Бул изилдөөдө 4-хлорфеноксисирке кислотасын (4-CPA) сууда тез жана сандык аныктоо үчүн гомогендик флуоресценциялык поляризация иммундук анализи (FPIA) иштелип чыкты. Изилдөөчүлөр M1 моноклоналдык антителосун эки башка флуоресценттик 4-CPA трейсери менен салыштырышты; кыска байланыштыргычы бар 4-CPA-EDF трейсери менен 15 мүнөттүк анализде 1,2 ng/mL аныктоо чеги жана болжол менен 2,3–300 ng/mL аналитикалык диапазон алынды. 4-CPA кошулган чыныгы ачык-суу үлгүлөрүндө 4-таблицага ылайык калыбына келүү %98–110 аралыгында болду. Методдун негизги чектөөсү түзүлүшү окшош 2,4-Dге карата %48 кайчылаш реактивдүүлүк көрсөтүшү болду; изилдөөчүлөр муну математикалык кош-FPIA талдоосу жана 2,4-Dни аффиндик колонка менен алдын ала бөлүп чыгаруу деген эки ыкма менен карашты. Кош-FPIA түзөтүүсү сыналган аралашмаларда %116–151 калыбына келүү менен ачык ашыкча баалоо жаратса, аффиндик колонкалуу ыкма сыналган шарттарда 4-CPA үчүн болжол менен %103,6–110 калыбына келүү берди.

4-CPA өсүмдүктөрдө ауксинге окшош таасир көрсөтө ала турган синтетикалык феноксисирке кислотасынын туундусу. Айыл чарба колдонмолорунда өсүмдүктүн өсүшүн жөнгө салуучу зат катары колдонулушу мүмкүн, ал эми жогорку дозаларда гербициддик таасир да көрсөтүшү мүмкүн. Ошондуктан анын суудагы жана айыл чарба үлгүлөрүндөгү калдыктарын тез көзөмөлдөө аналитикалык жактан маанилүү. Изилдөөнүн максаты жогорку деңгээлдеги жабдууну талап кылган хроматографиялык ыкмаларды алмаштыра турган универсалдуу референстик метод түзүү эмес; тез, гомогендик жана көчмө өлчөөгө ылайыктуу иммундук-химиялык скрининг ыкмасын иштеп чыгуу.

Изилдөөнүн маанилүү жаңылыктарынын бири 4-CPA үчүн FPIA түзүү менен гана чектелбестен, иммундук анализдерде көп кездешкен түзүлүштүк окшоштук көйгөйүнө түздөн-түз чечим издөө болду. M1 антителосу 4-CPAны күчтүү тааныганы менен 2,4-Dге да олуттуу жооп берди. Ал эми өзүнчө anti-2,4-D антителосу изилдөөчүлөрдүн сыноо шарттарында 4-CPAга маанилүү кайчылаш жооп көрсөткөн жок. Бул асимметрия эки тесттин жыйынтыгын математикалык түрдө ажыратууда да, 2,4-Dни үлгүдөн физикалык түрдө кармап алып бөлүп чыгарууда да пайдаланылды.

Изилдөөнүн негизги көйгөйү эмнеде?

4-CPA сыяктуу молекулалык массасы төмөн айыл чарба химикаттарын аныктоодогу негизги аналитикалык көйгөй төмөн концентрацияларды өлчөй алуу менен гана чектелбейт. Максаттуу молекуланы химиялык түзүлүшү абдан окшош башка кошулмалардан да айырмалоо керек. Айрыкча 4-CPA менен кеңири колдонулган фенокси гербициди 2,4-Dнин түзүлүштүк окшоштугу антителого негизделген анализдерде кайчылаш реактивдүүлүктү пайда кылышы мүмкүн.

Изилдөөдө бул көйгөй эки баскычта каралды. Биринчи максат 4-CPA үчүн жетиштүү сезгич жана тез FPIA түзүү болду. Экинчи максат болсо FPIAнын 2,4-Dге берген кайчылаш жообун башкарууга мүмкүндүк бере турган аналитикалык стратегияларды иштеп чыгуу эле.

Флуоресценциялык поляризация иммундук анализи кантип иштейт?

Флуоресценциялык поляризация иммундук анализи эритмедеги флуоресценттик белги коюлган майда молекулалардын айлануу кыймылындагы өзгөрүүнү өлчөйт. Эркин абалдагы майда флуоресценттик трейсер тез айланып, козголгон жарыктын поляризациясын көбүрөөк жоготот. Ошол эле трейсер чоң антителого байланышканда бүт комплекс жайыраак айланат; ошондуктан бөлүнүп чыккан флуоресценциянын поляризациясы жогору бойдон калат.

