Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD), bu çalışmada akut iskemik inme sonrası immünotrombotik ve inflamatuvar hasarı değiştirebilme potansiyeli araştırılan çok bileşenli geleneksel Çin tıbbı formülasyonudur. Araştırmacılar, nötrofil hücre dışı tuzaklarının (neutrophil extracellular traps, NETs) oluşumuyla ilişkili patojenik faktörleri Mendelci randomizasyon ile taramış, sıçan beyin dokusu transkriptomiğiyle TQTMD'nin etkilediği moleküler yolları incelemiş ve önerilen mekanizmayı hem orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) sıçan modelinde hem de OGD + PMA ile uyarılmış HL-60 kaynaklı nötrofil-benzeri hücrelerde deneysel olarak sınamıştır. Kaynakta TQTMD tedavisinin NOX2 ve MPO ekspresyonunu düşürdüğü, NET oluşumunu azalttığı, serebral infarkt hacmini küçülttüğü ve sıçanlarda erken nörolojik iyileşmeyle ilişkili olduğu raporlanmaktadır. Bununla birlikte çalışma hakemli değildir ve sonuçlar insanlarda klinik etkinliği kanıtlamaz.

Çalışmanın Mendelci randomizasyon bölümünde, iskemik inme ile ilişkili 476 farklı eksprese edilen gen ile bilinen NET ilişkili genler kesiştirilmiş ve 34 farklı eksprese NET ilişkili gen belirlenmiştir. Bu 34 adayın MR analizinde MMP9, SIGLEC5 ve MPO anlamlı ilişki göstermiştir. Primer IVW analizinde MMP9 için β = 0,079 ve P < 0,001; SIGLEC5 için β = −0,086 ve P = 0,004; MPO için β = 0,041 ve P = 0,017 raporlanmıştır.

Transkriptomik analizde MCAO grubunda Sham grubuna göre 3571 farklı eksprese edilen gen saptanırken, TQTMD uygulaması sonrası MCAO'ya göre 427 gen farklı eksprese edilmiştir. TQTMD sonrası NET oluşumu, nötrofil aktivasyonu, reaktif oksijen türleri üretimi ve oksidatif stresle ilişkili süreçlerde baskılanma görülmüş; Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 ve MPO dahil olmak üzere NET oluşumunda rol alan genlerde anlamlı aşağı düzenlenme raporlanmıştır.

Çalışmanın ana mekanistik yorumu, TQTMD'nin NOX2–MPO eksenini baskılayarak aşırı NET oluşumunu azaltabileceği ve bu yolla akut iskemik beyin hasarını hafifletebileceğidir. Ancak bu yorum; sıçan modeli, hücre modeli ve transkriptomik ilişkilendirmeye dayanan preklinik bir mekanizma önerisidir. Formülasyondaki hangi tek bileşenin etkiden sorumlu olduğu gösterilmemiştir ve insanlarda etkinlik, doz, uzun dönem güvenlik veya klinik sonuçlar bu çalışmada test edilmemiştir.

Akut iskemik inme ve NET oluşumu

Akut iskemik inme (AIS), bir beyin damarının tıkanması sonucu belirli beyin bölgelerine kan ve oksijen akışının yetersiz kalmasıyla oluşan akut nörolojik tablodur. İnme sonrası hasar yalnız ilk damar tıkanmasına bağlı değildir; inflamasyon, oksidatif stres, endotel hasarı, tromboz ve bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu ikincil doku hasarını büyütebilir.

Nötrofil Hücre Dışı Tuzakları (NETs) Nedir?

Nötrofil hücre dışı tuzakları, aktive nötrofiller tarafından hücre dışına salınan, dekondanse kromatin lifleri üzerine histonlar ve granül proteinlerinin bağlandığı ağ benzeri yapılardır. NETs enfeksiyon savunmasında fizyolojik işlev görebilir; ancak akut iskemik inmede aşırı NET oluşumu trombosit ve eritrositlerin tutulmasını, mikrovasküler tıkanmayı, kan-beyin bariyeri hasarını ve inflamatuvar yanıtı artırabilecek patolojik bir süreç haline gelebilir.

