Tetrametilpirazin (tetramethylpyrazine, TMP) ushbu tadqiqotda yarali kolitdagi ta’siri ichak mikrobiotasi, metabolizm va immun hujayralar o‘rtasidagi o‘zaro ta’sir orqali o‘rganilgan bioaktiv pirazin alkaloididir. Tadqiqotchilar TMP DSS bilan hosil qilingan sichqon kolitida ichak yallig‘lanishini kamaytirgani, epiteliy to‘sig‘i oqsillari va shilliq tuzilmani saqlagani hamda makrofaglarni proyallig‘lanishli M1-ga o‘xshash profildan ko‘proq tiklovchi M2-ga o‘xshash profilga yo‘naltirganini bildirishgan. Biroq tadqiqotning markaziy topilmasi shuki, TMP ta’sirini faqat mezbon to‘qimasiga to‘g‘ridan-to‘g‘ri farmakologik ta’sir bilan izohlab bo‘lmaydi. 16S rRNA tahlili TMPdan so‘ng ichak mikrobiotasi qayta tuzilganini va ayniqsa Bifidobacterium pseudolongum ko‘pligi ortganini ko‘rsatgan.

Antibiotiklar bilan ichak mikrobiotasi katta darajada kamaytirilganda TMPning kolitga qarshi himoya ta’siri sezilarli darajada zaiflashgan. B. pseudolongum bilan qayta kolonizatsiya yoki tashqaridan taurin berish esa ushbu himoya fenotipining muhim tarkibiy qismlarini qayta tiklagan. Metabolomik tahlilda N-stearoil taurin TMPdan so‘ng ajralib turgan differensial metabolitlardan biri bo‘lib, B. pseudolongum ko‘pligi bilan kuchli musbat bog‘liqlik ko‘rsatgan. Shu bilan birga, yo‘g‘on ichak to‘qimasida taurin tashish yo‘li boyigan va taurin tashuvchisini kodlaydigan Slc6a6/TauT darajalari yana oshgan.

Manba taklif qilgan mexanistik modelda taurin Foxo1 bilan bog‘liq hujayraviy redoks dasturiga ta’sir qilib, Sesn3, Sod2 va Cat antioksidant himoyasini kuchaytiradi, reaktiv kislorod turlarini kamaytiradi va M2-ga o‘xshash makrofag polarizatsiyasini osonlashtiradi. RAW264.7 makrofag tajribalarida Foxo1 ingibitori AS1842856 taurinning Foxo1 yadroviy joylashuvi va yallig‘lanishga qarshi polarizatsiyaga ta’sirini orqaga qaytargani bu bog‘liqlikni qo‘llab-quvvatlagan.

Topilmalar TMP–B. pseudolongum–taurin–Foxo1 o‘qi ichak to‘sig‘i va immun gomeostaz bilan bog‘liq bo‘lishi mumkinligini ko‘rsatuvchi keng qamrovli preklinik mexanizmni taqdim etadi. Biroq tadqiqot hakamlikdan o‘tmagan; asosiy davolash tajribalari sichqon va hujayra modellarida o‘tkazilgan. TMP odamlar uchun yarali kolitni davolashi yoki xavfsiz va samarali klinik doza mavjudligi ushbu tadqiqot bilan ko‘rsatilmagan.

Tadqiqotning asosiy muammosi

Yarali kolit (ulcerative colitis, UC) yo‘g‘on ichak shilliq qavatida surunkali va qaytalanuvchi yallig‘lanish bilan kechadigan yallig‘lanishli ichak kasalligidir. Manbaning tadqiqot doirasida kasallik faqat immun tizimidagi buzilish sifatida emas, balki mezbon immuniteti bilan ichak mikrobiotasi o‘rtasidagi gomeostatik muloqotning buzilishi sifatida ko‘riladi.

Tadqiqotchilarning asosiy savoli TMPning yallig‘lanishga qarshi ta’siri faqat mezbonning hujayraviy nishonlariga bevosita bog‘lanish orqali yuzaga keladimi yoki TMP ichak mikrobiotasini o‘zgartirib, mikrob metabolitlari orqali mezbon immunitetini qayta dasturlaydimi, degan masaladir.

