Модели каламушии синдроми тухмдони поликистозӣ, ки бо летрозол + парҳези серравған ба вуҷуд оварда шудааст, модели пеш аз клиникии ҳайвонот аст, ки ихтилолҳои репродуктивии монанд ба PCOS-ро, ки летрозол ба вуҷуд меорад, бо стресси метаболикии парҳези серравған дар як системаи таҷрибавӣ муттаҳид мекунад. Дар таҳқиқот 24 каламуши модинаи Sprague-Dawley ба се гурӯҳ ҷудо карда шуданд: гурӯҳи назоратӣ (CON), гурӯҳе, ки бо парҳези муқаррарӣ летрозол гирифт (LV), ва гурӯҳе, ки ба ғайр аз летрозол парҳези серравған гирифт (HLV). Тадқиқотчиён вазни бадан, таҳаммулпазирӣ ба глюкоза, глюкозаи рӯза, липидҳои хуноба, гистологияи ҷигар, бофтаи чарбии виссералӣ, гадуди зери меъда, тухмдон ва бачадон; иммунофлуорессенсияи гадуди зери меъда ва тухмдон ва экспрессияи генҳоро дар бофтаҳои метаболикӣ якҷоя арзёбӣ карданд.

Натиҷаи асосии таҳқиқот ин аст, ки парҳези серравғанҳамаиихтилолҳои модели летрозолро ба як дараҷа вазнин накард; баръакс, хусусиятҳои муайяни метаболикӣ ва гистопатологиро интихобан шадидтар кард. Дар гурӯҳи HLV нисбат ба гурӯҳи LV чарбшавии ҷигар равшантар, адипоситҳои виссералӣ калонтар, экспрессияи гепатикии PEPCK ва G6Pase баландтар, экспрессияи SREBP-1c ва ACC дар бофтаи чарбӣ баландтар ва тағйироти CYP19A1 ва AMH дар тухмдонҳо равшантар буданд. Баръакс, дар вазни бадан, глюкозаи хуни рӯза, липидҳои хуноба, сигнали иммунофлуорессенсияи инсулин дар гадуди зери меъда, позитивии панкреатии TUNEL ва бисёр генҳои асосии сигналдиҳии инсулин байни LV ва HLV бадшавии иловагии аҳамиятнок нишон дода нашуд.

Ин фарқият махсусан муҳим аст. Таҳқиқот хулосаи “парҳези серравған ҳар як нишондиҳандаи метаболикӣ ва репродуктивиро дар PCOS боз ҳам бадтар мекунад”-ро дастгирӣ намекунад. Ифодаи дурусттар ин аст, ки парҳези серравған дар муҳити монанд ба PCOS, ки бо летрозол ба вуҷуд оварда шудааст,баъзе нишондиҳандаҳои истеҳсоли глюкоза, липогенез, гипертрофияи бофтаи чарбӣ, гистопатологияи ҷигар ва тухмдонро интихобан вазнинтар мекунад.

Ин таҳқиқот тадқиқоти табобатии инсон нест. Инсулини хуноба, консентратсияҳои андрогенҳои гардишкунанда ва HOMA-IR мустақим чен карда нашудаанд. Аз ин рӯ, занҷири механизмӣ аз гиперинсулинемияи компенсаторӣ то гиперандрогенизм бо ин таҷриба мустақим тасдиқ нашудааст. Илова бар ин, давраи эструси каламушҳо, физиологияи тухмдон ва тақсимшавии чарб аз инсон фарқ мекунад. Натиҷаҳо барои омӯзиши меҳвари метаболикӣ-репродуктивии PCOS модели пеш аз клиникӣ пешниҳод мекунанд; онҳо маънои самаранокии мустақими клиникии табобат ё ҳатман ба вуҷуд омадани ҳамин таъсирҳо дар инсонро надоранд.

Мушкилоти асосии таҳқиқот чист?

Летрозол пайвастест, ки ферменти ароматазаро ингибитсия мекунад. Ароматаза системаи ферментативиест, ки дар табдили андрогенҳо ба эстрогенҳо иштирок мекунад ва сафедаи ароматазае, ки аз ҷониби CYP19A1 код мешавад, дар маркази ин табдил қарор дорад. Моделҳои хоянда бо летрозол метавонанд хусусиятҳои муҳими репродуктивии PCOS, аз ҷумла зиёдатии андроген ва ихтилоли овулятсияро ба вуҷуд оранд. Аммо нуқтаи ибтидоии тадқиқотчиён ин аст, ки моделҳои танҳо бо летрозол додашуда метавонанд ҳамаи ихтилолҳои метаболикӣ ё дараҷаи онҳоеро, ки дар PCOS-и вобаста ба фарбеҳӣ дида мешаванд, ба қадри кофӣ ифода накунанд.

Аз ин рӯ, таҳқиқот ҳадаф дошт, ки ба стресси эндокринӣ/репродуктивии ба вуҷудовардаи летрозол стресси метаболикии парҳези серравғанро илова карда, фенотипи васеътару монанд ба PCOS эҷод кунад. Саволи асосии таҷрибавӣ танҳо “PCOS ба вуҷуд омад?” нест. Саволи муҳимтар ин аст,ҳангоми илова шудани парҳези серравған ба заминаи летрозол кадом узв, молекула ва нишондиҳандаҳои гистологӣ иловатан вайрон мешаванд.

Модели Летрозол + Парҳези Серравған Чиро Ифода Мекунад?

Модели летрозол + парҳези серравған модели пеш аз клиникии таҷрибавӣ аст, ки ихтилолҳои репродуктивӣ/эндокринии монанд ба PCOS-ро, ки летрозол ба вуҷуд меорад, бо бори метаболикии парҳези серравған дар як каламуш муттаҳид карда, барои омӯзиши муносибатҳои метаболикӣ-репродуктивӣ байни ҷигар, бофтаи чарбии виссералӣ, гадуди зери меъда ва тухмдонҳо истифода мешавад; ин модел нусхаи айнӣ ё модели ташхиси клиникии PCOS-и инсон нест.

