HT-LM1004, кимчиден бөлүнүп алынган Lactiplantibacillus plantarum LM1004 штаммынан өндүрүлгөн, ферментациядан кийин жылуулук менен инактивацияланып кургатылган жана тирүү бактерияларды камтыбоосу көздөлгөн микробдук препарат. Изилдөө HT-LM1004түн иммунитетке тийгизген таасирин 8 апталык рандомизацияланган, кош сокур, плацебо-көзөмөлдүү адам сыноосу менен; ичеги микробиомуна мүмкүн болгон таасир механизмдерин болсо өзүнчө Simulated Human Intestinal Microbiome Ecosystem (SHIME®) системасы менен изилдеген. Клиникалык сыноодо 120 адам 1:1 катышында рандомизацияланган жана негизги акыркы чекит болгон табигый киллер клеткасы, башкача айтканда natural killer (NK) клетка активдүүлүгү, HT-LM1004 тобунда плацебого салыштырмалуу ковариатка ылайыкталган анализдерде маанилүү деңгээлде көбүрөөк жогорулаган. Ал эми SHIME эксперименттери аз сандагы айрым микробдук таксондор байыганын, жоон ичегинин бөлүгүнө жараша өзгөргөн микробдук ар түрдүүлүк, өт кислоталары жана кыска чынжырлуу май кислоталары өзгөрүүлөрү болгонун көрсөткөн.

Адам сыноосундагы эң күчтүү далил NK клеткаларынын цитотоксикалуулугу. ITT анализинде HT-LM1004 менен плацебонун ортосундагы ылайыкталган баштапкыдан кийинки өзгөрүү айырмасы E:T 6,25:1 үчүн 4,1883 (p=0,0136), 12,5:1 үчүн 5,0487 (p=0,0139), 25:1 үчүн 4,0441 (p=0,0465) жана 50:1 үчүн 4,1829 (p=0,0319) деп билдирилген. PP анализинде да төрт катыштын баарында маанилүү айырма байкалган. Ошентип, негизги акыркы чекит ар кандай NK клеткасы/бута клеткасы катыштарында жана эки анализ популяциясында бир багыттагы натыйжа бергенин көрүүгө болот.

Бирок изилдөө “HT-LM1004 инфекцияны же ракты алдын алат” деген жыйынтыкты түздөн-түз көрсөтпөйт. Клиникалык сыноо инфекциянын жыштыгын, рактын инциденттүүлүгүн же узак мөөнөттүү оору коркунучун негизги клиникалык акыркы чекит катары өлчөгөн эмес. Өлчөнгөн негизги натыйжа лабораторияда бааланган NK клетка цитотоксикалуулугу. NK клеткаларынын вируска каршы жана шишикти көзөмөлдөөдө биологиялык ролу болгондуктан, авторлор мүмкүн болгон коргоочу маанини талкуулашат; бирок бул биологиялык маани менен чыныгы ооруну алдын алуу натыйжасы бири-биринен айырмаланышы керек.

SHIME бөлүгү да клиникалык катышуучулардын өз ичеги микробиомун көзөмөлдөгөн адам механизмин изилдөө эмес. Симулятор өзүнчө дени сак заң донорлорунан түзүлгөн микробдук жамааттарды көзөмөлдөнгөн in vitro жоон ичеги бөлмөлөрүндө иштеткен. Ошондуктан SHIMEде байкалган аз сандагы бактериялар, өт кислоталары жана SCFA өзгөрүүлөрү клиникалык катышуучуларда байкалган NK жогорулашына түздөн-түз себеп болгону бул изилдөөдө далилденген эмес. Авторлор да микробиомдун кайра түзүлүшү, метаболит өзгөрүүлөрү жана NK активдүүлүгүнүн ортосундагы байланышты корреляциялык жана механизмдик жактан мүмкүн болгон байланыш катары баалап, түз себептик ырастоо керек экенин белгилешет.

Коопсуздук жагынан 8 апталык мезгилде дарылоо тобунда билдирилген жеңил дем алуу системасынын даттануулары %8,47 (5 адам), көзөмөл тобунда %6,67 (4 адам) болгон; орто же оор жагымсыз окуя билдирилген эмес. Булак бул окуялар убактылуу болгонун жана изилдөө продуктусуна байланыштуу деп эсептелбегенин билдирет. Ошентсе да бул табылга изилдөөнүн 8 апталык узактыгы жана тандалган чоң кишилер үлгүсү үчүн гана чечмеленүүгө тийиш; узак мөөнөттүү коопсуздук же улгайган жана иммундук жетишсиздиги бар адамдар үчүн коопсуздук түздөн-түз текшерилген эмес.

HT-LM1004 Пробиотикпи же Постбиотикпи?

Булактагы өндүрүш сүрөттөмөсүнө ылайык HT-LM1004 тирүү пробиотикалык препарат эмес, ферментация жолу менен көбөйтүлгөндөн кийин жылуулук менен толук инактивациялоо көздөлгөн L. plantarum LM1004 клеткаларынан жана алардын сакталып калган клеткалык түзүлүштөрүнөн турган препарат; макаланын кириш сөзүндө бул биологиялык абал “postbiotic” түшүнүгү менен түшүндүрүлөт, бирок айрым сүрөт жана талкуу билдирүүлөрүндө “probiotic supplementation” термини да колдонулат.

Пробиотик термини классикалык түрдө жетиштүү өлчөмдө берилгенде кожоюн организмге ден соолук пайдасын берген тирүү микроорганизмдер үчүн колдонулат. Постбиотик болсо тирүү эмес микроорганизмдерди жана/же алардын компоненттерин кожоюнга ден соолук пайдасын берген препарат түрүндө колдонуу түшүнүгүн билдирет.

HT-LM1004 өндүрүшүндө максат бактерияны тирүү түрдө ичегиде колонизация кылдыруу эмес. Булак ферментациядан кийин биомасса чогултулганын, жылуулук иштетүү менен жашоого жөндөмдүүлүк жок кылынганын жана кургатылганын билдирет. Клетка дубалындагы жана клетка кабыгындагы пептидогликан, липотейхой кислоталары жана беттик белоктор сыяктуу түзүлүштөр толугу менен жоголбой калышы мүмкүн. Мындай микробдук түзүлүштөр microbe-associated molecular patterns (MAMPs) деп аталат жана иммундук клеткалардагы pattern recognition receptors (PRRs), мисалы Toll-like receptor 2 (TLR2), тарабынан таанылышы мүмкүн.