Tetrametilpirazin (TMP) Nima va Ushbu Tadqiqotda Qanday Ko‘rib Chiqilgan?

Tetrametilpirazin (TMP) manbada yallig‘lanishga qarshi xususiyatlari o‘rganilgan bioaktiv pirazin alkaloidi sifatida ta’riflanadi; ushbu tadqiqotda TMPning bitta immun retseptoriga to‘g‘ridan-to‘g‘ri ta’siridan ko‘ra ichak mikrobiotasini qayta tuzib, mikrob metabolizmi va makrofag polarizatsiyasini o‘zgartirish qobiliyati sinovdan o‘tkazilgan.

O‘tkir tajribalarda olti haftalik erkak C57BL/6J sichqonlarda %2,5 DSS ichimlik suvi bilan yetti kun davomida kolit hosil qilingan. Farmakologik taqqoslashda besh asosiy guruh ishlatilgan: nazorat, DSS, DSS + sulfasalazin, DSS + past dozali TMP va DSS + yuqori dozali TMP.

TMP va taqqoslash aralashuvlari og‘iz orqali gavaj yo‘li bilan qo‘llangan. Manbada yuqori dozali TMP ko‘plab makroskopik kasallik o‘lchovlarida sulfasalazin musbat nazoratiga yaqin himoya profilini yaratgani bildirilgan; ammo bu taqqoslash sichqon modeliga tegishli va klinik tenglikni anglatmaydi.

TMP ichak to‘sig‘iga qanday ta’sir qildi?

DSS guruhida tana vazni yo‘qolishi, kasallik faolligi indeksining oshishi, yo‘g‘on ichakning qisqarishi va splenomegaliya paydo bo‘lgan. TMP aralashuvi bu o‘zgarishlarni dozaga bog‘liq ravishda yengillashtirgan. Gistologik jihatdan DSS epiteliy eroziyasi, kript buzilishi va neytrofil infiltratsiyasiga olib kelgan bo‘lsa, TMP yo‘g‘on ichak arxitekturasining saqlanishi bilan bog‘langan.

AB-PAS bo‘yash orqali goblet hujayralari va shilliq qavat baholangan, MUC-2 immunogistokimyosi esa mutsin ishlab chiqarish ko‘rsatkichi sifatida ishlatilgan. DSS keltirib chiqargan goblet hujayralari va MUC-2 yo‘qolishi TMPdan so‘ng qisman tiklangan.

Epiteliy hujayralari orasidagi jismoniy to‘siq bo‘yicha ZO-1, Occludin va Claudin-5 oqsillari o‘lchangan. DSS ushbu oqsillarni kamaytirgan bo‘lsa, TMP davolashi manbada dozaga bog‘liq tiklanish bilan bog‘langan. Shunday qilib, TMPning kuzatilgan ta’siri faqat yallig‘lanish ko‘rsatkichlarida emas, balki ichak to‘sig‘ining tarkibiy elementlarida ham baholangan.

Yo‘g‘on ichak transkriptomikasi nimani ko‘rsatdi?

Yo‘g‘on ichak RNA-seq tahlilida TMPdan so‘ng yallig‘lanish signalining bostirilishi va metabolik gomeostaz bilan bog‘liq yo‘llarning qayta boyishi xabar qilingan. KEGG va GSEA baholari IL-17, Th1/Th2 va yallig‘lanishli ichak kasalligi imzolarining kamayishini; oksidlovchi fosforillanish va oshqozon-ichak epiteliyini saqlash bilan bog‘liq imzolarning oshishini ko‘rsatgan.

“Inflammatory Bowel Disease” gen to‘plami uchun NES = −1,56 va P = 0,02; tip 1 immun javobi uchun NES = −1,41 va P = 0,03 xabar qilingan. Aksincha, oshqozon-ichak epiteliyini saqlashga oid gen to‘plamlari va oksidlovchi fosforillanish yo‘nalishida musbat boyish kuzatilgan; oksidlovchi fosforillanish uchun manbada NES = 1,58 va P = 0,02 berilgan.

M1 va M2 Makrofag Polarizatsiyasi Ushbu Tadqiqotda Nega Muhim?