Чаро се гурӯҳ заруранд?

Муқоисаи муҳимтарини ин тарҳбайни LV ва HLV аст. Фарқи калон байни CON ва HLV худ аз худ маънои онро надорад, ки “парҳези серравған ин тағйирро ба вуҷуд овард”; зеро дар гурӯҳи HLV ҳам летрозол ва ҳам парҳези серравған мавҷуданд. Барои дидани таъсири иловагии парҳези серравған бар замми летрозол бояд санҷид, ки HLV аз LV фарқ мекунад ё не.

Парҳези серравған маҳз чӣ маъно дорад?

Аз таркиби энергетикии парҳези D12492, ки ба гурӯҳи HLV дода шуд,%60 аз чарб, %20 аз карбогидрат ва %20 аз сафедатаъмин шудааст. Зичии умумии энергетикии парҳез 5,24 kcal/g дода шудааст. Ифодаи “%60 kcal чарб” маънои онро надорад, ки %60 вазни хӯрок чарб аст; он маънои онро дорад, ки %60 энергияи умумии метаболикӣ аз манбаъҳои чарб меояд. Манбаъ таркиби муфассали макронутриентии парҳези муқаррариро, ки ба гурӯҳҳои CON ва LV дода шудааст, дар ҳамин сатҳ гузориш намекунад.

Чаро сигналдиҳии инсулин дар марказ аст?

Вақте инсулин ба ҳуҷайра мерасад, ҷавоби метаболикӣ танҳо ба як молекула вобаста нест. Меҳвари асосие, ки таҳқиқот пайгирӣ мекунад,INSR → IRS → PI3K → AKTзанҷири сигналӣ мебошад. INSR ретсептори инсулин аст. IRS-1 ва IRS-2 генҳои сафедаҳои адапторӣ мебошанд, ки сигналро аз ретсептор ба дохили ҳуҷайра интиқол медиҳанд. PI3K ва AKT марҳилаҳои асосии миёнарав мебошанд, ки дар интиқоли сигнал ба ҷавоби метаболикӣ иштирок мекунанд. GLUT4 махсусан бо интиқоли глюкоза ба дохили ҳуҷайра дар бофтаҳои ҳассос ба инсулин алоқаманд аст.

Аммо бояд фаромӯш накунед, ки арзишҳое, ки дар ин таҳқиқот бо qPCR чен шудаанд, асосанэкспрессияи mRNAмебошанд. Кам шудани миқдори mRNA-и ген метавонад бо ихтилол дар роҳи дахлдори сигналӣ мувофиқ бошад, аммо худ аз худ миқдори сафеда, ҳолати фосфорилатсия ё фаъолияти ферментативиро мустақим чен намекунад. Тадқиқотчиён низ зарурати тасдиқи иловагӣ бо маркерҳои хоси фосфорилатсия, ба монанди p-AKT ва p-INSR, қайд мекунанд.

Дар мавриди ҷигар як нозукии дигар вуҷуд дорад. Интиқолдиҳандаи асосии дуҷонибаи глюкоза дар гепатоситҳо GLUT2 аст. Манбаъ махсусан қайд мекунад, ки кам шудани GLUT4 mRNA дар ҷигар метавонад экспрессияи сатҳи паст дар гепатоситҳо ё саҳми ҳуҷайраҳои ғайрипаренхималии ҷигарро инъикос кунад. Аз ин рӯ, натиҷаи GLUT4 дар ҷигар набояд чунин тафсир шавад, ки “интиқолдиҳандаи асосии глюкозаи гепатосит GLUT4 аст ва он мустақим хомӯш шудааст”.

Глюконеогенез, липогенез ва оксидшавии кислотаҳои равғанӣ чӣ маъно доранд?

PEPCKваG6Pase, ду гени муҳим мебошанд, ки бо глюконеогенез — раванди истеҳсоли нави глюкоза дар ҷигар — алоқаманданд. Баланд шудани экспрессияи ин генҳо дар тафсири таҳқиқоти манбаъ бо тағйироти метаболикӣ ба самти зиёд шудани истеҳсоли эндогении глюкоза мувофиқ аст.

SREBP-1c,FASваACCтанзимкунандагони марбут ба синтези чарб/липогенез мебошанд. SREBP-1c дар танзими барномаи генҳои липогенӣ иштирок мекунад; ACC яке аз марҳилаҳои аввали синтези кислотаҳои равғаниро танзим мекунад; FAS комплекси синтези кислотаҳои равғаниро ифода мекунад. Дар ҳоле ки ҷадвали праймерҳо ва Figure 6-и манбаъ истилоҳи “FAS”-ро истифода мебаранд, дар матни муҳокима баъзан “FASN” навишта шудааст; дар ин ҷо номгузории ҷадвал ва графикҳои манбаъ нигоҳ дошта шуда, FAS истифода шудааст.

CPT1aваACOX1генҳое мебошанд, ки бо истифодаи оксидативии кислотаҳои равғанӣ алоқаманданд. Дар гурӯҳҳои LV ва HLV пасттар аз назорат будани ҳарду бо тағйирот дар тарафи оксидшавии кислотаҳои равғанӣ мувофиқ аст; аммо байни LV ва HLV фарқи иловагии аҳамиятнок гузориш нашудааст.

Дар тухмдонҳо кадом сохторҳо арзёбӣ шуданд?

Corpus luteum, сохтори муҳими гистологиест, ки баъд аз овулятсия аз табдили фолликул ба вуҷуд меояд ва фаъолияти давраи репродуктивиро нишон медиҳад. Кам шудани шумораи corpus luteum бо вайроншавии давраи муқаррарии овуляторӣ мувофиқ аст.

Фолликули антралӣ, фолликулест, ки ба марҳилаи пешрафтатари инкишоф расида, антруми пур аз моеъ дорад.Фолликулҳои киставӣсохторҳои васеъшуда ва аз инкишофи муқаррарии фолликул дуршударо ифода мекунанд.Фолликули атретикӣфолликулест, ки инкишофро идома дода натавониста, ба дегенератсия мегузарад. Дар таҳқиқот дар гурӯҳҳои LV ва HLV шумораи corpus luteum ва фолликулҳои антралӣ кам шуда, фолликулҳои киставӣ зиёд шуданд; шумораи фолликулҳои атретикӣ дар гурӯҳи HLV аз гурӯҳи LV ҳам баландтар буд.