Бул биологиялык механизм “өлгөн бактерия эч нерсе кыла албайт” деген жөнөкөй ой эмне үчүн туура эмес экенин түшүндүрөт. Микроорганизм көбөйүшү үчүн тирүү болушу керек; бирок иммундук система микроорганизмдин клетка дубалын же беттик молекулаларын таануу үчүн анын тирүү болушуна муктаж эмес.

LM1004 кантип даярдалган?

Булакта LM1004 кимчиден бөлүнүп алынганы жана штаммдын идентификациясы 16S rRNA генин секвенирлөө менен ырасталганы айтылат. Өндүрүш көзөмөлдөнгөн ферментация, биомассаны чогултуу, жылуулук менен инактивациялоо жана кургатуу этаптарынан турган. Клиникалык изилдөөдө колдонулган партия 20OTF8, SHIME экспериментинде колдонулган партия болсо 10PTF6 деп билдирилген. Ар башка платформалардагы материалдын көзөмөлдөнө алышы үчүн бул партия номерлери өзүнчө сакталганы көрсөтүлгөн.

Талкуу бөлүмүндөгү кеңири өндүрүш сүрөттөмөсүндө адегенде глюкоза, соя пептону жана ачыткы экстракты бар чөйрөдө 34 ± 0,5°Cде 6–8 сааттык үрөн культурасы даярдалган; андан кийин 1.800 L биореактордо %6,6 глюкоза, %1,3 соя пептону, %1,5 ачыткы экстракты жана минералдык туздар камтылган чөйрөдө 34 ± 0,5°Cде 15–18 саат негизги ферментация жүргүзүлгөн. Негизги ферментацияда анаэробдук чөйрөнү сактоо үчүн азот газы колдонулган.

Бактерия концентрациясы болжол менен 1,6 × 10¹⁰ CFU/mL деңгээлине жеткенде биомасса 12.000 rpm центрифугалоо менен чогултулуп, криопротекторлор менен аралаштырылган жана булакта билдирилгендей 90°Cде 30 мүнөт жылуулук иштетүүгө дуушар болгон. Акыркы продукт тоңдуруп кургатылып, стандартташтырылган.

Доза маалыматындагы булак ичиндеги айырма

Доза жана капсуланын курамы боюнча булактын эки бөлүмү сөзмө-сөз бирдей сүрөттөмөнү колдонбойт. Ыкма бөлүмү изилдөө продуктусун 500 mg/күн HT-LM1004 порошогун камтыган бир капсула деп сүрөттөп, активдүү капсулада кошумча активдүү зат же нейтралдуу толтургуч жок экенин айтат. Талкуудагы өндүрүш деталдарында болсо порошок 2 × 10¹¹ клетка/g деңгээлинде стандартташтырылганы, күнүмдүк HT-LM1004 активдүү компонентинин өлчөмү 0,1 g = 2 × 10¹⁰ клетка эквиваленти экени жана бул мальтодекстрин менен магний стеараты сыяктуу жардамчы заттар менен капсуланын жалпы салмагына чейин толукталганы түшүндүрүлөт.

Булак бул эки формуляция сүрөттөмөсүнүн ортосундагы айырманы өзүнчө түшүндүрбөйт. Ошондуктан Verianla тексти алардын бирин экинчисинин ордуна үнсүз түрдө “туура доза” деп тандабайт.

NK Клетка Активдүүлүгү Кантип Өлчөндү?

Изилдөөнүн негизги акыркы чекити катышуучулардын канынан бөлүнүп алынган NK клеткаларынын K562 бута клеткаларын өлтүрүү жөндөмүнүн өзгөрүшүн ⁵¹Cr-release цитотоксикалуулук ыкмасы менен өлчөө; бул ыкма NK клеткасынын санын гана эмес, бута клеткага карата функционалдык өлтүрүү жөндөмүн баалоону көздөйт.

NK клеткасы деген эмне?

Natural killer (NK) клеткалары тубаса иммундук системанын цитотоксикалык лимфоциттери. Алар айрыкча вирус жуктурган же залалдуу трансформацияга учураган клеткаларды таанып, өлтүрө алышат. NK клеткасынын бута клетканы өлтүрүү механизмдерине перфорин жана гранзим сыяктуу цитотоксикалык молекулаларды бөлүп чыгаруу кирет.

Бул изилдөө NK клеткаларынын санындагы жөнөкөй өзгөрүүнү негизги натыйжа катары колдонгон эмес. Негизги максат NK клеткаларынын цитотоксикалык активдүүлүгүндөгү өзгөрүүнү өлчөө.

K562 бута клеткалары эмне үчүн колдонулат?

K562 NK клетка цитотоксикалуулугу тесттеринде кеңири колдонулган бута клетка линиясы. Экспериментте катышуучулардын перифериялык кан мононуклеардык клеткалары алгач Lymphoprep™ менен бөлүнүп, андан соң NK клеткалары MojoSort™ Human NK Cell Isolation Kit колдонуу менен изоляцияланган.

Бута K562 клеткаларынын NK клеткалары тарабынан бузулушу ⁵¹Cr-release ыкмасы менен бааланган. Булак бул изилдөөгө тиешелүү эсептөө формуласын өзүнчө бербейт, мурда жарыяланган протоколго шилтеме кылат; ошондуктан Verianla булакта билдирилбеген цитотоксикалуулук формуласын изилдөөнүн формуласы сыяктуу кошпойт.

E:T катышы эмнени билдирет?

E:T, “effector-to-target”, башкача айтканда эффектор клетка/бута клетка катышы. Бул жерде эффектор NK клеткасы, ал эми бута K562 клеткасы.

Мисалы, 6,25:1 катышы белгилүү assay түзүмүндө ар бир бута клеткасына карата NK эффектор клеткаларынын азыраак саны бар шартты; 50:1 болсо кыйла жогорку эффектор/бута катышын билдирет. Клетканы ар кандай E:T катыштарында текшерүү цитотоксикалык активдүүлүк бир гана эксперименттик клетка тыгыздыгында байкалабы же жокпу түшүнүүгө жардам берет.

Булактын ыкма бөлүмү 6,25:1, 12,5:1 жана 25:1 катыштарын тизмелесе, натыйжа таблицалары 50:1 катышын да камтыйт. Ошондуктан 50:1 натыйжасы таблица маалыматы катары сакталат, бирок ыкма бөлүмүндө бул катыш эмне үчүн өзүнчө көрсөтүлбөгөнү тууралуу божомол жасалбайт.

Клиникалык сыноо кимдерде жүргүзүлгөн?

