Tiaoqi Tongmai Decoction (TQTMD) формулятсияи бисёрҷузъии тибби анъанавии чинӣ мебошад, ки дар ин таҳқиқот потенсиали тағйир додани осеби иммунотромботикӣ ва илтиҳобиро пас аз сактаи ишемикии шадид меомӯзад. Муҳаққиқон омилҳои патогении марбут ба ташаккули домҳои берунҳуҷайравии нейтрофилҳо (neutrophil extracellular traps, NETs)-ро бо рандомизатсияи Менделӣ скрининг карда, бо транскриптомикаи бофтаи мағзи калламуш роҳҳои молекулавиеро, ки TQTMD ба онҳо таъсир мерасонад, таҳқиқ намудаанд ва механизми пешниҳодшударо ҳам дар модели калламушии басташавии артерияи миёнаи мағз (MCAO) ва ҳам дар ҳуҷайраҳои нейтрофилмонанди аз HL-60 ҳосилшуда, ки бо OGD + PMA ангехта шудаанд, ба таври таҷрибавӣ санҷидаанд. Дар манбаъ гузориш мешавад, ки табобати TQTMD экспрессияи NOX2 ва MPO-ро паст мекунад, ташаккули NET-ро кам мекунад, ҳаҷми инфаркти мағзиро хурд менамояд ва бо беҳбудии барвақти неврологӣ дар калламушҳо алоқаманд аст. Бо вуҷуди ин, таҳқиқот аз баррасии ҳамсолон нагузаштааст ва натиҷаҳо самаранокии клиникиро дар инсонҳо исбот намекунанд.

Дар бахши рандомизатсияи Менделии таҳқиқот, 476 гени фарқкунанда экспрессияшаванда, ки бо сактаи ишемикӣ алоқаманданд, бо генҳои маълуми марбут ба NET қиёс карда шуда, 34 гени фарқкунанда экспрессияшавандаи марбут ба NET муайян гардидааст. Дар таҳлили MR-и ин 34 номзад MMP9, SIGLEC5 ва MPO робитаи аҳамиятнок нишон додаанд. Дар таҳлили ибтидоии IVW барои MMP9 β = 0,079 ва P < 0,001; барои SIGLEC5 β = −0,086 ва P = 0,004; барои MPO β = 0,041 ва P = 0,017 гузориш шудааст.

Дар таҳлили транскриптомӣ дар гурӯҳи MCAO нисбат ба гурӯҳи Sham 3571 гени фарқкунанда экспрессияшаванда ошкор шудааст, дар ҳоле ки пас аз истифодаи TQTMD нисбат ба MCAO 427 ген фарқкунанда экспрессия шудааст. Пас аз TQTMD дар равандҳои марбут ба ташаккули NET, фаъолшавии нейтрофилҳо, истеҳсоли намудҳои реактивии оксиген ва стресси оксидативӣ фурӯнишонӣ мушоҳида шудааст; дар генҳое, ки дар ташаккули NET нақш доранд, аз ҷумла Rac2, Cyba, Ncf2, Cybb, Ncf1 ва MPO, пасттанзимшавии аҳамиятнок гузориш шудааст.

Тафсири асосии механистии таҳқиқот ин аст, ки TQTMD метавонад тавассути фурӯ нишондани меҳвари NOX2–MPO ташаккули аз ҳад зиёди NET-ро кам карда, бо ин роҳ осеби шадиди ишемикии мағзро сабук намояд. Аммо ин тафсир пешниҳоде дар бораи механизми преклиникӣ мебошад, ки ба модели калламуш, модели ҳуҷайравӣ ва робитадиҳии транскриптомӣ такя мекунад. Нишон дода нашудааст, ки кадом ҷузъи ягонаи формулятсия барои таъсир масъул аст ва самаранокӣ, доза, бехатарии дарозмуддат ё натиҷаҳои клиникӣ дар инсонҳо дар ин таҳқиқот санҷида нашудаанд.