Kaynağın sıçan MCAO modelinde infarkt bölgesindeki serebral damarların içinde H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ yapılar NET olarak tanımlanmıştır. Kaynağın sayfa 25'teki immünofloresan görüntülerinde bu yapıların bazı küçük damarların lümenini neredeyse doldurabildiği gösterilmektedir. Sham grubunda ise damar yapısı açık kalmış ve belirgin NET oluşumu görülmemiştir.

TQTMD nedir?

Tiaoqi Tongmai Decoction kaynakta yedi bileşenden oluşan geleneksel bir bitkisel/hayvansal kökenli formülasyon olarak tanımlanmıştır: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) ve Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Toplam kaynak günlük insan dozu 60 g olarak verilmiştir. Sıçan eşdeğer orta doz, vücut yüzey alanı dönüşümüne göre 6,17 g ham drog/kg hesaplanmıştır. Düşük doz 3,09 g/kg, yüksek doz 12,34 g/kg olarak belirlenmiştir.

Formülasyon 10 hacim su içinde 30 dakika bekletilmiş, 30 dakika kaynatılmış ve süzülmüş; kalan materyal sekiz hacim su ile 20 dakika tekrar kaynatılmıştır. Birleştirilen süzüntüler 60 °C su banyosunda düşük, orta ve yüksek doz için sırasıyla 0,154, 0,309 ve 0,617 g ham drog/mL konsantrasyonlarına yoğunlaştırılmıştır.

TQTMD'nin kimyasal karakterizasyonu

Formülasyonun kimyasal bileşimi UPLC–Q Exactive Plus yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisiyle incelenmiştir. Pozitif ve negatif iyon modlarında m/z 75–1050 aralığında veri toplanmış, çözünürlük 70.000 olarak ayarlanmıştır. Yüksek enerjili çarpışma ayrışması 20, 30 ve 40 eV düzeylerinde gerçekleştirilmiştir. Ham spektrumlar MSDIAL ile işlenmiş ve metabolit kimlikleri kesin kütle ile MS/MS parçalanma spektrumları kullanılarak TCM veri tabanlarıyla eşleştirilmiştir.

Kaynakta temsilî bileşenler arasında quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid ve resveratrol belirtilmiştir. Çalışma bu bileşiklerin herhangi birini TQTMD'nin tek aktif etken maddesi olarak tanımlamamaktadır.

Mendelci Randomizasyon Bu Çalışmada Ne İçin Kullanıldı?

Mendelci randomizasyon, genetik varyantları araç değişken olarak kullanarak gözlemsel ilişkilerdeki karıştırıcı etkenleri ve ters nedensellik riskini azaltmayı amaçlayan bir nedensel çıkarım yöntemidir. Bu çalışmada NET ile ilişkili genler maruziyet, iskemik inme ise sonuç olarak ele alınmış; amaç hangi NET ilişkili faktörlerin iskemik inme riskiyle genetik düzeyde tutarlı bir nedensel ilişki gösterebileceğini belirlemek olmuştur.

GSE16561 eğitim veri setinde 39 iskemik inme hastası ile 24 sağlıklı kontrolün tam periferik kan örnekleri kullanılmıştır. GSE22255 doğrulama veri setinde ise 20 iskemik inme hastası ve 20 sağlıklı kontrolden periferik kan mononükleer hücreleri bulunmaktadır.

GSE16561 analizinde düzeltilmiş P < 0,05 ve |log₂FC| > 1 eşikleri kullanılmıştır. Toplam 476 farklı eksprese edilen gen belirlenmiş; bunların 364'ü yukarı, 112'si aşağı düzenlenmiştir. NET ilişkili gen setiyle kesişim sonucunda 34 DE-NET geni elde edilmiştir.

MR için SNP seçiminde genom çapında anlamlılık P < 5 × 10⁻⁸, bağlantı dengesizliği için r² < 0,001 ve 10.000 kb clumping penceresi kullanılmıştır. Palindromik veya uyumsuz allellere sahip SNP'ler çıkarılmıştır.

