Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD), bu tədqiqatda akut işemik insultdan sonra immunotrombotik və iltihabi zədələnməni dəyişdirə bilmə potensialı araşdırılan çoxkomponentli ənənəvi Çin təbabəti formuludur. Tədqiqatçılar neytrofil hüceyrəxarici tələlərinin (neutrophil extracellular traps, NETs) yaranması ilə əlaqəli patogen amilləri Mendel randomizasiyası ilə skrininq etmiş, siçovul beyin toxuması transkriptomikası ilə TQTMD-nin təsir etdiyi molekulyar yolları araşdırmış və təklif edilən mexanizmi həm orta serebral arteriya okklüziyası (MCAO) siçovul modelində, həm də OGD + PMA ilə stimullaşdırılmış HL-60 mənşəli neytrofiləbənzər hüceyrələrdə eksperimental olaraq sınamışdır. Mənbədə TQTMD müalicəsinin NOX2 və MPO ekspressiyasını azaltdığı, NET yaranmasını aşağı saldığı, serebral infarkt həcmini kiçiltdiyi və siçovullarda erkən nevroloji yaxşılaşma ilə əlaqəli olduğu bildirilir. Bununla belə, tədqiqat resenziyadan keçməmişdir və nəticələr insanlarda klinik effektivliyi sübut etmir.

Tədqiqatın Mendel randomizasiyası bölməsində işemik insultla əlaqəli 476 fərqli ekspressiya olunan gen məlum NET əlaqəli genlərlə kəsişdirilmiş və 34 fərqli ekspressiya olunan NET əlaqəli gen müəyyən edilmişdir. Bu 34 namizədin MR analizində MMP9, SIGLEC5 və MPO əhəmiyyətli əlaqə göstərmişdir. İlkin IVW analizində MMP9 üçün β = 0,079 və P < 0,001; SIGLEC5 üçün β = −0,086 və P = 0,004; MPO üçün β = 0,041 və P = 0,017 bildirilmişdir.

Transkriptomik analizdə MCAO qrupunda Sham qrupuna nisbətən 3571 fərqli ekspressiya olunan gen aşkar edilərkən, TQTMD tətbiqindən sonra MCAO-ya nisbətən 427 gen fərqli ekspressiya olunmuşdur. TQTMD-dən sonra NET yaranması, neytrofil aktivləşməsi, reaktiv oksigen növlərinin istehsalı və oksidativ stresslə əlaqəli proseslərdə basqılanma müşahidə edilmiş; Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 və MPO daxil olmaqla NET yaranmasında rol alan genlərdə əhəmiyyətli aşağı tənzimlənmə bildirilmişdir.

Tədqiqatın əsas mexanistik şərhi TQTMD-nin NOX2–MPO oxunu basqılayaraq həddindən artıq NET yaranmasını azalda biləcəyi və bu yolla akut işemik beyin zədəsini yüngülləşdirə biləcəyidir. Lakin bu şərh siçovul modeli, hüceyrə modeli və transkriptomik əlaqələndirməyə əsaslanan preklinik mexanizm təklifidir. Formulyasiyadakı hansı tək komponentin təsirdən məsul olduğu göstərilməmişdir və insanlarda effektivlik, doza, uzunmüddətli təhlükəsizlik və ya klinik nəticələr bu tədqiqatda test edilməmişdir.

Akut işemik insult və NET yaranması

Akut işemik insult (AIS), beyin damarının tıxanması nəticəsində müəyyən beyin bölgələrinə qan və oksigen axınının yetərsiz qalması ilə yaranan akut nevroloji mənzərədir. İnsultdan sonrakı zədə yalnız ilkin damar tıxanmasına bağlı deyil; iltihab, oksidativ stress, endotel zədəsi, tromboz və immun hüceyrələrinin aktivləşməsi ikincili toxuma zədəsini böyüdə bilər.

Neytrofil Hüceyrəxarici Tələləri (NETs) nədir?

Neytrofil hüceyrəxarici tələləri aktivləşmiş neytrofillər tərəfindən hüceyrədən kənara buraxılan, dekondensasiya olunmuş xromatin lifləri üzərinə histonlar və qranul zülallarının bağlandığı torabənzər strukturlardır. NETs infeksiya müdafiəsində fizioloji funksiya görə bilər; lakin akut işemik insultda həddindən artıq NET yaranması trombosit və eritrositlərin tutulmasını, mikrovaskulyar tıxanmanı, qan-beyin baryeri zədəsini və iltihabi cavabı artıra bilən patoloji prosesə çevrilə bilər.