4-CPA сыяктуу майда максаттуу молекула үлгүдө болгондо, флуоресценттик белги коюлган 4-CPA трейсери менен антителонун байланышуу жери үчүн атаандашат. Үлгүдөгү эркин 4-CPA көбөйгөн сайын антителого байланышкан флуоресценттик трейсердин көлөмү азайып, өлчөнгөн поляризация сигналы төмөндөйт. Ошентип, 4-CPA концентрациясы менен флуоресценциялык поляризациянын ортосунда калибрлөөгө негизделген сандык байланыш түзүлөт.

Бул ыкманын изилдөө үчүн маанилүү жагы — салттуу гетерогендик иммундук анализдерде кездешкен көп жолу жууп-тазалоо жана бөлүү баскычтарына муктаж болбой, “аралаштыр, инкубацияла жана өлчө” логикасы менен иштей алышы.

M1 антителосунун келип чыгышы эмне үчүн көңүл бурууга татыктуу?

Булакта маанилүү библиографиялык/методологиялык дал келбестик бар. Кыскача мазмун бөлүмүндө M1 антителосу 4-CPAга каршы түзүлгөн антитело сыяктуу сүрөттөлөт. Бирок метод бөлүмүндө иммуноген даярдоодо 2,4-D колдонулганы так көрсөтүлөт жана жыйынтыктарда M1 2,4-Dге каршы даярдалган гибридома клондорун скринингдөө учурунда пайда болгону түшүндүрүлөт.

Жыйынтыктар бөлүмүнө ылайык, M1дин күтүлбөгөн өзгөчөлүгү — байланышууга багытталган 2,4-Dге караганда 4-CPAга жогорураак аффиндик көрсөтүшү. ELISAга негизделген салыштырууда M1 үчүн IC50 мааниси 4-CPA менен 0,71 µg/mL, 2,4-D менен 2,22 µg/mL деп билдирилди. Өзүнчө anti-2,4-D антителосу үчүн 2,4-D IC50 мааниси 0,70 µg/mL болгон, ал эми 4-CPAга кайчылаш реактивдүүлүк эксперименттин аныктоо чегинде байкалган жок.

Ошондуктан M1ди “башынан эле 4-CPA үчүн долбоорлонгон жогорку спецификалуу антитело” деп аныктоо булакка толук туура келбейт. Тагыраак айтканда, ал 2,4-Dге багытталган гибридома изилдөөсүндө пайда болгон жана 4-CPAга күтүүсүз жогорку аффиндик көрсөткөн клон.

Эмне үчүн эки флуоресценттик трейсер синтезделген?

FPIAнын сезгичтиги антителонун аффиндигине гана эмес, флуоресценттик белги коюлган антиген аналогуунун түзүлүшүнө да көз каранды. Ошондуктан изилдөөчүлөр 4-CPAны эки башка флуоресценттик туундуга байланыштырышты:

• 4-CPA-EDF: 4-CPA менен флуоресценттик түзүлүштүн ортосунда эки CH2 тобу бар кыскараак байланыштыргыч.
• 4-CPA-6-AHF: алты CH2 тобу бар узунураак байланыштыргыч.

4-CPAнын карбоксил тобу DCC/NHS негизиндеги карбодиимид химиясы менен активдештирилип, флуоресценттик туундулардын амин топтору менен амид байланышы түзүлдү. Трейсерлер жука катмарлуу хроматография менен тазаланды. Изилдөөдө синтездин чыгымы баштапкы флуоресцентке салыштырмалуу адатта болжол менен %30–40 болгону билдирилди.

Трейсерлер чындап синтезделгени кантип тастыкталды?

Флуоресценттик сигналдын болушу гана түзүлүштүн туура экенин далилдөө үчүн жетиштүү деп эсептелген жок. Изилдөөчүлөр 4-CPA-EDF жана 4-CPA-6-AHF продуктуларын жогорку эффективдүү суюктук хроматографиясы-жогорку ажыратуучу масс-спектрометрия (HPLC-HRMS) менен талдашты.

4-CPA-EDF үчүн депротондолгон молекулалык ион [M−H]⁻ m/z 616,0942; 4-CPA-6-AHF үчүн m/z 641,1696 болуп өлчөндү. Билдирилген масса каталары тиешелүүлүгүнө жараша −1,6 ppm жана 0,01 ppm деңгээлинде болгон. Эксперименттик изотоптук бөлүштүрүүлөр эсептелген молекулалык формулаларга шайкеш келди.

