste aversion, na baadhi ya tabia za anxiety-like; lakini haikuboresha kwa kiasi cha maana plaque burden ya hippocampus, GFAP astrogliosis, pellet displacement au step-down performance.

Matokeo ya amyloid plaque: athari inayochagua eneo na ukubwa

Matokeo ya cortex yanapaswa kusomwa kwa uangalifu. Overall treatment main effect haikuwa statistically significant; umuhimu ulionekana katika ulinganisho wa post hoc wa plaque-size category maalum. Kwa hiyo kusema “amyloid load yote katika cortex ilipungua” kunazidi data ya chanzo.

Katika thalamus, treatment main effect na treatment × plaque-size interaction zote ni significant, na kupungua kwa kundi la plaques ndogo ni wazi zaidi.

Katika hippocampus, hakuna athari ya matibabu yenye umuhimu iliyoonekana.

Matokeo ya GFAP

Katika cortex, genotype ilikuwa na athari kubwa kwa GFAP-positive area, huku treatment effect ikiwa p=0,6890 na genotype × treatment interaction p=0,8998.

Katika hippocampus pia treatment p=0,3237 na genotype × treatment interaction p=0,3463 hazikuwa significant.

Tafsiri ya waandishi katika mjadala inaendana na matokeo haya: protokali ya DHQ iliyotumiwa haikupunguza kwa wazi uanzishaji wa astrocyte katika panya APP/PS1.

Matokeo ya MDA

Kwa hiyo kauli “MDA ilirudi kabisa katika kiwango cha kawaida” haiendani kikamilifu na matokeo ya kina. Kauli sahihi zaidi ni kwamba DHQ ilipunguza kwa kiasi cha maana kiwango cha MDA kilichokuwa kimeongezeka katika mutants, lakini haikufikisha kabisa katika kiwango cha WT katika ulinganisho wote.

Conditioned taste aversion inapima nini?

Katika kipimo hiki, panya kwanza hujifunza kuhusisha mmumunyo mtamu wa sucrose na uzoefu mbaya wa kisaikolojia wa sindano ya LiCl. Katika hatua inayofuata ya recall, ikiwa associative learning yenye afya imetokea, mnyama anapaswa kuepuka kuchagua mmumunyo wa sucrose uliokuwa umehusishwa awali na uzoefu mbaya.

Chanzo kinahesabu sucrose preference kwa formula ifuatayo:

\[ \text{Sucrose preference (\%)}= \frac{\text{tüketilen sucrose miktarı}} {\text{tüketilen sucrose miktarı}+\text{tüketilen su miktarı}} \times100 \]

Formula inahesabu nini? Ni asilimia gani ya matumizi yote ya maji iliyotokana na mmumunyo wa sucrose.

Kwa nini %50 ni muhimu? Katika uchaguzi wa chupa mbili, %50 ilitumika kama chance level ambapo hakuna upendeleo wa wazi kati ya chaguo mbili.

Baada ya LiCl challenge, sucrose preference ya kundi untreated APP/PS1 ilibaki juu kwa kiasi cha maana kuliko %50 chance level (p=0,0028). Hii inaashiria kuwa uhusiano mbaya haukujifunzwa vya kutosha.

Katika kundi APP/PS1 lililopewa DHQ, sucrose preference haikuwa tofauti kwa kiasi cha maana na %50 chance level (p=0,347). Waandishi walitafsiri hili kama kuboreka kwa kujifunza conditioned taste aversion.

Hata hivyo, katika maandishi ya kina ya chanzo, p-value moja ya moja kwa moja ya post hoc kati ya untreated APP/PS1 na DHQ APP/PS1 haikuripotiwa kando kwa matokeo haya. Kwa hiyo matokeo hayapaswi kuwasilishwa kama “DHQ iliongeza kwa hakika pointi X”.

Matokeo ya Y-maze

Katika toleo hili la Y-maze, panya hujifunza kutumia spatial cues kufikia mkono sahihi wenye maji.

Three-way repeated-measures ANOVA:

• genotype effect: p<0,0001,
• treatment effect: p=0,0087,
• trial effect: p<0,0001,
• genotype × treatment interaction: p=0,0077

ilionyesha.

Katika panya APP/PS1 waliopokea DHQ, muda wa kufikia water reward ulikuwa mfupi kuliko katika kundi untreated APP/PS1 wakati wa trials fulani; kwa trial 2/day 1 p<0,0001 na kwa trial 1/day 5 p=0,0081.

