Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD) ni fomulesheni ya tiba ya jadi ya Kichina yenye vipengele vingi ambayo katika utafiti huu imechunguzwa kwa uwezo wake wa kubadilisha uharibifu wa immunothrombotic na uchochezi baada ya kiharusi cha iskemia cha papo hapo. Watafiti walichunguza kwa Mendelian randomization vipengele vya kipathojeni vinavyohusiana na uundaji wa mitego ya nje ya seli ya neutrofili (neutrophil extracellular traps, NETs), wakachunguza kwa transkriptomiki ya tishu ya ubongo wa panya njia za kimolekuli zinazoathiriwa na TQTMD, na wakajaribu kwa majaribio utaratibu uliopendekezwa katika modeli ya panya ya kuzibwa kwa ateri ya kati ya ubongo (MCAO) na pia katika seli zinazofanana na neutrofili zinazotokana na HL-60 zilizochochewa kwa OGD + PMA. Chanzo kinaripoti kuwa matibabu ya TQTMD yalipunguza ekspresheni ya NOX2 na MPO, yalipunguza uundaji wa NET, yalipunguza ujazo wa infarction ya ubongo na yalihusishwa na nafuu ya mapema ya kineurolojia kwa panya. Hata hivyo, utafiti haujapitiwa na wenzao na matokeo hayathibitishi ufanisi wa kliniki kwa binadamu.

Katika sehemu ya Mendelian randomization ya utafiti, jeni 476 zilizoonyeshwa kwa utofauti na zinazohusiana na kiharusi cha iskemia zilikatizwa na jeni zinazojulikana kuhusiana na NET, na jeni 34 zilizoonyeshwa kwa utofauti na zinazohusiana na NET zilibainishwa. Katika uchambuzi wa MR wa wagombea hawa 34, MMP9, SIGLEC5 na MPO zilionyesha uhusiano wenye umuhimu. Katika uchambuzi wa msingi wa IVW, kwa MMP9 β = 0,079 na P < 0,001; kwa SIGLEC5 β = −0,086 na P = 0,004; kwa MPO β = 0,041 na P = 0,017 ziliripotiwa.

Katika uchambuzi wa transkriptomiki, jeni 3571 zilizoonyeshwa kwa utofauti ziligunduliwa katika kundi la MCAO ikilinganishwa na kundi la Sham, ilhali baada ya matumizi ya TQTMD jeni 427 zilionyeshwa kwa utofauti ikilinganishwa na MCAO. Baada ya TQTMD, ukandamizaji ulionekana katika michakato inayohusiana na uundaji wa NET, uanzishaji wa neutrofili, uzalishaji wa spishi tendaji za oksijeni na msongo wa oksidishaji; udhibiti wa chini wenye umuhimu uliripotiwa katika jeni zinazohusika katika uundaji wa NET, ikiwemo Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 na MPO.

Tafsiri kuu ya kimakanika ya utafiti ni kwamba TQTMD inaweza kupunguza uundaji uliopitiliza wa NET kwa kukandamiza mhimili wa NOX2–MPO na kwa njia hii kupunguza uharibifu wa papo hapo wa ubongo wa iskemia. Hata hivyo, tafsiri hii ni pendekezo la utaratibu wa kabla ya kliniki linalotegemea modeli ya panya, modeli ya seli na uhusishaji wa transkriptomiki. Haijaonyeshwa ni kipengele gani kimoja katika fomulesheni kinachowajibika kwa athari hiyo, na ufanisi kwa binadamu, dozi, usalama wa muda mrefu au matokeo ya kliniki hayakujaribiwa katika utafiti huu.

