Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD) ushbu tadqiqotda o‘tkir ishemik insultdan keyingi immunotrombotik va yallig‘lanish zararlanishini o‘zgartira olish salohiyati o‘rganilgan ko‘p komponentli an’anaviy Xitoy tibbiyoti formulatsiyasidir. Tadqiqotchilar neytrofil hujayradan tashqari tuzoqlari (neutrophil extracellular traps, NETs) hosil bo‘lishi bilan bog‘liq patogen omillarni Mendel randomizatsiyasi orqali skrining qilgan, kalamush miya to‘qimasi transkriptomikasi yordamida TQTMD ta’sir qiladigan molekulyar yo‘llarni tekshirgan va taklif etilgan mexanizmni ham o‘rta serebral arteriya okklyuziyasi (MCAO) kalamush modelida, ham OGD + PMA bilan qo‘zg‘atilgan HL-60 manbali neytrofilga o‘xshash hujayralarda eksperimental ravishda sinagan. Manbada TQTMD davolashi NOX2 va MPO ekspressiyasini kamaytirgani, NET hosil bo‘lishini pasaytirgani, serebral infarkt hajmini kichraytirgani va kalamushlarda erta nevrologik yaxshilanish bilan bog‘liq ekani xabar qilinadi. Shunga qaramay, tadqiqot ekspertlar taqrizidan o‘tmagan va natijalar odamlarda klinik samaradorlikni isbotlamaydi.

Tadqiqotning Mendel randomizatsiyasi bo‘limida ishemik insult bilan bog‘liq 476 ta differensial ekspressiyalangan gen ma’lum NET bilan bog‘liq genlar bilan kesishgan va 34 ta differensial ekspressiyalangan NET bilan bog‘liq gen aniqlangan. Ushbu 34 nomzodning MR tahlilida MMP9, SIGLEC5 va MPO ahamiyatli bog‘liqlik ko‘rsatgan. Birlamchi IVW tahlilida MMP9 uchun β = 0,079 va P < 0,001; SIGLEC5 uchun β = −0,086 va P = 0,004; MPO uchun β = 0,041 va P = 0,017 xabar qilingan.

Transkriptomik tahlilda MCAO guruhida Sham guruhiga nisbatan 3571 ta differensial ekspressiyalangan gen aniqlangan bo‘lsa, TQTMD qo‘llanganidan keyin MCAOga nisbatan 427 gen differensial ekspressiyalangan. TQTMDdan keyin NET hosil bo‘lishi, neytrofil faollashuvi, reaktiv kislorod turlari ishlab chiqarilishi va oksidativ stress bilan bog‘liq jarayonlarda bostirilish kuzatilgan; Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 va MPOni o‘z ichiga olgan NET hosil bo‘lishida rol o‘ynovchi genlarda ahamiyatli pastga tartiblanish xabar qilingan.

Tadqiqotning asosiy mexanistik talqini shuki, TQTMD NOX2–MPO o‘qini bostirish orqali ortiqcha NET hosil bo‘lishini kamaytirishi va shu yo‘l bilan o‘tkir ishemik miya zararlanishini yengillashtirishi mumkin. Biroq bu talqin kalamush modeli, hujayra modeli va transkriptomik bog‘lashga asoslangan preklinik mexanizm taklifidir. Formulatsiyadagi qaysi yagona komponent ta’sir uchun mas’ul ekani ko‘rsatilmagan va odamlarda samaradorlik, doza, uzoq muddatli xavfsizlik yoki klinik natijalar ushbu tadqiqotda sinovdan o‘tkazilmagan.

O‘tkir ishemik insult va NET hosil bo‘lishi

O‘tkir ishemik insult (AIS) miya tomirining tiqilishi natijasida miyaning muayyan hududlariga qon va kislorod oqimi yetarli bo‘lmay qolishi bilan yuzaga keladigan o‘tkir nevrologik holatdir. Insultdan keyingi zarar faqat dastlabki tomir tiqilishiga bog‘liq emas; yallig‘lanish, oksidativ stress, endoteliy shikastlanishi, tromboz va immun hujayralarning faollashuvi ikkilamchi to‘qima zararlanishini kuchaytirishi mumkin.

Neytrofil hujayradan tashqari tuzoqlari (NETs) nima?