CYP19A1 ва AMH чиро нишон медиҳанд?

CYP19A1, маркери асосиест, ки бо номгузории ген/сафедаи ферменти ароматаза алоқаманд аст.AMH, гормони anti-Müllerian, нишондиҳандаест, ки бо муҳити фолликулии тухмдон ва инкишофи фолликул алоқаманд аст. Дар таҳқиқот ҳар ду маркер бо иммунофлуорессенсия арзёбӣ шуданд ва дар гурӯҳи HLV нисбат ба LV тағйироти қавитар дида шуданд.

Дар ин ҷо маҳдудияти муҳими ченкунӣ вуҷуд дорад: зиёд шудани сигнали флуорессенсияи CYP19A1 далели мустақими зиёд шудани фаъолияти ферменти ароматаза ё истеҳсоли эстроген нест. Летрозол аллакай ароматазаро фармакологӣ ингибитсия мекунад ва дар ин таҳқиқот сатҳи андроген/эстрогени гардишкунанда мустақим чен нашудааст. Ба ҳамин монанд, тағйироти флуорессенсияи AMH худ аз худ ченаки тамоми фаъолияти тухмдон нест.

Дар гадуди зери меъда чӣ чен карда шуд?

Дар ҷазирачаҳои гадуди зери меъда иммунофлуорессенсияи инсулин ва рангкунии TUNEL истифода шуданд. Кам шудани сигнали инсулин тағйироти майдон/сигнали ҳуҷайравии инсулин-мусбатро дар сохтори ҷазирача нишон медиҳад, дар ҳоле ки санҷиши TUNEL кӯшиш мекунад сигнали ядроии апоптотикии мувофиқ ба пора шудани DNA-ро муайян кунад.

Таҳлили TUNEL ядроҳои DAPI-мусбатро дар ROI-и барои ҷазирачаи гадуди зери меъда муайяншуда арзёбӣ кардааст. Аз ин рӯ, натиҷаи TUNEL “миқдори инсулин дар гардиш” ё “чӣ қадар инсулин гадуди зери меъда ҷудо мекунад” нест. Илова бар ин, азбаски рангкунии TUNEL худ аз худ нишон намедиҳад, ки ҳар як ядрои бо инсулин дукарата муайяншуда ҳатман β-ҳуҷайра аст, натиҷаро боэҳтиёттарин тарз ҳамчунсигнали апоптотикӣ дар минтақаи ҷазирачахондан лозим аст.

Натиҷаҳое, ки таҳқиқот мустақим дастгирӣ мекунад ва намекунад

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Тарҳи муфассали таҷрибаи ҳайвонот

Дар таҳқиқот каламушҳои модинаи ҳафтҳафтаинаи Sprague-Dawley истифода шуданд. Пас аз харид, ҳайвонот як ҳафта мутобиқ карда шуда, баъд ба се гурӯҳ, ҳар кадом аз ҳашт ҳайвон, тасодуфӣ тақсим шуданд. Ҳамин тавр, ҳаҷми умумии намуна 24 каламуш буд.

Шароити нигоҳдорӣ 23±2 °C ҳарорат, %50±10 намии нисбӣ ва давраи 12 соат рӯшноӣ/12 соат торикӣ буд. Ҳайвонот ба хӯрок ва об дастрасии озод доштанд.

Ба гурӯҳи CON дар давоми ҳафт ҳафта ҳар рӯз як маротиба оби дистиллшудаи даҳонӣ дода шуд. Ба гурӯҳҳои LV ва HLV летрозол дар вояи 1 mg/kg, дар %1 карбоксиметилселлюлоза суспензия шуда, ҳар рӯз як маротиба даҳонӣ дар тӯли ҳафт ҳафта дода шуд. Гурӯҳи HLV ҳамзамон парҳези серравғани D12492-ро истеъмол кард. Манбаъ тақсимоти муфассали энергияи парҳези муқаррариро гузориш намекунад.

Дар анҷоми таҷриба консентратсияи CO₂тадриҷан то %30 баланд карда шуд; пас аз гум кардани ҳуш бо пунксияи дил хун гирифта шуда, эвтаназия бо дислокатсияи гардан анҷом дода шуд. Тухмдон, бачадон, ҷигар, гадуди зери меъда ва бофтаи чарбии виссералӣ ҷамъоварӣ шуданд. Барои ҷудокунии хуноба, хун дар 12.000 × g барои 15 дақиқа центрифуга шуда, хуноба дар −80 °C нигоҳ дошта шуд.

Вазни бадан ҳар ҳафта сабт шуд. Графики вазни бадани мақола то ҳафтаи 8 мерасад; дар ҳоле ки метод пас аз як ҳафтаи мутобиқшавӣ татбиқи ҳафтҳафтаинаро тавсиф мекунад. Аз ин рӯ, график эҳтимолан хатти вақти мутобиқшавӣ + татбиқро дар бар мегирад, аммо манбаъ ҳафтаи мутобиқшавиро дар график алоҳида нишон намедиҳад.

Санҷиши таҳаммулпазирии даҳонии глюкоза чӣ гуна гузаронида шуд?

Санҷиши таҳаммулпазирии даҳонии глюкоза (OGTT) санҷиши динамикӣ аст, ки месанҷад организм бори додашудаи глюкозаро дар тӯли вақт чӣ қадар зуд танзим мекунад. Пас аз 12 соат гурусна нигоҳ доштан ба каламушҳо 2 g/kg D-глюкоза даҳонӣ дода шуд; глюкозаи хун аз раги дум дар 0, 30, 60, 90 ва 120 дақиқа чен карда шуд. Глюкозаи рӯза пеш аз некропсия ҳам баъд аз 12 соат гуруснагӣ бо глюкометри сайёр чен шуд.

