HT-LM1004, як препарати микробӣ мебошад, ки аз штамми Lactiplantibacillus plantarum LM1004, ки аз кимчи ҷудо карда шудааст, истеҳсол гардида, пас аз ферментатсия бо гармӣ ғайрифаъол ва хушк карда шудааст ва барои надоштани бактерияҳои зинда пешбинӣ шудааст. Таҳқиқот таъсири HT-LM1004-ро ба масуният тавассути озмоиши 8-ҳафтаинаи тасодуфисозишуда, дукӯра ва плацебо-назоратшавандаи инсонӣ; ва механизмҳои эҳтимолии таъсири онро ба микробиоми рӯда тавассути низоми алоҳидаи Simulated Human Intestinal Microbiome Ecosystem (SHIME®) омӯхтааст. Дар озмоиши клиникӣ 120 нафар бо таносуби 1:1 тасодуфисозӣ шуданд ва нуқтаи ниҳоии ибтидоӣ — ҳуҷайраи табиии кушанда, яъне natural killer (NK) фаъолияти ҳуҷайра, дар гурӯҳи HT-LM1004 нисбат ба плацебо дар таҳлилҳои бо ковариат тасҳеҳшуда ба таври маънодор бештар афзуд. Дар муқобил, таҷрибаҳои SHIME нишон доданд, ки баъзе таксонҳои микробии камфаровон ғанӣ шуданд ва тағйироти вобаста ба минтақаи колон дар гуногунрангии микробӣ, кислотаҳои сафро ва кислотаҳои равғании кӯтоҳзанҷир ба вуҷуд омаданд.

Қавитарин далел дар озмоиши инсонӣ ситотоксикии ҳуҷайраҳои NK мебошад. Дар таҳлили ITT фарқи тасҳеҳшудаи тағйирот аз сатҳи ибтидоӣ байни HT-LM1004 ва плацебо барои E:T 6,25:1 — 4,1883 (p=0,0136), барои 12,5:1 — 5,0487 (p=0,0139), барои 25:1 — 4,0441 (p=0,0465) ва барои 50:1 — 4,1829 (p=0,0319) гузориш шудааст. Дар таҳлили PP низ дар ҳамаи чор таносуб фарқи маънодор дида шуд. Ҳамин тавр, дида мешавад, ки нуқтаи ниҳоии ибтидоӣ дар таносубҳои гуногуни ҳуҷайраи NK/ҳуҷайраи ҳадаф ва дар ду аҳолии таҳлилӣ натиҷаҳои яксамт додааст.

Аммо таҳқиқот натиҷаи “HT-LM1004 сироят ё саратонро пешгирӣ мекунад”-ро мустақиман нишон намедиҳад. Озмоиши клиникӣ басомади сироят, ҳодисапазирии саратон ё хатари дарозмуддати бемориро ҳамчун нуқтаи ниҳоии ибтидоии клиникӣ чен накардааст. Натиҷаи асосии ченшуда ситотоксикии ҳуҷайраҳои NK мебошад, ки дар лаборатория арзёбӣ шудааст. Аз сабаби нақши биологии ҳуҷайраҳои NK дар назорати зиддивирусӣ ва варам, муаллифон маънои эҳтимолии муҳофизатиро муҳокима мекунанд; аммо ин маънои биологӣ бояд аз натиҷаи воқеии пешгирии беморӣ ҷудо карда шавад.

Қисмати SHIME низ таҳқиқоти механизми инсонӣ нест, ки микробиоми рӯдаи худи иштирокчиёни клиникиро пайгирӣ кунад. Симулятор ҷомеаҳои микробиро, ки аз донорҳои алоҳидаи наҷоси солим сохта шудаанд, дар бахшҳои назоратшавандаи in vitro колонӣ истифода бурдааст. Аз ин рӯ, ин таҳқиқот исбот накардааст, ки бактерияҳои камфаровон, кислотаҳои сафро ва тағйироти SCFA, ки дар SHIME дида шудаанд, сабаби мустақими афзоиши NK дар иштирокчиёни клиникӣ мебошанд. Муаллифон низ робитаи байни азнавсозии микробиом, тағйироти метаболитҳо ва фаъолияти NK-ро ҳамчун алоқаи эҳтимолии коррелятсионӣ ва механистӣ арзёбӣ карда, зарурати тасдиқи бевоситаи сабабиятро қайд мекунанд.

Аз нуқтаи назари бехатарӣ, дар давраи 8-ҳафтаина шикоятҳои сабуки роҳи нафас дар гурӯҳи табобат %8,47 (5 нафар), дар гурӯҳи назорат %6,67 (4 нафар) буданд; ҳодисаи номатлуби миёна ё вазнин гузориш нашуд. Манбаъ хабар медиҳад, ки ин ҳодисаҳо муваққатӣ буданд ва ба маҳсулоти таҳқиқотӣ вобаста ҳисобида нашуданд. Бо вуҷуди ин, ин натиҷа танҳо барои давомнокии 8-ҳафтаинаи таҳқиқот ва намунаи интихобшудаи калонсолон тафсир карда шавад; бехатарии дарозмуддат ё бехатарӣ барои пиронсолон ва шахсони дорои норасоии масуният мустақиман санҷида нашудааст.

HT-LM1004 Пробиотик аст ё Постбиотик?

Тибқи тавсифи истеҳсолии манбаъ, HT-LM1004 препарати зиндаи пробиотикӣ нест, балки аз ҳуҷайраҳои L. plantarum LM1004 ва сохторҳои ҳуҷайравии нигоҳдошташудаи онҳо иборат аст, ки пас аз зиёд кардан бо ферментатсия барои пурра ғайрифаъол шудан бо гармӣ пешбинӣ шудаанд; дар муқаддимаи мақола ин ҳолати биологӣ бо мафҳуми “postbiotic” шарҳ дода мешавад, аммо дар баъзе ибораҳои расмҳо ва муҳокима истилоҳи “probiotic supplementation” низ истифода мешавад.

Истилоҳи Пробиотик ба таври классикӣ барои микроорганизмҳои зинда истифода мешавад, ки ҳангоми додан ба миқдори кофӣ ба мизбон фоидаи саломатӣ мерасонанд. Постбиотик бошад ғояи истифодаи микроорганизмҳои ғайризинда ва/ё ҷузъҳои онҳо дар шакли препарате мебошад, ки ба мизбон фоидаи саломатӣ мерасонад.

Дар истеҳсоли HT-LM1004 мақсад колонизатсияи бактерия дар рӯда дар ҳолати зинда нест. Манбаъ мегӯяд, ки пас аз ферментатсия биомасса ҷамъоварӣ, қобилияти зинда мондан бо коркарди гармӣ бартараф ва маҳсулот хушк карда шудааст. Сохторҳое чун пептидогликан, кислотаҳои липотейхоикӣ ва сафедаҳои рӯизаминӣ дар девор ва пардаи ҳуҷайра метавонанд пурра аз байн нараванд. Ин гуна сохторҳои микробӣ microbe-associated molecular patterns (MAMPs) номида мешаванд ва метавонанд аз ҷониби pattern recognition receptors (PRRs) дар ҳуҷайраҳои масуният, масалан Toll-like receptor 2 (TLR2), шинохта шаванд.