MS/MS фрагментациялык анализинде эки трейсерде тең 4-CPA калдыгын колдогон болжол менен m/z 126,994 мүнөздүү фрагмент байкалды. Флуоресценттик өзөктү жана байланыштыруучу аймактарды билдирген кошумча фрагменттердин болушу да изилдөөчүлөрдүн 4-CPA флуоресценттик ташуучуга коваленттик байланыш менен кошулган деген жыйынтыгын колдоду.

Трейсердин концентрациясы кантип оптималдаштырылды?

Эки трейсердин флуоресценция интенсивдүүлүгү жана поляризациясы ар кандай концентрацияларда өлчөндү. Төмөн концентрацияларда сигнал/ызы-чуу катышы начарласа, болжол менен 1–10 nM аралыгында флуоресценция интенсивдүүлүгү колдонууга жарактуу деңгээлде жогорулап, поляризация салыштырмалуу туруктуу бойдон калган. 10 nMден жогору концентрацияларда болсо сызыктуу жүрүм-турум бузулуп, поляризацияда өзгөрүү болгону билдирилди.

Ошондуктан изилдөө үчүн 5 nM жумушчу эритме тандалды; аралаштыргандан кийинки калибрлөө эксперименттеринде акыркы трейсер концентрациясы болжол менен 2,5 nM деп билдирилди.

Антитело-трейсер байланышы эмнени көрсөттү?

M1 антителосунун эки трейсерге байланышы спецификалык эмес M2 моноклоналдык антителосу менен салыштырылды. M1 кошулганда антителонун төмөн концентрацияларынан тартып байланышкан фракция жана флуоресценциялык поляризация тез жогорулаган, ал эми M2 маанилүү сигнал өзгөрүүсүн жараткан эмес.

M1 үчүн болжол менен %50 байланышкан фракцияга туура келген акыркы концентрациялар 4-CPA-EDF менен 2,2 ± 0,1 nM жана 4-CPA-6-AHF менен 3,2 ± 0,3 nM деп аныкталды.

Кайсы трейсер жакшыраак аналитикалык көрсөткүч берди?

Эки трейсердин 4-CPAны аныктоодогу аналитикалык көрсөткүчү түз салыштырылганда, кыска байланыштыргычтуу 4-CPA-EDF төмөнүрөөк аныктоо чегин берди.

Бул жыйынтык байланыштыргычтын узундугу менен сезгичтиктин ортосунда жөнөкөй “узун байланыштыргыч жакшыраак” деген байланыш жок экенин көрсөтөт. Изилдөөчүлөр айырманы флуорофордун жергиликтүү кыймылдуулугу, антителого жеткиликтүүлүк, стерикалык таасирлер жана байланышкандан кийин айлануу кыймылы канчалык чектелери сыяктуу бир нече фактор менен талкуулашат.

Булактын өз маалыматтарына ылайык, эң сезгич комбинация 4-CPA-EDF/M1 болду. Бирок билдирилген 1,2 ± 1,2 ng/mL LOD маанисиндеги белгисиздик борбордук маани сыяктуу эле чоң экенин да аналитикалык көрсөткүчтү чечмелөөдө эске алуу керек.

Анализ эмне үчүн 15 мүнөт созулат?

Антитело менен флуоресценттик трейсердин байланышуу кинетикасы изилденгенде тең салмактуулукка болжол менен 15 мүнөттө жетилери, андан кийин флуоресценциялык поляризация сигналы болжол менен 60 мүнөт сакталаары билдирилди. Ошондуктан күнүмдүк өлчөө убактысы 15 мүнөт болуп тандалды.

Өлчөөлөрдө көчмө Sentry 200 флуориметри колдонулду. Изилдөөдө козгоо толкун узундугу 485 nm, эмиссия толкун узундугу 535 nm деп берилди. Эксперименттер 25 °Cде жана pH 8,5 борат буферинде жүргүзүлдү.

4-CPA үчүн алынган негизги көрсөткүч кандай?

4-CPA-EDF/M1 комбинациясы менен иштелип чыккан FPIA үчүн билдирилген аныктоо чеги 1,2 ng/mL, IC20–IC80ге негизделген аныктоо диапазону болжол менен 2,3–300 ng/mL жана өлчөө убактысы 15 мүнөт. Калибрлөө графигинин жарым-логарифмдик сызыктуу көрсөтүлүшү үчүн изилдөө Y = (0,91 ± 0,02) − (0,24 ± 0,01) × X жана R² = 0,98 маанилерин билдирет.