Биохимияи хуноба

AST, ALT, триглисерид (TG), холестерини умумӣ (TC) ва HDL-холестерин бо маҷмӯаҳои тиҷоратии Fujifilm чен шуданд; LDL-холестерин мувофиқи дастури истеҳсолкунанда ҳисоб карда шуд. Абсорбанс бо дастгоҳи DRI-CHEM NX500 хонда шуд. Гарчанде AST ва ALT дар бахши методҳо байни тағйирёбандаҳои ченшуда ҳастанд, дар баёни асосии натиҷаҳои мақолаи манбаъ барои онҳо натиҷаҳои рақамии ҷудогона дода нашудаанд; аз ин рӯ, дар ин ҷо арзиш сохта нашудааст.

Гистология чӣ гуна иҷро шуд?

Ҷигар, гадуди зери меъда, бофтаи чарбии виссералӣ, тухмдон ва бачадон дар %10 формалини нейтралии буферӣ фиксация шуда, ба парафин ҷойгир карда ва бо HM325 Micro-Tome ба буришҳои 4 µm тақсим шуданд. Барои ҳар бофта аз ҳар ҳайвон се буриш баррасӣ шуд. Буришҳо бо гематоксилин-эозин (H&E) ранг карда, бо микроскопи рӯшноии Nikon Eclipse Ci-L Plus арзёбӣ шуданд.

Дар буришҳои тухмдон corpus luteum, фолликулҳои киставӣ ва атретикӣ арзёбӣ шуда, ченкуниҳои дахлдори морфометрӣ анҷом дода шуданд. Диаметри адипоситҳо дар бофтаи чарбии виссералӣ бо калонкунии ×200 чен шуд.

Скори осеби ҷигар чӣ гуна сохта шуд?

Манбаъ равиши фаъолияти NAFLD бар асоси Kleiner-ро бо истилоҳоти кунунии MASLD истифода бурда, чор ҷузъи гистологиро ҷамъ кардааст. Скори умумӣ барои ин таҳқиқот дар доираи 0–12 аст.

Огоҳии гузоришдиҳии дохили манбаъ:Дар методи оморӣ гуфта мешавад, ки ин скори ordinal ҳамчун медиана ва фосилаи байни квартилҳо (IQR) пешниҳод шудааст; шарҳи Figure 3 низ box plot-ро ҳамчун медиана ва IQR тавсиф мекунад. Аммо матни натиҷаҳо скори CON, LV ва HLV-ро ҳамчун 2,60±1,58; 4,60±1,53 ва 6,67±0,52 бо аломати “±” менависад. Азбаски манбаъ ин фарқи намоишро шарҳ намедиҳад, ин арзишҳо дар ин ҷо ҳамчун миёна±SD аз нав номгузорӣ нашудаанд.

Усули иммунофлуорессенсия

Бофтаҳои гадуди зери меъда ва тухмдон, ки ба парафин ҷойгир карда шудаанд, бо антителоҳои insulin, AMH ва CYP19A1 дар маҳлули 1:500 инкубатсия шуданд; сипас антителоҳои дуюми бо Alexa Fluor 488/594 нишондор дар маҳлули 1:1.000 татбиқ шуданд. Ядроҳо бо муҳити монтажии дорои DAPI намоён шуданд. Тасвирҳо бо EVOS M5000 Imaging System дар шароити якхелаи экспозитсия гирифта шуда, пас аз хориҷ кардани замина бо ImageJ шиддати флуорессенсия таҳлил шуд.

ROI (region of interest), минтақаи маҳдудшуда дар тасвир аст, ки дар он таҳлили миқдорӣ анҷом дода мешавад. Ҷазирачаҳои гадуди зери меъда дастӣ ҳамчун ROI муайян шуданд ва дар тасвирҳои гуногун шароити якхелаи экспозитсия нигоҳ дошта шуд. Ин барои кам кардани таъсири сунъии тағйири камера/экспозитсия ҳангоми муқоисаи шиддати флуорессенсия байни гурӯҳҳо пешбинӣ шудааст.

Санҷиши TUNEL ва формулаи истифодашуда

Санҷиши TUNEL усулест, ки бо нишонгузории сигнали ядроии вобаста ба фрагментацияи DNA барои муайян кардани ҳуҷайраҳои апоптотикӣ истифода мешавад. Дар манбаъ DeadEnd Fluorometric TUNEL System истифода шудааст. Буришҳо бо ксилен депарафинизатсия шуда, бо 20 µg/ml протеиназа K дар 37 °C барои 20 дақиқа коркард ва бо омехтаи детексионӣ дар 37 °C дар торикӣ 60 дақиқа инкубатсия шуданд.

Ҳисоби фоизе, ки дар манбаъ истифода шудааст:

\[ \text{TUNEL-pozitif hücre (\%)}= \frac{\text{TUNEL-pozitif DAPI çekirdek sayısı}} {\text{adacık ROI içindeki toplam DAPI-pozitif çekirdek sayısı}} \times 100 \]

Сурат шумораи ядроҳое мебошад, ки аз ҳадди TUNEL мегузаранд. Махраҷ шумораи умумии ядроҳои DAPI-мусбат дар ҳамон ROI-и ҷазирачаи гадуди зери меъда аст. Натиҷа бо фоиз ифода мешавад. Ҳамон ҳадд ба ҳамаи тасвирҳое, ки дар шароити якхелаи экспозитсия гирифта шудаанд, татбиқ шудааст. Барои ҳар ҳайвон минтақаҳои ҷазирачаи такрорнашаванда арзёбӣ шуда, миёнаи фоиз ҳамчун арзиши намояндагии ҳайвон истифода шудааст.

Усули qPCR

Аз ҷигар ва бофтаи чарбии виссералӣ RNA-и умумӣ ҷудо карда шуд. Дар ҳар намуна 50 mg бофта дар болои ях дар 1 ml Easy Blue Reagent гомогенизатсия ва дар 12.000 × g барои 15 дақиқа, дар 4 °C центрифуга шуд. Аз ҳар намуна 5 µg RNA бо Prime Script RT Reagent Kit ба cDNA табдил дода шуд ва PCR-и миқдорӣ бо TB Green PCR Master Mix анҷом ёфт. β-актин ҳамчун гени назоратӣ/референсӣ истифода шуда, гурӯҳи CON калибратор қабул гардид.