Сактаи ишемикии шадид ва ташаккули NET

Сактаи ишемикии шадид (AIS) ҳолати шадиди неврологист, ки дар натиҷаи баста шудани раги мағз ва нокифоя шудани ҷараёни хун ва оксиген ба минтақаҳои муайяни мағз ба вуҷуд меояд. Осеби пас аз сакта танҳо ба баста шудани аввалияи раг вобаста нест; илтиҳоб, стресси оксидативӣ, осеби эндотелий, тромбоз ва фаъолшавии ҳуҷайраҳои масуният метавонанд осеби дуюмдараҷаи бофтаро зиёд кунанд.

Домҳои берунҳуҷайравии нейтрофилҳо (NETs) чистанд?

Домҳои берунҳуҷайравии нейтрофилҳо сохторҳои шабакамонанд мебошанд, ки аз ҷониби нейтрофилҳои фаъолшуда ба берун аз ҳуҷайра озод мешаванд ва дар онҳо гистонҳо ва сафедаҳои гранулавӣ ба нахҳои хроматини деконденсатсияшуда пайваст мешаванд. NETs метавонад дар ҳифз аз сироят вазифаи физиологӣ иҷро кунад; аммо дар сактаи ишемикии шадид ташаккули аз ҳад зиёди NET метавонад ба раванди патологие табдил ёбад, ки нигоҳдории тромбоцитҳо ва эритроситҳо, басташавии микроваскулярӣ, осеби монеаи хун-мағз ва посухи илтиҳобиро афзоиш медиҳад.

Дар модели MCAO-и калламушии манбаъ сохторҳои H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ дар дохили рагҳои мағзии минтақаи инфаркт ҳамчун NET таъриф шудаанд. Дар тасвирҳои иммунофлуоресцентии саҳифаи 25-и манбаъ нишон дода мешавад, ки ин сохторҳо метавонанд люмени баъзе рагҳои хурдро қариб пур кунанд. Дар гурӯҳи Sham бошад, сохтори раг кушода боқӣ монда, ташаккули равшани NET мушоҳида нашудааст.

TQTMD чист?

Tiaoqi Tongmai Decoction дар манбаъ ҳамчун формулятсияи анъанавии гиёҳӣ/ҳайвонотӣ бо ҳафт ҷузъ тавсиф шудааст: Rhei Radix et Rhizoma (Dahuang), Aurantii Fructus Immaturus (Zhishi), Trichosanthis Fructus (Gualou), Arisaema cum Bile (Dannanxing), Eupolyphaga Steleophaga (Tubiechong), Hirudo (Shuizhi) ва Angelicae Sinensis Radix (Danggui).

Миқдори умумии рӯзонаи инсон дар манбаъ 60 g дода шудааст. Дозаи миёнаи муодили калламуш аз рӯи табдили сатҳи бадан 6,17 g доруи хом/kg ҳисоб карда шудааст. Дозаи паст 3,09 g/kg ва дозаи баланд 12,34 g/kg муайян шудааст.

Формулятсия дар 10 ҳаҷм об 30 дақиқа нигоҳ дошта, 30 дақиқа ҷӯшонида ва соф карда шудааст; маводи боқимонда бо ҳашт ҳаҷм об 20 дақиқа дубора ҷӯшонида шудааст. Софиҳои якҷошуда дар ваннаи обии 60 °C барои дозаи паст, миёна ва баланд мутаносибан то консентратсияҳои 0,154, 0,309 ва 0,617 g доруи хом/mL ғафс карда шудаанд.

