Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD) бул изилдөөдө курч ишемиялык инсульттан кийин иммунотромботикалык жана сезгенүү зыянын өзгөртө алуу потенциалы изилденген көп компоненттүү салттуу кытай медицинасы формуляциясы болуп саналат. Изилдөөчүлөр нейтрофилдик клеткадан тышкаркы тузактардын (neutrophil extracellular traps, NETs) пайда болушу менен байланышкан патогендик факторлорду Менделдик рандомизация аркылуу скринингден өткөрүп, келемиш мээ тканынын транскриптомикасы менен TQTMD таасир эткен молекулалык жолдорду карап чыккан жана сунушталган механизмди ортоңку мээ артериясынын окклюзиясы (MCAO) келемиш моделинде да, OGD + PMA менен стимулдаштырылган HL-60 булагындагы нейтрофилге окшош клеткаларда да эксперименттик түрдө сынаган. Булакта TQTMD дарылоосу NOX2 жана MPO экспрессиясын төмөндөтөрү, NET пайда болушун азайтары, мээдеги инфаркт көлөмүн кичирейтери жана келемиштерде эрте неврологиялык жакшырууга байланыштуу экени маалымдалат. Ошентсе да изилдөө рецензиядан өткөн эмес жана жыйынтыктар адамдарда клиникалык натыйжалуулукту далилдебейт.

Изилдөөнүн Менделдик рандомизация бөлүмүндө ишемиялык инсульт менен байланышкан 476 айырмалуу экспрессияланган ген белгилүү NET байланыштуу гендер менен кесилишкен жана 34 айырмалуу экспрессияланган NET байланыштуу ген аныкталган. Бул 34 талапкердин MR анализинде MMP9, SIGLEC5 жана MPO маанилүү байланыш көрсөткөн. Баштапкы IVW анализинде MMP9 үчүн β = 0,079 жана P < 0,001; SIGLEC5 үчүн β = −0,086 жана P = 0,004; MPO үчүн β = 0,041 жана P = 0,017 деп маалымдалган.

Транскриптомдук анализде MCAO тобунда Sham тобуна салыштырмалуу 3571 айырмалуу экспрессияланган ген аныкталса, TQTMD колдонулгандан кийин MCAOго салыштырмалуу 427 ген айырмалуу экспрессияланган. TQTMDден кийин NET пайда болушу, нейтрофил активдешүүсү, реактивдүү кычкылтек түрлөрүнүн өндүрүлүшү жана оксидативдик стресс менен байланышкан процесстерде басылуу байкалган; Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 жана MPO кошо алганда NET пайда болушунда роль ойногон гендерде маанилүү төмөн жөнгө салынуу маалымдалган.

Изилдөөнүн негизги механизмдик чечмелөөсү TQTMD NOX2–MPO огун басуу аркылуу ашыкча NET пайда болушун азайта алат жана бул жол менен курч ишемиялык мээ зыянын жеңилдете алат деген ойго негизделет. Бирок бул чечмелөө келемиш модели, клетка модели жана транскриптомдук байланыштырууга таянган преклиникалык механизм сунушу болуп саналат. Формуляциядагы кайсы бир жалгыз компонент таасир үчүн жооптуу экени көрсөтүлгөн эмес жана адамдардагы натыйжалуулук, доза, узак мөөнөттүү коопсуздук же клиникалык натыйжалар бул изилдөөдө текшерилген эмес.

Курч ишемиялык инсульт жана NET пайда болушу

Курч ишемиялык инсульт (AIS) мээ тамырынын бүтөлүшүнүн натыйжасында мээнин белгилүү аймактарына кан жана кычкылтек агымы жетишсиз болуп калган курч неврологиялык абал. Инсульттан кийинки зыян бир гана баштапкы тамыр бүтөлүшүнө байланыштуу эмес; сезгенүү, оксидативдик стресс, эндотелий зыяны, тромбоз жана иммундук клеткалардын активдешүүсү экинчи даражадагы ткань зыянын күчөтүшү мүмкүн.

Нейтрофилдик клеткадан тышкаркы тузактар (NETs) деген эмне?