Ин механизми биологӣ мефаҳмонад, ки чаро андешаи содаи “бактерияи мурда ҳеҷ кор карда наметавонад” дуруст нест. Барои афзоиш микроорганизм бояд зинда бошад; аммо барои он ки системаи масуният девори ҳуҷайра ё молекулаҳои рӯизаминии микроорганизмро шиносад, зинда будани он ҳатмӣ нест.

LM1004 чӣ гуна омода шудааст?

Дар манбаъ гуфта мешавад, ки LM1004 аз кимчи ҷудо карда шуда, шахсияти штамм тавассути пайдарпайкунии гени 16S rRNA тасдиқ шудааст. Истеҳсол аз марҳилаҳои ферментатсияи назоратшаванда, ҷамъоварии биомасса, ғайрифаъолсозии гармӣ ва хушккунӣ иборат буд. Партияи дар таҳқиқоти клиникӣ истифодашуда 20OTF8, ва партияи дар таҷрибаи SHIME истифодашуда 10PTF6 гузориш шудааст. Гуфта мешавад, ки барои пайгирии мавод дар платформаҳои гуногун ин рақамҳои партия алоҳида нигоҳ дошта шудаанд.

Дар тавсифи муфассали истеҳсол дар бахши муҳокима аввал дар муҳити дорои глюкоза, пептони лубиё ва экстракти хамиртуруш дар 34 ± 0,5°C барои 6–8 соат фарҳанги тухмӣ омода карда шуд; сипас дар биореактори 1.800 L дар муҳити дорои %6,6 глюкоза, %1,3 пептони лубиё, %1,5 экстракти хамиртуруш ва намакҳои минералӣ дар 34 ± 0,5°C барои 15–18 соат ферментатсияи асосӣ гузаронида шуд. Барои нигоҳ доштани муҳити анаэробӣ дар ферментатсияи асосӣ гази нитроген истифода гардид.

Вақте консентратсияи бактерияҳо тақрибан ба 1,6 × 10¹⁰ CFU/mL расид, биомасса бо центрифугакунии 12.000 rpm ҷамъоварӣ, бо криопротекторҳо омехта ва, тавре ки дар манбаъ гуфта шудааст, дар 90°C барои 30 дақиқа коркарди гармӣ шуд. Маҳсулоти ниҳоӣ бо усули яхбандӣ-хушккунӣ хушк ва стандартӣ карда шуд.

Фарқи дохилиманбаъӣ дар маълумоти доза

Ду бахши манбаъ дар бораи доза ва таркиби капсула ба таври комилан якхела баён намекунанд. Бахши усул маҳсулоти таҳқиқотиро ҳамчун як капсула дорои 500 mg/рӯз хокаи HT-LM1004 тавсиф мекунад ва мегӯяд, ки дар капсулаи фаъол моддаи иловагии фаъол ё пуркунандаи бетараф нест. Аммо дар тафсилоти истеҳсолии бахши муҳокима гуфта мешавад, ки хока дар сатҳи 2 × 10¹¹ ҳуҷайра/g стандартӣ шудааст, миқдори ҳаррӯзаи ҷузъи фаъоли HT-LM1004 0,1 g = 2 × 10¹⁰ эквиваленти ҳуҷайра мебошад ва он бо моддаҳои ёрирасон, монанди мальтодекстрин ва стеарати магний, то вазни умумии капсула пур карда мешавад.

Манбаъ фарқи байни ин ду тавсифи формулятсияро алоҳида шарҳ намедиҳад. Аз ин рӯ, матни Verianla яке аз онҳоро пинҳонӣ ба ҷои дигар ҳамчун “дозаи дуруст” интихоб намекунад.

Фаъолияти Ҳуҷайраҳои NK Чӣ Гуна Чен Карда Шуд?

Нуқтаи ниҳоии ибтидоии таҳқиқот тағйироти қобилияти ҳуҷайраҳои NK, ки аз хуни иштирокчиён ҷудо шудаанд, барои куштани ҳуҷайраҳои ҳадафи K562 мебошад, ки бо усули ситотоксикии ⁵¹Cr-release чен карда шудааст; ин усул на танҳо шумораи ҳуҷайраҳои NK, балки қобилияти функсионалии куштани онҳоро нисбат ба ҳуҷайраи ҳадаф арзёбӣ мекунад.

Ҳуҷайраи NK чист?

Natural killer (NK) ҳуҷайраҳо лимфоситҳои ситотоксикии системаи масунияти модарзодӣ мебошанд. Онҳо махсусан метавонанд ҳуҷайраҳои бо вирус сироятшуда ё ҳуҷайраҳои гирифтори табдили бадсифатро шиносанд ва нобуд кунанд. Аз механизмҳои куштани ҳуҷайраи ҳадаф аз ҷониби NK озодшавии молекулаҳои ситотоксикӣ, монанди перфорин ва гранзим, мебошад.

Ин таҳқиқот тағйироти одии шумораи ҳуҷайраҳои NK-ро ҳамчун натиҷаи ибтидоӣ истифода накардааст. Ҳадафи асосӣ чен кардани тағйироти фаъолияти ситотоксикӣ-и ҳуҷайраҳои NK мебошад.

Чаро ҳуҷайраҳои ҳадафи K562 истифода мешаванд?

K562 хатти ҳуҷайраи ҳадаф аст, ки дар санҷишҳои ситотоксикии ҳуҷайраҳои NK васеъ истифода мешавад. Дар таҷриба ҳуҷайраҳои мононуклеарии хуни периферии иштирокчиён аввал бо Lymphoprep™ ҷудо карда шуданд, сипас ҳуҷайраҳои NK бо истифода аз MojoSort™ Human NK Cell Isolation Kit ҷудо карда шуданд.

Порашавии ҳуҷайраҳои ҳадафи K562 аз ҷониби ҳуҷайраҳои NK бо усули ⁵¹Cr-release арзёбӣ шуд. Манбаъ формулаи ҳисобкунии хоси ин таҳқиқотро алоҳида намедиҳад, балки ба протоколи қаблан нашршуда истинод мекунад; аз ин рӯ Verianla формулаи ситотоксикиеро, ки манбаъ гузориш накардааст, ҳамчун формулаи таҳқиқот илова намекунад.

Таносуби E:T чӣ маъно дорад?

E:T, “effector-to-target”, яъне таносуби ҳуҷайраи эффектор/ҳуҷайраи ҳадаф мебошад. Дар ин ҷо эффектор ҳуҷайраи NK ва ҳадаф ҳуҷайраи K562 аст.

Масалан, таносуби 6,25:1 шароите мебошад, ки дар сохтори муайяни assay барои ҳар як ҳуҷайраи ҳадаф шумораи камтари ҳуҷайраҳои эффектор NK мавҷуд аст; 50:1 бошад таносуби хеле баландтари эффектор/ҳадафро ифода мекунад. Санҷидани ҳуҷайра дар таносубҳои гуногуни E:T ба фаҳмидани он кӯмак мекунад, ки оё фаъолияти ситотоксикӣ танҳо дар як зичии таҷрибавии ҳуҷайра дида мешавад ё не.

Дар ҳоле ки бахши усули манбаъ таносубҳои 6,25:1, 12,5:1 ва 25:1-ро номбар мекунад, ҷадвалҳои натиҷаҳо таносуби 50:1-ро низ дар бар мегиранд. Аз ин рӯ, натиҷаи 50:1 ҳамчун маълумоти ҷадвалӣ нигоҳ дошта мешавад, аммо дар бораи он ки чаро ин таносуб дар бахши усул алоҳида нишон дода нашудааст, фарзия пешниҳод намешавад.