Селективдүүлүктөгү негизги көйгөй: 2,4-D

FPIAнын селективдүүлүгү түзүлүшү окшош фенокси кошулмалары, ошондой эле глифосат, атразин жана хлорпирифоско каршы сыналды. 4-CPA референс катары %100 деп кабыл алынганда 2,4-D үчүн %48 кайчылаш реактивдүүлүк табылды. 2,4,5-T үчүн %25, MCPA үчүн %6 жана 3,4-D үчүн %0,2 маанилери билдирилди. Глифосат, атразин жана хлорпирифос үчүн кайчылаш реактивдүүлүк %0,1ден төмөн калды.

Бул маалымат метод үчүн маанилүү нерсени көрсөтөт: FPIA 4-CPAны сезгич аныктаса да, үлгүдө 2,4-D бар болсо, өлчөнгөн сигнал 4-CPAдан гана келип жатат деп божомолдоого болбойт.

Чыныгы суу матрицасынын эксперименти эмнени көрсөттү?

Изилдөөчүлөр хлорфеноксисирке кислоталары боюнча алдын ала HPLC менен текшерилген ачык-суу үлгүлөрүнө белгилүү көлөмдө 4-CPA кошуп recovery тестин жүргүзүштү. Жыйынтык таблицасында төрт концентрация билдирилди:

Таблицага ылайык, чыныгы ачык-суу матрицасында байкалган калыбына келүү диапазону %98–110. Кыскача мазмун жана жыйынтык бөлүмдөрүндө %98–112 деген сөз колдонулгандыктан булакта кичине сандык дал келбестик бар; Verianla текстинде түздөн-түз эксперименттик таблицадагы маанилер негиз катары алынган.

2,4-D кийлигишүүсүнө биринчи чечим: эки FPIAны чогуу колдонуу

Биринчи чечимде бир эле үлгү 4-CPA FPIA жана мурда иштелип чыккан 2,4-D FPIA менен өлчөндү. Логика 4-CPA системасы 2,4-Dге %48 жооп берет, ал эми колдонулган 2,4-D системасы 4-CPAга практикалык жактан кайчылаш жооп бербейт деген божомолго негизделди.

Булакта бул байланыш төмөнкү теңдемелер системасы менен берилет:

\[ C_1 = X \times A + Y \times 0.48 \times A \]

\[ C_2 = X \times 0 \times B + Y \times B \]

Бул жерде X чыныгы 4-CPA концентрациясын, Y чыныгы 2,4-D концентрациясын, A 4-CPA тест системасынын бирдик 4-CPA жообун, B 2,4-D тест системасынын бирдик 2,4-D жообун, C1 4-CPA системасы менен жана C2 2,4-D системасы менен өлчөнгөн жалпы жоопту билдирет.

Нормалдаштыргандан кийин изилдөө байланышты:

\[ D_1 = X + 0.48Y \]

\[ D_2 \approx Y \]

түрүндө жөнөкөйлөтөт.

Бирок эксперименттик жыйынтыктар математикалык ыкма сыналган аралашмаларда олуттуу оң ыктуулук жаратканын көрсөтөт:

Ошондуктан кош-FPIA ыкмасы концептуалдык жактан эки аналитти ажырата алаары көрсөтүлгөнү менен, 5-таблицадагы жыйынтыктар өзгөчө жогорку концентрацияларда 4-CPA олуттуу ашыкча эсептелгенин көрсөтөт. Булак текстиндеги “туура аныктоо” баасы бул сандар менен бирге этияттык менен чечмелениши керек.

Экинчи чечим: 2,4-Dни өлчөөдөн мурда физикалык түрдө бөлүп чыгаруу

Экинчи стратегияда изилдөөчүлөр 2,4-Dге спецификалык антителолорду BrCN менен активдештирилген Sepharose 4Bге иммобилизациялап, аффиндик колонка түзүштү. Үлгү бул колонкадан өткөндө 2,4-D колонкада кармалып, 4-CPA кийинки FPIA үчүн эритмеде калышы максат кылынды.

2,4-D гана бар үлгүлөр колонкадан өткөрүлгөндөн кийин 4-CPA FPIA сигналында 2,4-D кийлигишүүсүн көрсөтө турган ачык айырма байкалган жок. Изилдөөчүлөр муну сыналган шарттарда 2,4-Dнин колонкага адсорбцияланышы менен түшүндүрүштү.