La muhimu zaidi, asilimia ya chaguo sahihi ilikuwa juu kwa kiasi cha maana katika kundi APP/PS1 lililopewa DHQ kuliko katika mutants untreated (p=0,0233).

Kwa nini pellet displacement haikuboreka?

Pellet displacement inategemea panya kutoa nje pellets ndogo za chakula kutoka ndani ya bomba na, katika source framework, inahusishwa na hippocampal function.

Hakuna tofauti ya maana iliyogunduliwa katika idadi ya displaced-pellet kati ya panya untreated na DHQ-treated APP/PS1 katika wakati wowote wa kipimo. Katika ulinganisho wote wa dakika 15, 30, 45, 60, 75 na 90, p>0,4.

Kwa upande wa cumulative curve AUC pia tofauti kati ya untreated APP/PS1 na DHQ APP/PS1 haikuwa significant (p=0,3755).

Waandishi wanahusisha kutokuwepo kwa uboreshaji huu wa kiutendaji na kutoboreka kwa maana kwa plaque density katika hippocampus na kutopata athari ya wazi ya matibabu kwa GFAP-positive astrogliosis. Uhusiano huu ni tafsiri ya mjadala; mechanism haikuthibitishwa moja kwa moja kwa majaribio.

Matokeo ya step-down avoidance

Step-down avoidance ni passive avoidance test inayotumika kwa contextual memory. Siku ya kwanza, panya anaposhuka kutoka jukwaa kwenda kwenye metal grid, hupokea electrical footshock ya 50 Hz, 0,8 mA kwa sekunde 1. Siku ya pili, muda wa kuchelewa kushuka kutoka jukwaa hupimwa bila kutoa shock.

Ikiwa kujifunza kwa kawaida kumetokea, mnyama anapaswa kusubiri muda mrefu zaidi kabla ya kushuka kutoka jukwaa siku ya pili.

Katika panya WT, latency iliongezeka siku ya pili. Katika makundi ya APP/PS1, hakuna ongezeko la maana la kujifunza lililoonekana katika panya untreated au DHQ-treated.

Treatment main effect p=0,749 na genotype × treatment interaction p=0,972. Hivyo DHQ haikurekebisha kwa kiasi cha maana upungufu wa contextual-memory wa APP/PS1 katika kipimo hiki.

Tabia inayofanana na wasiwasi

Elevated O-maze na light–dark box hutoa taarifa kuhusu anxiety-like phenotype kupitia uchaguzi wa mnyama kati ya maeneo ya wazi/mwanga na yaliyofungwa/giza.

Panya untreated APP/PS1 walionyesha latency ndefu zaidi kufikia open arm na open-arm exit chache zaidi katika elevated O-maze. Baadhi ya genotype × treatment interactions pia zilikuwa significant.

Hata hivyo, hakuna treatment main effect ya moja kwa moja na yenye nguvu katika mwelekeo mmoja katika vipimo vyote vya anxiety. Kwa mfano, kwa O-maze exit latency treatment p=0,9398, na kwa total exits p=0,562.

Kwa hiyo tafsiri salama zaidi ni kwamba DHQ ilionyesha partial normalization pattern katika baadhi ya anxiety-like abnormalities, lakini athari ya jumla na yenye mwelekeo mmoja ya “kutibu wasiwasi” haikuthibitishwa katika emotionality endpoints zote.

Kwa nini open-field ni udhibiti muhimu?

Katika open-field, locomotor activity ya jumla haikubadilishwa sana na treatment. Vipimo kama rearing, grooming na freezing pia havikuonyesha DHQ treatment effect yenye umuhimu.

Matokeo haya yanafanya iwe vigumu kutafsiri tofauti fulani katika Y-maze au anxiety kwa maelezo rahisi kwamba “DHQ ilifanya panya wasogee zaidi kwa ujumla”.

Kwa Nini Motor Tests Hazikuboreka Ingawa DHQ Ililinda Motor Neurons Katika Mfano Unaofanana na ALS?

Katika mfano wa FUS[1-359]-Tg, DHQ ilihifadhi kwa kiasi cha maana msongamano wa motor neuron katika ventral spinal cord, lakini kwa sababu motor performance katika ugonjwa unaoendelea haraka haitegemei idadi ya neurons pekee, pole, wire, rotarod na mwanzo wa dalili zinazofanana na ALS hazikuboreka kwa kiasi cha maana; waandishi wanajadili mchango unaoendelea wa neuromuscular, glial, vascular na muscle pathology kama maelezo yanayowezekana.