Neytrofil hujayradan tashqari tuzoqlari faollashgan neytrofillar tomonidan hujayradan tashqariga chiqariladigan, dekondensatsiyalangan xromatin tolalari ustiga gistonlar va granula oqsillari bog‘langan to‘rga o‘xshash tuzilmalardir. NETs infeksiyaga qarshi himoyada fiziologik vazifa bajarishi mumkin; ammo o‘tkir ishemik insultda ortiqcha NET hosil bo‘lishi trombotsit va eritrotsitlarning tutilishini, mikrovaskulyar tiqilishni, qon-miya to‘sig‘i zararlanishini va yallig‘lanish javobini oshirishi mumkin bo‘lgan patologik jarayonga aylanishi mumkin.

Manbaning kalamush MCAO modelida infarkt hududidagi serebral tomirlar ichida H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ tuzilmalari NET sifatida aniqlangan. Manbaning 25-sahifasidagi immunoflyuoresan tasvirlarda bu tuzilmalar ba’zi mayda tomirlarning lümenini deyarli to‘ldira olishi ko‘rsatiladi. Sham guruhida esa tomir tuzilishi ochiq qolgan va yaqqol NET hosil bo‘lishi kuzatilmagan.

TQTMD nima?

Tiaoqi Tongmai Decoction manbada yetti komponentdan iborat an’anaviy o‘simlik/hayvon kelib chiqishli formulatsiya sifatida ta’riflangan: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) va Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Umumiy manba kunlik inson dozasi 60 g deb berilgan. Kalamushga ekvivalent o‘rtacha doza tana yuzasi maydoni konversiyasiga ko‘ra 6,17 g xom drog/kg hisoblangan. Past doza 3,09 g/kg, yuqori doza 12,34 g/kg etib belgilangan.

Formulatsiya 10 hajm suv ichida 30 daqiqa ushlab turilgan, 30 daqiqa qaynatilgan va suzilgan; qolgan material sakkiz hajm suv bilan 20 daqiqa qayta qaynatilgan. Birlashtirilgan filtratlar 60 °C suv hammomida past, o‘rtacha va yuqori doza uchun mos ravishda 0,154, 0,309 va 0,617 g xom drog/mL konsentratsiyalarigacha quyuqlashtirilgan.

TQTMDning kimyoviy tavsiflanishi

Formulatsiyaning kimyoviy tarkibi UPLC–Q Exactive Plus yuqori aniqlikdagi massa-spektrometriyasi bilan tekshirilgan. Musbat va manfiy ion rejimlarida m/z 75–1050 oralig‘ida ma’lumot to‘plangan, aniqlik 70.000 qilib sozlangan. Yuqori energiyali to‘qnashuv dissotsiatsiyasi 20, 30 va 40 eV darajalarida amalga oshirilgan. Xom spektrlar MSDIAL bilan qayta ishlangan va metabolit identifikatsiyalari aniq massa hamda MS/MS parchalanish spektrlaridan foydalanib TCM ma’lumotlar bazalari bilan moslashtirilgan.

Manbada vakil komponentlar orasida quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid va resveratrol ko‘rsatilgan. Tadqiqot bu birikmalarning hech birini TQTMDning yagona faol ta’sir qiluvchi moddasi sifatida ta’riflamaydi.

Mendel randomizatsiyasi ushbu tadqiqotda nima uchun ishlatildi?

Mendel randomizatsiyasi genetik variantlarni instrumental o‘zgaruvchi sifatida qo‘llab, kuzatuv bog‘liqliklaridagi chalkashtiruvchi omillar va teskari sababiylik xavfini kamaytirishni maqsad qilgan sababiy xulosa usulidir. Ushbu tadqiqotda NET bilan bog‘liq genlar ekspozitsiya, ishemik insult esa natija sifatida ko‘rib chiqilgan; maqsad qaysi NET bilan bog‘liq omillar ishemik insult xavfi bilan genetik darajada izchil sababiy bog‘liqlik ko‘rsatishi mumkinligini aniqlash bo‘lgan.

GSE16561 o‘quv ma’lumotlar to‘plamida 39 ishemik insult bemori va 24 sog‘lom nazoratning to‘liq periferik qon namunalari ishlatilgan. GSE22255 tasdiqlash ma’lumotlar to‘plamida esa 20 ishemik insult bemori va 20 sog‘lom nazoratdan periferik qon mononuklear hujayralari mavjud.

GSE16561 tahlilida tuzatilgan P < 0,05 va |log₂FC| > 1 chegaralari ishlatilgan. Jami 476 ta differensial ekspressiyalangan gen aniqlangan; ularning 364 tasi yuqoriga, 112 tasi pastga tartiblangan. NET bilan bog‘liq gen to‘plami bilan kesishish natijasida 34 ta DE-NET geni olingan.