Андан кийин 2,4-D жана 4-CPA бирге болгон үлгүлөр сыналды. Колонка жана үлгүнү суюлтуудан кийин 6-таблицада 30 ng/mL 2,4-D бар учурда төмөнкү жыйынтыктар берилди:

Бул эксперименттик катарда аффиндик колонкалуу ыкма кош-FPIA математикалык түзөтүүсүнө караганда тең салмактуу калыбына келүү маанилерин берди. Бирок бул жыйынтык белгилүү лабораториялык шарттарга, колдонулган антитело колонкасына жана сыналган концентрацияларга тиешелүү; башка суу матрицаларында же кеңири интерферент профилдеринде ошол эле көрсөткүч автоматтык түрдө сакталары көрсөтүлгөн эмес.

Изилдөөнүн күчтүү жактары кайсылар?

• Жаңы FPIA калибрлөө менен гана чектелген эмес; флуоресценттик трейсерлердин түзүлүшү HPLC-HRMS жана MS/MS менен тастыкталган.
• Эки башка байланыштыргыч узундугу эксперименттик түрдө салыштырылган.
• Антитело-трейсер өз ара аракеттенүүсү, кинетика жана жумушчу концентрациялар өзүнчө эксперименттер менен оптималдаштырылган.
• Селективдүүлүк максаттуу аналит менен гана эмес, бир нече түзүлүштүк аналог жана тиешеси жок пестициддер менен сыналган.
• Чыныгы ачык-суу матрицасында spike/recovery валидациясы жүргүзүлгөн.
• Маанилүү 2,4-D кайчылаш реактивдүүлүгү жашырылган эмес; эки башка чечүү жолу эксперименттик түрдө сыналган.

Изилдөөнүн чектөөлөрү кайсылар?

• Негизги 4-CPA FPIAнын 2,4-Dге кайчылаш реактивдүүлүгү %48; үлгүдө 2,4-D болсо түз өлчөө спецификалык 4-CPA аныктоосу катары кабыл алынбайт.
• Кош-FPIA математикалык ыкмасында билдирилген %116–151 калыбына келүү олуттуу оң ыктуулукту көрсөтөт.
• Аффиндик колонкалуу чечим үмүттөндүргөнү менен, чектелген сандагы концентрацияларда жана бир гана эксперименттик суу контекстинде көрсөтүлгөн.
• Изилдөө кеңири географиялык аймактардан ар түрдүү табигый суу түрлөрүн, тамак-аш матрицасын же чыныгы талаа үлгүлөрүн камтыган чоң валидация топтомун сунуштабайт.
• LOD үчүн билдирилген 1,2 ± 1,2 ng/mL маани жогорку салыштырмалуу белгисиздикке ээ.
• Метод бөлүмүндө эксперименттер айрым жерлерде эки кайталануу, ал эми сүрөт жана таблицаларда n = 3 деп билдирилиши кайталануу схемасы боюнча ачыктык көйгөйүн жаратат.
• Булакта антителонун келип чыгышы, айрым таблица/теңдеме номерлери, recovery диапазондору жана методдорду салыштырган булактар боюнча редакциялык дал келбестиктер бар.

Түркия үчүн бул жыйынтык эмнени билдирет?

Изилдөө Түркиянын жер үстүндөгү сууларында жүргүзүлгөн экологиялык мониторинг эмес жана Түркияга тиешелүү 4-CPA колдонуу жыштыгы, суудагы концентрациялар же ченемдик чектер жөнүндө маалымат бербейт. Ошондуктан алынган аналитикалык көрсөткүчтү Түркиядагы чыныгы талаа үлгүлөрүнө түздөн-түз жалпылоого болбойт.

Ошентсе да, тез, көчмө жана аз баскычтуу FPIA ыкмасы жергиликтүү суу матрицалары, бир убакта кездешүүчү пестициддердин профили жана керектүү референстик методдор менен өзүнчө валидацияланган шартта экологиялык алдын ала скрининг үчүн изилдениши мүмкүн. Айрыкча 2,4-Dге окшош түзүлүштүк аналогдор бир үлгүдө кездешиши мүмкүн болгон учурда селективдүүлүк чечими валидациянын борборунда болушу керек.

Изилдөө эмнени колдойт?