Nissl staining ilionyesha nini?

Nissl staining ni njia ya kihistolojia inayofanya miundo kama Nissl granules katika soma ya neuron ionekane na hutumika katika tathmini ya morphology ya neuron na kuhesabu seli.

Transverse sections ziliandaliwa katika maeneo ya lumbar spinal cord L3–L5. Motor neurons zenye cell body kubwa, nuclear envelope iliyo wazi na stained nucleolus yenye msongamano zilihesabiwa.

Spinal-cord sections sita zilitumika na nafasi ya 80 µm ikaachwa kati ya sections. Kwa histological analysis, n=5–7 wanyama kwa kila kundi walitumika.

Katika motor neurons za panya untreated FUS[1-359]-Tg, shrunken cell bodies na nuclei zisizo wazi sana zilionekana.

Neuronal-density analysis:

• overall group difference: F=6,435; p=0,0096,
• untreated FUS vs WT: p=0,0085,
• untreated FUS vs DHQ FUS: p=0,0471,
• DHQ FUS vs WT: p=0,6964.

Kutokuwa significant kwa ulinganisho wa mwisho kunaonyesha kuwa msongamano wa neuron katika kundi DHQ-treated FUS haukuweza kutofautishwa na kundi WT katika sampuli hii. Lakini hii haimaanishi kuwa spinal motor system yote au motor function ya mnyama ilirudi kikamilifu katika hali ya kawaida.

Uwiano wa dalili zinazofanana na ALS

Mwishoni mwa jaribio, asilimia ya panya mutant wenye dalili zinazofanana na ALS haikutofautiana kwa kiasi cha maana kati ya makundi ya DHQ-treated na untreated FUS:

p=0,3405 — Fisher's exact test.

Kwa hiyo haiwezi kusemwa kuwa DHQ ilibadilisha kwa kiasi cha maana mwanzo au kiwango cha kutokea kwa syndrome inayofanana na kupooza katika utafiti huu.

Pole test

Panya huwekwa kwenye wooden bar ya wima yenye urefu wa 60 cm na kipenyo cha 1,1 cm, na muda wa kushuka hupimwa.

Panya untreated na DHQ-treated FUS wote walitofautiana kwa kiasi cha maana na kundi WT:

• untreated FUS vs WT: p<0,0001,
• DHQ FUS vs WT: p=0,0004.

Matokeo haya yanaonyesha kuwa matibabu hayakurekebisha kikamilifu motor coordination deficit.

Wire test

Panya hujaribu kushikilia horizontal wire yenye kipenyo cha 0,3 cm kwa muda wa juu wa sekunde 180. Muda hadi kuanguka hutoa taarifa kuhusu motor strength, coordination na grip performance.

Makundi ya untreated na DHQ FUS yote yalionyesha muda mfupi zaidi wa kushikilia kuliko WT:

• untreated FUS vs WT: p=0,0063,
• DHQ FUS vs WT: p=0,0014.

Rotarod

Rotarod iliendeshwa kwa kasi ya kudumu ya 15 rpm na muda wa juu wa kipimo ukawekwa kuwa sekunde 600. Kukaa muda mrefu zaidi kwenye rod humaanisha motor coordination/endurance bora zaidi.

Panya untreated na DHQ-treated FUS wote walikaa kwenye rod kwa muda mfupi zaidi kwa kiasi cha maana kuliko kundi WT:

• untreated FUS vs WT: p=0,0003,
• DHQ FUS vs WT: p=0,0167.

Tafsiri ya jumla ya waandishi ni kwamba ulinzi wa kihistolojia wa motor-neuron huenda haukutosha kuboresha whole-animal motor performance katika FUS proteinopathy inayosonga haraka.

Hali ya jumla ya kisaikolojia

Hapa kauli “coat state iliboreka” lazima itofautishe vipimo viwili tofauti. Thamani endelevu ya coat-state index ilionyesha mwelekeo tu; lakini kupungua kwa uwiano wa wanyama katika kundi la poor coat score kulikuwa significant katika kiwango cha p<0,05.