Характеризатсияи кимиёвии TQTMD

Таркиби кимиёвии формулятсия бо масс-спектрометрияи баландҳалли UPLC–Q Exactive Plus таҳқиқ шудааст. Дар режимҳои иони мусбат ва манфӣ маълумот дар фосилаи m/z 75–1050 ҷамъоварӣ шуда, ҳалкунандагӣ 70.000 танзим шудааст. Диссоциатсияи бархӯрди энергияи баланд дар сатҳҳои 20, 30 ва 40 eV анҷом дода шудааст. Спектрҳои хом бо MSDIAL коркард шуда, шахсияти метаболитҳо бо истифода аз массаи дақиқ ва спектрҳои порагардиши MS/MS бо пойгоҳҳои додаҳои TCM мувофиқ карда шудаанд.

Дар манбаъ аз ҷумлаи ҷузъҳои намоянда quercetin, luteolin, baicalein, rosmarinic acid ва resveratrol зикр шудаанд. Таҳқиқот ҳеҷ яке аз ин пайвастҳоро ҳамчун моддаи ягонаи фаъоли TQTMD таъриф намекунад.

Рандомизатсияи Менделӣ дар ин таҳқиқот барои чӣ истифода шуд?

Рандомизатсияи Менделӣ усули хулосабарории сабабист, ки бо истифода аз вариантҳои генетикӣ ҳамчун тағйирёбандаҳои асбобӣ коҳиш додани омилҳои омехтакунанда ва хатари сабабияти баръаксро дар робитаҳои мушоҳидавӣ ҳадаф мегирад. Дар ин таҳқиқот генҳои марбут ба NET ҳамчун таъсирпазирӣ ва сактаи ишемикӣ ҳамчун натиҷа гирифта шудаанд; ҳадаф муайян кардани он буд, ки кадом омилҳои марбут ба NET метавонанд бо хатари сактаи ишемикӣ дар сатҳи генетикӣ робитаи сабабии муттасил нишон диҳанд.

Дар маҷмӯаи додаҳои омӯзишии GSE16561 намунаҳои хуни пурраи периферии 39 бемори сактаи ишемикӣ ва 24 назорати солим истифода шудаанд. Дар маҷмӯаи додаҳои тасдиқии GSE22255 бошад, ҳуҷайраҳои мононуклеарии хуни периферӣ аз 20 бемори сактаи ишемикӣ ва 20 назорати солим мавҷуданд.

Дар таҳлили GSE16561 ҳадҳои P-и ислоҳшуда < 0,05 ва |log₂FC| > 1 истифода шудаанд. Дар маҷмӯъ 476 гени фарқкунанда экспрессияшаванда муайян шудааст; аз онҳо 364-то боло ва 112-то поён танзим шудаанд. Дар натиҷаи буриш бо маҷмӯи генҳои марбут ба NET 34 гени DE-NET ба даст омадааст.

Дар интихоби SNP барои MR аҳамиятнокии саросари геном P < 5 × 10⁻⁸, барои нобаробарии пайвастагӣ r² < 0,001 ва равзанаи clumping-и 10.000 kb истифода шудааст. SNP-ҳои дорои аллелҳои палиндромӣ ё номувофиқ хориҷ карда шудаанд.

Панҷ усул татбиқ шудааст: inverse-variance weighted (IVW), MR-Egger, weighted median, simple mode ва weighted mode. IVW ҳамчун таҳлили ибтидоӣ муайян шуда, ҳади аҳамиятнокӣ P < 0,05 гирифта шудааст. Гетерогенӣ бо санҷиши Cochran Q, плейотропияи самтдор бо MR-Egger intercept ва таъсирҳои ҷудогонаи SNP бо таҳлили leave-one-out арзёбӣ шудаанд.

Меҳвари NOX2–MPO дар ташаккули NET чӣ нақш дорад?

Дар чаҳорчӯби механистии манбаъ фаъолшавии NOX2 раванди болоҷараёнест, ки истеҳсоли намудҳои реактивии оксигенро зиёд мекунад; MPO бошад, ҷузъи ферментативиест, ки аз гранулаҳои нейтрофилҳо озод мешавад ва ҳангоми NETosis ба бозсозии хроматин ва ташаккули NET мусоидат мекунад. Таҳқиқот пас аз TQTMD пасттанзимшавии генҳои марбут ба комплекси NOX2 ва MPO-ро якҷо бо нишонаҳои коҳишёфтаи H3Cit/MPO ва ташаккули камтари NET мушоҳида карда, меҳвари NOX2–MPO-ро ҳамчун механизми марказӣ пешниҳод мекунад.