Manbada M1-ga o‘xshash makrofaglar proyallig‘lanishli javob bilan, M2-ga o‘xshash makrofaglar esa yallig‘lanishning bartaraf bo‘lishi va to‘qima tiklanishi bilan bog‘liq funksional holatlar sifatida ishlatilgan; TMPdan so‘ng F4/80⁺CD86⁺ M1-ga o‘xshash hujayralarning kamayishi va F4/80⁺CD163⁺ M2-ga o‘xshash hujayralarning ortishi tadqiqotning mikrobiota-metabolizm o‘qini immun natija bilan bog‘laydigan asosiy hujayraviy chiqishdir.

DSSdan so‘ng yo‘g‘on ichak shilliq qavatida CD86 bilan belgilanadigan M1-ga o‘xshash profil ortgan, CD163 bilan belgilanadigan M2-ga o‘xshash hujayralar esa kamaygan. TMP bu taqsimotni qarama-qarshi yo‘nalishda o‘zgartirgan. Sitokin natijalari ham ushbu o‘zgarishga mos: TNF-α, IL-1β va IL-6 kabi proyallig‘lanishli ko‘rsatkichlar kamaygan, IL-10 esa oshgan.

Bu natijalarni “M1 va M2 barcha makrofag biologiyasini ikki qat’iy sinfga ajratadi” deb talqin qilmaslik kerak. Manba eksperimental natijalarni CD86 va CD163 kabi markerlar orqali M1-ga o‘xshash va M2-ga o‘xshash polarizatsiya doirasida sharhlaydi.

16S rRNA tahlili ichak mikrobiotasida nimani topdi?

Najas mikrobiotasi 16S rRNA genining V3–V4 hududlarini sekvenslash orqali tahlil qilingan. Sekvenslash Illumina HiSeq platformasida 2 × 250 bp paired-end formatida bajarilgan; o‘qishlar FLASH bilan qayta ishlangan, QIIME v1.9.1 va SILVA 138.1 ma’lumotlar bazasidan foydalanilgan. Differensial taksonlar LEfSe va LDA > 2,0 chegarasi ostida aniqlangan.

DSS mikrob boyligi va tenglik ko‘rsatkichlarini kamaytirgan. TMPdan so‘ng Shannon va Simpson α-xilma-xillik ko‘rsatkichlari yana oshgan; PCoA tahlili nazorat, DSS va TMP guruhlarini aniq ajratgan. PERMANOVA/Adonis tahlilida manba TMP jamoa tuzilishini sezilarli o‘zgartirganini R² = 0,446 va P = 0,001 bilan xabar qilgan.

Taksonomik profilda DSS foydali Firmicutes a’zolarining kamayishi hamda Proteobacteria, Bacteroidota va Verrucomicrobiota o‘zgarishlari bilan bog‘liq ekani; TMP esa jamoa tuzilishini nazorat holatiga tomon qayta shakllantirgani bildirilgan.

Bifidobacterium pseudolongum Nega Tadqiqot Markaziga Chiqdi?

Bifidobacterium pseudolongum TMPdan so‘ng sezilarli boyigan ichak kommensalidir; ushbu tadqiqotda u faqat ko‘pligi o‘zgargani uchun emas, balki ko‘pligi kolit og‘irligi bilan kuchli bog‘liqlik ko‘rsatgani, antibiotik bilan kamaytirish va qayta kolonizatsiya tajribalari orqali funksional ta’siri sinovdan o‘tkazilgani hamda taurin metabolizmi bilan bog‘langani uchun markaziy mikrob nomzod sifatida tanlangan.

LEfSe tahlili TMP guruhida Akkermansia muciniphila va B. pseudolongum kabi ayrim kommensallar boyiganini ko‘rsatgan. Biroq klinik va fenotipik ko‘rsatkichlar bilan eng izchil bog‘liqliklar B. pseudolongum uchun kuzatilgan.

Bu korrelyatsiyalar o‘z-o‘zicha sababiylikni isbotlamaydi. Tadqiqotning sababiylikka yaqinlashish uchun qilgan muhim qadami mikrobiotani antibiotiklar bilan kamaytirib, keyin aniq bakterial qayta kolonizatsiya va metabolitni tiklash tajribalarini o‘tkazish bo‘lgan.