Mənbənin siçovul MCAO modelində infarkt bölgəsindəki serebral damarların içində H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ strukturlar NET kimi müəyyən edilmişdir. Mənbənin 25-ci səhifəsindəki immunofloresan görüntülərində bu strukturların bəzi kiçik damarların lümenini demək olar ki, doldura bildiyi göstərilir. Sham qrupunda isə damar quruluşu açıq qalmış və nəzərəçarpan NET yaranması görülməmişdir.

TQTMD nədir?

Tiaoqi Tongmai Decoction mənbədə yeddi komponentdən ibarət ənənəvi bitki/hayvan mənşəli formul kimi təsvir edilmişdir: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) və Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Ümumi mənbə gündəlik insan dozası 60 g olaraq verilmişdir. Siçovul ekvivalent orta dozası bədən səthi sahəsi çevrilməsinə görə 6,17 g xam dərman/kg hesablanmışdır. Aşağı doza 3,09 g/kg, yüksək doza 12,34 g/kg kimi müəyyən edilmişdir.

Formulyasiya 10 həcm su içində 30 dəqiqə saxlanmış, 30 dəqiqə qaynadılmış və süzülmüş; qalan material səkkiz həcm su ilə 20 dəqiqə yenidən qaynadılmışdır. Birləşdirilən süzüntülər 60 °C su hamamında aşağı, orta və yüksək doza üçün müvafiq olaraq 0,154, 0,309 və 0,617 g xam dərman/mL konsentrasiyalarına qədər qatılaşdırılmışdır.

TQTMD-nin kimyəvi xarakterizasiyası

Formulyasiyanın kimyəvi tərkibi UPLC–Q Exactive Plus yüksək ayırdetməli kütlə spektrometriyası ilə araşdırılmışdır. Müsbət və mənfi ion rejimlərində m/z 75–1050 aralığında məlumat toplanmış, ayırdetmə 70.000 olaraq tənzimlənmişdir. Yüksək enerjili toqquşma dissosiasiyası 20, 30 və 40 eV səviyyələrində həyata keçirilmişdir. Xam spektrlər MSDIAL ilə işlənmiş və metabolit kimlikləri dəqiq kütlə ilə MS/MS parçalanma spektrlərindən istifadə edilərək TCM verilənlər bazaları ilə uyğunlaşdırılmışdır.

Mənbədə təmsilçi komponentlər arasında quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid və resveratrol qeyd edilmişdir. Tədqiqat bu birləşmələrin heç birini TQTMD-nin tək aktiv təsiredici maddəsi kimi müəyyən etmir.

Mendel randomizasiyası bu tədqiqatda nə üçün istifadə edildi?

Mendel randomizasiyası genetik variantları alət dəyişəni kimi istifadə edərək müşahidə əlaqələrindəki qarışdırıcı amilləri və əks səbəbiyyət riskini azaltmağı hədəfləyən səbəbiyyət çıxarımı üsuludur. Bu tədqiqatda NET ilə əlaqəli genlər məruz qalma, işemik insult isə nəticə kimi götürülmüş; məqsəd hansı NET əlaqəli amillərin işemik insult riski ilə genetik səviyyədə tutarlı səbəbiyyət əlaqəsi göstərə biləcəyini müəyyən etmək olmuşdur.

GSE16561 təlim verilənlər dəstində 39 işemik insult xəstəsi və 24 sağlam nəzarətin tam periferik qan nümunələri istifadə edilmişdir. GSE22255 doğrulama verilənlər dəstində isə 20 işemik insult xəstəsi və 20 sağlam nəzarətdən periferik qan mononüvəli hüceyrələri vardır.

GSE16561 analizində düzəldilmiş P < 0,05 və |log₂FC| > 1 hədləri istifadə edilmişdir. Ümumilikdə 476 fərqli ekspressiya olunan gen müəyyən edilmiş; bunların 364-ü yuxarı, 112-si aşağı tənzimlənmişdir. NET əlaqəli gen dəsti ilə kəsişmə nəticəsində 34 DE-NET geni əldə edilmişdir.