Kiharusi cha iskemia cha papo hapo na uundaji wa NET

Kiharusi cha iskemia cha papo hapo (AIS) ni hali ya papo hapo ya kineurolojia inayotokea wakati kuziba kwa mshipa wa ubongo kunasababisha mtiririko wa damu na oksijeni kuwa hautoshi katika maeneo fulani ya ubongo. Uharibifu baada ya kiharusi hautegemei tu kuziba kwa awali kwa mshipa; uchochezi, msongo wa oksidishaji, uharibifu wa endothelium, thrombosis na uanzishaji wa seli za kinga vinaweza kuongeza uharibifu wa pili wa tishu.

Mitego ya nje ya seli ya neutrofili (NETs) ni nini?

Mitego ya nje ya seli ya neutrofili ni miundo inayofanana na wavu inayotolewa nje ya seli na neutrofili zilizoamilishwa, ambapo histoni na protini za chembechembe hujifunga juu ya nyuzi za kromatini zilizodekondensishwa. NETs zinaweza kuwa na kazi ya kifiziolojia katika ulinzi dhidi ya maambukizi; lakini katika kiharusi cha iskemia cha papo hapo, uundaji uliopitiliza wa NET unaweza kuwa mchakato wa kipatholojia unaoweza kuongeza kunaswa kwa platelet na eritrositi, kuziba kwa mishipa midogo, uharibifu wa kizuizi cha damu-ubongo na mwitikio wa uchochezi.

Katika modeli ya panya ya MCAO ya chanzo, miundo ya H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ ndani ya mishipa ya ubongo katika eneo la infarction ilifafanuliwa kama NET. Katika picha za immunofluorescence za ukurasa wa 25 wa chanzo, inaonyeshwa kuwa miundo hii inaweza karibu kujaza lumen ya baadhi ya mishipa midogo. Katika kundi la Sham, muundo wa mshipa ulibaki wazi na uundaji dhahiri wa NET haukuonekana.

TQTMD ni nini?

Tiaoqi Tongmai Decoction imefafanuliwa katika chanzo kama fomulesheni ya jadi yenye asili ya mimea/wanyama inayojumuisha vipengele saba: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) na Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Jumla ya dozi ya kila siku ya binadamu katika chanzo imetolewa kama 60 g. Dozi ya kati inayolingana kwa panya ilihesabiwa kuwa 6,17 g dawa ghafi/kg kulingana na ubadilishaji wa eneo la uso wa mwili. Dozi ya chini iliamuliwa kuwa 3,09 g/kg na dozi ya juu kuwa 12,34 g/kg.

Fomulesheni iliwekwa katika ujazo 10 wa maji kwa dakika 30, ikachemshwa kwa dakika 30 na kuchujwa; nyenzo iliyobaki ilichemshwa tena kwa dakika 20 kwa ujazo nane wa maji. Michujo iliyounganishwa ilikolezwa katika bafu la maji la 60 °C hadi konsentrasheni za 0,154, 0,309 na 0,617 g dawa ghafi/mL kwa dozi ya chini, kati na juu, mtawalia.

Uainishaji wa kikemikali wa TQTMD

Muundo wa kikemikali wa fomulesheni ulichunguzwa kwa UPLC–Q Exactive Plus high-resolution mass spectrometry. Data zilikusanywa katika modi za ioni chanya na hasi katika safu ya m/z 75–1050, na resolution iliwekwa kuwa 70.000. High-energy collision dissociation ilifanywa katika viwango vya 20, 30 na 40 eV. Spektra ghafi zilichakatwa kwa MSDIAL na vitambulisho vya metaboliti vililinganishwa na hifadhidata za TCM kwa kutumia massa sahihi na spektra za uvunjikaji za MS/MS.

Katika chanzo, quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid na resveratrol zimetajwa miongoni mwa vipengele wakilishi. Utafiti hauitambui yoyote kati ya misombo hii kama kiambato kimoja amilifu cha TQTMD.

Mendelian randomization ilitumika kwa nini katika utafiti huu?