Озмоиши клиникӣ дар кӣ гузаронида шуд?

Ба таҳқиқот занон ва мардони 19–75-сола дохил карда шуданд. Аммо ибораи “калонсолони солим” маънои шахсони комилан тасодуфӣ аз аҳолии умумиро надорад. Барои иштирок талаб карда мешуд, ки холҳои Perceived Stress Scale (PSS) ҳадди ақал 16 бошанд, шумораи WBC-и периферӣ байни 3 × 10³ ва 10 × 10³ ҳуҷайра/µL бошад ва дар соли гузашта ҳадди ақал ду таърихи сирояти роҳҳои болоии нафас вуҷуд дошта бошад.

Муаллифон мефаҳмонанд, ки ин меъёрҳо барои интихоби шахсоне истифода шудаанд, ки ҳолати ибтидоии масунияташон нисбатан заифтар ё ба тағйироти физиологии масуният ҳассостаранд. Аз ин рӯ, набояд гумон кард, ки андозаи натиҷаҳо ба таври худкор ба ҳамаи калонсолони солиме, ки таърихи стресс ё сироятҳои такрории роҳҳои болоии нафас надоранд, баробар татбиқ мешавад.

Меъёрҳои асосии хориҷкунӣ BMI ≥30 kg/m², эмкунӣ дар ду моҳи охир, сирояти COVID-19 дар ду моҳи охир, бемории системавие, ки метавонад ба системаи масуният таъсир расонад, истифодаи доруи иммуномодулятор ё пробиотик дар чор ҳафтаи охир, ҳомиладорӣ/ширмаконӣ ва аллергия ба маҳсулоти таҳқиқотӣ гузориш шудаанд.

Тасодуфисозӣ ва кӯрсозӣ

Ҳамагӣ 120 нафар бо пайдарпаии тасодуфисозии тавлидшудаи компютерӣ ба 60 HT-LM1004 ва 60 плацебо бо таносуби 1:1 тақсим шуданд. Капсулаҳои фаъол ва плацебо аз рӯи намуди зоҳирӣ, вазн ва бастабандӣ мутобиқ карда шуда, ҳам иштирокчиён ва ҳам таҳқиқотчиён аз таъйини гурӯҳӣ бехабар нигоҳ дошта шуданд.

Фарқи байни ITT ва PP чист?

Intention-to-treat (ITT) таҳлил шахсонеро таҳлил мекунад, ки пас аз тасодуфисозӣ маҳсулоти таҳқиқотиро ҳадди ақал як маротиба гирифтаанд ва ҳадди ақал як ченаки самаранокии баъди оғоз доранд. Азбаски сохтори муқоисаи гурӯҳиро, ки тасодуфисозӣ фароҳам меорад, то ҳадди имкон нигоҳ медорад, дар таҳқиқоти клиникӣ муҳим аст.

Per-protocol (PP) таҳлил бошад иштирокчиёнеро дар бар мегирад, ки вайронкунии ҷиддии протокол надоранд ва шарти ҳадди ақал %80 мутобиқатро, ки дар манбаъ нишон дода шудааст, иҷро мекунанд. Ҳангоме ки таҳлили PP ба гурӯҳе тамаркуз мекунад, ки мудохиларо бештар мувофиқи протокол анҷом додааст, ITT чаҳорчӯбаи таҳлилии наздиктар ба ҷараёни воқеии таҳқиқоти клиникиро пешниҳод мекунад.

Дар ин таҳқиқот натиҷаи асосии фаъолияти NK ҳам дар таҳлили ITT ва ҳам PP дар як самти умумӣ буд.

LOCF чист?

Барои маълумоти гумшуда дар таҳлили ITT манбаъ истифодаи усули last observation carried forward (LOCF)-ро зикр мекунад. LOCF усулест, ки агар ченаки баъдии иштирокчӣ набошад, арзиши охирини мушоҳидашуда ба пеш интиқол дода мешавад. Ин усул метавонад аз хориҷ шудани пурраи шахс аз таҳлил бинобар маълумоти гумшуда пешгирӣ кунад; аммо азбаски фарзияи қавӣ мекунад, ки арзиши воқеии биологӣ тағйир накардааст, худи усули маълумоти гумшуда низ қисми тафсири натиҷаҳо мебошад.

Чаро ANCOVA истифода шуд?

Барои ба таври оморӣ ба назар гирифтани он ки арзишҳои ибтидоии гурӯҳи табобат метавонанд аз гурӯҳи дигар каме фарқ кунанд, analysis of covariance (ANCOVA) истифода шуда метавонад. Манбаъ инчунин, бинобар фарқи хурд дар басомади гиперлипидемия дар хусусиятҳои ибтидоии ITT, ҳолати HLD-ро ҳамчун ковариат ба модел илова кардааст.

Манбаъ дар Ҷадвали 1 модели зеринро ба таври равшан медиҳад:

\[ \mathrm{CHANGE}=\alpha+\beta\cdot\mathrm{HLD}+\delta\cdot\mathrm{GROUP}+\varepsilon \]

CHANGE, фарқи байни арзиши шахс баъд аз мудохила ва арзиши ибтидоии ӯ мебошад.

α, собитаи регрессия аст; сатҳи ибтидоии моделро ҳангоми арзиши референсии дигар тағйирёбандаҳо ифода мекунад.

HLD, ҳолати гиперлипидемия аст: агар гиперлипидемия бошад 1, набошад 0 рамзгузорӣ шудааст.

β, коэффициенти модели таъсири ҳолати гиперлипидемия ба CHANGE мебошад.

GROUP, дар гурӯҳи HT-LM1004 ҳамчун 1, дар гурӯҳи плацебо/назорат ҳамчун 0 рамзгузорӣ шудааст.

δ, муқоисаи асосии табобатро дар модел ифода мекунад. Ба гуфтаи манбаъ, δ фарқи табобат минус назорат дар тағйироти аз ибтидо бо ковариат тасҳеҳшуда мебошад.

ε, истилоҳи хатоест, ки тағйирёбии боқимондаи аз ҷониби модел шарҳнашударо ифода мекунад.

Манбаъ барои баъзе нуқтаҳои ниҳоӣ ordinary regression ва барои баъзе тағйирёбандаҳо robust regression истифода кардааст. Robust regression усули регрессияест, ки ҳассосияти аз ҳад зиёди модели одии хаттиро ба арзишҳои канорӣ ё хусусиятҳои тақсимот коҳиш медиҳад.

Натиҷаҳои фаъолияти NK бо тасҳеҳи ковариат

Муҳимтарин нуктаи ҷадвал он аст, ки дар ҳамаи чор шароити NK E:T муқоисаҳои PP ва ITT p<0,05 мебошанд. Аз ин рӯ, натиҷаи асосии клиникии таҳқиқот ба як таносуби E:T ё танҳо ба аҳолии PP, ки протоколро пурра анҷом додааст, такя намекунад.

Барои WBC низ дар таҳлилҳои PP ва ITT фарқи тасҳеҳшудаи табобат–назорат маънодор аст. IL-12 бошад дар модели ITT p=0,0425, вале дар таҳлили PP p=0,1724 мебошад; бинобар ин барои IL-12 гуфтани “фарқи маънодори пайваста дар ҳамаи таҳлилҳо” дуруст нест.