Vitu ambavyo utafiti ulipima na haukupima moja kwa moja kuhusu mechanism

Waandishi wanaeleza katika mjadala kwamba Nrf2/HO-1, SIRT1, TLR4/NF-κB/NLRP3/caspase-1 na mechanisms nyingine zimeonyeshwa katika fasihi ya awali ya DHQ. Hizi ni mechanisms za fasihi ya awali zinazounga mkono msingi wa kibaolojia wa jaribio la sasa; si matokeo mapya ya pathway yaliyopimwa moja kwa moja katika utafiti huu.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Mtiririko wa jaribio la APP/PS1

1. Panya APP/PS1 wa kike wenye umri wa miezi minane na WT littermates walichaguliwa.
2. Panya walifanyiwa randomization kulingana na body weight na tarehe ya kuzaliwa.
3. Waligawanywa katika makundi ya DHQ au tap water ya kawaida.
4. DHQ iliongezwa kwenye drinking water ili dozi lengwa iwe 0,6 mg/kg/siku.
5. Matibabu yaliendelea kwa takriban miezi minne.
6. Katika umri wa miezi kumi na miwili, behavioral-test battery ya takriban wiki mbili ilifanywa.
7. Baada ya vipimo vya tabia, tishu za ubongo zilikusanywa.
8. Amyloid plaques zilichunguzwa kwa Congo red, astrogliosis kwa anti-GFAP na MDA kwa ELISA.

Vipimo vya tabia vya APP/PS1

Tofauti ya mbinu ya Y-maze ndani ya chanzo

Sentensi moja katika sehemu ya mbinu ya Y-maze inasema kuwa panya walipewa trials mbili za dakika 10 kwa siku kwa siku tano, zikiwa na tofauti ya saa moja kati ya trials.

Katika aya hiyo hiyo ya mbinu, mistari michache baadaye imeandikwa kuwa trials mbili za dakika 15 kwa siku zilitolewa kwa siku tano kwa tofauti ya saa 3–4.

Chanzo hakielezi kwa nini maelezo haya mawili yanatofautiana. Kwa hiyo Verianla haichagui muda mmoja kuwa sahihi na kufuta mwingine.

Maandalizi ya kihistolojia

Wanyama wali-euthanize chini ya terminal isoflurane anesthesia na perfused kwa PBS. Tishu husika zilifanyiwa post-fixation kwa 4% paraformaldehyde.

Katika brain histology, sections za 8 µm zilitathminiwa na nafasi ya 80 µm ikaachwa kati ya selected consecutive analyzed sections.

Kwa Congo-red plaque analysis, sections kumi kwa kila mnyama zilitumika.

Kwa GFAP analysis, sections nne kwa kila mnyama zilitathminiwa.

Kwa FUS spinal-cord analysis, transverse sections za 8 µm ziliandaliwa katika maeneo ya lumbar L3–L5, na motor-neuron counts kutoka sections sita zikabadilishwa kuwa wastani katika kiwango cha mnyama.

Uchambuzi wa kitakwimu

GraphPad Prism 8.0 ilitumika. Uhalali wa usambazaji wa data ulitathminiwa kwa Shapiro–Wilk.

Vipimo vilivyotumika katika chanzo:

• makundi mawili na usambazaji wa kawaida: t-test,
• makundi mawili na usambazaji usio wa kawaida: Mann–Whitney U-test,
• zaidi ya makundi mawili yenye usambazaji wa kawaida: one-way, two-way au three-way ANOVA,
• post hoc multiple comparison: Tukey na Sidak katika plaque analyses husika,
• repeated measurements: repeated-measures ANOVA,
• Greenhouse–Geisser correction katika Y-maze na pellet-displacement analyses zenye tatizo la sphericity,
• makundi mengi yasiyo na usambazaji wa kawaida: Kruskal–Wallis + Dunn,
• uwiano wa kategoriali: Fisher's exact test,
• ulinganisho wa chance-level: one-sample t-test.

Kizingiti cha statistical significance:

p < 0,05

kiliwekwa.

Hakuna data point iliyotolewa kutoka kwenye uchambuzi.

Katika ANOVA, “genotype effect”, “treatment effect” na “interaction” vinamaanisha nini?

Genotype effect huuliza ikiwa kuna tofauti ya jumla kati ya makundi WT na mutant bila kutegemea DHQ.

Treatment effect huuliza ikiwa kuna tofauti ya jumla kati ya makundi yaliyopokea na yasiyopokea DHQ bila kutegemea genotype.