Mendelian randomization ni mbinu ya uhitimishaji wa kisababishi inayolenga kupunguza vihatarishi vya sababu changanyishi na usababishi wa kinyume katika mahusiano ya uchunguzi kwa kutumia vigeu vya kijeni kama vigeu vya ala. Katika utafiti huu, jeni zinazohusiana na NET zilichukuliwa kama mfiduo, na kiharusi cha iskemia kama matokeo; lengo lilikuwa kubainisha ni vipengele gani vinavyohusiana na NET vinaweza kuonyesha uhusiano thabiti wa kisababishi katika kiwango cha kijeni na hatari ya kiharusi cha iskemia.

Katika seti ya data ya mafunzo ya GSE16561, sampuli za damu kamili ya pembeni kutoka wagonjwa 39 wa kiharusi cha iskemia na vidhibiti 24 wenye afya zilitumiwa. Katika seti ya data ya uthibitishaji ya GSE22255, kuna seli za mononuclear za damu ya pembeni kutoka wagonjwa 20 wa kiharusi cha iskemia na vidhibiti 20 wenye afya.

Katika uchambuzi wa GSE16561, vizingiti vya P iliyorekebishwa < 0,05 na |log₂FC| > 1 vilitumika. Jumla ya jeni 476 zilizoonyeshwa kwa utofauti zilibainishwa; 364 kati yake zilidhibitiwa juu na 112 zilidhibitiwa chini. Kutokana na ukatizano na seti ya jeni zinazohusiana na NET, jeni 34 za DE-NET zilipatikana.

Katika uteuzi wa SNP kwa MR, umuhimu wa kiwango cha jenomu P < 5 × 10⁻⁸, r² < 0,001 kwa linkage disequilibrium na dirisha la clumping la 10.000 kb vilitumika. SNP zenye aleli za palindromic au zisizolingana ziliondolewa.

Mbinu tano zilitumika: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode na weighted mode. IVW iliainishwa kama uchambuzi wa msingi, na kizingiti cha umuhimu kilichukuliwa kuwa P < 0,05. Utofauti ulitathminiwa kwa mtihani wa Cochran Q, pleiotropy yenye mwelekeo kwa MR-Egger intercept, na athari za SNP moja moja kwa uchambuzi wa leave-one-out.

Mhimili wa NOX2–MPO una jukumu gani katika uundaji wa NET?

Katika fremu ya kimakanika ya chanzo, uanzishaji wa NOX2 ni mchakato wa juu-mkondo unaoongeza uzalishaji wa spishi tendaji za oksijeni; MPO ni kipengele cha kienzimu kinachotolewa kutoka granuli za neutrofili na kuchangia upangaji upya wa kromatini na uundaji wa NET wakati wa NETosis. Utafiti unapendekeza mhimili wa NOX2–MPO kama utaratibu wa kati kwa kuchunguza, baada ya TQTMD, udhibiti wa chini wa jeni zinazohusiana na kompleksi ya NOX2 na MPO pamoja na alama zilizopungua za H3Cit/MPO na uundaji mdogo wa NET.

Kwa uchambuzi wa transkriptomiki, tishu ya infarction ilikusanywa kutoka kwa panya watatu kila mmoja katika makundi ya Sham, MCAO na MCAO + TQTMD. Poly(A)+ mRNA ilitajirishwa, ikagawanywa katika vipande vya takriban 300 bp na maktaba za takriban 450 bp zikaundwa. Upangaji wa paired-end PE150 ulifanywa kwa Illumina NovaSeq 6000.

Usomaji ghafi ulisafishwa kwa Fastp v0.23.2, ukalinganishwa na jenomu rejea ya mRatBN7.2 kwa HISAT2 v2.2.1, na mkusanyo pamoja na ukadiriaji wa transkripti ulifanywa kwa StringTie v2.2.1. Ekspresheni tofauti ilitathminiwa kwa DESeq2 v1.36.0 chini ya vizingiti vya |log₂FC| > 1 na Benjamini-Hochberg padj < 0,05.