• 4-CPA-EDF жана M1 комбинациясы менен 4-CPA үчүн тез FPIA сигналы түзүлө аларын.
• Изилдөөнүн эксперименттик шарттарында борбордук мааниси 1,2 ng/mL болгон LOD жана болжол менен 2,3–300 ng/mL аныктоо диапазону алынганын.
• 4-CPA кошулган ачык-суу үлгүлөрүндө 4-таблицага ылайык %98–110 калыбына келүү алынганын.
• 2,4-D 4-CPA FPIA үчүн маанилүү интерферент экенин.
• 2,4-Dни anti-2,4-D аффиндик колонкасы менен алдын ала бөлүп чыгаруу сыналган аралашмаларда 4-CPA өлчөөнү жакшырта аларын.

Изилдөө эмнени далилдебейт?

• FPIA бардык хроматографиялык же иммундук-химиялык методдордон универсалдуу түрдө жогору экенин далилдебейт.
• Метод бардык табигый суу, тамак-аш же айыл чарба продуктусунун матрицаларында бирдей тактыкты камсыз кыларын көрсөтпөйт.
• Кош-FPIA математикалык түзөтүүсү жогорку тактык менен иштей турганын көрсөтпөйт; берилген recovery жыйынтыктары ачык ашыкча баалоону камтыйт.
• Аффиндик колонка чыныгы экологиялык үлгүлөрдөгү бардык мүмкүн болгон интерференттерди жок кыларын көрсөтпөйт.
• 15 мүнөттүк анализ убактысынын өзү кадимки ченемдик референстик методду алмаштыра ала турган талаа валидациясы экенин көрсөтпөйт.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Моноклоналдык антитело өндүрүү

Булактын метод бөлүмүндө иммуноген даярдоодо 2,4-D BSA менен, ал эми каптоочу антиген OVA менен EDC/NHS химиясы аркылуу конъюгацияланганы билдирилет. BALB/c чычкандар бир баштапкы жана төрт күчөтүүчү иммундаштыруу менен иммундаштырылды. Сывороткадагы антитело титри жана ингибиция көрсөткүчү эң жогору болгон жаныбар тандалгандан кийин спленоциттер SP2/0 миелома клеткалары менен PEG ортомчу болгон фузияга дуушар кылынды. M1 моноклоналдык антителосу классикалык гибридома технологиясы менен алынып, Protein G аффиндик тазалоосу колдонулду.

Бул методдук деталь кыскача мазмундагы “4-CPAга каршы түзүлгөн M1” деген сөз менен толук дал келбейт. Жыйынтыктар бөлүмү M1 2,4-Dге багытталган гибридома скринингинен чыкканын жана 4-CPAга күтүүсүз жогорку аффиндик көрсөткөнүн түшүндүрөт.

Флуоресценттик трейсерлерди даярдоо

4-CPAнын карбоксил тобу DCC жана NHS менен активдештирилди. Активдештирүүдөн кийин реакция аралашмасынын эки бөлүгүнө тиешелүүлүгүнө жараша EDF жана 6-AHF кошулду. Продуктулар CHCl3:CH3OH 4:1 мобилдик фазасы менен TLC аркылуу бөлүнүп, метанол менен элюцияланды.

4-CPA-EDF эки CH2 тобу бар кыска байланыштыргычты, 4-CPA-6-AHF болсо алты CH2 тобу бар узунураак байланыштыргычты алып жүрдү.

HPLC-HRMS шарттары

Түзүлүштү тастыктоодо Dionex Ultimate 3000 суюктук хроматографы жана Q Exactive гибриддик жогорку ажыратуучу масс-спектрометри колдонулду. Аналитикалык колонка HypersilGold aQ, 2,1 × 100 mm жана 3 µm деп билдирилди. Агым ылдамдыгы 0,50 mL/мүнөт, колонка температурасы 40 °C, инъекция көлөмү 1 µL болду.

Мобилдик фаза A %0,1 кумурска кислотасын камтыган %5 ацетонитрил/суу; мобилдик фаза B болсо ацетонитрилдеги %0,1 кумурска кислотасы болду. MS маалыматтары 100–1000 m/z Full MS жана 90–900 m/z AIF режимдеринде оң жана терс иондоштуруу менен чогултулду; терс иондоштуруу түзүлүштүк чечмелөө үчүн маалыматтууураак деп табылды.

FPIA өлчөө шарттары

Төрт параметрлүү калибрлөө модели

Флуоресценциялык поляризация менен аналит концентрациясынын ортосундагы байланыш булакта төрт параметрлүү логистикалык функция менен моделденген:

\[ Y = B + \frac{A-B}{1+\left(\frac{x}{C}\right)^D} \]

Бул жерде x аналит концентрациясын, Y өлчөнгөн флуоресценциялык поляризация маанисин, A жогорку асимптотикалык FP маанисин, B төмөнкү асимптотикалык же фон маанисин, C жарым-логарифмдик ийри сызыктагы бурулуш чекитин жана %50 ингибицияга туура келген концентрацияны, D болсо ийри сызыктын бурулуш чекитиндеги эңкейишин аныктайт.