Барои таҳлили транскриптомӣ аз гурӯҳҳои Sham, MCAO ва MCAO + TQTMD аз ҳар кадом се калламуш бофтаи инфаркт ҷамъоварӣ шудааст. Poly(A)+ mRNA ғанӣ карда шуда, ба фрагментҳои тақрибан 300 bp ҷудо гардидааст ва китобхонаҳои тақрибан 450 bp сохта шудаанд. Секвениронии paired-end PE150 бо Illumina NovaSeq 6000 анҷом дода шудааст.

Хонишҳои хом бо Fastp v0.23.2 поксозӣ шуда, ба геноми истинодии mRatBN7.2 бо HISAT2 v2.2.1 ҳамоҳанг карда шудаанд, монтаж ва миқдоргузории транскрипт бо StringTie v2.2.1 иҷро шудааст. Экспрессияи дифференсиалӣ бо DESeq2 v1.36.0 таҳти ҳадҳои |log₂FC| > 1 ва Benjamini-Hochberg padj < 0,05 арзёбӣ шудааст.

Дар муқоисаи MCAO–Sham 3571 DEG муайян шудааст: 2467 боло ва 1104 поён танзим шудаанд. Дар муқоисаи TQTMD–MCAO бошад, 427 DEG вуҷуд дорад; 27 ген боло ва 400 ген поён танзим шудаанд.

Баъзе аз генҳои муҳими марбут ба NET, ки пас аз TQTMD поён танзим шудаанд, дар манбаъ чунин гузориш шудаанд:

Модели MCAO-и калламуш

Дар таҳқиқот калламушҳои наринаи 8-ҳафтаинаи Sprague-Dawley бо вазни 250 ± 20 g истифода шудаанд. Басташавии доимии артерияи миёнаи мағз барои моделсозии патофизиологияи AIS, ки дар он реканализатсия таъмин намешавад, ва барои ҷудо кардани осеби реперфузия аз арзёбии ташаккули NET интихоб шудааст.

Калламушҳо бо %3 изофлуран беҳуш карда шудаанд. Артерияҳои каротиди умумии рост, каротиди берунӣ ва каротиди дохилӣ ошкор карда шудаанд; пас аз бастани каротиди берунӣ, филаменти нейлонии бо poly-L-lysine пӯшонидашуда бо диаметри 0,285 mm аз CCA ба дохили ICA тақрибан 18,5 ± 0,5 mm пеш бурда шудааст. Ҳарорати бадан дар 37 °C нигоҳ дошта шудааст.

Табобатҳо 2 соат пас аз MCAO оғоз шудаанд. TQTMD бо гаважи даҳонӣ дар ҳаҷми 20 mL/kg дода шудааст. Ба гурӯҳи муқоисавии Edaravone 3 mg/kg дохиливаридӣ татбиқ шудааст. Ингибитори MPO PF-1355 бошад, бо 50 mg/kg ба таври дохилишикамӣ аз 2 соат пас аз MCAO оғоз шуда, ҳафт рӯз ҳар рӯз як маротиба дода шудааст.

Арзёбии неврологӣ ва гистологӣ

Функсияи неврологӣ бо Холи тағйирёфтаи шиддати неврологӣ (mNSS) дар 24 соат, 72 соат ва рӯзи 7 чен карда шудааст. Миқёс аз 0 то 18 аст ва холҳои баландтар дефицити неврологии вазнинтарро ифода мекунанд.