Katika ulinganisho wa MCAO–Sham, DEG 3571 zilibainishwa: 2467 zilidhibitiwa juu na 1104 zilidhibitiwa chini. Katika ulinganisho wa TQTMD–MCAO, kuna DEG 427; jeni 27 zilidhibitiwa juu na jeni 400 zilidhibitiwa chini.

Baadhi ya jeni muhimu zinazohusiana na NET zilizodhibitiwa chini baada ya TQTMD zimeripotiwa katika chanzo kama ifuatavyo:

Modeli ya MCAO ya panya

Katika utafiti, panya wa kiume wa Sprague-Dawley wenye umri wa wiki 8 na uzito wa 250 ± 20 g walitumiwa. Kuziba kwa kudumu kwa ateri ya kati ya ubongo kulichaguliwa ili kuiga patofiziolojia ya AIS isiyopata recanalization na kutenganisha uharibifu wa reperfusion na tathmini ya uundaji wa NET.

Panya waliwekewa anesthesia kwa %3 isoflurane. Ateri ya kawaida ya carotid ya kulia, carotid ya nje na carotid ya ndani zilifunuliwa; baada ya carotid ya nje kufungwa, filament ya nailoni iliyofunikwa na poly-L-lysine yenye kipenyo cha 0,285 mm ilisukumwa kupitia CCA kuingia ICA kwa takriban 18,5 ± 0,5 mm. Joto la mwili lilidumishwa katika 37 °C.

Matibabu yalianzishwa saa 2 baada ya MCAO. TQTMD ilitolewa kwa oral gavage kwa ujazo wa 20 mL/kg. Edaravone ilitolewa kwa kundi la kulinganisha kwa 3 mg/kg kwa njia ya mshipa. Inhibita ya MPO PF-1355 ilitolewa kwa 50 mg/kg intraperitoneally kuanzia saa 2 baada ya MCAO na mara moja kwa siku kwa siku saba.

Tathmini ya kineurolojia na kihistolojia

Utendaji wa kineurolojia ulipimwa kwa modified Neurological Severity Score (mNSS) katika saa 24, saa 72 na siku ya 7. Skeli ni kati ya 0–18 na alama ya juu inaonyesha upungufu mkubwa zaidi wa kineurolojia.

Infarction ya ubongo ilipimwa kwa rangi ya %2 TTC katika vipande vya korona vya ubongo vyenye unene wa 2 mm na kuripotiwa kama asilimia ikilinganishwa na hemisfia ya upande wa pili. Tathmini ya histopatholojia ilifanywa kwa rangi ya H&E.

Katika seti ya kwanza ya matokeo ya chanzo, dozi ya kati na ya juu ya TQTMD ilipunguza kwa kiasi muhimu ujazo wa infarction ikilinganishwa na kundi la modeli ya MCAO. Kwa sababu dozi ya kati ilikuwa karibu zaidi na dozi sawa ya kliniki na athari yake ilikuwa thabiti, dozi ya kati ya 6,17 g/kg ilitumika katika majaribio ya baadaye ya utaratibu.

Mbinu na matokeo ya utafiti

Je, inhibisheni ya MPO inaathiri uundaji wa NET?

PF-1355 ilitumika kwa lengo la kupima jukumu la kimakanika la MPO. Inhibisheni ya MPO ya siku saba ilipunguza miundo ya H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET katika gamba la infarction na infiltrasheni ya NET katika parenkima. Katika uchambuzi wa Western blot, protini ya H3Cit ilipungua.

Kwa panya waliopewa inhibita ya MPO, alama za mNSS za siku ya 3 na ya 7 zilikuwa chini zaidi na uhai wa siku saba ulikuwa juu zaidi ikilinganishwa na kundi la MCAO. Ujazo wa infarction wa kundi la modeli uliopimwa kwa TTC umetolewa katika chanzo kama %22,1 ± 3,9 na imeripotiwa kuwa ulipungua kwa kiasi muhimu baada ya PF-1355.