Odam namunalarida nima ko‘rsatildi?

Tadqiqotchilar The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University’da tasdiqlangan yarali kolit tashxisi bo‘lgan 27 bemorning najas namunalari va klinik ma’lumotlarini to‘plashgan. So‘nggi 30 kun ichida antibiotik, kortikosteroid yoki immunosupressiv davolash olganlar, shuningdek hamroh oshqozon-ichak, tizimli autoimmun yoki infeksion koliti bo‘lgan shaxslar chiqarib tashlangan.

Manba yarali kolit bemorlarida B. pseudolongum ko‘pligi sog‘lom nazorat guruhiga nisbatan pastligini P = 0,004 bilan xabar qilgan. Odam guruhida bakteriya ko‘pligi Mayo skori, CRP, oq qon hujayralari soni va eritrotsitlar cho‘kish tezligi bilan manfiy korrelyatsiya ko‘rsatgan.

Odam ma’lumotlarining bu yerdagi roli cheklangan: bu natijalar TMP davolashi odamlarda ishlashini ko‘rsatmaydi. Odamlardagi bo‘lim B. pseudolongum bilan yarali kolitning klinik og‘irligi o‘rtasida o‘xshash yo‘nalishdagi bog‘liqlik bor-yo‘qligini baholovchi translatsion qo‘llab-quvvatlashdir.

Mikrobiota TMP uchun zarurmi?

Bu savolni sinash uchun tadqiqotchilar ampitsillin, vankomitsin, neomitsin va metronidazoldan tashkil topgan keng spektrli antibiotik kokteylidan foydalanib, pseudo-germ-free deb ataluvchi, mikrobiotasi keskin kamaytirilgan sichqon modelini yaratishgan.

Antibiotik aralashuvi mikrobiota xilma-xilligini sezilarli darajada kamaytirgan va TMP odatda keltirib chiqaradigan jamoa o‘zgarishlarini to‘sib qo‘ygan. Ushbu sharoitda TMPning tana vazni, kasallik faolligi, yo‘g‘on ichak uzunligi, ichak to‘sig‘i oqsillari va makrofag polarizatsiyasi bo‘yicha himoya ta’sirlari ham katta darajada yo‘qolgan.

Bu tajriba mualliflarning “TMP ta’siri mikrobiotaga bog‘liq” degan xulosasining eng muhim tayanchlaridan biridir. Shunga qaramay, antibiotik bilan yaratilgan model to‘liq mikrobsiz germ-free hayvon bilan bir xil emas; manba ham eksperimental tizimni antibiotik bilan yaratilgan pseudo-germ-free model sifatida ta’riflaydi.

Taurin B. pseudolongum bilan Mezbon Immuniteti O‘rtasida Qanday Bog‘lanish Hosil Qiladi?

Manbaning modeliga ko‘ra B. pseudolongum ortishi ichakdagi taurin metabolizmining qayta tartiblanishi bilan bog‘liq; metabolomikada N-stearoil taurin sezilarli oshgan, yo‘g‘on ichak to‘qimasida taurin tashish yo‘li va Slc6a6 tomonidan kodlanadigan TauT tashuvchisi kuchaygan, tashqaridan taurin berish esa bakterial qayta kolonizatsiyaning ko‘plab himoya ta’sirlarini takrorlagan.

Metabolomik tahlil

Najas metabolomikasi GC-MS bilan o‘rganilgan. Liofilizatsiyalangan najasdan metabolitlar ajratib olingan, propil xloroformat/piridin bilan derivatizatsiya qilingan va Agilent 7890B GC hamda 5977A MSD tizimida tahlil qilingan. HB-5MS kapillyar kolonkasi ishlatilgan, geliy oqim tezligi 1,0 mL/min qilib belgilangan va elektron ionlanish 70 eV da qo‘llangan.

Xom ma’lumotlar MS-DIAL bilan qayta ishlangan; metabolit identifikatsiyasi NIST va Fiehn kutubxonalariga ko‘ra tayinlangan. Differensial metabolit tanlashda OPLS-DA VIP > 1,0 va FDR tuzatilgan Mann-Whitney U testi P < 0,05 mezonlari ishlatilgan.