MR üçün SNP seçimində genom üzrə əhəmiyyətlilik P < 5 × 10⁻⁸, bağlantı tarazsızlığı üçün r² < 0,001 və 10.000 kb clumping pəncərəsi istifadə edilmişdir. Palindromik və ya uyğunsuz allellərə sahib SNP-lər çıxarılmışdır.

Beş üsul tətbiq edilmişdir: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode və weighted mode. IVW ilkin analiz kimi müəyyən edilmiş, əhəmiyyətlilik həddi P < 0,05 götürülmüşdür. Heterogenlik Cochran Q testi ilə, yönlü pleiotropiya MR-Egger intercept ilə və ayrı-ayrı SNP təsirləri leave-one-out analizi ilə qiymətləndirilmişdir.

NOX2–MPO oxu NET yaranmasında hansı rol oynayır?

Mənbənin mexanistik çərçivəsində NOX2 aktivləşməsi reaktiv oksigen növlərinin istehsalını artıran yuxarı axın prosesidir; MPO isə neytrofil qranullarından buraxılan və NETosis zamanı xromatinin yenidən təşkili ilə NET yaranmasına töhfə verən fermentativ komponentdir. Tədqiqat TQTMD-dən sonra NOX2 kompleksi ilə əlaqəli genlərin və MPO-nun aşağı tənzimlənməsini azalan H3Cit/MPO markerləri və daha az NET yaranması ilə birlikdə müşahidə edərək NOX2–MPO oxunu mərkəzi mexanizm kimi təklif edir.

Transkriptomik analiz üçün Sham, MCAO və MCAO + TQTMD qruplarından hər birində üç siçovulun infarkt toxuması toplanmışdır. Poly(A)+ mRNA zənginləşdirilmiş, təxminən 300 bp fraqmentlərə ayrılmış və təxminən 450 bp kitabxanalar yaradılmışdır. Paired-end PE150 sekvensləmə Illumina NovaSeq 6000 ilə aparılmışdır.

Xam oxumalar Fastp v0.23.2 ilə təmizlənmiş, mRatBN7.2 referans genomuna HISAT2 v2.2.1 ilə hizalanmış, StringTie v2.2.1 ilə transkript montajı və miqdarlandırma aparılmışdır. Diferensial ekspressiya DESeq2 v1.36.0 ilə |log₂FC| > 1 və Benjamini-Hochberg padj < 0,05 hədləri altında qiymətləndirilmişdir.

MCAO–Sham müqayisəsində 3571 DEG müəyyən edilmişdir: 2467 yuxarı, 1104 aşağı tənzimlənmişdir. TQTMD–MCAO müqayisəsində isə 427 DEG vardır; 27 gen yuxarı, 400 gen aşağı tənzimlənmişdir.

TQTMD-dən sonra aşağı tənzimlənən NET əlaqəli mühüm genlərdən bəziləri mənbədə belə bildirilmişdir:

Siçovul MCAO modeli

Tədqiqatda 8 həftəlik, 250 ± 20 g ağırlığında erkək Sprague-Dawley siçovulları istifadə edilmişdir. Daimi orta serebral arteriya okklüziyası rekanalizasiya təmin olunmayan AIS patofiziologiyasını modelləşdirmək və reperfuziya zədəsini NET yaranması qiymətləndirməsindən ayırmaq məqsədilə seçilmişdir.

Siçovullar %3 izofluranla anesteziyaya alınmışdır. Sağ ümumi karotid, xarici karotid və daxili karotid arteriyaları açığa çıxarılmış; xarici karotid bağlandıqdan sonra 0,285 mm diametrli poly-L-lysine örtüklü neylon filament CCA üzərindən ICA içinə təxminən 18,5 ± 0,5 mm irəlilədilmişdir. Bədən temperaturu 37 °C-də saxlanılmışdır.

Müalicələr MCAO-dan 2 saat sonra başladılmışdır. TQTMD oral qavajla 20 mL/kg həcmdə verilmişdir. Edaravone müqayisə qrupuna 3 mg/kg venadaxili tətbiq edilmişdir. MPO inhibitoru PF-1355 isə 50 mg/kg intraperitoneal olaraq MCAO-dan 2 saat sonra başlayıb yeddi gün boyunca gündə bir dəfə verilmişdir.

Nevroloji və histoloji qiymətləndirmə

Nevroloji funksiya modifikasiya olunmuş Nevroloji Şiddət Skoru (mNSS) ilə 24 saat, 72 saat və 7-ci gündə ölçülmüşdür. Şkala 0–18 arasındadır və yüksək skor daha ağır nevroloji defisiti ifadə edir.