Инфаркти мағзӣ дар буришҳои короналии 2 mm-и мағз бо рангкунии %2 TTC чен карда шуда, нисбат ба нимкураи муқобил ҳамчун фоиз гузориш шудааст. Арзёбии гистопатологӣ бо рангкунии H&E анҷом дода шудааст.

Дар маҷмӯи аввалини натиҷаҳои манбаъ, дозаи миёна ва баландтари TQTMD ҳаҷми инфарктро нисбат ба гурӯҳи модели MCAO ба таври аҳамиятнок кам кардааст. Азбаски дозаи миёна ба дозаи муодили клиникӣ наздиктар ва таъсири он устувор буд, дар таҷрибаҳои минбаъдаи механизм дозаи миёнаи 6,17 g/kg истифода шудааст.

Усул ва бозёфтҳои таҳқиқот

Оё ингибитсияи MPO ба ташаккули NET таъсир мекунад?

Барои санҷидани нақши механистии MPO PF-1355 истифода шудааст. Ингибитсияи ҳафтрӯзаи MPO сохторҳои H3Cit⁺MPO⁺NE⁺ NET дар кортекси инфаркт ва инфилтратсияи паренхимавии NET-ро кам кардааст. Дар таҳлили Western blot сафедаи H3Cit паст шудааст.

Дар калламушҳое, ки ингибитори MPO гирифтаанд, нисбат ба гурӯҳи MCAO холҳои mNSS дар рӯзҳои 3 ва 7 пасттар ва зиндамонии ҳафтрӯза баландтар гузориш шудааст. Ҳаҷми инфаркти гурӯҳи модел, ки бо TTC чен шудааст, дар манбаъ %22,1 ± 3,9 дода шуда, баъд аз PF-1355 ба таври аҳамиятнок кам шудани он хабар дода шудааст.

Ин таҷриба байни фурӯнишонии фаъолияти MPO ва ташаккули камтари NET ҳамроҳ бо осеби шадиди мағзии пасттар робитаи таҷрибавӣ фароҳам мекунад. Бо вуҷуди ин, натиҷа танҳо барои модели калламушии MCAO ва шароити таҷрибавии истифодашуда эътибор дорад.

Таъсирҳои TQTMD дар мағзи калламуш

Пас аз табобати ҳафтрӯзаи TQTMD дар сохторҳои H3Cit⁺MPO⁺ NET, ки дар дохили рагҳои кортикалии минтақаи инфаркт ҷойгир буданд, коҳиш мушоҳида шудааст. Маълумоти иммунофлуоресцентӣ ва Western blot дар саҳифаҳои 29 ва 30-и манбаъ нишон медиҳанд, ки TQTMD сатҳҳои сафедавии MPO, H3Cit ва NOX2-ро паст мекунад.

Дар таҳлили qRT–PCR сатҳҳои mRNA-и NOX2 ва MPO дар гурӯҳи MCAO + TQTMD нисбат ба гурӯҳи модел ба таври аҳамиятнок паст ёфт шудаанд. Баръакс, PF-1355 дар сатҳҳои транскрипти NOX2 ё MPO тағйири аҳамиятнок ба вуҷуд наовардааст. Ин фарқ асоси тафсиреро ташкил додааст, ки TQTMD метавонад на танҳо ба фаъолияти ферментии MPO, балки ба равандҳои транскрипсионии болоҷараён низ таъсир расонад.

Дар калламушҳои TQTMDгирифта холҳои mNSS дар рӯзи ҳафтум ва ҳаҷми инфаркт низ нисбат ба гурӯҳи MCAO кам шудааст. Манбаъ ин тағйиротро дар сатҳи қобили муқоиса бо гурӯҳи PF-1355 тавсиф мекунад.

Тарҳи таҷрибаи ҳуҷайравӣ

Хати ҳуҷайраи лейкемияи промиелоситии инсон HL-60 дар муҳити дорои %1,25 DMSO дар давоми панҷ рӯз ба фенотипи нейтрофилмонанд дифференсиатсия шудааст. Барои маҳрумияти оксиген-глюкоза, ҳуҷайраҳо ба муҳити IMDM-и бе глюкоза гузаронида шуда, дар атмосфераи %1 O2, %5 CO2, %94 N2 4 соат инкубатсия шудаанд.