Beş yöntem uygulanmıştır: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode ve weighted mode. IVW primer analiz olarak belirlenmiş, anlamlılık eşiği P < 0,05 alınmıştır. Heterojenlik Cochran Q testiyle, yönlü pleiotropi MR-Egger intercept ile ve tek tek SNP etkileri leave-one-out analiziyle değerlendirilmiştir.

NOX2–MPO Ekseni NET Oluşumunda Nasıl Bir Rol Oynar?

Kaynağın mekanistik çerçevesinde NOX2 aktivasyonu reaktif oksijen türlerinin üretimini artıran üst akış sürecidir; MPO ise nötrofil granüllerinden salınan ve NETosis sırasında kromatin yeniden düzenlenmesi ile NET oluşumuna katkıda bulunan enzimatik bir bileşendir. Çalışma, TQTMD sonrasında NOX2 kompleksiyle ilişkili genlerin ve MPO'nun aşağı düzenlenmesini, azalan H3Cit/MPO işaretleri ve daha az NET oluşumuyla birlikte gözlemleyerek NOX2–MPO eksenini merkezi mekanizma olarak önermektedir.

Transkriptomik analiz için Sham, MCAO ve MCAO + TQTMD gruplarından üçer sıçanın infarkt dokusu toplanmıştır. Poly(A)+ mRNA zenginleştirilmiş, yaklaşık 300 bp fragmanlara ayrılmış ve yaklaşık 450 bp kütüphaneler oluşturulmuştur. Paired-end PE150 dizileme Illumina NovaSeq 6000 ile yapılmıştır.

Ham okumalar Fastp v0.23.2 ile temizlenmiş, mRatBN7.2 referans genomuna HISAT2 v2.2.1 ile hizalanmış, StringTie v2.2.1 ile transkript montajı ve miktarlandırma yapılmıştır. Diferansiyel ekspresyon DESeq2 v1.36.0 ile |log₂FC| > 1 ve Benjamini-Hochberg padj < 0,05 eşikleri altında değerlendirilmiştir.

MCAO–Sham karşılaştırmasında 3571 DEG belirlenmiştir: 2467 yukarı, 1104 aşağı düzenlenmiştir. TQTMD–MCAO karşılaştırmasında ise 427 DEG vardır; 27 gen yukarı, 400 gen aşağı düzenlenmiştir.

TQTMD sonrası aşağı düzenlenen NET ilişkili önemli genlerden bazıları kaynakta şöyle raporlanmıştır:

Sıçan MCAO modeli

Çalışmada 8 haftalık, 250 ± 20 g ağırlığında erkek Sprague-Dawley sıçanlar kullanılmıştır. Kalıcı orta serebral arter oklüzyonu, rekanalizasyon sağlanamayan AIS patofizyolojisini modellemek ve reperfüzyon hasarını NET oluşumu değerlendirmesinden ayırmak amacıyla seçilmiştir.

Sıçanlar %3 izofluranla anesteziye alınmıştır. Sağ ortak karotis, dış karotis ve iç karotis arterleri açığa çıkarılmış; dış karotis bağlandıktan sonra 0,285 mm çapında poly-L-lysine kaplı naylon filament CCA üzerinden ICA içine yaklaşık 18,5 ± 0,5 mm ilerletilmiştir. Vücut sıcaklığı 37 °C'de tutulmuştur.

Tedaviler MCAO'dan 2 saat sonra başlatılmıştır. TQTMD oral gavajla 20 mL/kg hacimde verilmiştir. Edaravone karşılaştırma grubuna 3 mg/kg intravenöz uygulanmıştır. MPO inhibitörü PF-1355 ise 50 mg/kg intraperitoneal olarak MCAO'dan 2 saat sonra başlayıp yedi gün boyunca günde bir kez verilmiştir.

Nörolojik ve histolojik değerlendirme

Nörolojik fonksiyon modifiye Nörolojik Şiddet Skoru (mNSS) ile 24 saat, 72 saat ve 7. günde ölçülmüştür. Ölçek 0–18 arasındadır ve yüksek skor daha ağır nörolojik defisiti ifade eder.