Нейтрофилдик клеткадан тышкаркы тузактар активдешкен нейтрофилдер тарабынан клетканын сыртына чыгарылган, деконденсацияланган хроматин жипчелерине гистондор жана гранула белоктору байланган тор сымал түзүлүштөр. NETs инфекциядан коргонууда физиологиялык функция аткара алат; бирок курч ишемиялык инсультта ашыкча NET пайда болушу тромбоциттер менен эритроциттердин кармалышын, микроваскулярдык бүтөлүүнү, кан-мээ тосмосунун зыянын жана сезгенүү жоопту күчөтө турган патологиялык процесске айланышы мүмкүн.

Булактын келемиш MCAO моделинде инфаркт аймагындагы мээ тамырларынын ичинде H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ түзүлүштөр NET катары аныкталган. Булактын 25-бетиндеги иммунофлуоресценттик сүрөттөрдө бул түзүлүштөр айрым майда тамырлардын люменин дээрлик толтура алары көрсөтүлөт. Sham тобунда болсо тамыр түзүлүшү ачык калып, айкын NET пайда болушу байкалган эмес.

TQTMD деген эмне?

Tiaoqi Tongmai Decoction булакта жети компоненттен турган салттуу өсүмдүк/жаныбар тектүү формуляция катары сүрөттөлгөн: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) жана Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Булакта жалпы күнүмдүк адам дозасы 60 g деп берилген. Келемишке эквиваленттүү орточо доза дене бетинин аянты боюнча айландырууга ылайык 6,17 g чийки дары/kg болуп эсептелген. Төмөн доза 3,09 g/kg, жогорку доза 12,34 g/kg катары белгиленген.

Формуляция 10 көлөм сууда 30 мүнөт кармалып, 30 мүнөт кайнатылып жана сүзүлгөн; калган материал сегиз көлөм суу менен 20 мүнөт кайра кайнатылган. Бириктирилген сүзүндүлөр 60 °C суу мончосунда төмөн, орточо жана жогорку доза үчүн тиешелүүлүгүнө жараша 0,154, 0,309 жана 0,617 g чийки дары/mL концентрацияларына чейин коюулантылган.

TQTMDнин химиялык мүнөздөмөсү

Формуляциянын химиялык курамы UPLC–Q Exactive Plus жогорку ажыратуу жөндөмдүү масс-спектрометриясы менен изилденген. Оң жана терс ион режимдеринде m/z 75–1050 аралыгында маалымат чогултулуп, ажыратуу жөндөмү 70.000 деп коюлган. Жогорку энергиялуу кагылышуу диссоциациясы 20, 30 жана 40 eV деңгээлдеринде жүргүзүлгөн. Чийки спектрлер MSDIAL менен иштетилип, метаболит идентификациялары так масса жана MS/MS фрагментация спектрлери аркылуу TCM маалымат базалары менен дал келтирилген.

Булакта өкүл компоненттер катары quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid жана resveratrol көрсөтүлгөн. Изилдөө бул кошулмалардын эч бирин TQTMDнин жалгыз активдүү таасир этүүчү заты катары аныктабайт.

Менделдик рандомизация бул изилдөөдө эмне үчүн колдонулду?

Менделдик рандомизация генетикалык варианттарды инструменталдык өзгөрмө катары колдонуп, байкоочу байланыштардагы чаташтыруучу факторлорду жана тескери себептүүлүк коркунучун азайтууну көздөгөн себептик тыянак чыгаруу ыкмасы. Бул изилдөөдө NET менен байланышкан гендер экспозиция, ишемиялык инсульт болсо натыйжа катары каралган; максат кайсы NET байланыштуу факторлор ишемиялык инсульт коркунучу менен генетикалык деңгээлде ырааттуу себептик байланыш көрсөтө аларын аныктоо болгон.

GSE16561 окутуу маалымат топтомунда 39 ишемиялык инсульт бейтабы жана 24 ден соолугу чың контролдун толук перифериялык кан үлгүлөрү колдонулган. GSE22255 тастыктоо маалымат топтомунда болсо 20 ишемиялык инсульт бейтабы жана 20 ден соолугу чың контролдон перифериялык кан мононуклеардык клеткалары бар.

GSE16561 анализинде оңдолгон P < 0,05 жана |log₂FC| > 1 чектери колдонулган. Жалпы 476 айырмалуу экспрессияланган ген аныкталган; алардын 364ү жогору, 112си төмөн жөнгө салынган. NET байланыштуу ген топтому менен кесилишүүнүн натыйжасында 34 DE-NET гени алынган.