TMP va DSS taqqoslovida N-stearoil taurin ajralib turgan oshgan metabolitlardan biridir. Ko‘p-omik korrelyatsiya xaritasida B. pseudolongum bilan N-stearoil taurin o‘rtasida P < 0,001 darajasida musbat bog‘liqlik xabar qilingan.

TauT tashuvchisi

Yo‘g‘on ichak transkriptomikasida “Taurine Transport” yo‘li TMP guruhida NES = 1,69 va P < 0,001 bilan boyigani bildirilgan. TMP DSS kamaytirgan Slc6a6 mRNA ni yana oshirgan; Slc6a12 va Slc6a13 uchun bir xil o‘zgarish kuzatilmagan.

Slc6a6 taurin tashuvchisi TauTni kodlaydi. Western blot va immunoflyuoresans natijalarida TMP DSSdan keyin kamaygan TauT oqsil miqdorini va epiteliy apikal membranasidagi signalni qayta oshirgani xabar qilingan.

N-stearoil taurin bilan erkin taurin bir xil narsami?

Yo‘q. Manba metabolomik skriningda ayniqsa N-stearoil taurinni differensial metabolit sifatida ajratib ko‘rsatsa, funksional qutqarish tajribalarida erkin taurindan foydalangan. Mualliflar bu farqni muhokama qilib, N-stearoil taurin B. pseudolongum yo‘naltiradigan umumiy taurin metabolik oqimining barqarorroq rezervuari yoki biomarkeri bo‘lishi mumkinligini, hujayraviy qabul esa TauT orqali erkin taurin bilan sodir bo‘lishi mumkinligini taklif qilishadi. Bu izoh mualliflarning mexanistik talqinidir; bevosita isbotlangan konversiya zanjiri sifatida baholanmasligi kerak.

Tadqiqot Usuli va Topilmalari

B. pseudolongum qayta kolonizatsiyasi

Antibiotik bilan mikrobiotasi kamaytirilgan sichqonlarga tirik Bifidobacterium suspenziyasi og‘iz orqali gavaj bilan berilgan. Manbada har bir qo‘llashda 200 µL, 5 × 10⁹ CFU/mL konsentratsiya va har bir hayvonga 1 × 10⁹ CFU berilgani ko‘rsatilgan. Qo‘llash har uch kunda bir, jami 24 kun va sakkiz doza sifatida ta’riflangan.

16S rRNA tahlili qayta kolonizatsiya guruhlarida B. pseudolongum boyishini tasdiqlagan. Antibiotik + DSS sharoitida TMP yolg‘iz cheklangan himoya bergan bo‘lsa, B. pseudolongum bilan birga TMP qo‘llash vazn yo‘qotilishi va DAI bo‘yicha kuchliroq himoya profilini yaratgan.

Yo‘g‘on ichak qisqarishi va splenomegaliya ham kombinatsiya guruhlarida kamaygan. H&E, AB-PAS va MUC-2 baholari kript tuzilishi, goblet hujayralari va shilliq to‘sig‘ining yaxshilanishini ko‘rsatgan.

Taurin qutqarish tajribasi

Antibiotik bilan mikrobiotasi kamaytirilgan DSS modelida TMP bilan birga taurin berish B. pseudolongum qayta kolonizatsiyasida kuzatilgan kuchli himoya fenotipining ko‘plab jihatlarini qayta yaratgan. Tadqiqotchilar buni taurin TMP–B. pseudolongum o‘qidagi muhim quyi oqim metabolik effektori ekaniga funksional dalil sifatida talqin qilishgan.

Manba metod bo‘limida turli eksperimental protokollarga oid ikkita taurin ifodasi mavjud. Kombinatsion aralashuv bo‘limida taurin “5 g/kg” deb ko‘rsatilgan, alohida kolit aralashuvi protokolida esa %0,5 (w/v) taurin ichimlik suvi bilan 9–23-kunlar davomida berilgan. Ushbu qiymatlar manbada bitta dozaga aylantirilmaganligi sababli bu yerda ham birlashtirilmaydi.