2^−ΔΔCqУсул Чиро Ҳисоб Мекунад?

2^−ΔΔCqусул дар qPCR экспрессияи гени ҳадафро аввал ба гени референсӣ ва баъд ба гурӯҳи назоратӣ нормализатсия карда, сатҳи нисбии mRNA-ро дар намуна ҳисоб мекунад; дар ин таҳқиқот гени референсӣ β-актин ва калибратор гурӯҳи CON мебошад ва натиҷа шумораи мутлақи молекулаҳои mRNA не, балки экспрессияи нисбӣ нисбат ба назорат аст.

Ҷараёни математикии усул чунин аст:

\[ \Delta C_q=C_{q,\text{hedef gen}}-C_{q,\beta\text{-aktin}} \]

Дар қадами аввал фарқи Cq байни гени ҳадаф ва β-актин гирифта мешавад. Ҳамин тавр, қисми тағйирёбандаҳои техникии байни намунаҳо, ба монанди маводи ибтидоӣ, нисбат ба гени референсӣ нормализатсия мешавад.

\[ \Delta\Delta C_q=\Delta C_{q,\text{örnek}}-\Delta C_{q,\text{CON}} \]

Дар қадами дуюм арзиши нормализатсияшудаи намунаи таҷрибавӣ бо арзиши нормализатсияшудаи гурӯҳи назоратӣ муқоиса мешавад.

\[ \text{Göreli ekspresyon}=2^{-\Delta\Delta C_q} \]

Қадами охир тағйири нисбии чандкаратаро медиҳад. Аз ин рӯ, интизор меравад, ки арзиши гурӯҳи назоратӣ тақрибан 1 бошад. Масалан, арзиши нисбии тақрибан 0,5 дар доираи фарзияҳои усул маънои онро дорад, ки mRNA-и ҳадаф тақрибан нисфи сатҳи назорат аст; тақрибан 2 бошад, маънои тақрибан ду баробари назоратро дорад. Ин арзишҳо бо миқдор ё фаъолияти сафеда як чиз нестанд.

Манбаъ пайдарпаии праймерҳоро муфассал медиҳад. Гарчанде рӯйхати генҳои ҳадаф дар шарҳи усули qPCR TNF, IL-1β ва IL-18-ро ошкоро ном намебарад, ин се ген дар ҷадвали праймерҳои манбаъ мавҷуданд ва натиҷаҳои онҳо дар Figure 6D гузориш шудаанд. Аз ин рӯ, қабул карда мешавад, ки генҳои илтиҳоб дар манбаъ воқеан чен шудаанд, аммо ин камбуди номгузорӣ дар параграфи метод бояд алоҳида қайд шавад.

Таҳлили оморӣ чӣ гуна анҷом дода шуд?

Таҳлилҳо бо GraphPad Prism 9.0 анҷом дода шуданд. Аксари натиҷаҳои миқдорӣ ҳамчун миёна ± инҳирофи стандартӣ гузориш шуданд. Барои муқоисаи се гурӯҳ дар як нуқтаи вақт ANOVA-и яксамта истифода шуда, баъдан барои ҳамаи муқоисаҳои ҷуфтӣ санҷиши Tukey post hoc татбиқ шуд.

Барои маълумоте чун вазни бадан ва OGTT, ки дар як ҳайвон дар тӯли вақт такроран чен шуданд, ANOVA-и дусамтаи тарҳи омехта бо сохтори гурӯҳ × вақт истифода шуда, муқоисаҳои ҷуфтӣ дар ҳар нуқтаи вақт бо санҷиши Tukey анҷом дода шуданд.

Азбаски скори гистопатологии ҷигар ordinal ҳисобида шуд, санҷиши Kruskal-Wallis ва баъдан санҷиши бисёрмуқоисавии Dunn истифода шуданд. Ҳадди аҳамияти оморӣP<0,05муайян шуд. Аз ин ҳад камтар будани қимати P нишон медиҳад, ки фарқи мушоҳидашуда байни гурӯҳҳо дар доираи гипотезаи нуллии муайяншуда аз ҷиҳати оморӣ ғайриинтизор аст; қимати P худ аз худ андозаи таъсири биологӣ ё аҳамияти клиникиро нишон намедиҳад.

Натиҷаҳои метаболикӣ

Вазни бадан аз ҳафтаи сеюм дар гурӯҳҳои LV ва HLV аз назорат баландтар шуда, фарқ баъд аз ҳафтаи чорум равшантар гардид. Бо вуҷуди ин, дар анҷоми таҷриба вазнинтар будани HLV нисбат ба LV аз ҷиҳати оморӣ аҳамиятнок нест. Аз ин рӯ, гуфтан мумкин нест, ки “парҳези серравған вазни баданро дар гурӯҳи летрозол ба таври аҳамиятнок боз ҳам зиёд кард”.

OGTT манзараи муфассалтар нишон дод. Дар оғоз сатҳи глюкозаи LV ва HLV аз назорат баланд буд. Дар дақиқаи 30 HLV аз LV ба таври аҳамиятнок баландтар буд (P<0,05). Дар дақиқаи 60 низ HLV аз LV баландтар гузориш шуд (P<0,01). Баръакс, дар дақиқаҳои 90 ва 120 фарқи байни LV ва HLV дигар аҳамиятнок набуд. Пас, таъсири парҳези серравған дар ҳамаи нуқтаҳои каҷи вақт яксон нест.

Давраи эструс бо vaginal smear арзёбӣ шуд. Дар гурӯҳи CON давра муқаррарӣ буд, дар ҳоле ки дар аксари ҳайвоноти гурӯҳҳои LV ва HLV давра вайрон шуд. Бо вуҷуди ин, манбаъ дар бахши Materials and methods тартиби муфассали гирифтани намуна, рангкунӣ ва таснифи марҳилаҳои vaginal smear-ро алоҳида шарҳ намедиҳад; бинобар ин натиҷа дар ҳамон сатҳе, ки манбаъ гузориш мекунад, оварда шудааст.