Изилдөөгө 19–75 жаштагы аялдар жана эркектер киргизилген. Бирок “дени сак чоң кишилер” деген түшүнүк жалпы калктан толук кокусунан тандалган адамдарды билдирбейт. Катышуу үчүн Perceived Stress Scale (PSS) упайы кеминде 16 болушу, перифериялык WBC саны 3 × 10³ менен 10 × 10³ клетка/µL арасында болушу жана мурунку жыл ичинде кеминде эки жогорку дем алуу жолдорунун инфекциясы тарыхы болушу талап кылынган.

Авторлор бул критерийлер салыштырмалуу алсыраган иммундук баштапкы абалы же физиологиялык иммундук термелүүлөргө жогорку сезимталдыгы бар адамдарды тандоо үчүн колдонулганын түшүндүрүшөт. Ошондуктан натыйжалар стресс же кайталануучу жогорку дем алуу жолдорунун инфекциясы тарыхы жок бардык дени сак чоң кишилерге автоматтык түрдө ошол эле чоңдукта колдонулат деп божомолдоого болбойт.

Негизги чыгаруу критерийлери BMI ≥30 kg/m², акыркы эки айда эмдөө, акыркы эки айда COVID-19 инфекциясы, иммундук системага таасир этиши мүмкүн болгон системалуу оору, акыркы төрт жумада иммуномодулятор дары же пробиотик колдонуу, кош бойлуулук/эмизүү жана изилдөө продуктусуна аллергия катары билдирилген.

Рандомизация жана сокурлоо

Жалпы 120 адам компьютер түзгөн рандомизация ырааттуулугу менен 60 HT-LM1004 жана 60 плацебо болуп 1:1 бөлүштүрүлгөн. Активдүү жана плацебо капсулалары көрүнүшү, салмагы жана таңгакталышы боюнча дал келтирилип, катышуучулар да, изилдөөчүлөр да топко бөлүштүрүүнү билишкен эмес.

ITT менен PPнин айырмасы эмнеде?

Intention-to-treat (ITT) анализи рандомизациядан кийин изилдөө продуктусун кеминде бир жолу алган жана баштапкыдан кийинки кеминде бир натыйжалуулук өлчөөсү бар адамдарды анализдөөнү көздөйт. Рандомизация берген топторду салыштыруу түзүмүн мүмкүн болушунча сактагандыктан клиникалык изилдөөлөрдө маанилүү.

Per-protocol (PP) анализи болсо олуттуу протокол бузулушу жок жана булакта көрсөтүлгөн кеминде %80 шайкештик шартын аткарган катышуучуларды камтыйт. PP анализи кийлигишүүнү протоколго көбүрөөк ылайык аяктаган топко көңүл бурса, ITT реалдуу клиникалык изилдөө агымына жакыныраак анализ алкагын берет.

Бул изилдөөдө негизги NK активдүүлүгү натыйжасы ITT да, PP анализинде да бирдей жалпы багытта болгон.

LOCF деген эмне?

ITT анализиндеги жетишпеген маалыматтар үчүн булак last observation carried forward (LOCF) ыкмасын колдонгонун билдирет. LOCF катышуучунун кийинки өлчөөсү жок болсо, бар болгон акыркы байкоо маанисин алдыга алып өтүү ыкмасы. Бул ыкма жетишпеген маалыматтын айынан адамды анализден толук чыгарып салууну алдын алышы мүмкүн; бирок чыныгы биологиялык маани өзгөргөн жок деп божомолдогон күчтүү ыкма болгондуктан, жетишпеген маалыматты иштетүү ыкмасынын өзү да натыйжаларды чечмелөөнүн бир бөлүгү болуп саналат.

ANCOVA эмне үчүн колдонулган?

Дарылоо тобунун баштапкы учурда башка топтон бир аз айырмаланышы мүмкүн болгон маанилерин статистикалык түрдө эске алуу үчүн analysis of covariance (ANCOVA) колдонулушу мүмкүн. Булак ошондой эле ITT баштапкы мүнөздөмөлөрүндө гиперлипидемиянын жыштыгында кичине айырма болгондуктан HLD абалын ковариат катары моделге кошкон.

Булак 1-таблицада төмөнкү моделди ачык берет:

\[ \mathrm{CHANGE}=\alpha+\beta\cdot\mathrm{HLD}+\delta\cdot\mathrm{GROUP}+\varepsilon \]

CHANGE, адамдын кийлигишүүдөн кийинки мааниси менен баштапкы маанисинин айырмасы.

α, регрессия константасы; башка өзгөрмөлөрдүн референс маанисинде моделдин баштапкы деңгээлин билдирет.

HLD, гиперлипидемия абалы: гиперлипидемия болсо 1, болбосо 0 деп коддолгон.

β, гиперлипидемия абалынын CHANGEге болгон моделдик коэффициенти.

GROUP, HT-LM1004 тобунда 1, плацебо/көзөмөл тобунда 0 деп коддолгон.

δ, моделдин негизги дарылоо салыштыруусун билдирет. Булактын сөзү менен δ, ковариатка ылайыкталган баштапкыдан кийинки өзгөрүүнүн дарылоо минус көзөмөл айырмасы.

ε, модель түшүндүрбөгөн калдык өзгөрмөлүүлүктү билдирген ката мүчөсү.

Булак айрым акыркы чекиттерде ordinary regression, айрым өзгөрмөлөрдө болсо robust regression колдонгон. Robust regression кадимки сызыктуу моделдин чет маанилерден же бөлүштүрүү өзгөчөлүктөрүнөн ашыкча таасир алышын азайтууга багытталган регрессия ыкмасы.

NK активдүүлүгүнүн ковариатка ылайыкталган натыйжалары

Таблицанын эң маанилүү жагы төрт NK E:T шартынын баарында PP жана ITT салыштыруулары p<0,05 болушу. Ошондуктан изилдөөнүн негизги клиникалык натыйжасы бир эле E:T катышына же протоколду толук аяктаган PP популяциясына гана таянбайт.

WBC үчүн да PP жана ITT анализдеринде ылайыкталган дарылоо–көзөмөл айырмасы маанилүү. IL-12 болсо ITT моделинде p=0,0425, ал эми PP анализинде p=0,1724; демек IL-12 үчүн “бардык анализдерде ырааттуу маанилүү айырма” деген билдирүү туура болбойт.

Цитокин натыйжалары эмне үчүн этият чечмелениши керек?

Сывороткадагы TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-12 жана IL-15 деңгээлдери колдоочу механизмдик биомаркерлер катары өлчөнгөн. Авторлор адамдар арасындагы цитокин өзгөрмөлүүлүгү жогору экенин жана бул натыйжалар негизги натыйжалуулук көрсөткүчү катары каралбашы керек экенин белгилешет.