MR uchun SNP tanlashda genom bo‘yicha ahamiyatlilik P < 5 × 10⁻⁸, bog‘lanish nomuvozanati uchun r² < 0,001 va 10.000 kb clumping oynasi ishlatilgan. Palindromik yoki mos kelmaydigan allellarga ega SNP-lar chiqarib tashlangan.

Besh usul qo‘llangan: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode va weighted mode. IVW birlamchi tahlil sifatida belgilangan, ahamiyatlilik chegarasi P < 0,05 olingan. Geterogenlik Cochran Q testi bilan, yo‘nalgan pleiotropiya MR-Egger intercept bilan va alohida SNP ta’sirlari leave-one-out tahlili bilan baholangan.

NOX2–MPO o‘qi NET hosil bo‘lishida qanday rol o‘ynaydi?

Manbaning mexanistik doirasida NOX2 faollashuvi reaktiv kislorod turlarining ishlab chiqarilishini oshiradigan yuqori oqim jarayonidir; MPO esa neytrofil granulalaridan chiqariladigan va NETosis vaqtida xromatinning qayta tashkil etilishi hamda NET hosil bo‘lishiga hissa qo‘shadigan fermentativ komponentdir. Tadqiqot TQTMDdan keyin NOX2 kompleksi bilan bog‘liq genlar va MPOning pastga tartiblanishini kamaygan H3Cit/MPO belgilar va kamroq NET hosil bo‘lishi bilan birga kuzatib, NOX2–MPO o‘qini markaziy mexanizm sifatida taklif qiladi.

Transkriptomik tahlil uchun Sham, MCAO va MCAO + TQTMD guruhlaridan uchtadan kalamushning infarkt to‘qimasi yig‘ilgan. Poly(A)+ mRNA boyitilgan, taxminan 300 bp fragmentlarga ajratilgan va taxminan 450 bp kutubxonalar yaratilgan. Paired-end PE150 sekvenslash Illumina NovaSeq 6000 bilan bajarilgan.

Xom o‘qishlar Fastp v0.23.2 bilan tozalangan, mRatBN7.2 referens genomiga HISAT2 v2.2.1 bilan hizlangan, StringTie v2.2.1 bilan transkript yig‘ilishi va miqdoriy baholash amalga oshirilgan. Differensial ekspressiya DESeq2 v1.36.0 bilan |log₂FC| > 1 va Benjamini-Hochberg padj < 0,05 chegaralari ostida baholangan.

MCAO–Sham taqqoslashida 3571 DEG aniqlangan: 2467 yuqoriga, 1104 pastga tartiblangan. TQTMD–MCAO taqqoslashida esa 427 DEG mavjud; 27 gen yuqoriga, 400 gen pastga tartiblangan.

TQTMDdan keyin pastga tartiblangan NET bilan bog‘liq muhim genlarning ayrimlari manbada quyidagicha xabar qilingan:

Kalamush MCAO modeli

Tadqiqotda 8 haftalik, 250 ± 20 g vazndagi erkak Sprague-Dawley kalamushlari ishlatilgan. Doimiy o‘rta serebral arteriya okklyuziyasi rekanalizatsiya ta’minlanmagan AIS patofiziologiyasini modellashtirish va reperfuziya zararlanishini NET hosil bo‘lishini baholashdan ajratish maqsadida tanlangan.

Kalamushlar %3 izofluran bilan anesteziyaga olingan. O‘ng umumiy karotid, tashqi karotid va ichki karotid arteriyalari ochib ko‘rsatilgan; tashqi karotid bog‘langanidan keyin 0,285 mm diametrli poly-L-lysine bilan qoplangan neylon filament CCA orqali ICA ichiga taxminan 18,5 ± 0,5 mm ilgari surilgan. Tana harorati 37 °Cda saqlangan.

Davolashlar MCAOdan 2 soat keyin boshlangan. TQTMD oral gavaj bilan 20 mL/kg hajmda berilgan. Edaravone taqqoslash guruhiga 3 mg/kg vena ichiga qo‘llangan. MPO ingibitori PF-1355 esa 50 mg/kg intraperitoneal tarzda MCAOdan 2 soat keyin boshlanib, yetti kun davomida kuniga bir marta berilgan.