Натиҷаҳои тухмдон ва бачадон

Ҷанбаи муҳими ин натиҷаҳо он аст, ки гурӯҳи HLV дар ҳар як нишондиҳандаи репродуктивӣ аз LV бадтар нест. Масалан, диаметри бачадон дар HLV аз LV калонтар аст; яъне хурдшавие, ки дар гурӯҳи летрозол дида мешавад, дар HLV камтар равшан аст. Баръакс, шумораи фолликулҳои атретикӣ дар HLV ба таври аҳамиятнок баландтар аст.

Ҳаҷми corpus luteum низ диққат талаб мекунад. Матни натиҷаи манбаъ мегӯяд, ки LV аз назорат пасттар аст ва HLV то 339,12±212,65 mm³ “афзоиши қисман” нишон медиҳад. Дар Figure 2-и манбаъ болои муқоисаи LV–HLV аломати † дида мешавад. Азбаски матн қимати P-и ин муқоисаи ҷуфтиро алоҳида шарҳ намедиҳад, фарқи гузоришдиҳӣ байни фигура ва матн дар ин ҷо нигоҳ дошта шудааст.

Гистологияи ҷигар, гадуди зери меъда ва бофтаи чарбии виссералӣ

Дар ҷигари назоратӣ сохтори лобулярӣ нигоҳ дошта шуд. Дар гурӯҳи LV вакуолизатсияи сабуки гепатоситҳо ва қатраҳои маҳаллии липидӣ дида шуданд, дар ҳоле ки дар гурӯҳи HLV ҷамъшавии васеътари чарб, баллоншавии гепатоситҳо ва инфилтратсияи равшантарини ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ мушоҳида шуд.

Дар матни натиҷаҳои манбаъ скори фаъолияти ҷигар барои CON 2,60±1,58, барои LV 4,60±1,53 ва барои HLV 6,67±0,52 навишта шудааст. LV ва HLV аз назорат баландтаранд; HLV инчунин аз LV баландтар гузориш шудааст (P<0,05). Аммо, тавре ки боло шарҳ дода шуд, азбаски дар тарзи пешниҳоди скор байни медиана/IQR ва нишондиҳандаи “±” номувофиқии дохили манбаъ вуҷуд дорад, ин арзишҳо аз нав ба гурӯҳбандии оморӣ дохил карда нашудаанд.

Диаметри миёнаи адипосит дар бофтаи чарбии виссералӣ дар CON 45,71±5,10 µm, дар LV 57,38±7,50 µm ва дар HLV 79,09±6,80 µm буд. HLV аз LV ҳам ба таври аҳамиятнок калонтар аст (P<0,0001). Ин яке аз равшантарин таъсирҳои гистоморфометриест, ки парҳези серравған бар заминаи летрозол илова кардааст.

Муаллифон давраи ҳафтҳафтаинаи парҳези серравғанро бештар ҳамчун марҳилае шарҳ медиҳанд, ки бозсозии барвақти бофтаи чарбии виссералӣ — махсусан гипертрофияи адипосит ва фаъолшавии генҳои липогенӣ — ро нишон медиҳад. Арзёбӣ дар бораи он ки инфилтратсияи устувори ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ метавонад бо таъсири дарозтари HFD инкишоф ёбад, дар муҳокимаи таҳқиқот ба адабиёти қаблӣ такя мекунад; он натиҷаи мустақими силсилаи вақти ин таҷриба нест.

Иммунофлуорессенсияи гадуди зери меъда ва натиҷаҳои TUNEL

Ҳар ду гурӯҳи PCOS нисбат ба гурӯҳи назоратӣ сигнали пасттари флуорессенсияи инсулини панкреатӣ ва позитивии баландтари TUNEL нишон доданд. Аммо байни HLV ва LV фарқи иловагии аҳамиятнок пайдо нашуд. Аз ин рӯ, нишон дода нашудааст, ки парҳези серравған дар ин протоколи ҳафтҳафтаина нишондиҳандаҳои осеби ҷазирачаҳои гадуди зери меъдаро аз сатҳи ба вуҷудовардаи летрозол ҳам баландтар мебарад.

Матни натиҷаҳои манбаъ арзишҳои 61,79/31,24/30,98-ро ҳамчун “нисбати майдони инсулин-мусбат” тавсиф мекунад, дар ҳоле ки меҳвари y-и Figure 4 ибораи “relative insulin fluorescence intensity”-ро истифода мебарад. Бинобар ин фарқи истилоҳот, арзишҳо дар ин ҷо бе воҳиди физикии фоиз ҳамчун “ченкунии иммунофлуорессенсия” нигоҳ дошта шудаанд.

Иммунофлуорессенсияи CYP19A1 ва AMH дар тухмдон

Сигнали CYP19A1 дар гурӯҳи назоратӣ бештар дар минтақаи corpus luteum буд, аммо дар гурӯҳҳои LV ва HLV дар минтақаи фолликулярӣ васеътар паҳн шуд. Сигнали AMH низ дар гурӯҳҳои LV ва HLV зиёд шуд ва тағйироти қавитарин дар HLV дида шуд. Ин натиҷаҳо бо тафсире мувофиқанд, ки микромуҳити фолликулярӣ таҳти стресси якҷояи метаболикӣ ва эндокринӣ тағйир ёфтааст; аммо азбаски синтези гормон ё консентратсияи гормонҳои гардишкунанда мустақим чен нашудааст, хулосаҳои минбаъдаи гормонӣ баровардан мумкин нест.