Мындан тышкары, цитокин p маанилери үчүн формалдуу көп салыштыруу түзөтүүсү жасалган эмес. Көп сандагы көз карандысыз статистикалык тесттер жүргүзүлгөндө p<0,05 босогосун кайра-кайра колдонуу кокусунан маанилүү натыйжа алуу ыктымалдыгын жогорулатышы мүмкүн. Авторлор түзөтүү жасабоо чечимин дени сак когортада мүмкүн болгон биологиялык тенденцияларды өткөрүп жибербөө жана II түрдөгү ката коркунучун азайтуу максаты менен түшүндүрүшөт; ошондуктан цитокин табылгаларын изилдөөчү жана колдоочу катары беришет.

SHIME Адамдын Ичегиси менен Бирдейби?

Жок. SHIME® чыныгы адам жоон ичегисинин ар башка бөлүктөрүндөгү pH, температура, анаэробдук чөйрө жана микробдук ферментация шарттарын көзөмөлдөнгөн түрдө окшоштурган in vitro ичеги экосистемасынын модели; тирүү адамдын ичеги эпителийин, кан айлануусун, иммундук системасын, гормоналдык системасын жана кожоюн–микроб өз ара аракеттеринин баарын толук камтыбайт.

SHIME түзүлүшү кантип курулган?

Изилдөөдө эки параллелдүү SHIME бирдиги колдонулган. Бир бирдик дарылоосуз көзөмөл, экинчи бирдик HT-LM1004 берилген эксперименттик бирдик. Ар бир системада жоон ичегинин үч бөлүгүн көрсөткөн идиштер бар:

• AC: ascending colon — көтөрүлүүчү/проксималдык жоон ичеги.
• TC: transverse colon — туурасынан кеткен жоон ичеги.
• DC: descending colon — түшүүчү/дисталдык жоон ичеги.

Система 37°Cде кармалып, pH үзгүлтүксүз көзөмөлдөнгөн жана анаэробдук газ менен кычкылтексиз ичеги чөйрөсү окшоштурулган. Стандарттык азык чөйрөсүндө арабиногалактан, пектин, ксилан, крахмал, глюкоза, ачыткы экстракты, пептон, муцин жана L-цистеин HCl сыяктуу компоненттер болгон. Панкреатикалык эритме NaHCO₃, панкреатин жана oxgall камтыган.

Заң инокулуму дени сак аял жана эркек донорлордун 1:1 катышындагы материалынан даярдалып, AC, TC жана DC бөлмөлөрүнүн жумуш көлөмүнүн %5-и өлчөмүндө инокуляцияланган.

Эксперимент үч мезгилге бөлүнгөн: 1 апта стабилизация, 4 апта HT-LM1004 кийлигишүүсү жана 1,5 апта кийлигишүүдөн кийинки байкоо/жуу мезгили.

SHIMEде HT-LM1004 дозасы 0,1 g, башкача айтканда булакта 2 × 10¹⁰ клетка эквиваленти деп көрсөтүлгөн; 10 mL стерилдүү дистилденген сууда суспензияланып, жумасына беш күн саат 10:30 убакта дарылоо бирдигинин AC2 бөлмөсүнө берилген.

Үлгүлөр Pre, Mid, End жана Post болуп төрт убакыт чекитинде чогултулган. Булак үлгү алуу күнүмдүк дозадан мурда саат 10:00 убакта жүргүзүлүшүнүн максаты дароо кийинки кыска мөөнөттүү таасирди гана эмес, топтолгон экосистемалык таасирди баалоо экенин билдирет.

SHIME экспериментинин булак агымын көрсөткөн көз карандысыз схема

16S rRNA анализи эмнени өлчөйт?

16S rRNA генинин өзгөрмө аймактары бактерияларды таксономиялык классификациялоо үчүн колдонулушу мүмкүн. Изилдөөдө V4 гиперөзгөрмө аймагы бутага алынып, 515–806 аймагын камтыган праймерлер колдонулган. Булак күтүлгөн ампликон узундугун 359 bp деп билдирет.

DNA QIAamp DNA Mini Kit менен бөлүнүп алынган, Qubit 4 менен өлчөмү өлчөнгөн, 0,8% агароза гель-электрофорези менен бүтүндүгү текшерилип, A260/A280 катышы менен тазалыгы бааланган.

Китепканалар Illumina Nextera XT адаптерлери менен даярдалып, AMPure XP менен тазаланып, %10 PhiX кошулган жана булакта Illumina iSeq100 платформасында paired-end секвенирлөө жүргүзүлгөнү айтылат. Секвенциялар QIIME 2 негизиндеги pipeline аркылуу демультиплекстөө, сапат фильтри, катаны оңдоо жана таксономиялык классификациядан өткөрүлгөн.

Альфа жана бета ар түрдүүлүк эмнени билдирет?

Альфа ар түрдүүлүк бир үлгүнүн же экосистема бөлмөсүнүн өз ичиндеги микробдук ар түрдүүлүктү түшүндүрөт. Изилдөөдө observed features/OTU, ACE, Chao1, Jackknife, Shannon, Simpson, NPShannon жана филогенетикалык ар түрдүүлүк сыяктуу метрикалар колдонулган.

Richness, башкача айтканда байлык, канча ар башка өзгөчөлүк/таксон бар экенине көбүрөөк көңүл бурат. Shannon жана ага окшош ар түрдүүлүк индекстери болсо канча түр бар экенин гана эмес, жамааттагы бөлүштүрүү канчалык тең салмактуу экенин да эске алышы мүмкүн.

Филогенетикалык ар түрдүүлүк таксондордун санын гана эмес, микроорганизмдер эволюциялык жактан бири-биринен канчалык айырмаланарын да эске алат.

Бета ар түрдүүлүк болсо эки жамаат бири-бирине канчалык окшош же айырмалуу экенин баалайт. Булак weighted UniFrac колдонуп, жамааттардын көп өлчөмдүү айырмаларын визуалдык түрдө жыйынтыктоо үчүн Principal Coordinate Analysis (PCoA) жүргүзгөн.

Микробиомдун ар түрдүүлүгүндө эмне болду?

ACде richness өлчөмдөрү боюнча маанилүү өзгөрүү байкалган эмес. Ал эми TCде кийлигишүүнүн аягында жана DCде Post убагында richness жогорулашы байкалган.

Shannon, Simpson, NPShannon жана филогенетикалык ар түрдүүлүк боюнча ACде туруктуураак өсүү тенденциясы байкалса, TC жана DCдеги ар түрдүүлүк индекстери убакыт бою бирдей өзгөргөн эмес.