Jaribio hili linatoa uhusiano wa kimajaribio kati ya ukandamizaji wa shughuli ya MPO na uundaji mdogo wa NET pamoja na uharibifu mdogo zaidi wa papo hapo wa ubongo. Hata hivyo, matokeo yanatumika tu kwa modeli ya panya ya MCAO na masharti ya majaribio yaliyotumiwa.

Athari za TQTMD katika ubongo wa panya

Baada ya matibabu ya TQTMD ya siku saba, kupungua kulionekana katika miundo ya H3Cit⁺MPO⁺ NET iliyoko ndani ya mishipa ya korteksi katika eneo la infarction. Data za immunofluorescence na Western blot katika ukurasa wa 29 na 30 wa chanzo zinaonyesha kuwa TQTMD hupunguza viwango vya protini za MPO, H3Cit na NOX2.

Katika uchambuzi wa qRT–PCR, viwango vya NOX2 na MPO mRNA vilipatikana kuwa chini kwa kiasi muhimu katika kundi la MCAO + TQTMD kuliko kundi la modeli. Kwa upande mwingine, PF-1355 haikusababisha mabadiliko yenye umuhimu katika viwango vya transkripti vya NOX2 au MPO. Tofauti hii iliunda msingi wa tafsiri kwamba TQTMD inaweza kuathiri si tu shughuli ya kimeng’enya cha MPO bali pia michakato ya transkripsheni ya juu-mkondo.

Kwa panya waliopewa TQTMD, alama ya mNSS ya siku ya saba na ujazo wa infarction pia vilipungua ikilinganishwa na kundi la MCAO. Chanzo kinafafanua mabadiliko haya kuwa katika kiwango kinachoweza kulinganishwa na kundi la PF-1355.

Muundo wa jaribio la seli

Laini ya seli ya leukemia ya promyelocytic ya binadamu HL-60 ilitofautishwa kuwa fenotipu inayofanana na neutrofili kwa siku tano katika mazingira yenye %1,25 DMSO. Kwa ajili ya upungufu wa oksijeni-glukosi, seli ziliwekwa katika mazingira ya IMDM yasiyo na glukosi na kuinkubetiwa kwa saa 4 katika angahewa ya %1 O2, %5 CO2, %94 N2.

Wakati huo huo, 100 nM PMA ilitumika kuchochea NETosis inayotegemea NOX2. Kwa inhibita ya NOX2 gp91ds-tat, seli ziliwekwa katika pre-incubation ya dakika 30 kwa inhibita ya 2 μM.

Wakati wa kuandaa seramu iliyomedikiwa na TQTMD, panya walipewa 6,17 g/kg TQTMD mara moja kwa siku kwa siku tatu; seramu ilipatikana saa moja baada ya dozi ya mwisho. Katika majaribio ya uhai wa seli, konsentrasheni za %0, %5, %10, %15, %20, %25 na %30 zilijaribiwa na chanzo kinaripoti kuwa uhai wa juu zaidi wa seli ulionekana katika %10 seramu iliyomedikiwa na TQTMD.

Matokeo ya NET ya in vitro

Matumizi ya OGD + PMA yaliunda miundo minene ya wavu wa nje ya seli inayoonekana kwa SYTOX Green. %10 seramu iliyomedikiwa na TQTMD ilipunguza utolewaji huu wa NET. Katika picha za ukurasa wa 32 na 51 wa chanzo, katika kundi la TQTMD, ishara ya SYTOX Green na miundo ya MPO⁺H3Cit⁺ NET inaonekana michache kuliko katika kundi la modeli.

Katika uchambuzi wa Western blot, OGD + PMA iliongeza ekspresheni ya protini za NOX2, MPO na H3Cit; seramu iliyomedikiwa na TQTMD ilizipunguza. Kupungua kwa viwango vya NOX2 na MPO mRNA pia kuliripotiwa kwa qRT–PCR. Inhibita ya NOX2 gp91ds-tat ilipunguza uundaji wa NET lakini haikubadilisha kwa kiasi muhimu kiwango cha NOX2 mRNA.