Genotype × treatment interaction hujaribu kama athari ya DHQ ni sawa katika panya WT na mutant.

Interaction ikiwa significant, si sahihi kusema “matibabu yalikuwa na athari sawa kwa kila mmoja”; treatment effect inaweza kubadilika kulingana na genotype.

p-value inasema nini na haisemi nini?

p-value inahusiana na uwezekano wa kupata matokeo sawa na tofauti iliyoonekana au makali zaidi chini ya model iliyotumika na null hypothesis. p<0,05 ndicho kizingiti kilichotumika kwa statistical significance katika utafiti.

p-value:

• peke yake haisemi ukubwa wa athari,
• haithibitishi kuwa matibabu ni muhimu kliniki,
• ikiwa p>0,05 haimaanishi “hakuna athari kabisa”.

Jambo hili la mwisho ni muhimu hasa kwa makundi transgenic ya APP/PS1 yenye n=5–6; power analysis inaonyesha kwamba athari ndogo zinaweza kukosa kugunduliwa kwa urahisi.

Muhtasari wa matrix ya matokeo ya mifano miwili

Hitimisho zinazoungwa mkono na utafiti

• DHQ ya mdomo ya dozi ndogo ilibadilisha kwa mwelekeo chanya baadhi ya endpoints zinazohusiana na ugonjwa katika panya APP/PS1 na FUS[1-359]-Tg.
• Katika mfano wa APP/PS1, athari ni ya kuchagua kwa amyloid plaque size na brain region.
• Plaques ndogo za amyloid katika cortex na thalamus zilipungua.
• Hippocampal plaque burden haikuboreka kwa kiasi cha maana.
• Prefrontal-cortex MDA ilipungua kwa kiasi cha maana.
• GFAP-positive astrogliosis haikupata rescue ya wazi.
• Conditioned taste aversion na Y-maze zinaendana na uboreshaji katika baadhi ya viashiria vya kujifunza.
• Pellet displacement na step-down deficits ziliendelea.
• Katika mfano wa FUS, spinal motor-neuron density ilikuwa juu zaidi katika panya DHQ-treated kuliko mutants untreated.
• Katika mfano wa FUS, baadhi ya general physiological measures ziliboreka.
• Katika mfano wa FUS, motor-test deficits na ALS-like symptom rate hazikuboreka kwa kiasi cha maana.
• Katika mifano yote miwili, athari ya DHQ ni “ya sehemu”.

Hitimisho ambazo utafiti hauungi mkono

• Haijaonyeshwa kuwa DHQ hutibu ugonjwa wa Alzheimer kwa binadamu.
• Haijaonyeshwa kuwa DHQ hutibu ALS kwa binadamu.
• Dozi ya panya ya 0,6 mg/kg/siku si dozi ya matibabu kwa binadamu.
• DHQ haikuondoa amyloid plaques zote.
• Hippocampal pathology haikurekebishwa kikamilifu.
• Haijaonyeshwa kuwa astrogliosis iliboreka.
• Haiwezi kusemwa kuwa MDA ilirejea kikamilifu kawaida katika ulinganisho wote wa vidhibiti.
• Katika mfano wa FUS, paralysis onset au motor function havikuboreka kwa kiasi cha maana.
• Motor-neuron preservation si sawa na motor recovery.
• Utafiti huu haujathibitisha moja kwa moja ni molecular signaling pathway gani DHQ hutumia kuleta athari.
• Kwa kuwa dozi moja tu ilitumika, dozi bora au uhusiano wa dose-response haujulikani.
• Brain concentration au BBB penetration ya DHQ haikupimwa katika utafiti huu.
• Usalama wa muda mrefu kwa binadamu au clinical efficacy hauwezi kuhitimishwa kutoka jaribio hili.

Nguvu za utafiti

Mifano miwili huru ya kijeni: Utafiti haukutumia toxin-induced neurodegeneration pekee, bali ulitathmini mifano miwili ya kijeni inayofanana na Alzheimer na ALS.

Mbinu ya muda mrefu ya dozi ndogo: Hasa katika tawi la APP/PS1, voluntary drinking-water administration ya miezi kadhaa ilitathminiwa.

Vipimo vya tabaka nyingi: Behavior, histology, oxidative-stress marker na physiological endpoints zilitathminiwa katika utafiti mmoja.

Randomization na blinding: Ugawaji wa makundi ulifanywa kwa randomization na experimenter blinding ilitumika katika assays.