Кошумча анализде төрт апталык кийлигишүүнүн аягында AC филогенетикалык ар түрдүүлүгү HT-LM1004 тобунда көзөмөлгө караганда маанилүү деңгээлде жогору болгон (p=0,0099). PCoA анализи көзөмөл жана HT-LM1004 микробдук жамааттары ажыраганын көрсөтүп, булак beta-set анализинде p<0,05 деп билдирген.

Авторлор бул үлгүнү проксималдык жоон ичегиде алгач ар түрдүүлүк/теңдик өзгөрүүлөрү, ал эми андан дисталдуу TC жана DCде аз сандагы таксондордун кийинчерээк байышы катары чечмелешет. Бирок бул “проксималдан дисталга градиент” чечмелөөсү SHIME системасына тиешелүү экенин жана адам ичегисинде ошол эле траектория түздөн-түз өлчөнбөгөнүн эстен чыгарбоо керек.

Аз сандагы бактериялар эмне үчүн маанилүү болушу мүмкүн?

Бактериянын ичегиде аз өлчөмдө болушу анын биологиялык жактан маанисиз экенин билдирбейт. Аз сандагы айрым таксондор белгилүү метаболикалык өзгөрүүлөрдө же экосистемалык тармактарда функционалдык ролго ээ болушу мүмкүн.

Булак TCде Clostridia, Dialisteraceae жана Lentilactobacillus; DCде Bacteroidales, Rikenellaceae, Lactonifactor жана Christensenella сыяктуу аз сандагы таксондордун байышын талкуулайт. Бул таксондордун “пайдалуу” функциялары ушул экспериментте өзүнчө түздөн-түз текшерилген эмес; авторлор алардын ден соолук, тосмо, SCFA өндүрүшү же метаболикалык функциялар менен байланышын мурунку адабияттарга таянып чечмелешет.

Метаболомика кантип жүргүзүлгөн?

Метаболомикалык анализде жоон ичеги бөлмөлөрүнөн алынган культура суюктугу Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (UHPLC-MS/MS) менен анализделген.

Метаболит сигналдары жалпы иондук хроматограммага (TIC) карата нормалдаштырылган. Химиялык классификацияда NPClassifier жана ClassyFire колдонулуп, NPClassifier натыйжасына артыкчылык берилген жана классификация ишенимдүүлүгү үчүн ыктымалдык ≥0,8 шарты колдонулган.

Метаболикалык өзгөрүүлөрдү баалоо үчүн mixed-design ANOVA колдонулган. Убакыт, башкача айтканда Pre–Mid–End–Post, кайталанма/within фактор; көзөмөл–HT-LM1004 шарты болсо between фактор катары колдонулган. Булак p<0,05 менен катар жогорку partial eta squared (η_p²) маанилерин да дисперсияга болгон таасирдин көрсөткүчү катары баалаган.

Метаболомикада канча өзгөчөлүк аныкталган?

Бул жердеги “feature” саны түздөн-түз ошол эле санда так идентификациясы ырасталган өз алдынча метаболит бар дегенди билдирбейт. LC-MS/MS маалыматтарын иштетүүдө белгилүү масса/заряд, кармалуу убактысы жана сигнал өзгөчөлүктөрү бар аналитикалык сигналдар алынат; алардын бир бөлүгү стандарттык китепканалар менен дал келтирилет, калган айрым өзгөчөлүктөрдүн химиялык классы болжолдоо куралдары менен annotate кылынган.

Өт кислоталарында эмне өзгөрдү?

ACде холик кислотасы жана айрым chenodeoxycholic acid сигналдары сыяктуу биринчилик өт кислоталарынын жогорулашы билдирилген.

TCде аныгыраак метаболикалык кайра түзүлүү байкалып, 3-oxocholate жана ар кандай экинчилик өт кислотасы/тиешелүү туунду сигналдарында жогорулаш билдирилген. Айрым биринчилик өт кислотасы сигналдары болсо салыштырмалуу азайган.

DCдеги өзгөрүү өт кислоталары менен гана чектелген эмес. Айрым экинчилик өт кислоталары менен бирге ар кандай өттөн тышкаркы метаболиттерде да жогорулаш байкалган.

Авторлор өзгөчө биринчилик–экинчилик өт кислоталарынын балансындагы өзгөрүүлөр ичеги микробдук метаболизминин кайра уюшулганын көрсөтүшү мүмкүн экенин талкуулашат. Өт кислоталарынын FXR жана TGR5 сыяктуу рецепторлор аркылуу иммундук функциялар менен байланышта болушу бул метаболикалык натыйжалардын NK табылгасы менен мүмкүн болгон механизмдик байланышынын негизин түзөт. Бирок бул рецептордук жолдор учурдагы адам сыноосунда түздөн-түз өлчөнгөн эмес.

SCFA деген эмне?

Short-chain fatty acids (SCFAs) ичеги микроорганизмдери ферментация процесстеринде түзө алган кыска чынжырлуу органикалык кислоталар. Изилдөө төрт SCFAны сандык баалаган: уксус кислотасы, пропион кислотасы, бутир кислотасы жана валер кислотасы.

SCFA анализи headspace GC-MS менен жүргүзүлгөн. Үлгүлөр NaCl жана %2 күкүрт кислотасы менен даярдалып; уксус, пропион, бутир жана валер кислоталары үчүн 1–100 mg/L стандарттык эритмелер колдонулуп калибрлөө ийри сызыктары түзүлгөн. Метаболиттин идентификациясы кармалуу убактысы жана масса-спектрин анык стандарттар менен салыштыруу аркылуу аныкталган.

SCFAларда кандай убакыттык үлгү байкалды?

ACде SCFA деңгээлдери Mid чекитинде төмөндөп, End жана Post чекиттеринде баштапкыга жакын же баштапкыдан жогору деңгээлдерге кайтып келген.

TCде SCFA концентрациялары Mid жана End мезгилдеринде жогорулап, кийлигишүү токтотулгандан кийинки Post баскычында баштапкыга жакындашуу тенденциясын көрсөткөн.

DCде да ушундай эле Mid жана End мезгилдеринде жогорулаш, Post мезгилинде болсо жарым-жартылай кайра кайтуу байкалган.

Бул натыйжаларды “HT-LM1004 бүт жоон ичегиде SCFAны туруктуу жогорулатты” деп жөнөкөйлөтүүгө болбойт. Таасир жоон ичегинин бөлүгүнө жана убакытка жараша; өзгөчө ACнин орто мезгилдеги багыты TC жана DCден айырмаланат.