Makrofag polarizatsiyasiga ta’siri

Antibiotik + DSS sharoitida CD86⁺ M1-ga o‘xshash makrofag infiltratsiyasi yuqori, CD163⁺ M2-ga o‘xshash makrofag miqdori past. TMP bilan birga B. pseudolongum yoki taurin berilganda CD86 signali kamaygan, CD163 yo‘nalishida esa oshish kuzatilgan.

Oqsil va sitokin darajasida ushbu polarizatsiya o‘zgarishiga TNF-αning kamayishi; IL-10 va TGF-βning oshishi hamroh bo‘lgan. Shu sababli tadqiqotchilar M2-ga o‘xshash qayta dasturlashni ichak to‘sig‘ini tiklashdagi asosiy immunologik yakuniy nuqtalardan biri sifatida baholagan.

Foxo1 Taurinning M2 Makrofag Ta’sirida Qanday Rol O‘ynaydi?

Foxo1 ushbu tadqiqotda taurinning hujayraviy redoks holati bilan makrofag fenotipini bog‘laydigan transkripsion tugun sifatida ta’riflangan; taurin Foxo1 bilan bog‘liq antioksidant dastur orqali Sesn3, Sod2 va Cat ekspressiyasini oshirib, ROSni kamaytirgan, Foxo1 ingibitori AS1842856 esa ushbu yadroviy signal va M2-ga o‘xshash polarizatsiya ta’sirlarining muhim qismini orqaga qaytargan.

FoxO yo‘li qanday aniqlangan?

RNA-seq va yo‘l boyitish tahlillarida FoxO signal yo‘li TMP ta’siri bilan bog‘liq yetakchi nomzodlardan biri sifatida aniqlangan. Metabolit-yo‘l korrelyatsiya tahlillari N-stearoil taurin va Sesn3 kabi omillarni FoxO signali bilan bog‘lagan.

Western blot tajribalarida TMP DSS o‘zgartirgan Foxo1 fosforillanishini bostirgan. Antibiotik bilan kamaytirish va Bifidobacterium qayta kolonizatsiya tajribalari ham mikrobiotadan kelib chiqadigan himoya ta’siri pastroq p-Foxo1 darajasi bilan bog‘liqligini ko‘rsatgan. Taurin qo‘llab-quvvatlashi xuddi shu yo‘nalishdagi Foxo1 o‘zgarishini qayta yaratgan.

RAW264.7 hujayra tajribalari

Sichqon RAW264.7 makrofaglari yuqori glyukozali DMEM, %15 fetal bovin serum, 100 U/mL penitsillin va 100 µg/mL streptomitsin saqlovchi muhitda 37 °C va %5 CO2 sharoitida yetishtirilgan.

Hujayralarga taurin va/yoki Foxo1 ingibitori AS1842856 berilib, keyin 1 µg/mL lipopolisaxarid bilan yallig‘lanish stimuli qo‘llangan. CCK-8 testi bilan hujayra hayotchanligi tekshirilgan.

Taurin LPS sharoitida makrofaglarni M2-ga o‘xshash yo‘nalishga o‘zgartiradigan marker va sitokin profillarini yaratgan. Foxo1 ingibitori past sinov konsentratsiyalarida o‘zi sezilarli hujayra hayotchanligi yo‘qotilishini keltirib chiqarmasdan taurinning Foxo1 yadroviy translokatsiyasini to‘sib, yallig‘lanishga qarshi polarizatsiya profilini orqaga qaytargan.

Sesn3, Sod2 va Cat nega muhim?

Taurin qo‘llash manbada antioksidant himoya bilan bog‘liq uch muhim oqsilning ekspressiyasini oshirgan: Sestrin-3 (Sesn3), mitoxondrial superoksid dismutaza 2 (Sod2) va katalaza (Cat). Bunga hujayra ichidagi reaktiv kislorod turlarining kamayishi hamroh bo‘lgan.

AS1842856 ushbu antioksidant ta’sirlarni va ROSni tozalashni qisman orqaga qaytargan. Demak, manba taklif qilgan model faqat “taurin M2ni oshiradi” degan shaklda emas; oradagi hujayraviy redoks boshqaruvi Foxo1 va antioksidant gen dasturi orqali mexanistik tarzda sinovdan o‘tkazilgan.