MR үчүн SNP тандоодо геном боюнча маанилүүлүк P < 5 × 10⁻⁸, байланыш тең салмаксыздыгы үчүн r² < 0,001 жана 10.000 kb clumping терезеси колдонулган. Палиндромдук же шайкеш эмес аллелдери бар SNPлер чыгарылган.

Беш ыкма колдонулган: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode жана weighted mode. IVW баштапкы анализ катары аныкталып, маанилүүлүк чеги P < 0,05 алынган. Гетерогендүүлүк Cochran Q тести менен, багыттуу плейотропия MR-Egger intercept менен жана ар бир SNP таасири leave-one-out анализи менен бааланган.

NOX2–MPO огу NET пайда болушунда кандай роль ойнойт?

Булактын механизмдик алкагында NOX2 активдешүүсү реактивдүү кычкылтек түрлөрүнүн өндүрүлүшүн көбөйткөн жогорку агымдагы процесс; MPO болсо нейтрофил гранулаларынан бөлүнүп чыккан жана NETosis учурунда хроматиндин кайра уюшулушу менен NET пайда болушуна салым кошкон ферменттик компонент. Изилдөө TQTMDден кийин NOX2 комплекси менен байланышкан гендердин жана MPOнун төмөн жөнгө салынышын азайган H3Cit/MPO белгилери жана азыраак NET пайда болушу менен бирге байкап, NOX2–MPO огун борбордук механизм катары сунуштайт.

Транскриптомдук анализ үчүн Sham, MCAO жана MCAO + TQTMD топторунан үчтөн келемиштин инфаркт тканы чогултулган. Poly(A)+ mRNA байытылып, болжол менен 300 bp фрагменттерге бөлүнгөн жана болжол менен 450 bp китепканалар түзүлгөн. Paired-end PE150 секвенирлөө Illumina NovaSeq 6000 менен жүргүзүлгөн.

Чийки окуулар Fastp v0.23.2 менен тазаланып, mRatBN7.2 референс геномуна HISAT2 v2.2.1 менен тегизделген, StringTie v2.2.1 менен транскрипт монтажы жана сандык баалоо жүргүзүлгөн. Дифференциалдык экспрессия DESeq2 v1.36.0 менен |log₂FC| > 1 жана Benjamini-Hochberg padj < 0,05 чектери астында бааланган.

MCAO–Sham салыштыруусунда 3571 DEG аныкталган: 2467 жогору, 1104 төмөн жөнгө салынган. TQTMD–MCAO салыштыруусунда болсо 427 DEG бар; 27 ген жогору, 400 ген төмөн жөнгө салынган.

TQTMDден кийин төмөн жөнгө салынган NET байланыштуу маанилүү гендердин айрымдары булакта мындайча маалымдалган:

Келемиш MCAO модели

Изилдөөдө 8 жумалык, 250 ± 20 g салмактагы эркек Sprague-Dawley келемиштери колдонулган. Туруктуу ортоңку мээ артериясынын окклюзиясы реканализация камсыздалбаган AIS патофизиологиясын моделдөө жана реперфузия зыянын NET пайда болушун баалоодон бөлүү максатында тандалган.

Келемиштер %3 изофлуран менен анестезияга алынган. Оң жалпы каротид, тышкы каротид жана ички каротид артериялары ачылган; тышкы каротид байлангандан кийин 0,285 mm диаметрдеги poly-L-lysine менен капталган нейлон филамент CCA аркылуу ICA ичине болжол менен 18,5 ± 0,5 mm жылдырылган. Дене температурасы 37 °Cде кармалган.

Дарылоолор MCAOдон 2 саат өткөндөн кийин башталган. TQTMD ооз аркылуу гаваж менен 20 mL/kg көлөмдө берилген. Edaravone салыштыруу тобуна 3 mg/kg вена ичине колдонулган. MPO ингибитору PF-1355 болсо 50 mg/kg интраперитонеалдык түрдө MCAOдон 2 саат өткөндөн кийин башталып, жети күн бою күнүнө бир жолу берилген.

Неврологиялык жана гистологиялык баалоо

Неврологиялык функция модификацияланган Неврологиялык Оордук Скору (mNSS) менен 24 саат, 72 саат жана 7-күндө өлчөнгөн. Шкала 0–18 аралыгында жана жогорку балл оорураак неврологиялык дефицитти билдирет.