Ҳамзамон 100 nM PMA татбиқ шуда, NETosis-и вобаста ба NOX2 ангехта шудааст. Барои ингибитори NOX2 gp91ds-tat ҳуҷайраҳо бо 2 μM ингибитор 30 дақиқа пешинкубатсия карда шудаанд.

Ҳангоми омода кардани зардоби TQTMD-медикатсияшуда ба калламушҳо се рӯз ҳар рӯз як маротиба 6,17 g/kg TQTMD дода шуда, як соат пас аз дозаи охирин зардоб гирифта шудааст. Дар таҷрибаҳои зиндамонии ҳуҷайра консентратсияҳои %0, %5, %10, %15, %20, %25 ва %30 санҷида шудаанд ва дар манбаъ баландтарин зиндамонии ҳуҷайра дар %10 зардоби TQTMD-медикатсияшуда мушоҳида шудааст.

Натиҷаҳои NET дар in vitro

Истифодаи OGD + PMA сохторҳои зичи шабакамонанди берунҳуҷайравиро ба вуҷуд овардааст, ки бо SYTOX Green дида мешаванд. %10 зардоби TQTMD-медикатсияшуда ин озодшавии NET-ро кам кардааст. Дар тасвирҳои саҳифаҳои 32 ва 51-и манбаъ дар гурӯҳи TQTMD сигнали SYTOX Green ва сохторҳои MPO⁺H3Cit⁺ NET нисбат ба гурӯҳи модел камтар ба назар мерасанд.

Дар таҳлили Western blot OGD + PMA экспрессияи сафедаҳои NOX2, MPO ва H3Cit-ро зиёд кардааст; зардоби TQTMD-медикатсияшуда онҳоро кам кардааст. Бо qRT–PCR дар сатҳҳои mRNA-и NOX2 ва MPO низ коҳиш гузориш шудааст. Ингибитори NOX2 gp91ds-tat ташаккули NET-ро кам кардааст, аммо сатҳи mRNA-и NOX2-ро ба таври аҳамиятнок тағйир надодааст.

Занҷири механизми NOX2–MPO–NET

1. Шароити ишемикии шадид фаъолшавии нейтрофилҳоро зиёд мекунад.
2. Комплекси NOX2 ба ташаккули намудҳои реактивии оксиген мусоидат мекунад.
3. Фаъолшавӣ ва озодшавии MPO бо пешрафти раванди NETosis ҳамроҳӣ мекунад.
4. Шабакахои хроматини дорои H3Cit, MPO ва NE ҳамчун сохторҳои NET ба дохили раг озод мешаванд.
5. Ҷамъшавии аз ҳад зиёди NET-и дохилирагӣ бо басташавии микроваскулярӣ ва осеби илтиҳобӣ алоқаманд аст.
6. Дар таҷрибаҳои манбаъ TQTMD ҳамроҳ бо пастшавии нишондиҳандаҳои NOX2 ва MPO ташаккули камтари NET-ро нишон додааст.

Исбот нашудааст, ки ҳамаи панҷ қадами аввали ин занҷир аз ҷониби TQTMD ба таври ягона, хаттӣ ва мустақим назорат мешаванд. Далеле, ки таҳқиқот пешниҳод мекунад, нишон медиҳад, ки истифодаи TQTMD бо нишондиҳандаҳои молекулавии ин меҳвар ва миқдори NET ҳамзамон тағйир меёбад ва таҷрибаҳои ингибиторӣ нақши механистии MPO/NOX2-ро дастгирӣ мекунанд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ мекунад