Taurin o‘zi DSS kolitida nima qildi?

DSS berilgan sichqonlarda tashqaridan taurin qo‘llab-quvvatlashi tana vaznining yaxshiroq saqlanishi, kasallik faolligi indeksining pastroq bo‘lishi, yo‘g‘on ichakning uzunroq bo‘lishi va taloq koeffitsientining pastroq bo‘lishi bilan bog‘langan.

ZO-1, Occludin va Claudin-5 kabi zich birikma oqsillari taurin bilan qayta oshgan; gistologiya yaxshiroq shilliq tuzilma va kamroq yallig‘lanish infiltratsiyasini ko‘rsatgan. Makrofag profili CD163 oshishi va CD86 kamayishi tomon o‘zgargan; TGF-β va IL-10 ortgan, TNF-α esa kamaygan.

Manba taklif qilgan mexanizm zanjiri

1. TMP DSS buzgan ichak mikrobiotasini qayta tuzadi.
2. Bifidobacterium pseudolongum tanlab boyiydi.
3. B. pseudolongum ko‘pligi taurin va ayniqsa N-stearoil taurin metabolizmi bilan bog‘liq.
4. Yo‘g‘on ichak to‘qimasida taurin tashish yo‘li va TauT/Slc6a6 kuchayadi.
5. Taurin Foxo1 bilan bog‘liq redoks dasturini o‘zgartiradi.
6. Sesn3, Sod2 va Cat antioksidant himoyasi ortadi.
7. Hujayra ichidagi ROS kamayadi.
8. Makrofag polarizatsiyasi M1-ga o‘xshash holatdan M2-ga o‘xshash holatga siljiydi.
9. Proyallig‘lanishli sitokinlar kamayadi, yallig‘lanishga qarshi/tiklanish bilan bog‘liq sitokinlar esa ortadi.
10. Epiteliy zich birikmalari, shilliq ishlab chiqarish va ichak to‘sig‘i yaxlitligi kuchayadi.
11. Sichqonlarda DSS kolitining klinik va gistologik ko‘rsatkichlari yengillashadi.

Ushbu zanjirning barcha bosqichlari bir tajribada bevosita va genetik tarzda isbotlanmagan. Tadqiqot turli eksperimental qatlamlarni birgalikda talqin qilish orqali ushbu modelni shakllantirgan.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlaydigan xulosalar

• TMP DSS kolitli sichqonlarda kasallik faolligi va gistologik zararni kamaytirgan.
• TMP ZO-1, Occludin, Claudin-5 va MUC-2 kabi ichak to‘sig‘i ko‘rsatkichlarini qayta oshirgan.
• TMP ichak mikrobiotasining α- va β-xilma-xillik tuzilishini o‘zgartirgan.
• TMPdan so‘ng B. pseudolongum ko‘pligi ortgan.
• B. pseudolongum ko‘pligi sichqonlarda pastroq kasallik og‘irligi bilan kuchli bog‘langan.
• Odam yarali kolit namunalarida B. pseudolongum ko‘pligi pastroq aniqlangan va yallig‘lanish/kasallik og‘irligi ko‘rsatkichlari bilan manfiy korrelyatsiya ko‘rsatgan.
• Antibiotik bilan mikrobiota kamaytirilganda TMPning himoya ta’sirining muhim qismi yo‘qolgan.
• B. pseudolongum qayta kolonizatsiyasi TMP ta’sirini kuchaytirgan.
• N-stearoil taurin TMPdan so‘ng ajralib turgan metabolitlardan biri va B. pseudolongum bilan musbat bog‘liq.
• TauT/Slc6a6 TMPdan so‘ng qayta oshgan.
• Taurin qo‘llab-quvvatlashi B. pseudolongum bilan kuzatilgan himoya fenotipining ko‘plab tarkibiy qismlarini qayta tiklagan.
• Taurin RAW264.7 hujayralarida M2-ga o‘xshash polarizatsiya va pastroq ROS bilan bog‘langan.
• Foxo1 ingibitori taurinning yadroviy Foxo1 va yallig‘lanishga qarshi polarizatsiya ta’sirlarini sezilarli darajada orqaga qaytargan.