Чаро натиҷаҳои ситокин бояд эҳтиёткорона тафсир шаванд?

Сатҳҳои зардобии TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-12 ва IL-15 ҳамчун биомаркерҳои механизмии дастгиркунанда чен карда шуданд. Муаллифон қайд мекунанд, ки тағйирёбии ситокинҳо байни шахсон баланд аст ва ин натиҷаҳо набояд ҳамчун натиҷаи ибтидоии самаранокӣ дида шаванд.

Илова бар ин, барои p-арзишҳои ситокин тасҳеҳи расмии муқоисаҳои сершумор анҷом дода нашудааст. Ҳангоми гузаронидани шумораи зиёди санҷишҳои мустақили оморӣ, такроран истифода бурдани танҳо ҳадди p<0,05 метавонад эҳтимоли ба таври тасодуфӣ ба даст овардани натиҷаи маънодорро афзоиш диҳад. Муаллифон қарори иҷро накардани тасҳеҳро бо мақсади аз даст надодани тамоюлҳои эҳтимолии биологӣ дар когорти солим ва кам кардани хатари хатои Навъи II шарҳ медиҳанд; аз ин рӯ, натиҷаҳои ситокинро ҳамчун кашфиётӣ ва дастгиркунанда пешниҳод мекунанд.

Оё SHIME Ба Рӯдаи Инсон Монанд Аст?

Не. SHIME® модели in vitro-и экосистемаи рӯда мебошад, ки pH, ҳарорат, муҳити анаэробӣ ва шароити ферментатсияи микробиро дар бахшҳои гуногуни колони воқеии инсон ба таври назоратшаванда тақлид мекунад; он эпителияи рӯда, гардиши хун, системаи масуният, системаи гормонӣ ва тамоми ҳамкориҳои мизбон–микроби инсони зиндаро пурра дар бар намегирад.

Тарҳи SHIME чӣ гуна сохта шудааст?

Дар таҳқиқот ду воҳиди параллелии SHIME истифода шудааст. Як воҳид назорати бе табобат, воҳиди дигар таҷрибавӣ бо HT-LM1004 мебошад. Ҳар система зарфҳое дорад, ки се минтақаи колонро намояндагӣ мекунанд:

• AC: ascending colon — колони болораванда/проксималӣ.
• TC: transverse colon — колони кӯндаланг.
• DC: descending colon — колони поёнраванда/дисталӣ.

Система дар 37°C нигоҳ дошта шуда, pH пайваста назорат гардида ва бо гази анаэробӣ муҳити беоксигени рӯда тақлид шудааст. Муҳити стандартии ғизоӣ арабиногалактан, пектин, ксилан, крахмал, глюкоза, экстракти хамиртуруш, пептон, муцин ва L-систеин HCl-ро дар бар гирифтааст. Маҳлули панкреатикӣ NaHCO₃, панкреатин ва oxgall дошт.

Инокулуми наҷосат аз маводи донорҳои солими зан ва мард бо таносуби 1:1 омода шуда, ба миқдори %5-и ҳаҷми кории бахшҳои AC, TC ва DC ворид карда шуд.

Таҷриба ба се давра ҷудо шуд: 1 ҳафта стабилизатсия, 4 ҳафта мудохилаи HT-LM1004 ва 1,5 ҳафта давраи мушоҳида/шустан пас аз мудохила.

Дар SHIME дозаҳои HT-LM1004 0,1 g, яъне тавре ки дар манбаъ гуфта шудааст, 2 × 10¹⁰ эквиваленти ҳуҷайра буд; он дар 10 mL оби дистиллятсияи стерилӣ суспензия шуда, панҷ рӯз дар як ҳафта соати 10:30 ба бахши AC2-и воҳиди табобат дода шуд.

Намунаҳо дар чор нуқтаи вақт — Pre, Mid, End ва Post — ҷамъоварӣ шуданд. Манбаъ мегӯяд, ки гирифтани намунаҳо пеш аз дозаҳои рӯзона соати 10:00 барои арзёбии на танҳо таъсири кӯтоҳмуддати фаврии баъди доза, балки таъсири ҷамъшавандаи экосистема пешбинӣ шуда буд.

Схемаи мустақиле, ки ҷараёни манбаъии таҷрибаи SHIME-ро нишон медиҳад

Таҳлили 16S rRNA чиро чен мекунад?

Минтақаҳои тағйирёбандаи гени 16S rRNA метавонанд барои таснифи таксономии бактерияҳо истифода шаванд. Дар таҳқиқот минтақаи гипертағйирёбандаи V4 ҳадаф гирифта шуда, праймерҳое истифода шуданд, ки минтақаи 515–806-ро фаро мегиранд. Манбаъ дарозии интизории ампликонро 359 bp гузориш мекунад.

DNA бо QIAamp DNA Mini Kit ҷудо карда шуда, миқдораш бо Qubit 4 чен, якпорчагиаш бо электрофорези гели агарозаи 0,8% санҷида ва покиаш бо таносуби A260/A280 арзёбӣ шуд.

Китобхонаҳо бо адаптерҳои Illumina Nextera XT омода, бо AMPure XP тоза, %10 PhiX илова шуданд ва дар манбаъ гуфта мешавад, ки дар платформаи Illumina iSeq100 секвениркунии paired-end анҷом дода шуд. Пайдарпайиҳо тавассути pipeline-и асосёфта ба QIIME 2 аз демултиплексинг, филтри сифат, ислоҳи хато ва таснифи таксономӣ гузаронида шуданд.

Гуногунрангии алфа ва бета чӣ маъно дорад?

Гуногунрангии алфа гуногунрангии микробиро дар дохили як намуна ё бахши экосистема тавсиф мекунад. Дар таҳқиқот метрикаҳое чун observed features/OTU, ACE, Chao1, Jackknife, Shannon, Simpson, NPShannon ва гуногунрангии филогенетикӣ истифода шудаанд.

Richness, яъне ғановат, бештар ба он равона аст, ки чанд хусусият/таксони гуногун мавҷуд аст. Индексҳои гуногунрангӣ, монанди Shannon, на танҳо шумораи намудҳоро, балки то чӣ андоза мутавозин будани тақсимот дар ҷомеаро низ ба назар гирифта метавонанд.

Гуногунрангии филогенетикӣ на танҳо шумораи таксонҳо, балки то чӣ андоза аз ҷиҳати эволютсионӣ фарқ кардани микроорганизмҳоро низ ба назар мегирад.

Гуногунрангии бета бошад то чӣ андоза монанд ё фарқ кардани ду ҷомеаро арзёбӣ мекунад. Манбаъ weighted UniFrac-ро истифода бурда, барои ба таври визуалӣ ҷамъбаст кардани фарқиятҳои бисёрченакаи ҷомеаҳо Principal Coordinate Analysis (PCoA)-ро татбиқ кардааст.

Дар гуногунрангии микробиом чӣ рӯй дод?

Дар AC дар тамоми ченакҳои richness тағйироти маънодор дида нашуд. Баръакс, дар TC дар охири мудохила ва дар DC дар вақти Post афзоиши richness мушоҳида шуд.