Nevrologik va gistologik baholash

Nevrologik funksiya modifikatsiyalangan Nevrologik Og‘irlik Skori (mNSS) bilan 24 soat, 72 soat va 7-kunda o‘lchangan. Shkala 0–18 oralig‘idadir va yuqori ball og‘irroq nevrologik defitsitni bildiradi.

Serebral infarkt 2 mm qalinlikdagi koronal miya kesimlarida %2 TTC bo‘yash bilan o‘lchangan va qarama-qarshi yarimsharga nisbatan foiz sifatida xabar qilingan. Gistopatologik baholash H&E bo‘yash bilan bajarilgan.

Manbaning birinchi natijalar to‘plamida o‘rtacha va yuqori doza TQTMD infarkt hajmini MCAO model guruhiga nisbatan ahamiyatli tarzda kamaytirgan. O‘rtacha doza klinik ekvivalent dozaga yaqinroq va ta’siri barqaror bo‘lgani sababli keyingi mexanizm tajribalarida 6,17 g/kg o‘rtacha doza ishlatilgan.

Tadqiqot usuli va topilmalari

MPO ingibitsiyasi NET hosil bo‘lishiga ta’sir qiladimi?

MPOning mexanistik rolini sinash maqsadida PF-1355 ishlatilgan. Yetti kunlik MPO ingibitsiyasi infarkt korteksidagi H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET tuzilmalarini va parenximal NET infiltratsiyasini kamaytirgan. Western blot tahlilida H3Cit oqsili pasaygan.

MPO ingibitori berilgan kalamushlarda MCAO guruhiga nisbatan 3- va 7-kun mNSS ballari pastroq va yetti kunlik omon qolish yuqoriroq xabar qilingan. Model guruhining TTC bilan o‘lchangan infarkt hajmi manbada %22,1 ± 3,9 sifatida berilgan va PF-1355dan keyin ahamiyatli ravishda kamaygani bildirilgan.

Bu tajriba MPO faolligi bostirilishi bilan kamroq NET hosil bo‘lishi va pastroq o‘tkir miya zararlanishi o‘rtasida eksperimental bog‘lanish ta’minlaydi. Biroq natija faqat ishlatilgan MCAO kalamush modeli va tajriba sharoitlari uchun amal qiladi.

TQTMDning kalamush miyasidagi ta’sirlari

Yetti kunlik TQTMD davolashidan keyin infarkt hududidagi kortikal tomirlar ichida joylashgan H3Cit⁺MPO⁺ NET tuzilmalarida kamayish kuzatilgan. Manbaning 29- va 30-sahifalaridagi immunoflyuoresan va Western blot ma’lumotlari TQTMD MPO, H3Cit va NOX2 oqsil darajalarini pasaytirishini ko‘rsatadi.

qRT–PCR tahlilida NOX2 va MPO mRNA darajalari MCAO + TQTMD guruhida model guruhidan ahamiyatli darajada past topilgan. Bunga qarshi PF-1355 NOX2 yoki MPO transkript darajalarida ahamiyatli o‘zgarish hosil qilmagan. Bu farq TQTMD faqat MPO ferment faolligiga emas, balki yuqoriroq oqimdagi transkripsion jarayonlarga ham ta’sir qilishi mumkin degan talqinning asosini tashkil qilgan.

TQTMD berilgan kalamushlarda yettinchi kun mNSS balli va infarkt hajmi ham MCAO guruhiga nisbatan kamaygan. Manba bu o‘zgarishlarni PF-1355 guruhi bilan taqqoslanadigan darajada deb ta’riflaydi.

Hujayra tajribasining dizayni

Inson promiyelotsitik leykemiya hujayra liniyasi HL-60, %1,25 DMSO o‘z ichiga olgan muhitda besh kun davomida neytrofilga o‘xshash fenotipga differensiyalangan. Kislorod-glyukoza yetishmovchiligi uchun hujayralar glyukoza bo‘lmagan IMDM muhitiga olingan va %1 O2, %5 CO2, %94 N2 atmosferasida 4 soat inkubatsiya qilingan.

Bir vaqtning o‘zida 100 nM PMA qo‘llanib, NOX2ga bog‘liq NETosis qo‘zg‘atilgan. NOX2 ingibitori gp91ds-tat uchun hujayralar 2 μM ingibitor bilan 30 daqiqa oldindan inkubatsiya qilingan.