Mnyororo wa utaratibu wa NOX2–MPO–NET

1. Masharti ya papo hapo ya iskemia huongeza uanzishaji wa neutrofili.
2. Kompleksi ya NOX2 huchangia uundaji wa spishi tendaji za oksijeni.
3. Uanzishaji na utolewaji wa MPO huambatana na kuendelea kwa mchakato wa NETosis.
4. Nyavu za kromatini zenye H3Cit, MPO na NE hutolewa ndani ya mshipa kama miundo ya NET.
5. Mkusanyiko uliopitiliza wa NET ndani ya mishipa unahusiana na kuziba kwa mishipa midogo na uharibifu wa uchochezi.
6. Katika majaribio ya chanzo, TQTMD ilionyesha uundaji mdogo wa NET pamoja na kupungua kwa viashiria vya NOX2 na MPO.

Haijathibitishwa kwamba hatua zote tano za kwanza za mnyororo huu zinadhibitiwa na TQTMD kwa njia moja, ya mstari na ya moja kwa moja. Ushahidi unaotolewa na utafiti unaonyesha kuwa matumizi ya TQTMD hubadilika pamoja na viashiria vya kimolekuli katika mhimili huu na kiasi cha NET, na kwamba majaribio ya inhibita yanaunga mkono jukumu la kimakanika la MPO/NOX2.

Matokeo yanayoungwa mkono na utafiti

• Katika modeli ya panya ya MCAO ya papo hapo, mkusanyiko wa NET uliongezeka katika mishipa ya eneo la infarction.
• Viwango vya MPO na H3Cit viliongezeka baada ya MCAO.
• Inhibisheni ya kifamakolojia ya MPO ilipunguza uundaji wa NET na kuboresha matokeo ya papo hapo ya kineurolojia.
• TQTMD ilipunguza viashiria vya NOX2, MPO na H3Cit katika ubongo wa panya.
• Matumizi ya TQTMD yalionekana pamoja na kupungua kwa uundaji wa NET, ujazo mdogo zaidi wa infarction na matokeo bora zaidi ya mNSS.
• Katika modeli ya seli ya OGD + PMA, seramu iliyomedikiwa na TQTMD ilipunguza NOX2, MPO, H3Cit na uundaji wa NET.
• Katika uchambuzi wa MR, mahusiano ya kijeni yenye umuhimu na kiharusi cha iskemia yaliripotiwa kwa MMP9, SIGLEC5 na MPO.

Matokeo ambayo utafiti hauyaungi mkono

• Haijathibitishwa na utafiti huu kwamba TQTMD ina ufanisi wa kliniki kwa wagonjwa wa kiharusi cha iskemia cha papo hapo.
• Haijaonyeshwa kwamba TQTMD inaweza kutumika badala ya thrombolysis au mechanical thrombectomy.
• Dozi salama kwa binadamu haijabainishwa.
• Nafuu ya muda mrefu ya kineurolojia, utendaji wa utambuzi au madhara ya hatua ya baadaye hayajatathminiwa.
• Haijabainishwa ni kipengele gani kimoja cha TQTMD kinachosababisha ukandamizaji wa NOX2–MPO.
• Haijatatuliwa kama athari ya fomulesheni inategemea sinergia ya vipengele vingi badala ya molekuli moja.
• Uwezo wa kujumlisha moja kwa moja data za GWAS zenye asili ya Ulaya kwa makundi mengine ya watu haujaonyeshwa.
• Haiwezi kusemwa kuwa jenetiki ya binadamu na matokeo ya majaribio ya panya yana ukubwa sawa wa athari ya kibiolojia.