Аз рӯи Shannon, Simpson, NPShannon ва гуногунрангии филогенетикӣ дар AC тамоюли устувортари афзоиш дида шуд, дар ҳоле ки индексҳои гуногунрангии TC ва DC дар тӯли вақт яксон тағйир наёфтанд.

Дар таҳлили иловагӣ, дар охири мудохилаи чорҳафтаина гуногунрангии филогенетикии AC дар гурӯҳи HT-LM1004 нисбат ба назорат ба таври маънодор баландтар буд (p=0,0099). Таҳлили PCoA ҷудошавии ҷомеаҳои микробии назорат ва HT-LM1004-ро нишон дод ва манбаъ дар таҳлили beta-set p<0,05 гузориш кард.

Муаллифон ин намунаи тағйиротро чунин тафсир мекунанд: аввал тағйироти гуногунрангӣ/баробарӣ дар колони проксималӣ, сипас ғанишавии дертарини таксонҳои камфаровон дар TC ва DC-и дисталтар. Бо вуҷуди ин, бояд дар хотир дошт, ки ин тафсири “градиент аз проксималӣ ба дисталӣ” ба низоми SHIME тааллуқ дорад ва ҳамон траектория дар рӯдаи инсон мустақиман чен нашудааст.

Чаро бактерияҳои камфаровон метавонанд муҳим бошанд?

Кам будани ҳиссаи бактерия дар рӯда маънои биологӣ беаҳамият будани онро надорад. Баъзе таксонҳои камфаровон метавонанд дар табдилоти муайяни метаболикӣ ё шабакаҳои экосистема нақши функсионалӣ дошта бошанд.

Манбаъ ғанишавии Clostridia, Dialisteraceae ва Lentilactobacillus дар TC; ва Bacteroidales, Rikenellaceae, Lactonifactor ва Christensenella дар DC-ро муҳокима мекунад. Функсияҳои “фоиданок”-и ин таксонҳо дар ин таҷриба як ба як мустақиман санҷида нашудаанд; муаллифон робитаи онҳоро бо саломатӣ, монеаи рӯда, истеҳсоли SCFA ё вазифаҳои метаболикӣ бар асоси адабиёти пешина тафсир мекунанд.

Метаболомика чӣ гуна гузаронида шуд?

Дар таҳлили метаболомикӣ моеъи фарҳангии гирифташуда аз бахшҳои колон бо Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (UHPLC-MS/MS) таҳлил шуд.

Сигналҳои метаболитҳо нисбат ба хроматограммаи умумии ионӣ (TIC) нормализатсия шуданд. Барои таснифи химиявӣ NPClassifier ва ClassyFire истифода шуда, натиҷаи NPClassifier авлавият гирифт ва барои эътимоднокии тасниф шарти эҳтимолият ≥0,8 истифода шуд.

Барои арзёбии тағйироти метаболикӣ mixed-design ANOVA татбиқ гардид. Вақт, яъне Pre–Mid–End–Post, омили такрорӣ/within; шарти назорат–HT-LM1004 бошад омили between истифода шуд. Манбаъ дар баробари p<0,05 арзишҳои баланди partial eta squared (η_p²)-ро низ нишондиҳандаи таъсир ба дисперсия арзёбӣ кардааст.

Дар метаболомика чанд хусусият ошкор шуд?

Шумораи “feature” дар ин ҷо мустақиман маънои ҳамон қадар метаболити мустақил бо шахсияти қатъиян тасдиқшуда надорад. Ҳангоми коркарди маълумоти LC-MS/MS сигналҳои аналитикӣ бо масса/заряд, вақти нигоҳдорӣ ва хусусиятҳои муайяни сигнал бароварда мешаванд; қисми онҳо бо китобхонаҳои стандартӣ мувофиқ карда мешаванд, дар ҳоле ки синфи химиявии баъзе хусусиятҳои боқимонда бо воситаҳои пешгӯӣ annotate шудааст.

Дар кислотаҳои сафро чӣ тағйир ёфт?

Дар AC афзоиши кислотаҳои сафрои ибтидоӣ, аз ҷумла кислотаи холик ва баъзе сигналҳои chenodeoxycholic acid гузориш шудааст.

Дар TC азнавсозии метаболикӣ равшантар буд ва афзоиши 3-oxocholate ва сигналҳои гуногуни кислотаҳои сафрои дуюмдараҷа/ҳосилаҳои вобаста гузориш шуд. Баъзе сигналҳои кислотаҳои сафрои ибтидоӣ бошад нисбатан коҳиш ёфтанд.

Дар DC тағйирот танҳо бо кислотаҳои сафро маҳдуд набуд. Дар баробари баъзе кислотаҳои сафрои дуюмдараҷа, дар метаболитҳои гуногуни ғайрисафроӣ низ афзоиш мушоҳида шуд.

Муаллифон махсусан муҳокима мекунанд, ки тағйироти тавозуни кислотаҳои сафрои ибтидоӣ–дуюмдараҷа ба азнавташкилшавии метаболизми микробии рӯда ишора мекунанд. Робитаи кислотаҳои сафро бо вазифаҳои масуният тавассути ретсепторҳо ба монанди FXR ва TGR5 асоси робитаи эҳтимолии механизмии ин натиҷаҳои метаболикӣ бо натиҷаи NK мебошад. Аммо ин роҳҳои ретсепторӣ дар озмоиши ҳозираи инсонӣ мустақиман чен нашудаанд.

SCFA чист?

Short-chain fatty acids (SCFAs) кислотаҳои органикии кӯтоҳзанҷир мебошанд, ки микроорганизмҳои рӯда метавонанд дар равандҳои ферментатсия тавлид кунанд. Таҳқиқот чор SCFA-ро ба таври миқдорӣ арзёбӣ кардааст: кислотаи сирко, кислотаи пропион, кислотаи бутир ва кислотаи валер.

Таҳлили SCFA бо headspace GC-MS анҷом дода шуд. Намунаҳо бо NaCl ва %2 кислотаи сулфат омода шуданд; барои кислотаҳои сирко, пропион, бутир ва валер бо истифода аз маҳлулҳои стандартии 1–100 mg/L каҷҳои калибронӣ сохта шуданд. Шахсияти метаболит бо муқоисаи вақти нигоҳдорӣ ва спектри масса бо стандартҳои аслӣ муайян карда шуд.

Дар SCFA кадом намунаи вақтӣ дида шуд?

Дар AC сатҳҳои SCFA дар нуқтаи Mid коҳиш ёфта, дар нуқтаҳои End ва Post ба сатҳҳои наздик ба ибтидо ё болотар аз ибтидо баргаштанд.

Дар TC консентратсияҳои SCFA дар давраҳои Mid ва End афзоиш ёфта, дар марҳилаи Post пас аз қатъи мудохила тамоюли наздикшавӣ ба сатҳи ибтидоиро нишон доданд.

Дар DC низ ба ҳамин монанд дар давраҳои Mid ва End афзоиш, ва дар давраи Post бозгашти қисман мушоҳида шуд.

Ин натиҷаҳоро ба шакли “HT-LM1004 дар тамоми колон SCFA-ро пайваста зиёд кард” содда кардан мумкин нест. Таъсир ба минтақаи колон ва вақт вобаста аст; махсусан самти AC дар давраи миёна аз TC ва DC фарқ мекунад.

Оё Байни Афзоиши Клиникии NK ва Тағйироти Микробиоми SHIME Сабабият Исбот Шудааст?