Кайчылаш реактивдүүлүктү эсептөө

Кайчылаш реактивдүүлүк булакта төмөнкү байланыш менен эсептелген:

\[ CR = \frac{IC50_{4-CPA}}{IC50_{cr}}\times100\% \]

IC50_4-CPA 4-CPAнын антитело-трейсер байланышын %50 ингибициялаган концентрациясын; IC50_cr болсо сыналган кайчылаш реактивдүү кошулманын ошондой деңгээлде ингибиция жараткан концентрациясын билдирет. Жогорку CR мааниси максаттуу эмес кошулма тестке күчтүүрөөк кийлигишерин көрсөтөт.

Калыбына келүүнү эсептөө

Spike/recovery валидациясында:

\[ Recovery(\%)=\frac{C_{found}}{C_{added}}\times100\% \]

колдонулган. C_found FPIA менен табылган, C_added болсо үлгүгө белгилүү көлөмдө кошулган 4-CPA концентрациясы.

Байланышкан фракцияны эсептөө

Антителону оптималдаштырууда флуоресценттик трейсердин байланышкан фракциясы:

\[ F_b=\frac{mP-mP_{free}}{mP_{max}-mP_{free}} \]

теңдемеси менен эсептелген. Бул жерде mP өлчөнгөн поляризация, mP_free эркин трейсердин поляризациясы жана mP_max максималдуу антитело-трейсер байланышы учурундагы поляризация.

Негизги сандык жыйынтыктардын кыскача мазмуну

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Толук оригиналдуу эмгектин аталышы: Fluorescence Polarization Immunoassay with Modulated Selectivity for Effective Detection of the Agrochemical 4-Chlorophenoxyacetic Acid

Авторлор: Marya K. Kolokolova; Liliya I. Mukhametova; Boris S. Tupertsev; Anatoly V. Zherdev; Xinxin Xu; Chuanlai Xu; Sergei A. Eremin.

Авторлордун тартиби: Булакта жогорудагы тартип менен берилген. Ачык тең биринчи автор/тең салым билдирүүсү табылган жок.

Жооптуу автор: Sergei A. Eremin.

Мекемелер: Faculty of Chemistry, M. V. Lomonosov Moscow State University, Москва, Россия; A. N. Bach Institute of Biochemistry, Research Center of Biotechnology of the Russian Academy of Sciences, Москва, Россия; N. N. Semenov Federal Research Center for Chemical Physics, Russian Academy of Sciences, Москва, Россия; State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi, Кытай.

Булактын түрү: Рецензияланган оригиналдуу изилдөө макаласы (Article).

Журнал: Biosensors.

Басма: MDPI, Basel, Switzerland.

Том / сан / макаланын номери: 16 / 6 / 343.

DOI: 10.3390/bios16060343.

Расмий шилтеме:https://doi.org/10.3390/bios16060343

Даталар: Кабыл алынды 29 апрель 2026; кайра каралды 8 июнь 2026; кабыл алынды 13 июнь 2026; жарыяланды 18 июнь 2026.

Рецензия статусу: Расмий басма маалыматына ылайык, изилдөө рецензияланган Biosensors журналында жарыяланган изилдөө макаласы.

Лицензия: Creative Commons Attribution (CC BY); ачык жеткиликтүүлүк.

Каржылоо: Russian Science Foundation, грант 24-43-00196.

Этика комитети: Жаныбарларга жасалган эксперименттер Кытайдагы лабораториялык жаныбарлар боюнча эрежелерге ылайык жүргүзүлгөнү жана Jiangnan University Animal Ethics Committee тарабынан жактырылганы билдирилет.

Маалымдалган макулдук: Колдонулбайт.

Маалыматтардын жеткиликтүүлүгү: Маалыматтар авторлордон суроо боюнча берилери көрсөтүлгөн.

Кызыкчылыктардын кагылышы: Авторлор кызыкчылыктардын кагылышы жок экенин билдиришкен.