Serebral infarkt, 2 mm kalınlığında koronal beyin kesitlerinde %2 TTC boyaması ile ölçülmüş ve karşı hemisfere göre yüzde olarak raporlanmıştır. Histopatolojik değerlendirme H&E boyamasıyla yapılmıştır.

Kaynağın ilk sonuç setinde orta ve yüksek doz TQTMD, infarkt hacmini MCAO model grubuna göre anlamlı biçimde azaltmıştır. Orta dozun klinik eşdeğer doza daha yakın ve etkisinin kararlı olması nedeniyle sonraki mekanizma deneylerinde 6,17 g/kg orta doz kullanılmıştır.

Çalışmanın Yöntemi ve Bulguları

MPO inhibisyonu NET oluşumunu etkiliyor mu?

MPO'nun mekanistik rolünü test etmek amacıyla PF-1355 kullanılmıştır. Yedi günlük MPO inhibisyonu, infarkt korteksindeki H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET yapılarını ve parankimal NET infiltrasyonunu azaltmıştır. Western blot analizinde H3Cit proteini düşmüştür.

MPO inhibitörü verilen sıçanlarda MCAO grubuna göre 3. ve 7. gün mNSS skorları daha düşük ve yedi günlük sağkalım daha yüksek raporlanmıştır. Model grubunun TTC ile ölçülen infarkt hacmi kaynakta %22,1 ± 3,9 olarak verilmiş ve PF-1355 sonrasında anlamlı biçimde azaldığı bildirilmiştir.

Bu deney, MPO aktivitesinin baskılanması ile daha az NET oluşumu ve daha düşük akut beyin hasarı arasında deneysel bağlantı sağlamaktadır. Bununla birlikte sonuç yalnız kullanılan MCAO sıçan modeli ve deney koşulları için geçerlidir.

TQTMD'nin sıçan beynindeki etkileri

Yedi günlük TQTMD tedavisi sonrası infarkt bölgesindeki kortikal damarların içinde bulunan H3Cit⁺MPO⁺ NET yapılarında azalma görülmüştür. Kaynağın sayfa 29 ve 30'daki immünofloresan ve Western blot verileri TQTMD'nin MPO, H3Cit ve NOX2 protein düzeylerini düşürdüğünü göstermektedir.

qRT–PCR analizinde NOX2 ve MPO mRNA düzeyleri MCAO + TQTMD grubunda model grubundan anlamlı derecede düşük bulunmuştur. Buna karşılık PF-1355, NOX2 veya MPO transkript düzeylerinde anlamlı değişiklik oluşturmamıştır. Bu fark, TQTMD'nin yalnız MPO enzim aktivitesine değil daha yukarı akıştaki transkripsiyonel süreçlere de etki edebileceği yorumunun temelini oluşturmuştur.

TQTMD verilen sıçanlarda yedinci gün mNSS skoru ve infarkt hacmi de MCAO grubuna göre azalmıştır. Kaynak, bu değişiklikleri PF-1355 grubuyla karşılaştırılabilir düzeyde olarak tanımlamaktadır.

Hücre deneyinin tasarımı

İnsan promiyelositik lösemi hücre hattı HL-60, %1,25 DMSO içeren ortamda beş gün boyunca nötrofil-benzeri fenotipe farklılaştırılmıştır. Oksijen-glukoz yoksunluğu için hücreler glukoz içermeyen IMDM ortamına alınmış ve %1 O2, %5 CO2, %94 N2 atmosferinde 4 saat inkübe edilmiştir.

Aynı anda 100 nM PMA uygulanarak NOX2 bağımlı NETosis uyarılmıştır. NOX2 inhibitörü gp91ds-tat için hücreler 2 μM inhibitörle 30 dakika ön inkübasyona tabi tutulmuştur.