Не. Дар озмоиши инсонӣ фаъолияти NK чен карда шудааст, дар ҳоле ки механизми микробиом ва метаболитҳо дар экосистемаи алоҳидаи in vitro SHIME омӯхта шудааст; азбаски дар ҳамон иштирокчиёни клиникӣ занҷири инфиродии миёнаравӣ ба шакли тағйироти микробиом → тағйироти метаболит → фаъолияти NK чен карда нашудааст, натиҷаҳои SHIME наметавонанд ҳамчун сабаби мустақими афзоиши клиникии NK қабул шаванд.

Ин фарқият дар тафсири илмии мақола аҳамияти марказӣ дорад. Манбаъ як модели механистиро пешниҳод мекунад: ҷузъҳои ҳуҷайравии HT-LM1004, ки пас аз коркарди гармӣ нигоҳ дошта шудаанд, метавонанд мустақиман ба сигналгузаронии PRR/TLR таъсир расонанд; ҳамзамон ҷомеаи микробии рӯда ва истеҳсоли метаболитҳои микробӣ метавонад тағйир ёбад; кислотаҳои сафро ва SCFA метавонанд бо системаи масуният ҳамкорӣ кунанд. Аммо таҳқиқоти ҳозира ҳамаи қадамҳои ин занҷирро дар як таҷрибаи ягонаи сабабӣ нишон намедиҳад.

Манбаъ ошкоро мегӯяд, ки ҳатто байни маҷмӯаҳои маълумоти микробиом ва метаболомика робитаи мустақими механистӣ муқаррар нашудааст ва ғанишавии баъзе таксонҳо бо тағйироти роҳҳои SCFA ва кислотаҳои сафро танҳо робитаи эҳтимолӣ бо афзоиши масуниятро пешниҳод мекунанд.

Аз ин рӯ, ибораи дурусти илмӣ чунин аст: “HT-LM1004 дар озмоиши клиникӣ фаъолияти ҳуҷайраҳои NK-ро зиёд кард ва дар модели алоҳидаи SHIME тағйироти микробиом/метаболит мушоҳида шуданд, ки метавонанд барои ин натиҷа шарҳи биологӣ пешниҳод кунанд.” Ибораи “HT-LM1004 фаъолияти NK-ро маҳз тавассути зиёд кардани ин бактерияҳо ба таври қатъӣ баланд бурд” аз ҳудуди далели тарҳи таҷрибавии мавҷуда берун меравад.

Оё механизми мустақими ҳуҷайравӣ чен карда шуд?

Манбаъ муҳокима мекунад, ки пептидогликан, кислотаи липотейхоикӣ ва сафедаҳои рӯизаминии ҳуҷайраҳои бо гармӣ ғайрифаъолшуда метавонанд бо сохторҳои PRR/TLR ҳамкорӣ карда, роҳҳои MAPK, AP-1 ва NF-κB-ро фаъол кунанд; ва ин метавонад бо эффекторҳои ситотоксикӣ, монанди перфорин, granzyme B ва IFN-γ, алоқаманд бошад.

Аммо муаллифон махсусан таъкид мекунанд, ки таҳқиқоти ҳозира ин роҳҳои сигналиро мустақиман санҷида нашудааст. Аз ин рӯ, механизми TLR2/MAPK/NF-κB механизми мустақиман ченшудаи клиникии ин таҳқиқот нест, балки шарҳи эҳтимолии биологист, ки аз таҳқиқоти қаблӣ дастгирӣ мегирад.

Оё афзоиши NK маънои илтиҳоби васеи системавиро дорад?

Гарчанде ситотоксикии NK дар таҳқиқот ба таври маънодор афзуд, дар ситокинҳои зардобӣ, ба монанди IFN-γ ва TNF-α, афзоиши маънодори табобат–назорат мушоҳида нашуд. Муаллифон инро чунин тафсир мекунанд, ки баланд шудани функсияи эффекторӣ NK ҳатман маънои афзоиши васеи системавии ҳамаи ситокинҳои илтиҳобӣ дар гардиши хунро надорад.

Ин натиҷа набояд ба хулосаи қатъии “HT-LM1004 ҳеҷ таъсири илтиҳобӣ надорад” табдил дода шавад. Ченкунӣ бо ситокинҳои мушаххаси зардобӣ ва шароити таҷрибавии ҳаштҳафтаина маҳдуд аст.

Натиҷаҳои бехатарӣ

Гуфта мешавад, ки ҳодисаҳои сабук аз нишонаҳои маъмули сармохӯрӣ, монанди сулфа ва ринорея, иборат буданд, муваққатӣ буданд ва ба маҳсулоти таҳқиқотӣ вобаста ҳисобида нашуданд. Гематология, биохимия, липидҳо, электролитҳо, нишондиҳандаҳои гурда, CRP/ESR ва аломатҳои ҳаётан муҳим дар маҷмӯъ мушкили клиникии маънодори вобаста ба табобатро нишон надоданд.

Гарчанде дар баъзе арзишҳои лабораторӣ тағйироти омории дохилигурӯҳӣ дида шуданд, гузориш шудааст, ки онҳо бо нишонаҳои клиникӣ алоқаманд набуданд ва байни табобат ва назорат фарқи маънодор эҷод накарданд. Дар ин ҷо муҳим аст, ки маънодории оморӣ ва маънодории клиникӣ як чиз нестанд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ мекунад

• Дар намунаи интихобшудаи калонсолон, истифодаи 8-ҳафтаинаи HT-LM1004 бо афзоиши бештар дар ситотоксикии ҳуҷайраҳои NK, ки нуқтаи ниҳоии ибтидоӣ буд, нисбат ба плацебо алоқаманд аст.
• Натиҷаи NK дар ҳамаи чор таносуби гузоришшудаи E:T ва ҳам дар таҳлилҳои тасҳеҳшудаи ITT ва PP маънодор аст.
• Дар тағйироти WBC низ фарқи тасҳеҳшудаи табобат–назорат дар таҳлилҳои PP ва ITT маънодор аст.
• Дар давраи 8-ҳафтаинаи таҳқиқоти клиникӣ сигнали ҷиддии бехатарӣ, ки ба маҳсулоти таҳқиқотӣ нисбат дода шудааст, гузориш нашуд.
• Дар низоми алоҳидаи SHIME, HT-LM1004 гуногунрангии микробӣ, тақсимоти таксонҳои камфаровон, профилҳои кислотаҳои сафро ва истеҳсоли SCFA-ро вобаста ба минтақаи колон ва вақт тағйир дод.
• Ин натиҷаҳои in vitro фарзияҳои механистиро пешниҳод мекунанд, ки метавонанд бо натиҷаи клиникии NK мувофиқ бошанд.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот дастгирӣ намекунад

• Дар ин таҷриба нишон дода нашудааст, ки HT-LM1004 сироятҳои вирусиро дар инсон пешгирӣ мекунад.
• Нишон дода нашудааст, ки рушди саратон ё такрори варамро коҳиш медиҳад.
• Самаранокӣ ва бехатарӣ дар пиронсолон ё шахсони дорои норасоии масуният мустақиман санҷида нашудааст.
• Бехатарии истифодаи дарозмуддат аз таҳқиқоти ҳаштҳафтаина бароварда намешавад.
• Нишон дода нашудааст, ки тағйироти микробиоми дидашуда дар SHIME дар иштирокчиёни клиникӣ айнан рӯй медиҳанд.
• Тағйироти микробиом ё SCFA дар наҷоси инсон ҳамчун нуқтаи ниҳоии механизмии ин таҳқиқоти клиникӣ нишон дода нашудааст.
• Исбот нашудааст, ки ғанишавии бактерияҳои муайян сабаби мустақими афзоиши NK аст.
• Нишон дода нашудааст, ки тағйироти кислотаҳои сафро ё SCFA афзоиши фаъолияти NK-ро бо таҳлили миёнаравӣ шарҳ медиҳанд.
• Натиҷаҳои кашфиётии ситокин дар ҳамон сатҳи далел бо натиҷаи ибтидоии NK нестанд.
• Маҳсулоти таҳқиқотӣ набояд ҳамчун табобати беморӣ ё иммунотерапияи тасдиқшуда арзёбӣ шавад.