A priori power analysis: Idadi za sampuli zilihalalishwa mapema kwa power analysis na baadaye sensitivity power analysis ikafanywa.

Kuripoti matokeo hasi: Endpoints ambazo hazikuboreka, kama motor-function rescue, hippocampal learning na astrogliosis, ziliripotiwa wazi.

Vikwazo vikuu

Dozi moja ya DHQ: Hakuna dose-response study iliyofanywa.

Hakuna pharmacokinetics: Plasma concentration, brain concentration na elimination kinetics hazikupimwa moja kwa moja.

Hakuna kipimo cha BBB: DHQ permeability kupitia kizuizi cha damu–ubongo haikupimwa katika jaribio hili.

Soluble Aβ haikupimwa: Amyloid plaques zilichunguzwa, lakini soluble Aβ species hazikutathminiwa moja kwa moja.

Synaptic proteins hazikupimwa: Synaptic mechanism ya behavioral improvement haikujaribiwa moja kwa moja.

Makundi madogo ya APP/PS1: Makundi mutant ya n=5–6 yana nguvu ya kutosha ya kitakwimu kwa treatment effects kubwa pekee.

Model moja ya AD na moja ya ALS ya kijeni: Matokeo hayawezi kuhamishwa kiotomatiki kwa mifano mingine ya kijeni au sporadic disease.

Jinsia hutofautiana kati ya mifano: Tawi la APP/PS1 lina panya wa kike, tawi la FUS lina panya wa kiume.

Functional translation ya sehemu: Histological benefit haikujitokeza katika behavior au motor endpoints zote.

Tofauti za muda ndani ya chanzo: Lebo za wiki za Figure 1A, maelezo ya FUS final-timepoint na muda wa Y-maze trial hazilingani kikamilifu.

Mahitaji yaliyotajwa katika chanzo kwa utafiti wa baadaye

• Majaribio ya DHQ dose-response,
• pharmacokinetic analysis,
• BBB permeability measurements,
• kipimo cha soluble Aβ species,
• uchambuzi wa synaptic-protein,
• cohorts kubwa zaidi za APP/PS1,
• alternative AD models,
• alternative ALS models — waandishi wanataja hasa mfano wa SOD1 transgenic,
• uchambuzi wa kimakanika wa kutengana kati ya ulinzi wa kihistolojia na functional outcome.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Kichwa asili: Efficacy of Low Dose of Dihydroquercetin (DHQ) in Two Genetic Models of Neurodegeneration: Insights from FUS[1-359]-Tg and APPswe/PS1dE9 Paradigms

Waandishi: Ekaterina Lysikova; Kseniia Sitdikova; Aigerim Makhambetova; Kirill Chaprov; Anna Gorlova; Andrey Kostin; Polina Novikova; Alexei Lyundup; Sholpan Askarova; Michail S. Kukharsky; Alexey Deykin; Tatyana Strekalova.

Mchango sawa: Ekaterina Lysikova, Kseniia Sitdikova na Aigerim Makhambetova wamewekwa alama katika chanzo kama waandishi wenye mchango sawa.

Mwandishi wa mawasiliano: Tatyana Strekalova.

Barua pepe ya mwandishi wa mawasiliano: tatslova@gmail.com; tatyana.strekalova@pharm.ox.ac.uk

Taasisi 1: Laboratory of Medical Sciences, Medical Research Council, London, UK.

Taasisi 2: Center for Life Sciences, National Laboratory Astana, Nazarbayev University, Astana, Kazakhstan.

Taasisi 3: Laboratory of Genetic Technology and Gene Editing for Biomedicine and Veterinary, National Research Belgorod State University, Belgorod, Russia.

Taasisi 4: Institute of Physiologically Active Compounds at Federal Research Center of Problems of Chemical Physics and Medicinal Chemistry of Russian Academy of Sciences, Chernogolovka, Russia.

Taasisi 5: Research and Education Resource Center, Peoples Friendship University of Russia (RUDN University), Moscow, Russia.

Taasisi 6: Department of Normal Physiology, Sechenov University, Moscow, Russia.

Taasisi 7: Department of Psychiatry and Neuropsychology, Maastricht University, Maastricht, The Netherlands.

Jarida: Cells.

Mchapishaji: MDPI, Basel, Switzerland.

Juzuu / toleo / nambari ya makala: 15(17), 1598.