Авторлордун салымдары: Концептуалдаштыруу A.V.Z. жана S.A.E.; методология L.I.M.; валидация M.K.K., B.S.T. жана L.I.M.; формалдуу анализ B.S.T.; изилдөө M.K.K., B.S.T., C.X., X.X. жана L.I.M.; маалыматтарды курациялоо M.K.K. жана A.V.Z.; алгачкы долбоор L.I.M. жана M.K.K.; кароо/редакциялоо A.V.Z. жана S.A.E.; визуалдаштыруу C.X.; жетекчилик A.V.Z. жана S.A.E.; долбоорду башкаруу A.V.Z. жана C.X.; каржылоону алуу S.A.E.

Булактын ичиндеги дал келбестиктер

M1 антителосунун келип чыгышы: Кыскача мазмун M1ди 4-CPAга каршы түзүлгөн антитело катары сүрөттөсө, метод жана жыйынтык бөлүмдөрү M1 2,4-Dге багытталган гибридома изилдөөсүнөн чыкканын жана 4-CPAга күтүүсүз жогорку аффиндик көрсөткөнүн билдирет. Verianla макаласы метод/жыйынтык түшүндүрмөсүн негиз катары алып, бул карама-каршылыкты көрүнөө сактаган.

Recovery диапазону: Кыскача мазмун жана жыйынтык бөлүмүндө %98–112 деген сөз болгону менен, эксперименттик 4-таблицада төрт маани %98, %102, %103 жана %110. Негизги илимий текстте 4-таблицанын %98–110 диапазону колдонулган.

Кош-FPIA recovery: 5-таблица %116, %138 жана %151 маанилерин берет, ал эми кийинки текст диапазонду %99–151 деп билдирет. Verianla текстинде чыныгы таблица маанилери негиз катары алынган.

Үлгү саны/концентрациялар: метод бөлүмүндө ачык-суу үлгүлөрү 2,5; 5; 10; 50; 200 жана 500 ng/mL деңгээлдеринде spike кылынганы айтылса, жыйынтык бөлүмүндө “жети” үлгү деген сөз колдонулат жана 4-таблицада 5, 10, 50 жана 200 ng/mL деңгээлдери гана берилет. Жетишпеген деңгээлдер үчүн маалымат ойлоп табылган эмес.

Теңдеме жана таблицага кайчылаш шилтемелер: тексттин айрым жерлеринде кайчылаш реактивдүүлүк же кош-аналит теңдемелерине мурдагы номерлер менен шилтеме берилет. Теңдемелер бул макалада математикалык мазмунуна ылайык берилген, булактагы номерлөө катасы жашыруун түрдө илимий маалыматты өзгөртүүгө айландырылган эмес.

Кыскартуулар бөлүмү: 2,4-Dнин толук аталышы кыскартуулар тизмесинде негизги тексттеги “2,4-dichlorophenoxyacetic acid” аталышына туура келбеген түрдө жазылган. Ошондой эле 2,4,5-T аталышында да негизги текст менен терминологиялык айырма бар.

Салыштырма методдор таблицасы: Булактын 7-таблицасындагы айрым метод–референс дал келүүлөрү адабияттар тизмеси менен толук шайкеш эмес. Мындан тышкары, макаланын киришинде кыйла төмөн LOD билдирген айрым хроматографиялык мисалдар айтылганы менен, жыйынтык бөлүмүндө FPIA көпчүлүк аспаптык методдордон жогору экени тууралуу кеңири баа берилген. Ошондуктан Verianla макаласы “FPIA бардык аспаптык методдордон жогору” деген жыйынтыкты кабыл албайт.

Илимий чек: Изилдөө 4-CPA үчүн тез FPIA иштеп чыгууну жана белгилүү суу үлгүлөрүндө аны текшерүүнү колдойт. Бирок чыныгы экологиялык мониторинг тармактарында кеңири талаа валидациясы, көп борборлуу кайталангычтык же ар түрдүү суу/тамак-аш матрицаларындагы универсалдуу көрсөткүч көрсөтүлгөн эмес.

Verianla булак эскертүүсү: Илимий мазмун жүктөлгөн 22 беттик эмгектин метод, формула, таблица, график, HPLC-HRMS/MS спектрлери, калибрлөө маалыматтары, recovery тесттери, кайчылаш реактивдүүлүк эксперименттери, аффиндик колонка изилдөөлөрү, жыйынтык, каржылоо, этика, маалыматтардын жеткиликтүүлүгү жана авторлордун салымдары бөлүмдөрү каралып даярдалган. Тышкы булактар библиографиялык идентификацияны жана жарыялануу статусун текшерүү үчүн гана колдонулган; негизги илимий баянга сырттан жаңы эксперименттик жыйынтык кошулган эмес.