Маҳдудиятҳои асосии таҳқиқот

Маҳдудияти якум: Аҳолии клиникӣ аз калонсолони солими интихобшуда иборат аст. Ба аҳолии пиронсол, дорои масунияти фурӯнишонда ё бемории ҷиддии музмин умумисозӣ кардан мумкин нест.

Маҳдудияти дуюм: SHIME шароити физикӣ-химиявӣ ва микробии рӯдаро тақлид мекунад, аммо эпителий, системаи масуният, гардиши хун, системаи асаб ва тамоми ҳамкориҳои метаболизми мизбонро дар рӯдаи воқеии инсон дар бар намегирад.

Маҳдудияти сеюм: Натиҷаи клиникии NK ва натиҷаи in vitro микробиом/метаболит мустақиман бо сабабият пайваст нашудаанд.

Маҳдудияти чорум: Мудохилаи клиникии ҳаштҳафтаина ва мушоҳидаи 1,5-ҳафтаинаи пас аз мудохилаи SHIME устувории таъсири дарозмуддатро нишон намедиҳанд.

Маҳдудияти панҷум: Таҳлилҳои ситокин кашфиётӣ ҳастанд ва тасҳеҳи расмии муқоисаҳои сершумор татбиқ нашудааст.

Маҳдудияти шашум: Намунаҳои SCFA ва микробиом, ки дар SHIME дида шудаанд, бояд дар наҷоси инсон ё намунаҳои рӯдаи инсон тасдиқ шаванд.

Маҳдудияти ҳафтум: Дар дохили манбаъ фарқияти байни бахшҳо дар бораи доза/формулятсияи капсула ва таносубҳои гузоришшудаи NK E:T мавҷуд аст; пеш аз истифодаи ин тафсилот барои такрористеҳсол ё татбиқи клиникӣ, онҳо бояд бо протоколи аслӣ/supplementary material алоҳида тасдиқ карда шаванд.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Тарҳи таҳқиқоти клиникӣ

Санҷишҳои оморӣ

Тағйирёбандаҳои муттасил ҳамчун миёна ± инҳирофи стандартӣ, тағйирёбандаҳои категориявӣ ҳамчун шумора ва фоиз пешниҳод шудаанд. Барои арзёбии тақсимоти муқаррарӣ санҷиши Shapiro–Wilk истифода шуд.

Муқоисаҳои дохилигурӯҳии ибтидоӣ–ҳафтаи 8 барои тағйирёбандаҳои бо тақсимоти муқаррарӣ бо paired t-test ва барои тағйирёбандаҳои ғайримуқаррарӣ бо Wilcoxon signed-rank test анҷом дода шуданд.

Муқоисаҳои байни гурӯҳҳо бо моделҳои ANCOVA/регрессия гузаронида шуда, кӯшиш шуд таъсири фарқиятҳои ибтидоӣ бо ковариатҳо назорат карда шавад.

Манбаъ барои баъзе тағйирёбандаҳо ordinary regression ва барои баъзе дигар robust regression истифода кардааст. p<0,05 ҳамчун ҳадди маънодории оморӣ қабул шуд.

Тарҳи таҳқиқоти SHIME

Натиҷаҳои 16S rRNA

Манбаъ афзоиши пайвастаи баъзе индексҳои гуногунрангиро дар AC, афзоиши richness-ро дар TC дар End ва дар DC дар вақти Post гузориш мекунад. Дар охири мудохилаи чорҳафтаина фарқи гуногунрангии филогенетикии AC ба фоидаи HT-LM1004 маънодор аст (p=0,0099). Таҳлилҳои PCoA ва beta-set низ ҷудошавии сохтори ҷомеаҳои назорат ва табобатро нишон доданд.

Натиҷаҳои метаболомика

Натиҷаҳои метаболомика ба минтақаи колон хос мебошанд. Дар AC тағйироти кислотаҳои сафрои ибтидоӣ бештар намоён; дар TC табдилоти кислотаҳои сафрои дуюмдараҷа бештар намоён; дар DC бошад азнавсозии васеътари метаболикӣ, ки метаболитҳои ғайрисафроиро низ дар бар мегирад, гузориш шудааст.

Ин фарқи минтақавӣ нишон медиҳад, ки HT-LM1004 дар тамоми рӯда таъсири якхелаи метаболикӣ эҷод намекунад.

Натиҷаҳои SCFA

Дар AC пас аз коҳиш дар давраи Mid барқароршавӣ дар давраи End/Post; дар TC ва DC бошад афзоиш ҳангоми мудохила ва бозгашти қисман ба сатҳи ибтидоӣ дар давраи Post мушоҳида шуд. Ҳамин тавр, посухи SCFA ҳам ба вақт ва ҳам ба минтақаи колон вобаста буд.

Тафсири якҷояи натиҷаҳои клиникӣ ва in vitro

Озмоиши клиникӣ нишон медиҳад, ки бо HT-LM1004 фаъолияти ҳуҷайраҳои NK афзудааст. SHIME бошад нишон медиҳад, ки ҳамон препарат метавонад дар экосистемаи назоратшавандаи рӯда ҷомеаи микробӣ ва профилҳои метаболитҳоро тағйир диҳад.

Ин ду натиҷа якҷоя фарзияеро дастгирӣ мекунанд, ки HT-LM1004 метавонад ҳам тавассути ҷузъҳои ҳуҷайравии микробӣ ба роҳҳои мустақими шинохти масуният ва ҳам ба меҳвари микробиом–метаболит таъсир расонад. Аммо тарҳи таҳқиқоти манбаъ наметавонад ҳисоб кунад, ки ин ду роҳ дар инсон бо чӣ таносуб саҳм мегузоранд ё яке миёнарави дигаре мешавад.

Таҳқиқоти оянда

Манбаъ гурӯҳҳои гуногунтари иштирокчиён, давраҳои дарозтари мудохила ва пайгирӣ ва санҷишҳои мустақими сабабиятро пешниҳод мекунад. Махсусан муқоисаи тағйироти SCFA ва микробиом, ки дар SHIME дида шудаанд, дар наҷосат ё намунаҳои рӯдаи иштирокчиёни клиникӣ барои тасдиқи эътибори физиологии натиҷаҳои симулятор муҳим аст.