DOI: 10.3390/cells15171598.

Academic Editor: Jacques P. Tremblay.

Iliwasilishwa: 5 Agosti 2026.

Marekebisho: 24 Agosti 2026.

Ilikubaliwa: 31 Agosti 2026.

Ilichapishwa: 2 Septemba 2026.

Aina ya chanzo: Makala asilia ya utafiti; utafiti wa wanyama wa kabla ya kliniki uliodhibitiwa katika mifano miwili huru ya kijeni ya neurodegeneration kwa panya.

Mapitio ya kitaalamu: Cells ni jarida lenye peer review; taarifa za sasa za uchapishaji za MDPI zinaonyesha matumizi ya mfumo wa single-anonymized peer review.

Leseni: Creative Commons Attribution — CC BY 4.0.

Hali ya preprint: PDF ya chanzo haitaji toleo tofauti la preprint. Katika ukaguzi wa bibliografia uliolengwa, rekodi tofauti ya preprint yenye kichwa hicho hicho haikugunduliwa.

Maneno muhimu: Alzheimer's disease; amyotrophic lateral sclerosis; dihydroquercetin; antioxidants; APPswe/PS1dE9 mice; FUS[1-359]-Tg mice.

DHQ: Dihydroquercetin; flavonoid inayojulikana pia kama taxifolin.

Dozi lengwa: 0,6 mg/kg/siku.

Utoaji: Oral na voluntary chronic administration katika tap water.

Mkusanyiko wa takriban wa drinking-water: 0,0045 mg/mL; ulirekebishwa kwa liquid intake na body weight halisi.

Sampuli ya jaribio la APP/PS1: WT vehicle n=9; WT DHQ n=9; APP/PS1 vehicle n=5; APP/PS1 DHQ n=6; jumla n=29.

Jinsia / umri wa kuanza wa APP/PS1: Kike; miezi 8.

APP/PS1 treatment duration: Kwa mujibu wa prose na Figure 1 caption ya chanzo, takriban miezi minne; behavioral evaluation katika umri wa miezi 12.

Dokezo la muda ndani ya chanzo la APP/PS1: Sanduku za Figure 1A zinaandika “Weeks 1–32: Treatment” na “Weeks 32–34: Behavioral tests”; lebo hizi hazilingani kikamilifu na maelezo ya treatment ya miezi minne kutoka miezi 8–12.

Sampuli ya jaribio la FUS: WT vehicle n=12; FUS vehicle n=14; FUS DHQ n=14; jumla n=40.

Jinsia / umri wa kuanza wa FUS: Kiume; miezi 2 / siku 60.

Dokezo la muda ndani ya chanzo la FUS: Maandishi ya chanzo yanataja treatment ya takriban miezi 1,5 na final age ya miezi 3,5, huku Figure 1B ikionyesha motor tests siku ya 95 na tissue collection +24 h; Figure 6 inaweka ALS symptoms katika 105 days of age. Tofauti hii haijaelezwa na chanzo.

Randomization: Kwa msingi wa body weight na date of birth.

Blinding: Katika assays zote, group assignment ilifichwa kwa experimenter.

Power software: G*Power 3.1.9.7.

A priori power: α=0,05; 1−β=0,80; Cohen's f=0,6.

APP/PS1 minimum planned N: 25; enrolled 29; actual power 0,816.

FUS minimum planned N: 30; enrolled 40; actual power 0,800.

Statistical software: GraphPad Prism 8.0.

Normality: Shapiro–Wilk.

Statistical tests: t-test; Mann–Whitney U; one-, two- and three-way ANOVA; repeated-measures ANOVA; Tukey HSD; Sidak multiple comparisons; Kruskal–Wallis + Dunn; Fisher's exact; one-sample t-test.

Greenhouse–Geisser correction: Ilitumika kwa sphericity katika repeated-measures analyses za Y-maze na pellet-displacement.

Significance threshold: p<0,05.

Excluded data points: Kwa mujibu wa chanzo, hakuna data point iliyotolewa kutoka kwenye uchambuzi.

APP/PS1 histology: Congo red amyloid-plaque analysis; GFAP immunofluorescence; prefrontal-cortex MDA competitive inhibition ELISA.

Congo-red imaging: LSM880 confocal laser scanning microscope; QuPath 0.4.3.

Plaque classes: <100, 100–200, 200–500 na >500 µm².