Serebral infarkt 2 mm qalınlığında koronal beyin kəsiklərində %2 TTC boyaması ilə ölçülmüş və qarşı hemisferə görə faiz olaraq bildirilmişdir. Histopatoloji qiymətləndirmə H&E boyaması ilə aparılmışdır.

Mənbənin ilk nəticələr dəstində orta və yüksək doza TQTMD infarkt həcmini MCAO model qrupuna nisbətən əhəmiyyətli şəkildə azaltmışdır. Orta dozanın klinik ekvivalent dozaya daha yaxın və təsirinin sabit olması səbəbilə sonrakı mexanizm təcrübələrində 6,17 g/kg orta doza istifadə edilmişdir.

Tədqiqatın üsulu və tapıntıları

MPO inhibisiyası NET yaranmasına təsir edirmi?

MPO-nun mexanistik rolunu test etmək məqsədilə PF-1355 istifadə edilmişdir. Yeddi günlük MPO inhibisiyası infarkt korteksindəki H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET strukturlarını və parenximada NET infiltrasiyasını azaltmışdır. Western blot analizində H3Cit zülalı azalmışdır.

MPO inhibitoru verilən siçovullarda MCAO qrupuna nisbətən 3-cü və 7-ci gün mNSS skorları daha aşağı və yeddi günlük sağqalım daha yüksək bildirilmişdir. Model qrupunun TTC ilə ölçülən infarkt həcmi mənbədə %22,1 ± 3,9 olaraq verilmiş və PF-1355-dən sonra əhəmiyyətli şəkildə azaldığı bildirilmişdir.

Bu təcrübə MPO aktivliyinin basqılanması ilə daha az NET yaranması və daha aşağı akut beyin zədəsi arasında eksperimental əlaqə təmin edir. Bununla belə, nəticə yalnız istifadə edilən MCAO siçovul modeli və təcrübə şərtləri üçün keçərlidir.

TQTMD-nin siçovul beynindəki təsirləri

Yeddi günlük TQTMD müalicəsindən sonra infarkt bölgəsindəki kortikal damarların içində olan H3Cit⁺MPO⁺ NET strukturlarında azalma görülmüşdür. Mənbənin 29-cu və 30-cu səhifələrindəki immunofloresan və Western blot məlumatları TQTMD-nin MPO, H3Cit və NOX2 zülal səviyyələrini azaltdığını göstərir.

qRT–PCR analizində NOX2 və MPO mRNA səviyyələri MCAO + TQTMD qrupunda model qrupundan əhəmiyyətli dərəcədə aşağı tapılmışdır. Buna qarşılıq PF-1355, NOX2 və ya MPO transkript səviyyələrində əhəmiyyətli dəyişiklik yaratmamışdır. Bu fərq TQTMD-nin yalnız MPO ferment aktivliyinə deyil, daha yuxarı axındakı transkripsion proseslərə də təsir edə biləcəyi şərhinin əsasını təşkil etmişdir.

TQTMD verilən siçovullarda yeddinci gün mNSS skoru və infarkt həcmi də MCAO qrupuna nisbətən azalmışdır. Mənbə bu dəyişiklikləri PF-1355 qrupu ilə müqayisə edilə bilən səviyyədə təsvir edir.

Hüceyrə təcrübəsinin dizaynı

İnsan promiyelositik leykemiya hüceyrə xətti HL-60, %1,25 DMSO ehtiva edən mühitdə beş gün boyunca neytrofiləbənzər fenotipə diferensiasiya etdirilmişdir. Oksigen-qlükoza çatışmazlığı üçün hüceyrələr qlükoza ehtiva etməyən IMDM mühitinə alınmış və %1 O2, %5 CO2, %94 N2 atmosferində 4 saat inkubasiya edilmişdir.

Eyni zamanda 100 nM PMA tətbiq edilərək NOX2 asılı NETosis stimullaşdırılmışdır. NOX2 inhibitoru gp91ds-tat üçün hüceyrələr 2 μM inhibitorla 30 dəqiqə ön inkubasiyaya məruz qoyulmuşdur.