Экспрессияи генҳо дар ҷигар ва бофтаи чарбӣ

Ин ҷадвал натиҷаи “вазниншавии интихобӣ”-и таҳқиқотро равшан нишон медиҳад. Аксари ҷузъҳои асосии сигналдиҳии инсулин аллакай дар гурӯҳи LV ба таври равшан коҳиш ёфтаанд ва гарчанде дар HLV аз ҷиҳати рақамӣ боз ҳам пасттар менамоянд, мувофиқи матни манбаъ аксари фарқҳои LV–HLV аҳамиятнок нестанд. Баръакс, баъзе нишондиҳандаҳои вобаста ба истеҳсоли глюкоза/липогенез, аз ҷумла PEPCK, G6Pase, SREBP-1c ва ACC, дар HLV аз LV ҳам баландтар шудаанд.

Генҳои илтиҳобӣ низ яксамта рафтор накарданд. TNF-α ва IL-1β дар HLV аз LV баландтаранд; IL-18 бошад ба самти баръакс тағйир ёфта, дар HLV аз LV ба таври аҳамиятнок пасттар ёфт шуд. Бо вуҷуди ин, сатҳи IL-18 дар HLV аз назорат баланд монд. Аз ин рӯ, хулосаи “парҳези серравған ҳамаи маркерҳои илтиҳобро боз ҳам зиёд кард” аз ҷониби манбаъ дастгирӣ намешавад.

Номувофиқии дохили манбаъ барои INSR:баёни натиҷаҳо ва хулоса мегӯянд, ки байни LV ва HLV дар нишондиҳандаҳои INSR, аз ҷумла INSR/IRS-1/IRS-2/AKT/PI3K/GLUT4, фарқи аҳамиятнок нест. Аммо дар графики INSR-и Figure 6A-и манбаъ байни LV–HLV аломати † дида мешавад ва дар шарҳи фигура † муқоисаи LV–HLV бо P<0,05-ро ифода мекунад. Азбаски ин ду унсури манбаъ бо ҳам мувофиқ нестанд, Verianla фарқи LV–HLV барои INSR-ро дар ин ҷо ҳамчун натиҷаи қатъии илмӣ интихоб намекунад.

Илова бар ин, бахши методҳо мегӯяд, ки RNA ҳам аз ҷигар ва ҳам аз VAT ҷудо карда шудааст ва муҳокима тағйироти сигналдиҳии инсулинро дар ҷигар ва VAT якҷоя шарҳ медиҳад. Бо вуҷуди ин, панелҳои рақамии A–D-и Figure 6-и манбаъ ҳамчун ҷигар ва панели E ҳамчун маркерҳои липогенези бофтаи чарбӣ нишонгузорӣ шудаанд. Арзишҳои рақамии ҷудогонаи INSR/IRS/PI3K/AKT/GLUT4 барои VAT дар PDF ҳамчун панели мустақил пешниҳод нашудаанд. Аз ин рӯ, барои генҳои сигналдиҳии инсулини VAT натиҷаҳои рақамии ҷудогонае, ки дар манбаъ нишон дода нашудаанд, сохта нашудаанд.

Оё Парҳези Серравған Ҳамаи Ихтилолҳои Гурӯҳи Летрозолро Боз Ҳам Зиёд Кард?

Не. Таъсири парҳези серравған интихобӣ аст: дар гурӯҳи HLV нисбат ба LV дар нишондиҳандаҳое чун PEPCK, G6Pase, SREBP-1c, ACC, TNF-α, IL-1β, диаметри адипосит, баъзе нишондиҳандаҳои тухмдон, CYP19A1 ва AMH тағйироти иловагӣ дида шуданд; аммо дар вазни бадан, глюкозаи рӯза, липидҳои хуноба, флуорессенсияи инсулини панкреатӣ, позитивии TUNEL, FAS, CPT1a, ACOX1 ва бисёр маркерҳои асосии сигналдиҳии инсулин байни LV–HLV фарқи иловагии аҳамиятнок нишон дода нашуд.

Тафсири асосии илмии таҳқиқот

Модел ихтилолҳои репродуктивӣ/эндокринии ба вуҷудовардаи летрозолро бо стресси метаболикии парҳези серравған дар як таҷриба муттаҳид намуда, тағйироти ҳамзамонро дар ҷигар, бофтаи чарбии виссералӣ, гадуди зери меъда ва тухмдонҳо намоён кардааст. Қавитарин таъсирҳои иловагии HFD махсусан дар стеатози ҷигар, гипертрофияи адипоситҳои виссералӣ, генҳои вобаста ба глюконеогенези гепатикӣ, липогенези бофтаи чарбӣ ва баъзе нишондиҳандаҳои тухмдон дида мешаванд.

Бо вуҷуди ин, маълумоти таҳқиқот як механизми хаттии муайянро аз оғоз то анҷом исбот намекунад. Масалан, занҷири “муқовимат ба инсулин → гиперинсулинемияи компенсаторӣ → зиёд шудани истеҳсоли андроген дар тухмдон → ихтилоли фолликулярӣ” аз ҷиҳати биологӣ муҳокима шудааст; аммо дар ин таҷриба инсулини хуноба, андрогенҳои хуноба ё HOMA-IR чен нашудаанд. Аз ин рӯ, дар ин каламушҳо ин занҷир воқеан бо кадом тартиб рух додааст, таҷрибавӣ муайян нашудааст.

Маҳдудиятҳои асосӣ

Маҳдудияти аввал ин аст, ки ин модели хоянда аст. Байни каламуш ва инсон аз ҷиҳати давраи эструс/менструалӣ, физиологияи тухмдон ва тақсимшавии бофтаи чарбӣ фарқҳои муҳим мавҷуданд. Натиҷаҳоро мустақим ба инсон интиқол додан дуруст нест.

Маҳдудияти дуюм ин аст, ки қисми муҳими арзёбии сигналдиҳии инсулин ба экспрессияи mRNA такя мекунад. Тадқиқотчиён зарурати маркерҳои хоси фосфорилатсия, ба монанди p-AKT ва p-INSR, ва тасдиқи иловагии иммуногистохимиявиро қайд кардаанд.

Маҳдудияти сеюм чен нашудани инсулини хуноба, консентратсияҳои андроген ва HOMA-IR аст. Ин камбудӣ исботи мустақими муносибати гиперинсулинемия-гиперандрогенизмро дар ин таҷриба пешгирӣ мекунад.