Клиникалык NK Жогорулашы менен SHIME Микробиом Өзгөрүүлөрүнүн Ортосунда Себептүүлүк Далилдендиби?

Жок. Адам сыноосунда NK активдүүлүгү өлчөнгөн, ал эми микробиом жана метаболит механизми өзүнчө in vitro SHIME экосистемасында изилденген; ошол эле клиникалык катышуучуларда микробиом өзгөрүшү → метаболит өзгөрүшү → NK активдүүлүгү түрүндөгү жеке ортомчулук чынжыры өлчөнбөгөндүктөн SHIME табылгалары клиникалык NK жогорулашынын түз себеби катары кабыл алынбайт.

Бул айырма макаланын илимий чечмелөөсүндө борбордук мааниге ээ. Булак механизмдик моделди сунуштайт: HT-LM1004түн жылуулук менен сакталган клеткалык компоненттери түздөн-түз PRR/TLR сигналдашына таасир этиши мүмкүн; ошол эле учурда ичеги микробдук жамааты жана микробдук метаболит өндүрүшү өзгөрүшү мүмкүн; өт кислоталары жана SCFAлар иммундук система менен өз ара аракеттениши мүмкүн. Бирок учурдагы изилдөө бул чынжырдын бардык кадамдарын бир себептик экспериментте көрсөтпөйт.

Булак микробиом жана метаболомика маалымат топтомдорунун ортосунда да түз механизмдик байланыш түзүлбөгөнүн, белгилүү таксондордун байышы менен SCFA жана өт кислотасы жолдорундагы өзгөрүүлөр иммундук жогорулаш менен потенциалдуу байланышты сунуштай турганын ачык айтат.

Ошондуктан туура илимий билдирүү “HT-LM1004 клиникалык сыноодо NK клетка активдүүлүгүн жогорулатты жана өзүнчө SHIME моделинде муну биологиялык жактан түшүндүрүшү мүмкүн болгон микробиом/метаболит өзгөрүүлөрү байкалды” түрүндө. “HT-LM1004 NK активдүүлүгүн дал ушул бактерияларды көбөйтүү аркылуу так жогорулатты” деген билдирүү учурдагы эксперименттик дизайн берген далил чегинен ашат.

Түз клеткалык механизм өлчөндүбү?

Булак жылуулук менен инактивацияланган клеткалардын пептидогликан, липотейхой кислотасы жана беттик белоктору PRR/TLR түзүлүштөрү менен өз ара аракеттенип, MAPK, AP-1 жана NF-κB сыяктуу жолдорду иштетиши мүмкүн экенин; бул перфорин, granzyme B жана IFN-γ сыяктуу цитотоксикалык эффекторлор менен байланыштуу болушу мүмкүн экенин талкуулайт.

Бирок авторлор учурдагы изилдөө бул сигналдык жолдорду түздөн-түз текшербегенин өзгөчө белгилешет. Демек TLR2/MAPK/NF-κB механизми учурдагы изилдөөнүн түз өлчөнгөн клиникалык механизми эмес, мурдагы изилдөөлөр менен колдоого алынган мүмкүн болгон биологиялык түшүндүрмө.

NK жогорулашы кеңири системалуу сезгенүүнү билдиреби?

Изилдөөдө NK цитотоксикалуулугу маанилүү жогорулаганы менен IFN-γ жана TNF-α сыяктуу сыворотка цитокиндеринде маанилүү дарылоо–көзөмөл жогорулашы байкалган эмес. Авторлор муну NK эффектор функциясынын жогорулашы сөзсүз түрдө кан айлануудагы бардык сезгенүү цитокиндеринин кеңири системалуу жогорулашын талап кылбайт деп чечмелешет.

Бул натыйжаны “HT-LM1004 эч кандай сезгенүү таасирин жаратпайт” деген так жалпылоого айлантпоого тийиш. Өлчөө белгилүү сыворотка цитокиндери жана сегиз апталык эксперименттик шарттар менен чектелген.

Коопсуздук натыйжалары

Жеңил окуялар жөтөл жана ринорея сыяктуу кадимки суук тийүү белгилеринен турганы, убактылуу болгону жана изилдөө продуктусуна байланыштуу деп эсептелбегени айтылат. Гематология, биохимия, липид, электролит, бөйрөк индекстери, CRP/ESR жана турмуштук көрсөткүчтөр жалпысынан клиникалык маанилүү дарылоого байланышкан көйгөй көрсөткөн эмес.

Айрым лабораториялык маанилерде топ ичиндеги статистикалык өзгөрүүлөр байкалганы менен алар клиникалык белги менен байланыштуу эмес жана дарылоо–көзөмөл арасында маанилүү айырма жараткан эмес деп билдирилген. Статистикалык маанилүүлүк менен клиникалык маанилүүлүк бир эле нерсе эместиги бул жерде маанилүү.

Изилдөө колдогон жыйынтыктар

• Тандалган чоң кишилер үлгүсүндө 8 апталык HT-LM1004 колдонуу негизги акыркы чекит болгон NK клетка цитотоксикалуулугунда плацебого салыштырмалуу чоңураак жогорулаш менен байланышкан.
• NK натыйжасы билдирилген төрт E:T катышында жана ITT менен PP ылайыкталган анализдеринде маанилүү.
• WBC өзгөрүшүндө да PP жана ITT ылайыкталган дарылоо–көзөмөл айырмасы маанилүү.
• 8 апталык клиникалык изилдөө мезгилинде изилдөө продуктусуна таандык олуттуу коопсуздук сигналы билдирилген эмес.
• Өзүнчө SHIME системасында HT-LM1004 микробдук ар түрдүүлүктү, аз сандагы таксондордун бөлүштүрүлүшүн, өт кислотасынын профилдерин жана SCFA өндүрүшүн жоон ичеги бөлүгүнө жана убакытка жараша өзгөрткөн.
• Бул in vitro табылгалар клиникалык NK натыйжасына шайкеш келиши мүмкүн болгон механизмдик гипотезаларды берет.