Мээдеги инфаркт 2 mm калыңдыктагы короналдык мээ кесиндилеринде %2 TTC боёосу менен өлчөнүп, каршы жарым шарга салыштырмалуу пайыз катары маалымдалган. Гистопатологиялык баалоо H&E боёосу менен жүргүзүлгөн.

Булактын биринчи жыйынтык топтомунда орточо жана жогорку доза TQTMD инфаркт көлөмүн MCAO модель тобуна салыштырмалуу маанилүү түрдө азайткан. Орточо дозанын клиникалык эквивалент дозага жакыныраак жана таасиринин туруктуу болушунан улам кийинки механизм эксперименттеринде 6,17 g/kg орточо доза колдонулган.

Изилдөөнүн ыкмасы жана табылгалары

MPO ингибициясы NET пайда болушуна таасир этеби?

MPOнун механизмдик ролун текшерүү максатында PF-1355 колдонулган. Жети күндүк MPO ингибициясы инфаркт кортексиндеги H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET түзүлүштөрүн жана паренхималык NET инфильтрациясын азайткан. Western blot анализинде H3Cit белогу төмөндөгөн.

MPO ингибитору берилген келемиштерде MCAO тобуна салыштырмалуу 3- жана 7-күн mNSS баллдары төмөнүрөөк жана жети күндүк жашап калуу жогорураак деп маалымдалган. Модель тобунун TTC менен өлчөнгөн инфаркт көлөмү булакта %22,1 ± 3,9 катары берилген жана PF-1355тен кийин маанилүү түрдө азайганы билдирилген.

Бул эксперимент MPO активдүүлүгүнүн басылышы менен азыраак NET пайда болушу жана төмөнүрөөк курч мээ зыяны ортосунда эксперименттик байланыш берет. Ошентсе да жыйынтык колдонулган MCAO келемиш модели жана эксперимент шарттары үчүн гана жарактуу.

TQTMDнин келемиш мээсиндеги таасирлери

Жети күндүк TQTMD дарылоосунан кийин инфаркт аймагындагы кортикалдык тамырлардын ичинде жайгашкан H3Cit⁺MPO⁺ NET түзүлүштөрүндө азаюу байкалган. Булактын 29- жана 30-беттериндеги иммунофлуоресценттик жана Western blot маалыматтары TQTMD MPO, H3Cit жана NOX2 белок деңгээлдерин төмөндөтөрүн көрсөтөт.

qRT–PCR анализинде NOX2 жана MPO mRNA деңгээлдери MCAO + TQTMD тобунда модель тобуна салыштырмалуу маанилүү даражада төмөн табылган. Мунун тескерисинче, PF-1355 NOX2 же MPO транскрипт деңгээлдеринде маанилүү өзгөрүү жараткан эмес. Бул айырма TQTMD бир гана MPO фермент активдүүлүгүнө эмес, андан жогору агымдагы транскрипциялык процесстерге да таасир этиши мүмкүн деген чечмелөөнүн негизин түзгөн.

TQTMD берилген келемиштерде жетинчи күн mNSS баллы жана инфаркт көлөмү да MCAO тобуна салыштырмалуу азайган. Булак бул өзгөрүүлөрдү PF-1355 тобу менен салыштырууга боло турган деңгээлде деп сүрөттөйт.

Клетка экспериментинин дизайны

Адам промиелоциттик лейкемия клетка линиясы HL-60, %1,25 DMSO камтыган чөйрөдө беш күн бою нейтрофилге окшош фенотипке дифференцияланган. Кычкылтек-глюкоза жетишсиздиги үчүн клеткалар глюкозасыз IMDM чөйрөсүнө алынган жана %1 O2, %5 CO2, %94 N2 атмосферасында 4 саат инкубацияланган.

Ошол эле учурда 100 nM PMA колдонулуп, NOX2 көз каранды NETosis стимулдаштырылган. NOX2 ингибитору gp91ds-tat үчүн клеткалар 2 μM ингибитор менен 30 мүнөт алдын ала инкубацияланган.