• Дар модели калламушии MCAO-и шадид ҷамъшавии NET дар рагҳои минтақаи инфаркт зиёд шудааст.
• Сатҳҳои MPO ва H3Cit пас аз MCAO баланд шудаанд.
• Ингибитсияи фармакологии MPO ташаккули NET-ро кам карда, натиҷаҳои шадиди неврологиро беҳтар кардааст.
• TQTMD дар мағзи калламуш нишондиҳандаҳои NOX2, MPO ва H3Cit-ро кам кардааст.
• Истифодаи TQTMD бо коҳиши ташаккули NET, ҳаҷми пасттари инфаркт ва натиҷаҳои беҳтари mNSS ҳамроҳ дида шудааст.
• Дар модели ҳуҷайравии OGD + PMA зардоби TQTMD-медикатсияшуда NOX2, MPO, H3Cit ва ташаккули NET-ро кам кардааст.
• Дар таҳлили MR барои MMP9, SIGLEC5 ва MPO робитаҳои генетикии аҳамиятнок бо сактаи ишемикӣ гузориш шудаанд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ намекунад

• Бо ин таҳқиқот исбот нашудааст, ки TQTMD дар беморони сактаи ишемикии шадид аз ҷиҳати клиникӣ самаранок аст.
• Нишон дода нашудааст, ки TQTMD метавонад ба ҷойи тромболиз ё тромбэктомияи механикӣ истифода шавад.
• Дозаи бехатар дар инсонҳо муайян нашудааст.
• Беҳбудии неврологии дарозмуддат, функсияи когнитивӣ ё оқибатҳои дерҳангом арзёбӣ нашудаанд.
• Муайян нашудааст, ки фурӯнишонии NOX2–MPO аз кадом ҷузъи ягонаи TQTMD сарчашма мегирад.
• Ҳал нашудааст, ки таъсири формулятсия ба синергияи бисёрҷузъӣ вобаста аст ё ба як молекула.
• Умумиятпазирии мустақими маълумоти GWAS-и мансуб ба аврупоиҳо ба популясияҳои дигар нишон дода нашудааст.
• Гуфтан мумкин нест, ки генетикаи инсон ва натиҷаҳои таҷрибаҳои калламуш андозаи якхелаи таъсири биологӣ доранд.

Таҳлили оморӣ

Дар муқоисаҳои бисёргурӯҳӣ ANOVA-и яксамта; дар муқоисаҳои дугона санҷиши LSD-t ё Dunnett ва баъдан равиши Tukey post hoc истифода шудааст. Маълумоти таҷрибавӣ аз ҳадди ақал се такрори мустақил ба даст омадааст. Дар манбаъ нишонагузории оморӣ ҳамчун *P < 0,05, **P < 0,01 ва ***P < 0,001 таъриф шудааст.

Маҳдудиятҳои асосии таҳқиқот

Фарқи популятсия ва навъ: Маълумоти GWAS, ки барои MR истифода шудааст, аз популятсияҳои аврупоӣ гирифта шудааст; таҷрибаҳои механистӣ бошад дар калламушҳои Sprague-Dawley анҷом дода шудаанд. Фарқҳои генетикӣ ва биологӣ байни популятсияҳои инсонӣ ва модели ҳайвонот умумиятпазирии натиҷаҳоро маҳдуд мекунанд.

Формулятсияи бисёрҷузъӣ: TQTMD препарати мураккаб аст. Гарчанде ки бо LC–MS ҷузъҳои гуногун муайян шудаанд, нишон дода нашудааст, ки таъсири NOX2–MPO–NET аз як молекула ё аз синергияи якчанд ҷузъ сарчашма мегирад.

Пайгирии кӯтоҳ: Таҷрибаҳо ба фазаи шадид, тақрибан ба давраи ҳафтрӯза равона шудаанд. Зиндамонии дарозмуддат, функсияи неврологӣ, ихтилоли когнитивӣ ва дигар оқибатҳои post-stroke арзёбӣ нашудаанд.