Uchambuzi wa takwimu

Katika ulinganisho wa makundi mengi, one-way ANOVA ilitumika; katika ulinganisho wa jozi, mtihani wa LSD-t au Dunnett na kisha mbinu ya Tukey post hoc zilitumika. Data za majaribio zilipatikana kutoka angalau marudio matatu huru. Katika chanzo, uwekaji alama wa takwimu umefafanuliwa kama *P < 0,05, **P < 0,01 na ***P < 0,001.

Vikwazo vikuu vya utafiti

Tofauti ya idadi ya watu na spishi: Data za GWAS zilizotumiwa kwa MR zilipatikana kutoka makundi ya watu wa Ulaya; majaribio ya kimakanika yalifanywa katika panya wa Sprague-Dawley. Tofauti za kijeni na kibiolojia kati ya makundi ya binadamu na modeli ya mnyama huzuia uwezo wa kujumlisha matokeo.

Fomulesheni yenye vipengele vingi: TQTMD ni preparati changamano. Ingawa vipengele mbalimbali viligunduliwa kwa LC–MS, haijaonyeshwa kama athari ya NOX2–MPO–NET inatokana na molekuli moja au sinergia ya vipengele kadhaa.

Ufuatiliaji mfupi: Majaribio yalilenga awamu ya papo hapo, takriban kipindi cha siku saba. Uhai wa muda mrefu, utendaji wa kineurolojia, hitilafu ya utambuzi na madhara mengine ya post-stroke hayajatathminiwa.

Ukosefu wa uthibitishaji wa kliniki: Utafiti si jaribio la kliniki linalohusisha uingiliaji wa TQTMD kwa washiriki binadamu. Utafiti tofauti wa kliniki unahitajika kwa ufanisi na usalama kwa binadamu.

Dokezo la chanzo na mbinu

Kichwa asilia: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Waandishi: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Waandishi wanaowajibika: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui na Xiang-Qing Xu.

Taasisi: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Aina ya chanzo: Preprint ya utafiti.

Hali ya kupitia mapitio: Haijapitiwa na wenzao. Katika kila ukurasa wa hati ya chanzo kuna kauli “This preprint research paper has not been peer reviewed”.

Jukwaa: SSRN.

Rekodi rasmi ya preprint: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: DOI haijaripotiwa katika hati ya chanzo.

Jarida: Uchapishaji katika jarida lililopitiwa na wenzao haujaonyeshwa katika hati ya chanzo.

Maadili ya majaribio: Majaribio ya wanyama yaliidhinishwa na Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee kwa nambari ya idhini SDSZYYAWE20250903002. Imeelezwa kuwa washiriki binadamu au tishu za binadamu hazikutumiwa katika utafiti.

Wanyama: Panya wa kiume wa Sprague-Dawley wa wiki 8, 250 ± 20 g.

Modeli ya seli: Seli zinazofanana na neutrofili zilizoundwa kutoka laini ya seli ya leukemia ya promyelocytic ya binadamu HL-60.

Mbinu kuu: uchambuzi wa ekspresheni tofauti ya jeni wa GEO; Mendelian randomization; GWAS; RNA-seq/transkriptomiki; modeli ya kudumu ya MCAO ya panya; TTC; H&E; immunofluorescence; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; modeli ya OGD + PMA NETosis.

Ufadhili: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Mgongano wa maslahi: Waandishi walitangaza kuwa hakuna mgongano wa maslahi.

Upatikanaji wa data: Imeelezwa kuwa data zinaweza kupatikana kutoka kwa mwandishi anayewajibika kwa ombi linalofaa.

Mpaka mkuu wa kisayansi: Matokeo ya utafiti yako katika kiwango cha kabla ya kliniki. Athari za neuroproteksheni zilizoonekana katika majaribio ya panya na seli si ushahidi kwamba TQTMD ni tiba yenye ufanisi au salama kwa wagonjwa binadamu wa kiharusi cha iskemia cha papo hapo.