TQTMD-медикацияланган сыворотка даярдалганда келемиштерге үч күн бою күнүнө бир жолу 6,17 g/kg TQTMD берилген; акыркы дозадан бир саат өткөндөн кийин сыворотка алынган. Клетка жашоого жөндөмдүүлүгү эксперименттеринде %0, %5, %10, %15, %20, %25 жана %30 концентрациялар текшерилген жана булакта эң жогорку клетка жашоого жөндөмдүүлүгү %10 TQTMD-медикацияланган сывороткада байкалган.

In vitro NET жыйынтыктары

OGD + PMA колдонулушу SYTOX Green менен көрүнгөн тыгыз клеткадан тышкаркы тор түзүлүштөрүн пайда кылган. %10 TQTMD-медикацияланган сыворотка бул NET бөлүнүп чыгышын азайткан. Булактын 32- жана 51-беттериндеги сүрөттөрдө TQTMD тобунда SYTOX Green сигналы менен MPO⁺H3Cit⁺ NET түзүлүштөрү модель тобунан азыраак көрүнөт.

Western blot анализинде OGD + PMA NOX2, MPO жана H3Cit белок экспрессиясын көбөйткөн; TQTMD-медикацияланган сыворотка аларды азайткан. qRT–PCR менен NOX2 жана MPO mRNA деңгээлдеринде да азаюу маалымдалган. gp91ds-tat NOX2 ингибитору NET пайда болушун азайткан, бирок NOX2 mRNA деңгээлин маанилүү түрдө өзгөрткөн эмес.

NOX2–MPO–NET механизм чынжыры

1. Курч ишемиялык шарттар нейтрофилдердин активдешүүсүн көбөйтөт.
2. NOX2 комплекси реактивдүү кычкылтек түрлөрүнүн пайда болушуна салым кошот.
3. MPO активдешүүсү жана бөлүнүп чыгышы NETosis процессинин илгерилешин коштойт.
4. H3Cit, MPO жана NE камтыган хроматин торлору NET түзүлүштөрү катары тамыр ичине чыгарылат.
5. Ашыкча интраваскулярдык NET топтолушу микроваскулярдык бүтөлүү жана сезгенүү зыяны менен байланыштуу.
6. Булак эксперименттеринде TQTMD NOX2 жана MPO көрсөткүчтөрүнүн төмөндөшү менен бирге азыраак NET пайда болушун көрсөткөн.

Бул чынжырдын алгачкы беш баскычынын баары TQTMD тарабынан жалгыз, сызыктуу жана түздөн-түз көзөмөлдөнөрү далилденген эмес. Изилдөө сунуштаган далил TQTMD колдонулушу бул огу боюнча молекулалык көрсөткүчтөр жана NET көлөмү менен бирге өзгөрөрүн жана ингибитор эксперименттери MPO/NOX2нин механизмдик ролун колдой турганын көрсөтөт.

Изилдөө колдогон жыйынтыктар

• Курч MCAO келемиш моделинде инфаркт аймагынын тамырларында NET топтолушу көбөйгөн.
• MPO жана H3Cit деңгээлдери MCAOдон кийин жогорулаган.
• MPOнун фармакологиялык ингибициясы NET пайда болушун азайтып, курч неврологиялык натыйжаларды жакшырткан.
• TQTMD келемиш мээсинде NOX2, MPO жана H3Cit көрсөткүчтөрүн азайткан.
• TQTMD колдонулушу NET пайда болушунун азаюусу, төмөнүрөөк инфаркт көлөмү жана жакшыраак mNSS жыйынтыктары менен бирге байкалган.
• OGD + PMA клетка моделинде TQTMD-медикацияланган сыворотка NOX2, MPO, H3Cit жана NET пайда болушун азайткан.
• MR анализинде MMP9, SIGLEC5 жана MPO үчүн ишемиялык инсульт менен маанилүү генетикалык байланыштар маалымдалган.

Изилдөө колдобогон жыйынтыктар

• TQTMD курч ишемиялык инсульт бейтаптарында клиникалык жактан натыйжалуу экени бул изилдөө менен далилденген эмес.
• TQTMD тромболиздин же механикалык тромбэктомиянын ордуна колдонулушу мүмкүн экени көрсөтүлгөн эмес.
• Адамдарда коопсуз доза аныкталган эмес.
• Узак мөөнөттүү неврологиялык жакшыруу, когнитивдик функция же кеч мезгилдик кесепеттер бааланган эмес.
• NOX2–MPO басылышы кайсы жалгыз TQTMD компонентинен келип чыгары аныкталган эмес.
• Формуляциянын таасири бир молекуланын ордуна көп компоненттүү синергияга байланыштуу же байланыштуу эместиги чечилген эмес.
• Европа тектүү GWAS маалыматтарынын башка популяцияларга түз жалпыланышы көрсөтүлгөн эмес.
• Адам генетикасы менен келемиш эксперимент жыйынтыктары бирдей биологиялык таасир көлөмүнө ээ деп айтууга болбойт.