TQTMD-medike serum hazırlanırken sıçanlara üç gün boyunca günde bir kez 6,17 g/kg TQTMD verilmiş; son dozdan bir saat sonra serum elde edilmiştir. Hücre canlılığı deneylerinde %0, %5, %10, %15, %20, %25 ve %30 konsantrasyonlar test edilmiş ve kaynakta en yüksek hücre canlılığı %10 TQTMD-medike serumda görülmüştür.

In vitro NET sonuçları

OGD + PMA uygulaması SYTOX Green ile görülebilen yoğun hücre dışı ağ yapıları oluşturmuştur. %10 TQTMD-medike serum bu NET salınımını azaltmıştır. Kaynağın sayfa 32 ve 51'deki görüntülerinde TQTMD grubunda SYTOX Green sinyali ile MPO⁺H3Cit⁺ NET yapıları model grubundan daha az görünmektedir.

Western blot analizinde OGD + PMA, NOX2, MPO ve H3Cit protein ekspresyonunu artırmış; TQTMD-medike serum bunları azaltmıştır. qRT–PCR ile NOX2 ve MPO mRNA düzeylerinde de azalma raporlanmıştır. gp91ds-tat NOX2 inhibitörü NET oluşumunu azaltmış ancak NOX2 mRNA düzeyini anlamlı biçimde değiştirmemiştir.

NOX2–MPO–NET mekanizma zinciri

1. Akut iskemik koşullar nötrofillerin aktivasyonunu artırır.
2. NOX2 kompleksi reaktif oksijen türlerinin oluşumuna katkıda bulunur.
3. MPO aktivasyonu ve salınımı NETosis sürecinin ilerlemesine eşlik eder.
4. H3Cit, MPO ve NE içeren kromatin ağları NET yapıları olarak damar içine salınır.
5. Aşırı intravasküler NET birikimi mikrovasküler tıkanma ve inflamatuvar hasarla ilişkilidir.
6. Kaynak deneylerinde TQTMD, NOX2 ve MPO göstergelerinin düşmesiyle birlikte daha az NET oluşumu göstermiştir.

Bu zincirin ilk beş basamağının tamamının TQTMD tarafından tek, doğrusal ve doğrudan kontrol edildiği kanıtlanmış değildir. Çalışmanın sunduğu kanıt, TQTMD uygulamasının bu eksendeki moleküler göstergeler ve NET miktarıyla birlikte değiştiğini ve inhibitör deneylerinin MPO/NOX2'nin mekanistik rolünü desteklediğini göstermektedir.

Çalışmanın desteklediği sonuçlar

• Akut MCAO sıçan modelinde infarkt bölgesi damarlarında NET birikimi artmıştır.
• MPO ve H3Cit düzeyleri MCAO sonrası yükselmiştir.
• MPO'nun farmakolojik inhibisyonu NET oluşumunu azaltmış ve akut nörolojik sonuçları iyileştirmiştir.
• TQTMD sıçan beyninde NOX2, MPO ve H3Cit göstergelerini azaltmıştır.
• TQTMD uygulaması NET oluşumunda azalma, daha düşük infarkt hacmi ve daha iyi mNSS sonuçlarıyla birlikte görülmüştür.
• OGD + PMA hücre modelinde TQTMD-medike serum NOX2, MPO, H3Cit ve NET oluşumunu azaltmıştır.
• MR analizinde MMP9, SIGLEC5 ve MPO için iskemik inme ile anlamlı genetik ilişkiler raporlanmıştır.

Çalışmanın desteklemediği sonuçlar

• TQTMD'nin akut iskemik inme hastalarında klinik olarak etkili olduğu bu çalışmayla kanıtlanmamıştır.
• TQTMD'nin tromboliz veya mekanik trombektominin yerine kullanılabileceği gösterilmemiştir.
• İnsanlarda güvenli doz belirlenmemiştir.
• Uzun dönem nörolojik iyileşme, bilişsel fonksiyon veya geç dönem sekeller değerlendirilmemiştir.
• NOX2–MPO baskılanmasının hangi tek TQTMD bileşeninden kaynaklandığı belirlenmemiştir.
• Formülasyonun etkisinin tek bir molekül yerine çoklu bileşen sinerjisine bağlı olup olmadığı çözülmemiştir.
• Avrupa kökenli GWAS verilerinin diğer popülasyonlara doğrudan genellenebilirliği gösterilmemiştir.
• İnsan genetiği ile sıçan deney sonuçlarının aynı biyolojik etki büyüklüğüne sahip olduğu söylenemez.