Изилдөө колдобогон жыйынтыктар

• HT-LM1004 адамдарда вирустук инфекциялардын алдын алары бул экспериментте көрсөтүлгөн эмес.
• Рактын өнүгүшүн же шишиктин кайталанышын азайтары көрсөтүлгөн эмес.
• Улгайган же иммундук жетишсиздиги бар адамдарда натыйжалуулук жана коопсуздук түздөн-түз текшерилген эмес.
• Узак мөөнөт колдонуу коопсуздугу сегиз апталык изилдөөдөн чыгарылбайт.
• SHIMEде байкалган микробиом өзгөрүүлөрү клиникалык катышуучуларда так ошондой болгондугу көрсөтүлгөн эмес.
• Адам заңында микробиом же SCFA өзгөрүүлөрү бул клиникалык изилдөөнүн механизмдик акыркы чекити катары көрсөтүлгөн эмес.
• Белгилүү бактериялардын байышы NK жогорулашына түз себеп болгону далилденген эмес.
• Өт кислотасы же SCFA өзгөрүүлөрү NK активдүүлүгүнүн жогорулашын ортомчулук анализи менен түшүндүрөрү көрсөтүлгөн эмес.
• Изилдөөчү цитокин натыйжалары негизги NK натыйжасы менен бирдей далил деңгээлинде эмес.
• Изилдөө продуктусу ооруну дарылоо же бекитилген иммунотерапия катары бааланбашы керек.

Изилдөөнүн негизги чектөөлөрү

Биринчи чектөө: Клиникалык популяция тандалган дени сак чоң кишилерден турат. Улгайган, иммундук системасы басылган же олуттуу өнөкөт оорусу бар популяцияларга жалпылоого болбойт.

Экинчи чектөө: SHIME ичегинин физикалык-химиялык жана микробдук шарттарын окшоштурат, бирок чыныгы адам ичегисиндеги эпителий, иммундук система, кан айлануу, нерв системасы жана кожоюн метаболизминин бардык өз ара аракеттерин камтыбайт.

Үчүнчү чектөө: Клиникалык NK натыйжасы менен in vitro микробиом/метаболит натыйжасы түз себептик байланышта көрсөтүлгөн эмес.

Төртүнчү чектөө: Сегиз апталык клиникалык кийлигишүү жана 1,5 апталык SHIME кийлигишүүдөн кийинки байкоо узак мөөнөттүү таасирдин сакталуусун көрсөтпөйт.

Бешинчи чектөө: Цитокин анализдери изилдөөчү болуп, формалдуу көп салыштыруу түзөтүүсү колдонулган эмес.

Алтынчы чектөө: SHIME системасында байкалган SCFA жана микробиом үлгүлөрүн адам заңында же адам ичеги үлгүлөрүндө ырастоо зарыл.

Жетинчи чектөө: Булактын ичинде капсула дозасы/формуляциясы жана билдирилген NK E:T катыштары боюнча бөлүмдөр аралык айырма бар; бул деталдар кайра өндүрүү же клиникалык колдонуу максатында пайдаланылардан мурда баштапкы протокол/supplementary material менен өзүнчө ырасталышы керек.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Клиникалык изилдөөнүн дизайны

Статистикалык тесттер

Үзгүлтүксүз өзгөрмөлөр орточо ± стандарттык четтөө, категориялык өзгөрмөлөр сан жана пайыз түрүндө берилген. Нормалдуу бөлүштүрүүнү баалоодо Shapiro–Wilk тести колдонулган.

Топ ичиндеги баштапкы–8-апта салыштыруулары нормалдуу бөлүштүрүлгөн өзгөрмөлөрдө paired t-test, нормалдуу эмес өзгөрмөлөрдө Wilcoxon signed-rank test менен жүргүзүлгөн.

Топтор аралык салыштыруулар ANCOVA/регрессия моделдери менен жүргүзүлүп, баштапкы айырмалардын таасирин ковариаттар менен көзөмөлдөөгө аракет кылынган.

Булак айрым өзгөрмөлөрдө ordinary regression, башкаларында robust regression колдонгон. p<0,05 статистикалык маанилүүлүк босогосу катары кабыл алынган.

SHIME изилдөө дизайны

16S rRNA натыйжалары

Булак ACде айрым ар түрдүүлүк индекстеринде туруктуу өсүш, TCде End жана DCде Post убактарында richness жогорулашын билдирет. Төрт апталык кийлигишүүнүн аягында AC филогенетикалык ар түрдүүлүк айырмасы HT-LM1004 пайдасына маанилүү (p=0,0099). PCoA жана beta-set анализдери да көзөмөл жана дарылоо жамааттарынын түзүлүшүндө ажыралууну көрсөткөн.

Метаболомикалык натыйжалар

Метаболомикалык натыйжалар жоон ичеги бөлүгүнө мүнөздүү. ACде биринчилик өт кислотасы өзгөрүүлөрү айкыныраак; TCде экинчилик өт кислотасынын айлануулары айкыныраак; DCде болсо өт кислотасынан тышкаркы метаболиттерди да камтыган кеңири метаболикалык кайра түзүлүү билдирилген.

Бул аймактык айырма HT-LM1004 ичеги боюнча бир түрдүү метаболикалык таасир жаратпасын көрсөтөт.

SCFA натыйжалары

ACде Mid мезгилиндеги төмөндөөдөн кийин End/Post мезгилинде калыбына келүү; TC жана DCде болсо кийлигишүү учурунда жогорулаш жана Post мезгилинде баштапкыга карай жарым-жартылай кайтуу байкалган. Ошентип SCFA жообу убакытка да, жоон ичеги бөлүгүнө да байланыштуу болгон.

Клиникалык жана in vitro натыйжаларды бирге чечмелөө

Клиникалык сыноо HT-LM1004 менен NK клетка активдүүлүгү жогорулаганын көрсөтөт. SHIME болсо ошол эле препарат көзөмөлдөнгөн ичеги экосистемасында микробдук жамаатты жана метаболит профилдерин өзгөртө аларын көрсөтөт.

Бул эки натыйжа бирге HT-LM1004 микробдук клетка компоненттери аркылуу түз иммундук таануу жолдоруна да, микробиом–метаболит огуна да таасир этиши мүмкүн деген гипотезаны колдойт. Бирок булак изилдөөнүн дизайны бул эки жол адамда кандай үлүштө салым кошорун же бири экинчисине ортомчулук кыларын эсептей албайт.

Келечектеги изилдөөлөр

Булак көбүрөөк ар түрдүү катышуучу топторун, узагыраак кийлигишүү жана көзөмөлдөө мезгилдерин жана түз себептүүлүк тесттерин сунуштайт. Айрыкча SHIMEде байкалган SCFA жана микробиом өзгөрүүлөрүн клиникалык катышуучулардын заң же ичеги үлгүлөрүндө салыштыруу симулятор табылгаларынын физиологиялык жарамдуулугун ырастоо үчүн маанилүү.

Авторлор ошондой эле иммундук клетка фенотиптөө жана транскриптомика сыяктуу ыкмалар TLR/MAPK/NF-κB сыяктуу сунушталган түз клеткалык механизмдерди ырастоодо колдонулушу мүмкүн экенин талкуулашат.