Статистикалык анализ

Көп топтук салыштырууларда бир багыттуу ANOVA; жуп салыштырууларда LSD-t же Dunnett тести жана андан кийин Tukey post hoc ыкмасы колдонулган. Эксперименттик маалыматтар кеминде үч көз карандысыз кайталоодон алынган. Булакта статистикалык белгилөө *P < 0,05, **P < 0,01 жана ***P < 0,001 катары аныкталган.

Изилдөөнүн негизги чектөөлөрү

Популяция жана түр айырмасы: MR үчүн колдонулган GWAS маалыматтары Европа популяцияларынан алынган; механизмдик эксперименттер болсо Sprague-Dawley келемиштеринде жүргүзүлгөн. Адам популяциялары менен жаныбар модели ортосундагы генетикалык жана биологиялык айырмалар жыйынтыктардын жалпыланышын чектейт.

Көп компоненттүү формуляция: TQTMD татаал препарат. LC–MS менен ар кандай компоненттер аныкталса да, NOX2–MPO–NET таасири бир молекуладанбы же бир нече компоненттин синергиясынанбы келип чыгары көрсөтүлгөн эмес.

Кыска байкоо: Эксперименттер курч фазага, болжол менен жети күндүк мезгилге багытталган. Узак мөөнөттүү жашап калуу, неврологиялык функция, когнитивдик бузулуу жана башка post-stroke кесепеттер бааланган эмес.

Клиникалык тастыктоонун жоктугу: Изилдөө адам катышуучуларында TQTMD кийлигишүүсүн камтыган клиникалык изилдөө эмес. Адамдардагы натыйжалуулук жана коопсуздук үчүн өзүнчө клиникалык изилдөө зарыл.

Булак жана ыкма эскертүүсү

Түпнуска аталыш: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Авторлор: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Жооптуу авторлор: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui жана Xiang-Qing Xu.

Мекемелер: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Булак түрү: Изилдөө preprintи.

Рецензия абалы: Рецензиядан өткөн эмес. Булак документтин ар бир бетинде “This preprint research paper has not been peer reviewed” деген билдирүү бар.

Платформа: SSRN.

Расмий preprint жазуусу: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: Булак документте DOI маалымдалган эмес.

Журнал: Булак документте рецензияланган журнал жарыясы көрсөтүлгөн эмес.

Эксперимент этикасы: Жаныбар эксперименттери Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee тарабынан SDSZYYAWE20250903002 бекитүү номери менен бекитилген. Изилдөөдө адам катышуучу же адам тканы колдонулбаганы белгиленген.

Жаныбарлар: 8 жумалык эркек Sprague-Dawley келемиштери, 250 ± 20 g.

Клетка модели: HL-60 адам промиелоциттик лейкемия клетка линиясынан түзүлгөн нейтрофилге окшош клеткалар.

Негизги ыкмалар: GEO дифференциалдык ген экспрессиясы анализи; Менделдик рандомизация; GWAS; RNA-seq/транскриптомика; туруктуу MCAO келемиш модели; TTC; H&E; иммунофлуоресценция; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; OGD + PMA NETosis модели.

Каржылоо: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Кызыкчылыктардын кагылышы: Авторлор кызыкчылыктардын кагылышы жок экенин билдиришкен.

Маалымат жеткиликтүүлүгү: Маалыматтар негиздүү суроо-талап боюнча жооптуу автордон алынышы мүмкүн экени көрсөтүлгөн.

Негизги илимий чек: Изилдөөнүн жыйынтыктары преклиникалык деңгээлде. Келемиш жана клетка эксперименттеринде байкалган нейропротектордук таасирлер TQTMD адамдагы курч ишемиялык инсульт бейтаптарында натыйжалуу же коопсуз дарылоо экенинин далили эмес.