TQTMD-medike serum hazırlanarkən siçovullara üç gün boyunca gündə bir dəfə 6,17 g/kg TQTMD verilmiş; son dozadan bir saat sonra serum əldə edilmişdir. Hüceyrə canlılığı təcrübələrində %0, %5, %10, %15, %20, %25 və %30 konsentrasiyalar test edilmiş və mənbədə ən yüksək hüceyrə canlılığı %10 TQTMD-medike serumda görülmüşdür.

In vitro NET nəticələri

OGD + PMA tətbiqi SYTOX Green ilə görünə bilən sıx hüceyrəxarici tor strukturları yaratmışdır. %10 TQTMD-medike serum bu NET buraxılışını azaltmışdır. Mənbənin 32-ci və 51-ci səhifələrindəki görüntülərdə TQTMD qrupunda SYTOX Green siqnalı ilə MPO⁺H3Cit⁺ NET strukturları model qrupundan daha az görünür.

Western blot analizində OGD + PMA NOX2, MPO və H3Cit zülal ekspressiyasını artırmış; TQTMD-medike serum bunları azaltmışdır. qRT–PCR ilə NOX2 və MPO mRNA səviyyələrində də azalma bildirilmişdir. gp91ds-tat NOX2 inhibitoru NET yaranmasını azaltmış, lakin NOX2 mRNA səviyyəsini əhəmiyyətli şəkildə dəyişdirməmişdir.

NOX2–MPO–NET mexanizm zənciri

1. Akut işemik şərtlər neytrofillərin aktivləşməsini artırır.
2. NOX2 kompleksi reaktiv oksigen növlərinin yaranmasına töhfə verir.
3. MPO aktivləşməsi və buraxılması NETosis prosesinin irəliləməsini müşayiət edir.
4. H3Cit, MPO və NE ehtiva edən xromatin torları NET strukturları kimi damar içinə buraxılır.
5. Həddindən artıq intravaskulyar NET yığılması mikrovaskulyar tıxanma və iltihabi zədə ilə əlaqəlidir.
6. Mənbə təcrübələrində TQTMD, NOX2 və MPO göstəricilərinin azalması ilə birlikdə daha az NET yaranması göstərmişdir.

Bu zəncirin ilk beş mərhələsinin hamısının TQTMD tərəfindən tək, xətti və birbaşa idarə edildiyi sübut edilmiş deyil. Tədqiqatın təqdim etdiyi sübut TQTMD tətbiqinin bu ox üzrə molekulyar göstəricilər və NET miqdarı ilə birlikdə dəyişdiyini və inhibitor təcrübələrinin MPO/NOX2-nin mexanistik rolunu dəstəklədiyini göstərir.

Tədqiqatın dəstəklədiyi nəticələr

• Akut MCAO siçovul modelində infarkt bölgəsi damarlarında NET yığılması artmışdır.
• MPO və H3Cit səviyyələri MCAO-dan sonra yüksəlmişdir.
• MPO-nun farmakoloji inhibisiyası NET yaranmasını azaltmış və akut nevroloji nəticələri yaxşılaşdırmışdır.
• TQTMD siçovul beynində NOX2, MPO və H3Cit göstəricilərini azaltmışdır.
• TQTMD tətbiqi NET yaranmasında azalma, daha aşağı infarkt həcmi və daha yaxşı mNSS nəticələri ilə birlikdə görülmüşdür.
• OGD + PMA hüceyrə modelində TQTMD-medike serum NOX2, MPO, H3Cit və NET yaranmasını azaltmışdır.
• MR analizində MMP9, SIGLEC5 və MPO üçün işemik insultla əhəmiyyətli genetik əlaqələr bildirilmişdir.

Tədqiqatın dəstəkləmədiyi nəticələr

• TQTMD-nin akut işemik insult xəstələrində klinik olaraq təsirli olduğu bu tədqiqatla sübut edilməmişdir.
• TQTMD-nin tromboliz və ya mexaniki trombektomiyanın yerinə istifadə edilə biləcəyi göstərilməmişdir.
• İnsanlarda təhlükəsiz doza müəyyən edilməmişdir.
• Uzunmüddətli nevroloji yaxşılaşma, koqnitiv funksiya və ya gec dövr fəsadları qiymətləndirilməmişdir.
• NOX2–MPO basqılanmasının hansı tək TQTMD komponentindən qaynaqlandığı müəyyən edilməmişdir.
• Formulyasiyanın təsirinin tək bir molekul yerinə çoxlu komponent sinerjisinə bağlı olub-olmadığı həll edilməmişdir.
• Avropa mənşəli GWAS məlumatlarının digər populyasiyalara birbaşa ümumiləşdirilə bilməsi göstərilməmişdir.
• İnsan genetikası ilə siçovul təcrübə nəticələrinin eyni bioloji təsir böyüklüyünə sahib olduğu deyilə bilməz.