TQTMD-medikatsiyalangan zardob tayyorlanayotganda kalamushlarga uch kun davomida kuniga bir marta 6,17 g/kg TQTMD berilgan; oxirgi dozadan bir soat keyin zardob olingan. Hujayra yashovchanligi tajribalarida %0, %5, %10, %15, %20, %25 va %30 konsentratsiyalar sinovdan o‘tkazilgan va manbada eng yuqori hujayra yashovchanligi %10 TQTMD-medikatsiyalangan zardobda kuzatilgan.

In vitro NET natijalari

OGD + PMA qo‘llanishi SYTOX Green bilan ko‘rinadigan zich hujayradan tashqari to‘r tuzilmalarini hosil qilgan. %10 TQTMD-medikatsiyalangan zardob bu NET ajralishini kamaytirgan. Manbaning 32- va 51-sahifalaridagi tasvirlarda TQTMD guruhida SYTOX Green signali bilan MPO⁺H3Cit⁺ NET tuzilmalari model guruhiga qaraganda kamroq ko‘rinadi.

Western blot tahlilida OGD + PMA NOX2, MPO va H3Cit oqsil ekspressiyasini oshirgan; TQTMD-medikatsiyalangan zardob ularni kamaytirgan. qRT–PCR orqali NOX2 va MPO mRNA darajalarida ham kamayish xabar qilingan. gp91ds-tat NOX2 ingibitori NET hosil bo‘lishini kamaytirgan, ammo NOX2 mRNA darajasini ahamiyatli ravishda o‘zgartirmagan.

NOX2–MPO–NET mexanizm zanjiri

1. O‘tkir ishemik sharoitlar neytrofillarning faollashuvini oshiradi.
2. NOX2 kompleksi reaktiv kislorod turlarining hosil bo‘lishiga hissa qo‘shadi.
3. MPO faollashuvi va ajralishi NETosis jarayonining rivojlanishiga hamroh bo‘ladi.
4. H3Cit, MPO va NE o‘z ichiga olgan xromatin to‘rlari NET tuzilmalari sifatida tomir ichiga chiqariladi.
5. Ortiqcha intravaskulyar NET to‘planishi mikrovaskulyar tiqilish va yallig‘lanish zarari bilan bog‘liq.
6. Manba tajribalarida TQTMD NOX2 va MPO ko‘rsatkichlarining pasayishi bilan birga kamroq NET hosil bo‘lishini ko‘rsatgan.

Bu zanjirning dastlabki besh bosqichining hammasi TQTMD tomonidan yagona, chiziqli va bevosita nazorat qilinishi isbotlangan emas. Tadqiqot taqdim etgan dalil TQTMD qo‘llanishi ushbu o‘qdagi molekulyar ko‘rsatkichlar va NET miqdori bilan birga o‘zgarishini hamda ingibitor tajribalari MPO/NOX2ning mexanistik rolini qo‘llab-quvvatlashini ko‘rsatadi.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlaydigan natijalar

• O‘tkir MCAO kalamush modelida infarkt hududi tomirlarida NET to‘planishi oshgan.
• MPO va H3Cit darajalari MCAOdan keyin ko‘tarilgan.
• MPOning farmakologik ingibitsiyasi NET hosil bo‘lishini kamaytirgan va o‘tkir nevrologik natijalarni yaxshilagan.
• TQTMD kalamush miyasida NOX2, MPO va H3Cit ko‘rsatkichlarini kamaytirgan.
• TQTMD qo‘llanishi NET hosil bo‘lishida kamayish, pastroq infarkt hajmi va yaxshiroq mNSS natijalari bilan birga kuzatilgan.
• OGD + PMA hujayra modelida TQTMD-medikatsiyalangan zardob NOX2, MPO, H3Cit va NET hosil bo‘lishini kamaytirgan.
• MR tahlilida MMP9, SIGLEC5 va MPO uchun ishemik insult bilan ahamiyatli genetik bog‘liqliklar xabar qilingan.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlamaydigan natijalar

• TQTMDning o‘tkir ishemik insult bemorlarida klinik jihatdan samarali ekani bu tadqiqot bilan isbotlanmagan.
• TQTMD tromboliz yoki mexanik trombektomiya o‘rnida ishlatilishi mumkinligi ko‘rsatilmagan.
• Odamlarda xavfsiz doza aniqlanmagan.
• Uzoq muddatli nevrologik yaxshilanish, kognitiv funksiya yoki kech davr asoratlari baholanmagan.
• NOX2–MPO bostirilishi qaysi yagona TQTMD komponentidan kelib chiqishi aniqlanmagan.
• Formulatsiya ta’siri bitta molekula o‘rniga ko‘p komponentli sinergiyaga bog‘liq yoki bog‘liq emasligi hal qilinmagan.
• Yevropa kelib chiqishli GWAS ma’lumotlarining boshqa populyatsiyalarga bevosita umumlashtirilishi ko‘rsatilmagan.
• Inson genetikasi bilan kalamush tajriba natijalari bir xil biologik ta’sir kattaligiga ega deb aytib bo‘lmaydi.