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Түпнуска изилдөө: Microbiome-Modulating Effects of Heat-Treated Lactiplantibacillus plantarum LM1004 and Its Enhancement of NK Cell Activity: Evidence from a Clinical Trial and a Simulated Human Intestinal Microbiome Ecosystem

Авторлор: Sukyung Kim; Hoonhee Seo; Tae-Rahk Kim; Md Abdur Rahim; Hanieh Tajdozian; Youjin Yoon; Sujin Jo; Md Sarower Hossen Shuvo; Indrajeet Barman; Chaeeun Park; Saebim Lee; Sangwon Lee; Min Hyung Cho; Jangho Ha; Hansol Hong; Sohee An; SungJune Chu; Minn Sohn; Yoo Kyung Ahn; Yoon Ju So; Sungsue Rheem; Seong-Ho Han; Ho-Yeon Song.

Тең салым: Sukyung Kim жана Hoonhee Seo булакта тең салым кошкон авторлор катары белгиленген.

Corresponding authors: Seong-Ho Han жана Ho-Yeon Song.

Мекемелер: LactoMason Co., Ltd.; Department of Microbiology and Immunology, School of Medicine, Soonchunhyang University; K-Microbiome Institute, Soonchunhyang University; Department of Family Medicine, College of Medicine, Dong-A University; Bioinformatics and Molecular Design Research Center (BMDRC), Yonsei University; Division of Big Data Science, Korea University.

Институционалдык кызыкчылык контексти: Булакта айрым авторлор изилдөө препаратын өндүргөн LactoMason Co., Ltd. менен аффилиацияга ээ экени көрүнөт. Макала ошол эле учурда “authors have no financial conflicts of interest to declare” билдирүүсүн берет. Бул эки маалымат бирге жана өзгөртүлбөй сакталууга тийиш.

Журнал: Journal of Microbiology and Biotechnology.

Том / макала номери: Volume 36, e2604046.

DOI: 10.4014/jmb.2604.04046

Булак түрү: Журналда жарыяланган эксперименттик изилдөө; рандомизацияланган көзөмөлдүү адам сыноосун өзүнчө in vitro SHIME экосистема эксперименти менен айкалыштырат. PDFтин биринчи бетиндеги жогорку түр этикеткасы “Review” болуп көрүнөт; бул этикетка документтеги жаңы эксперименттик Methods/Results түзүмүнө туура келбеген библиографиялык деталь катары сакталган.

Келип түшкөн: 17 Апрель 2026.

Кабыл алынган: 28 Июнь 2026.

Жарыялоо датасынын айырмасы: PDF биринчи бетте “Published: July 23, 2026” маалыматын берет. PubMed/Crossref электрондук жарыя metadata жазуусу 3 Июль 2026 датасын көрсөтөт. Эки датанын айырмасы үнсүз түрдө жоюлган эмес.

Лицензия: Creative Commons Attribution (CC BY). PDF макала ачык жеткиликтүү экенин жана CC BY шарттары менен таркатыларын билдирет.

Каржылоо: National Research Foundation of Korea тарабынан MSIT каржылоосу (RS-2023-00219563); MOTIE industrial innovation infrastructure construction project (P0021516); Ministry of SMEs and Startups Korea Technology Development Program for SMEs (S3373174) жана Soonchunhyang University Research Fund колдоосу билдирилген.

Маалымат жеткиликтүүлүгү: Макалада берилген маалыматтарды жана изилдөөнү колдогон негизги маалымат топтомдорун corresponding authorдон негиздүү суроо-талап боюнча алууга болору айтылат.

Кызыкчылыктардын кагылышы: Булак финансылык кызыкчылыктардын кагылышы жок экенин билдирет.

Этика жана каттоо: Клиникалык изилдөө Dong-A University Hospital IRB уруксаты DAUHIRB-23-152 менен жүргүзүлүп, ClinicalTrials.govда NCT07433855 катары катталган. Заң үлгүлөрү үчүн Seoul National University Bundang Hospital IRB No. B-1810-497-308; геном/метаболом жана жасалма сиңирүү системасы изилдөөлөрү үчүн Soonchunhyang University долбоор/этика жазуусу 202406-SB-067 / 202406-SB-067-01 билдирилген.

Маалыматтуу макулдук: Клиникалык катышуучулардан жазуу жүзүндөгү маалыматтуу макулдук алынган.

Негизги клиникалык акыркы чекит: Баштапкыдан 8-аптага чейин NK клетка активдүүлүгүнүн өзгөрүшү.

Статистикалык анализ: SPSS 26 жана SAS 9.4; paired t-test же Wilcoxon signed-rank test; ANCOVA/регрессия; p<0,05; ITT жана PP анализдери; ITT жетишпеген маалыматтарында LOCF.

Булак ичиндеги E:T айырмасы: Ыкма бөлүмү 6,25:1, 12,5:1 жана 25:1 катыштарын көрсөтсө, клиникалык натыйжа таблицалары 50:1 катышын да билдирет.

Булак ичиндеги доза/формуляция айырмасы: Ыкма бөлүмү 500 mg/күн HT-LM1004 порошогу жана толтургуч зат жок экенин айтса, талкуудагы кеңири өндүрүш сүрөттөмөсү 0,1 g стандарттык HT-LM1004 активдүү компоненти жардамчы заттар менен капсуланын жалпы салмагына чейин толукталарын билдирет. Булак бул айырманын себебин түшүндүрбөйт.

Клиникалык механизм чеги: Клиникалык катышуучуларда SHIMEдеги микробиом жана метаболомика чынжыры түздөн-түз өлчөнгөн эмес. Микробиом/метаболит өзгөрүүлөрү менен NK активдүүлүгүнүн жогорулашынын ортосунда түз себептүүлүк далилденген эмес.

SHIME чеги: Система адам жоон ичегисинин микробдук жана физикалык-химиялык шарттарын моделдеген in vitro экосистема; чыныгы адам иммундук системасын жана толук кожоюн физиологиясын кайра түзбөйт.

Цитокин анализинин чеги: Цитокиндер изилдөөчү/колдоочу биомаркерлер болуп, формалдуу көп тест түзөтүүсү колдонулган эмес.

Авторлордун салымы: Conceptualization: T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; биринчи долбоор: S.K. жана H.S.; review/editing: S.K., H.S., M.A.R., T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; supervision: T.-R.K., S.-H.H., H.-Y.S.; funding acquisition: T.-R.K. жана H.-Y.S. Булак ошондой эле методология, изилдөө, формалдуу анализ, ресурстар, визуалдаштыруу жана долбоорду башкаруу салымдарын кеңири CRediT форматында берет.