Муаллифон инчунин муҳокима мекунанд, ки усулҳое чун фенотипкунии ҳуҷайраҳои масуният ва транскриптомика метавонанд барои тасдиқи механизмҳои мустақими ҳуҷайравии пешниҳодшуда, ба монанди TLR/MAPK/NF-κB, истифода шаванд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Таҳқиқоти аслӣ: Microbiome-Modulating Effects of Heat-Treated Lactiplantibacillus plantarum LM1004 and Its Enhancement of NK Cell Activity: Evidence from a Clinical Trial and a Simulated Human Intestinal Microbiome Ecosystem

Муаллифон: Sukyung Kim; Hoonhee Seo; Tae-Rahk Kim; Md Abdur Rahim; Hanieh Tajdozian; Youjin Yoon; Sujin Jo; Md Sarower Hossen Shuvo; Indrajeet Barman; Chaeeun Park; Saebim Lee; Sangwon Lee; Min Hyung Cho; Jangho Ha; Hansol Hong; Sohee An; SungJune Chu; Minn Sohn; Yoo Kyung Ahn; Yoon Ju So; Sungsue Rheem; Seong-Ho Han; Ho-Yeon Song.

Саҳми баробар: Sukyung Kim ва Hoonhee Seo дар манбаъ ҳамчун муаллифони дорои саҳми баробар нишон дода шудаанд.

Corresponding authors: Seong-Ho Han ва Ho-Yeon Song.

Муассисаҳо: LactoMason Co., Ltd.; Department of Microbiology and Immunology, School of Medicine, Soonchunhyang University; K-Microbiome Institute, Soonchunhyang University; Department of Family Medicine, College of Medicine, Dong-A University; Bioinformatics and Molecular Design Research Center (BMDRC), Yonsei University; Division of Big Data Science, Korea University.

Заминаи манфиати институтсионалӣ: Дар манбаъ дида мешавад, ки баъзе муаллифон ба LactoMason Co., Ltd., истеҳсолкунандаи препарати таҳқиқотӣ, вобастагии институтсионалӣ доранд. Ҳамзамон мақола изҳороти “authors have no financial conflicts of interest to declare”-ро медиҳад. Ин ду маълумот бояд якҷоя ва бетағйир нигоҳ дошта шаванд.

Маҷалла: Journal of Microbiology and Biotechnology.

Ҷилд / рақами мақола: Volume 36, e2604046.

DOI: 10.4014/jmb.2604.04046

Навъи манбаъ: Таҳқиқоти таҷрибавии дар маҷалла нашршуда; озмоиши тасодуфисозишудаи назоратшавандаи инсонро бо таҷрибаи алоҳидаи in vitro экосистемаи SHIME муттаҳид мекунад. Тамғаи навъи болоии саҳифаи аввали PDF “Review” менамояд; ин тамға ҳамчун ҷузъиёти библиографӣ, ки бо сохтори нави таҷрибавии Methods/Results-и санад номувофиқ аст, нигоҳ дошта шудааст.

Гирифта шуд: 17 Апрел 2026.

Қабул шуд: 28 Июн 2026.

Фарқи санаи нашр: PDF дар саҳифаи аввал маълумоти “Published: July 23, 2026”-ро медиҳад. Сабти metadata-и e-нашри PubMed/Crossref санаи 3 Июл 2026-ро нишон медиҳад. Фарқи байни ду сана пинҳонӣ бартараф нашудааст.

Литсензия: Creative Commons Attribution (CC BY). PDF нишон медиҳад, ки мақола дастрасии кушода дорад ва таҳти шартҳои CC BY паҳн мешавад.

Маблағгузорӣ: Маблағгузории MSIT аз ҷониби National Research Foundation of Korea (RS-2023-00219563); MOTIE industrial innovation infrastructure construction project (P0021516); Ministry of SMEs and Startups Korea Technology Development Program for SMEs (S3373174) ва дастгирии Soonchunhyang University Research Fund гузориш шудаанд.

Дастрасии маълумот: Гуфта мешавад, ки маълумоти дар мақола пешниҳодшуда ва маҷмӯаҳои асосии маълумоте, ки таҳқиқотро дастгирӣ мекунанд, аз corresponding author бо дархости асоснок дастрас карда мешаванд.

Бархӯрди манфиатҳо: Манбаъ набудани бархӯрди манфиатҳои молиявиро эълом мекунад.

Этика ва сабт: Таҳқиқоти клиникӣ таҳти тасдиқи IRB-и Dong-A University Hospital DAUHIRB-23-152 гузаронида шуда, дар ClinicalTrials.gov ҳамчун NCT07433855 сабт шудааст. Барои намунаҳои наҷосат Seoul National University Bundang Hospital IRB No. B-1810-497-308; барои таҳқиқоти геном/метаболом ва системаи сунъии ҳазм Soonchunhyang University сабти лоиҳа/этикаи 202406-SB-067 / 202406-SB-067-01 гузориш шудааст.

Розигии огоҳона: Аз иштирокчиёни клиникӣ розигии хаттии огоҳона гирифта шудааст.

Нуқтаи ниҳоии ибтидоии клиникӣ: Тағйироти фаъолияти ҳуҷайраҳои NK аз ибтидо то ҳафтаи 8.

Таҳлили оморӣ: SPSS 26 ва SAS 9.4; paired t-test ё Wilcoxon signed-rank test; ANCOVA/регрессия; p<0,05; таҳлилҳои ITT ва PP; LOCF барои маълумоти гумшудаи ITT.

Фарқи дохилиманбаъии E:T: Бахши усул таносубҳои 6,25:1, 12,5:1 ва 25:1-ро зикр мекунад, дар ҳоле ки ҷадвалҳои натиҷаҳои клиникӣ таносуби 50:1-ро низ гузориш мекунанд.

Фарқи дохилиманбаъии доза/формулятсия: Бахши усул 500 mg/рӯз хокаи HT-LM1004 ва набудани моддаи пуркунандаро мегӯяд, дар ҳоле ки тавсифи муфассали истеҳсол дар муҳокима мегӯяд, ки 0,1 g ҷузъи стандартии фаъоли HT-LM1004 бо моддаҳои ёрирасон то вазни умумии капсула пур карда мешавад. Манбаъ сабаби ин фарқро шарҳ намедиҳад.

Ҳудуди механизми клиникӣ: Занҷири микробиом ва метаболомикаи SHIME дар иштирокчиёни клиникӣ мустақиман чен нашудааст. Сабабияти мустақим байни тағйироти микробиом/метаболит ва афзоиши фаъолияти NK исбот нашудааст.

Ҳудуди SHIME: Низом экосистемаи in vitro мебошад, ки шароити микробӣ ва физикӣ-химиявии колони инсонро модел мекунад; системаи воқеии масунияти инсон ва тамоми физиологияи мизбонро бозсозӣ намекунад.

Ҳудуди таҳлили ситокин: Ситокинҳо биомаркерҳои кашфиётӣ/дастгиркунанда ҳастанд ва тасҳеҳи расмии санҷишҳои сершумор татбиқ нашудааст.

Саҳми муаллифон: Conceptualization: T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; тарҳи аввал: S.K. ва H.S.; review/editing: S.K., H.S., M.A.R., T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; supervision: T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; funding acquisition: T.-R.K. ва H.-Y.S. Манбаъ инчунин саҳмҳоро дар методология, таҳқиқ, таҳлили формалӣ, захираҳо, визуализатсия ва идоракунии лоиҳа ба шакли муфассали CRediT медиҳад.