Набудани тасдиқи клиникӣ: Таҳқиқот озмоиши клиникӣ бо дахолати TQTMD дар иштирокчиёни инсон нест. Барои самаранокӣ ва бехатарӣ дар инсонҳо таҳқиқоти клиникии алоҳида лозим аст.

Қайди манбаъ ва усул

Сарлавҳаи аслӣ: Tiaoqi Tongmai Decoction Exerts Neuroprotective Effects in Acute Ischemic Stroke by Inhibiting Neutrophil Extracellular Trap Formation through the NOX2–MPO Axis

Муаллифон: Yi-Ran Wang; Ya-Qing Gao; Kai-Xin Zhang; Zhen-Ling Liu; Feng-xian Hu; Wei Liu; Peng-Li Ding; Hong-Yun Wu; Wen-Qiang Cui; Xiang-Qing Xu.

Муаллифони масъул: Hong-Yun Wu, Wen-Qiang Cui ва Xiang-Qing Xu.

Муассисаҳо: First College of Clinical Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China; Department of Neurology, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, China.

Навъи манбаъ: Preprint-и таҳқиқотӣ.

Вазъи баррасӣ: Аз баррасии ҳамсолон нагузаштааст. Дар ҳар саҳифаи ҳуҷҷати манбаъ ибораи “This preprint research paper has not been peer reviewed” мавҷуд аст.

Платформа: SSRN.

Сабти расмии preprint: https://ssrn.com/abstract=6853881

DOI: Дар ҳуҷҷати манбаъ DOI гузориш нашудааст.

Журнал: Дар ҳуҷҷати манбаъ нашри маҷаллаи рецензияшуда нишон дода нашудааст.

Этикаи таҷриба: Таҷрибаҳои ҳайвонот аз ҷониби Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Experimental Animal Ethics Committee бо рақами тасдиқи SDSZYYAWE20250903002 тасдиқ шудаанд. Дар таҳқиқот истифода нашудани иштирокчии инсон ё бофтаи инсон зикр шудааст.

Ҳайвонот: Калламушҳои наринаи 8-ҳафтаинаи Sprague-Dawley, 250 ± 20 g.

Модели ҳуҷайравӣ: Ҳуҷайраҳои нейтрофилмонанд, ки аз хати ҳуҷайраи лейкемияи промиелоситии инсон HL-60 ҳосил шудаанд.

Усулҳои асосӣ: таҳлили экспрессияи дифференсиалии генҳои GEO; рандомизатсияи Менделӣ; GWAS; RNA-seq/транскриптомика; модели доимии MCAO-и калламуш; TTC; H&E; иммунофлуоресенсия; Western blot; ELISA; qRT–PCR; SYTOX Green; CCK-8; модели OGD + PMA NETosis.

Маблағгузорӣ: Science and Technology Foundation of the National Administration of Traditional Chinese Medicine (GZY-KJS-2023-018, GZY-KJS-SD-2024-079, GZY-KJS-SD-2024-075); Key Research and Development Program of Shandong Province (2025CXGC010615); Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2024ZD0522100, 2024ZD052210X); China Postdoctoral Science Foundation (2023T160726, 2023M733914); Shandong University of Chinese Medicine Doctoral Student Quality Improvement and Innovation Project (YJSTZCX2024030).

Ихтилофи манфиатҳо: Муаллифон изҳор кардаанд, ки ихтилофи манфиатҳо вуҷуд надорад.

Дастрасии додаҳо: Зикр шудааст, ки додаҳо бо дархости оқилона аз муаллифи масъул дастрас карда мешаванд.

Марзи асосии илмӣ: Натиҷаҳои таҳқиқот дар сатҳи преклиникӣ мебошанд. Таъсирҳои нейропротективие, ки дар таҷрибаҳои калламуш ва ҳуҷайра мушоҳида шудаанд, далели он нестанд, ки TQTMD дар беморони инсонии гирифтори сактаи ишемикии шадид табобати самаранок ё бехатар аст.