GFAP: anti-GFAP 1:1000; secondary goat anti-rabbit IgG 1:1000 Alexa Fluor 568; DAPI nuclei counterstain.

MDA ELISA: Competitive inhibition ELISA; absorbance 450 nm; values ng/mg wet tissue.

FUS histology: Lumbar spinal cord L3–L5; Nissl/cresyl-violet motor-neuron analysis.

FUS motor tests: Pole test, wire test, rotarod.

Pole: kipenyo 1,1 cm, urefu 60 cm.

Wire: kipenyo 0,3 cm, urefu 60 cm, kiwango cha juu 180 s.

Rotarod: kasi ya kudumu 15 rpm, kiwango cha juu 600 s.

Matokeo makuu ya APP/PS1: Plaques ndogo za amyloid katika cortex na thalamus zilipungua; MDA ilishuka; baadhi ya learning/anxiety endpoints ziliboreka; hippocampal plaque, GFAP, pellet displacement na step-down hazikupata rescue.

Matokeo makuu ya FUS: Motor-neuron density ilihifadhiwa na baadhi ya general physiological endpoints ziliboreka; ALS-like symptom rate na motor-test deficits hazikupata rescue yenye umuhimu.

Dokezo la tafsiri ya MDA: Abstract inatumia kauli “normalized MDA levels”; katika matokeo ya kina ya post hoc, MDA ya DHQ-treated APP/PS1 iko chini kuliko untreated APP/PS1 lakini bado iko juu kuliko DHQ-treated WT. Kwa hiyo makala imetumia lugha ya “kupungua/kurejea kawaida kwa sehemu”.

Dokezo la mbinu ya Y-maze: Chanzo katika aya hiyo hiyo kinatoa maelezo mawili tofauti ya protokali: trials mbili za dakika 10 kwa siku / nafasi ya saa 1, na trials mbili za dakika 15 kwa siku / nafasi ya saa 3–4; tofauti haijaelezwa.

Maadili: European Directive 2010/63/EU; Nazarbayev University Local Ethics Committee, N02-2023 (20 Machi 2023) na N05-2023 (21 Novemba 2023); ARRIVE guidelines.

Informed Consent: Haitumiki; huu si utafiti wa washiriki binadamu.

Upatikanaji wa data: Michango asilia ya utafiti imewasilishwa katika makala na Supplementary Materials; maombi ya ziada yanaweza kuelekezwa kwa mwandishi wa mawasiliano.

Mgongano wa maslahi: Waandishi wanatangaza kuwa hakuna mgongano wa maslahi.

Ufadhili: Ministry of Higher Education and Science of the Republic of Kazakhstan AP23485236 na BR24992841; Russian Federation State Task FZWG-2021-0016; FFSG-2024-0020; IPAC RAS State Target FFSG-2024-0023; pamoja na msaada wa Aqua-Synapse 101086453 EU / H2020-MSCA-RISE-2020 Marie Skłodowska-Curie grant agreement.

Michango ya waandishi: Conceptualization: S.A., M.S.K., T.S.; methodology: E.L., A.G., T.S.; software: E.L., K.S.; validation: E.L., K.S., P.N., K.C., A.G.; formal analysis: E.L., A.G., K.C., P.N., A.M., M.S.K.; investigation: E.L., A.M., A.G., P.N., K.C., K.S.; resources: A.D., A.L., S.A., M.S.K., T.S.; data curation: A.K., S.A., A.G.; original draft: K.S., A.G., S.A., P.N., A.K., K.C., T.S.; review/editing: A.M., K.S., A.L., A.D., M.S.K.; visualization: K.S., E.L., A.M., A.G.; supervision: K.C., A.L., T.S.; project administration: A.K., A.D., A.L., M.S.K., T.S.; funding acquisition: A.K., A.D., S.A., T.S.

Kikomo kikuu cha kisayansi: Matokeo yanahusu mifano miwili ya kijeni ya mouse na hayaonyeshi ufanisi au usalama wa matibabu ya Alzheimer/ALS kwa binadamu.

Kikomo kikuu cha kimetodolojia: Dozi moja ya DHQ, makundi madogo transgenic ya APP/PS1, kutokuwepo kwa vipimo vya moja kwa moja vya pharmacokinetic/BBB, kutopimwa kwa soluble Aβ na synaptic proteins, na matumizi ya mfano mmoja tu wa AD na mmoja wa ALS.