İstatistiksel analiz

Çoklu grup karşılaştırmalarında tek yönlü ANOVA; ikili karşılaştırmalarda LSD-t veya Dunnett testi ve ardından Tukey post hoc yaklaşımı kullanılmıştır. Deneysel veriler en az üç bağımsız tekrardan elde edilmiştir. Kaynakta istatistiksel işaretleme *P < 0,05, **P < 0,01 ve ***P < 0,001 olarak tanımlanmıştır.

Çalışmanın başlıca sınırlılıkları

Popülasyon ve tür farkı: MR için kullanılan GWAS verileri Avrupa popülasyonlarından elde edilmiştir; mekanistik deneyler ise Sprague-Dawley sıçanlarında gerçekleştirilmiştir. İnsan popülasyonları ile hayvan modeli arasındaki genetik ve biyolojik farklar sonuçların genellenebilirliğini sınırlar.

Çok bileşenli formülasyon: TQTMD karmaşık bir preparattır. LC–MS ile çeşitli bileşenler saptansa da NOX2–MPO–NET etkisinin tek bir molekülden mi yoksa birden fazla bileşenin sinerjisinden mi kaynaklandığı gösterilmemiştir.

Kısa izlem: Deneyler akut faza, yaklaşık yedi günlük döneme odaklanmıştır. Uzun dönem sağkalım, nörolojik fonksiyon, bilişsel bozukluk ve diğer post-stroke sekeller değerlendirilmemiştir.

Klinik doğrulama eksikliği: Çalışma insan katılımcı üzerinde TQTMD müdahalesi içeren klinik araştırma değildir. İnsanlarda etkinlik ve güvenlik için ayrıca klinik çalışma gereklidir.

Kaynak ve Yöntem Notu

Özgün başlık: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Yazarlar: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Sorumlu yazarlar: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui ve Xiang-Qing Xu.

Kurumlar: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Kaynak türü: Araştırma preprinti.

Hakemlik durumu: Hakem değerlendirmesinden geçmemiştir. Kaynak belgenin her sayfasında “This preprint research paper has not been peer reviewed” ibaresi bulunmaktadır.

Platform: SSRN.

Resmî preprint kaydı: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: Kaynak belgede DOI raporlanmamıştır.

Dergi: Kaynak belgede hakemli dergi yayını belirtilmemiştir.

Deney etiği: Hayvan deneyleri Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee tarafından SDSZYYAWE20250903002 onay numarasıyla onaylanmıştır. Çalışmada insan katılımcı veya insan dokusu kullanılmadığı belirtilmiştir.

Hayvanlar: 8 haftalık erkek Sprague-Dawley sıçanlar, 250 ± 20 g.

Hücre modeli: HL-60 insan promiyelositik lösemi hücre hattından oluşturulan nötrofil-benzeri hücreler.

Temel yöntemler: GEO diferansiyel gen ekspresyon analizi; Mendelci randomizasyon; GWAS; RNA-seq/transkriptomik; kalıcı MCAO sıçan modeli; TTC; H&E; immünofloresan; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; OGD + PMA NETosis modeli.

Finansman: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Çıkar çatışması: Yazarlar çıkar çatışması bulunmadığını beyan etmiştir.

Veri erişilebilirliği: Verilerin makul talep üzerine sorumlu yazardan edinilebileceği belirtilmiştir.

Temel bilimsel sınır: Çalışmanın sonuçları preklinik düzeydedir. Sıçan ve hücre deneylerinde gözlenen nöroprotektif etkiler, TQTMD'nin insan akut iskemik inme hastalarında etkin veya güvenli bir tedavi olduğunun kanıtı değildir.