Маҳдудияти чорум ба андозаи вақт дахл дорад. Таҳқиқот бофтаҳоро дар анҷоми татбиқи ҳафтҳафтаинаи HFD арзёбӣ кард. Ин тарҳи longitudinal нест, ки пайдарпаии инкишофи фенотипи монанд ба PCOS, баргаштпазир ё баргаштнопазир будани он ва тағйирот дар таъсири дарозтарро муайян кунад.

Муаллифон пешниҳод мекунанд, ки дар оянда профилҳои гормонӣ, натиҷаҳои ҳосилхезӣ, маркерҳои захираи тухмдон, ба монанди AMH, ва ҷомеаҳои микробии рӯда дар тӯли вақт пайгирӣ карда шаванд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Унвони аслӣ:High-fat diet exacerbates hepatic and adipose insulin signaling impairment and ovarian lesions in a rat model of letrozole-induced polycystic ovary syndrome

Муаллифон:Sunju So, Sujin Kwon, La Yoon Choi, Dae Yong Kim, Mi Hye Kim.

Саҳми баробар:Дар PDF-и манбаъ изҳороти ҳаммуаллифи якум/саҳми баробар муайян карда нашудааст.

Муаллифи масъул:Mi Hye Kim.

Муассиса:College of Korean Medicine, Woosuk University, Jeonju, Jeonbuk State 54986, Republic of Korea.

Маҷалла:Molecular Medicine Reports.

Ношир:Spandidos Publications.

Ҷилд / шумора / мақола:34 / 5 / Article 308.

DOI:10.3892/mmr.2026.14019.

Санаи қабул барои баррасӣ:22 Июн 2026.

Санаи қабул:28 Август 2026.

Нашри онлайн:15 Сентябр 2026.

Навъи манбаъ:Мақолаи аслии таҳқиқотӣ; таҷрибаи назоратшавандаи in vivo дар ҳайвонот. Таҳқиқоти клиникии инсон нест.

Баррасии ҳамтоён:Сиёсати расмии нашри Molecular Medicine Reports мегӯяд, ки мақолаҳо пеш аз қабул аз баррасии ҳамтоён мегузаранд ва ҳадди ақал аз ҷониби ду баррасикунандаи академӣ арзёбӣ мешаванд.

Иҷозатнома:PDF-и манбаъ ва сабти PMC иҷозатномаи Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International (CC BY-NC-ND 4.0)-ро нишон медиҳанд. Аз ин рӯ, тасвирҳои гистология, иммунофлуорессенсия ва схемаҳои аслии манбаъ айнан ё бо мутобиқсозии визуалии наздик дубора нашр нашудаанд. Схемаи дохили Verianla танҳо баёни мустақили визуалии муносибатҳои илмие мебошад, ки дар манбаъ ошкоро гузориш шудаанд.

Этикаи таҷриба:Woosuk University Institutional Animal Care and Use Committee, тасдиқ no. WS-2024-04.

Маблағгузорӣ:National Research Foundation of Korea (NRF), ҳукумати Корея MSIT; грант no. RS-2024-00338574.

Дастрасии маълумот:Гуфта шудааст, ки маълумоти дар таҳқиқот тавлидшуда метавонад аз муаллифи масъул дархост карда шавад.

Ихтилофи манфиатҳо:Муаллифон изҳор кардаанд, ки ихтилофи манфиатҳо вуҷуд надорад.

Саҳми муаллифон:MHK дар консептуализатсия ва тарҳи таҳқиқот саҳм гузоштааст. SS, SK ва LYC дар таҳлили додаҳо ва таҳқиқот иштирок кардаанд. LYC, DYK ва MHK дар арзёбии гистопатологӣ ва тафсири маълумоти таҷрибавӣ саҳм гузоштаанд; LYC, DYK ва MHK хабар додаанд, ки ҳаққонияти маълумоти хомро тасдиқ кардаанд. SS тарҳи аввали мақоларо омода кардааст; MHK ва DYK бозбинӣ ва назоратро таъмин кардаанд. Ҳамаи муаллифон матни ниҳоиро хонда ва тасдиқ кардаанд.

Огоҳиҳои гузоришдиҳии дохили манбаъ:(1) Скори MASLD дар метод ва шарҳи фигура ҳамчун медиана/IQR муайян шудааст, дар ҳоле ки матни натиҷа арзишҳоро дар шакли “±” медиҳад. (2) Барои INSR матни натиҷа фарқи LV–HLV-ро ғайриаҳамиятнок мешуморад, аммо Figure 6A байни LV–HLV аломати † нишон медиҳад. (3) Фарқи диаметри бачадон байни LV–HLV дар матни натиҷа ҳамчун P<0,05 дода шудааст, аммо дар графики Figure 2 аломати ††† мавҷуд аст. (4) Гарчанде TNF, IL-1β ва IL-18 дар рӯйхати генҳои ҳадафи параграфи усули qPCR номбар нашудаанд, ҷадвали праймерҳо ва графики натиҷаҳо ин генҳоро дар бар мегиранд. (5) Гарчанде манбаъ ихтилоли сигналдиҳии инсулинро ҳам дар ҷигар ва ҳам VAT муҳокима мекунад, Figure 6 барои VAT INSR/IRS/PI3K/AKT/GLUT4 панели рақамии ҷудогона пешниҳод намекунад. Ин нуқтаҳо аз ҷониби Verianla хомӯшона ислоҳ нашудаанд; номуайянӣ нигоҳ дошта шудааст.

Ҳадди асосии тафсир:Таҳқиқот дастгирӣ мекунад, ки модели каламушии HFD+LET метавонад баъзе хусусиятҳои метаболикӣ ва репродуктивии PCOS-и вобаста ба фарбеҳиро якҷоя инъикос кунад. Ин далели мустақими самаранокии клиникӣ, муваффақияти табобат ё пайдарпаии вақти гиперинсулинемия-гиперандрогенизм дар инсон нест.