Statistik tahlil

Ko‘p guruhli taqqoslashlarda bir yo‘nalishli ANOVA; juft taqqoslashlarda LSD-t yoki Dunnett testi va undan keyin Tukey post hoc yondashuvi ishlatilgan. Eksperimental ma’lumotlar kamida uchta mustaqil takrordan olingan. Manbada statistik belgilash *P < 0,05, **P < 0,01 va ***P < 0,001 sifatida ta’riflangan.

Tadqiqotning asosiy cheklovlari

Populyatsiya va tur farqi: MR uchun ishlatilgan GWAS ma’lumotlari Yevropa populyatsiyalaridan olingan; mexanistik tajribalar esa Sprague-Dawley kalamushlarida bajarilgan. Inson populyatsiyalari bilan hayvon modeli o‘rtasidagi genetik va biologik farqlar natijalarning umumlashtirilishini cheklaydi.

Ko‘p komponentli formulatsiya: TQTMD murakkab preparatdir. LC–MS bilan turli komponentlar aniqlansa ham, NOX2–MPO–NET ta’siri bitta molekuladanmi yoki bir nechta komponent sinergiyasidanmi kelib chiqishi ko‘rsatilmagan.

Qisqa kuzatuv: Tajribalar o‘tkir fazaga, taxminan yetti kunlik davrga qaratilgan. Uzoq muddatli omon qolish, nevrologik funksiya, kognitiv buzilish va boshqa post-stroke asoratlar baholanmagan.

Klinik tasdiqlash yetishmasligi: Tadqiqot inson ishtirokchisida TQTMD aralashuvini o‘z ichiga olgan klinik tadqiqot emas. Odamlarda samaradorlik va xavfsizlik uchun alohida klinik tadqiqot zarur.

Manba va usul qaydi

Asl sarlavha: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Mualliflar: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Mas’ul mualliflar: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui va Xiang-Qing Xu.

Muassasalar: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Manba turi: Tadqiqot preprinti.

Taqriz holati: Ekspertlar taqrizidan o‘tmagan. Manba hujjatining har bir sahifasida “This preprint research paper has not been peer reviewed” iborasi mavjud.

Platforma: SSRN.

Rasmiy preprint qaydi: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: Manba hujjatida DOI xabar qilinmagan.

Jurnal: Manba hujjatida taqrizli jurnal nashri ko‘rsatilmagan.

Tajriba etikasi: Hayvon tajribalari Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee tomonidan SDSZYYAWE20250903002 tasdiq raqami bilan tasdiqlangan. Tadqiqotda inson ishtirokchisi yoki inson to‘qimasi ishlatilmagani bildirilgan.

Hayvonlar: 8 haftalik erkak Sprague-Dawley kalamushlari, 250 ± 20 g.

Hujayra modeli: HL-60 inson promiyelotsitik leykemiya hujayra liniyasidan yaratilgan neytrofilga o‘xshash hujayralar.

Asosiy usullar: GEO differensial gen ekspressiyasi tahlili; Mendel randomizatsiyasi; GWAS; RNA-seq/transkriptomika; doimiy MCAO kalamush modeli; TTC; H&E; immunoflyuoresans; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; OGD + PMA NETosis modeli.

Moliyalashtirish: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Manfaatlar to‘qnashuvi: Mualliflar manfaatlar to‘qnashuvi yo‘qligini bayon qilgan.

Ma’lumotlarga kirish imkoniyati: Ma’lumotlar asosli so‘rov asosida mas’ul muallifdan olinishi mumkinligi bildirilgan.

Asosiy ilmiy chegara: Tadqiqot natijalari preklinik darajadadir. Kalamush va hujayra tajribalarida kuzatilgan neyroprotektiv ta’sirlar TQTMD inson o‘tkir ishemik insult bemorlarida samarali yoki xavfsiz davolash ekanining dalili emas.