Statistik analiz

Çoxlu qrup müqayisələrində tək istiqamətli ANOVA; ikili müqayisələrdə LSD-t və ya Dunnett testi və ardınca Tukey post hoc yanaşması istifadə edilmişdir. Eksperimental məlumatlar ən azı üç müstəqil təkrardan əldə edilmişdir. Mənbədə statistik işarələmə *P < 0,05, **P < 0,01 və ***P < 0,001 olaraq müəyyən edilmişdir.

Tədqiqatın əsas məhdudiyyətləri

Populyasiya və növ fərqi: MR üçün istifadə olunan GWAS məlumatları Avropa populyasiyalarından əldə edilmişdir; mexanistik təcrübələr isə Sprague-Dawley siçovullarında aparılmışdır. İnsan populyasiyaları ilə heyvan modeli arasındakı genetik və bioloji fərqlər nəticələrin ümumiləşdirilə bilməsini məhdudlaşdırır.

Çoxkomponentli formulyasiya: TQTMD mürəkkəb preparatdır. LC–MS ilə müxtəlif komponentlər aşkar edilsə də, NOX2–MPO–NET təsirinin tək bir molekuldan, yoxsa bir neçə komponentin sinerjisindən qaynaqlandığı göstərilməmişdir.

Qısa izləmə: Təcrübələr akut fazaya, təxminən yeddi günlük dövrə fokuslanmışdır. Uzunmüddətli sağqalım, nevroloji funksiya, koqnitiv pozuntu və digər post-stroke fəsadlar qiymətləndirilməmişdir.

Klinik doğrulamanın olmaması: Tədqiqat insan iştirakçısı üzərində TQTMD müdaxiləsi ehtiva edən klinik araşdırma deyil. İnsanlarda effektivlik və təhlükəsizlik üçün ayrıca klinik tədqiqat tələb olunur.

Mənbə və üsul qeydi

Orijinal başlıq: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Müəlliflər: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Məsul müəlliflər: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui və Xiang-Qing Xu.

Qurumlar: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Mənbə növü: Araşdırma preprinti.

Resenziya vəziyyəti: Resenziyadan keçməmişdir. Mənbə sənədinin hər səhifəsində “This preprint research paper has not been peer reviewed” ifadəsi mövcuddur.

Platforma: SSRN.

Rəsmi preprint qeydi: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: Mənbə sənədində DOI bildirilməmişdir.

Jurnal: Mənbə sənədində resenziyalı jurnal nəşri göstərilməmişdir.

Təcrübə etikası: Heyvan təcrübələri Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee tərəfindən SDSZYYAWE20250903002 təsdiq nömrəsi ilə təsdiqlənmişdir. Tədqiqatda insan iştirakçı və ya insan toxuması istifadə edilmədiyi bildirilmişdir.

Heyvanlar: 8 həftəlik erkək Sprague-Dawley siçovulları, 250 ± 20 g.

Hüceyrə modeli: HL-60 insan promiyelositik leykemiya hüceyrə xəttindən yaradılan neytrofiləbənzər hüceyrələr.

Əsas üsullar: GEO diferensial gen ekspressiyası analizi; Mendel randomizasiyası; GWAS; RNA-seq/transkriptomika; daimi MCAO siçovul modeli; TTC; H&E; immunofloresan; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; OGD + PMA NETosis modeli.

Maliyyələşmə: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Maraqlar toqquşması: Müəlliflər maraqlar toqquşmasının olmadığını bəyan etmişdir.

Məlumat əlçatanlığı: Məlumatların əsaslandırılmış tələb əsasında məsul müəllifdən əldə edilə biləcəyi bildirilmişdir.

Əsas elmi sərhəd: Tədqiqatın nəticələri preklinik səviyyədədir. Siçovul və hüceyrə təcrübələrində müşahidə olunan neyroprotektiv təsirlər TQTMD-nin insan akut işemik insult xəstələrində təsirli və ya təhlükəsiz bir müalicə olduğunun sübutu deyil.