Tadqiqot qo‘llab-quvvatlamaydigan xulosalar

• TMP odamlar uchun yarali kolitni davolashi isbotlanmagan.
• TMP mavjud biologik davolashlar yoki standart dorilar o‘rnida ishlatilishi mumkinligi ko‘rsatilmagan.
• Sichqonlarda qo‘llangan 20 yoki 40 mg/kg TMP dozalarini odam davolash dozasi sifatida talqin qilib bo‘lmaydi.
• B. pseudolongum preparati yarali kolit bemorlarida klinik samarali yoki xavfsiz ekani ushbu tadqiqotda sinovdan o‘tkazilmagan.
• Taurin yarali kolit bemorlarida o‘zi mustaqil davolash ekani ko‘rsatilmagan.
• N-stearoil taurin bevosita B. pseudolongum tomonidan sintez qilinishi qat’iy isbotlanmagan.
• N-stearoil taurin erkin taurinning qanday hosil bo‘lishiga yoki hujayraviy qabulga qanday hissa qo‘shishiga oid zanjir to‘liq yechilmagan.
• TauT ushbu o‘q uchun majburiy ekani genetik knockout bilan ko‘rsatilmagan.
• Makrofag Foxo1ning majburiyligi miyeloid hujayraga xos Foxo1 knockout modeli bilan tasdiqlanmagan.
• M1/M2 ajratilishi barcha makrofag holatlarining mukammal biologik tasnifi sifatida qabul qilinmaydi.

Statistik yondashuv

Miqdoriy ma’lumotlar o‘rtacha ± standart xato (SEM) sifatida xabar qilingan. Ma’lumot taqsimoti Shapiro-Wilk testi bilan, dispersiya bir xilligi Brown-Forsythe testi bilan baholangan. Ikki guruhni taqqoslashda parametrik ma’lumotlar uchun juftlashtirilmagan ikki tomonlama Student t-testi, parametrik bo‘lmagan ma’lumotlar uchun Mann-Whitney U testi ishlatilgan.

Uch yoki undan ko‘p guruh uchun parametrik ma’lumotlarda bir yo‘nalishli ANOVA va Dunnett ko‘p taqqoslash testi, parametrik bo‘lmagan ma’lumotlarda Kruskal-Wallis va Dunn post hoc testi qo‘llangan. Statistik ahamiyat P < 0,05 deb belgilangan.

Tadqiqotning asosiy cheklovlari

Hakamlik: Tadqiqot preprint holatida va mustaqil hakamlik baholashi tugallanmagan.

Klinik dalil chegarasi: TMP aralashuvi asosan sichqon va hujayra modellarida sinovdan o‘tkazilgan. Odam najas kohorti mexanizm nuqtai nazaridan translatsion bog‘liqlik beradi, klinik davolash samaradorligini ko‘rsatmaydi.

TauT zarurligi: Mualliflar taurinni qabul qilishning majburiy roli TauT-deficient modellar bilan hali tasdiqlanmaganini ta’kidlashadi.

Foxo1 hujayra xosligi: Makrofagdagi Foxo1ning ushbu o‘q uchun majburiy roli miyeloid hujayraga xos shartli knockout yondashuvi bilan hali sinovdan o‘tkazilmagan.

N-stearoil taurin talqini: Metabolomikada ajralib turgan N-stearoil taurin bilan funksional tajribalarda ishlatilgan erkin taurin o‘rtasidagi biokimyoviy ierarxiya to‘liq yechilmagan.

Taurin protokoli: Manbaning metod bo‘limida turli eksperimental kontekstlarda 5 g/kg va %0,5 (w/v) taurin ifodalari mavjud. Matn ularning munosabatini aniq tushuntirmaganligi sababli natijalarni talqin qilishda protokol bo‘yicha farq saqlanishi kerak.

Manba va Metod Izohi

Asl sarlavha: Tetramethylpyrazine ameliorates ulcerative colitis via B. pseudolongum-driven taurine metabolism and M2 macrophage polarization

Mualliflar: Zhijiang Huang; Xiaojian Zhu; Yanglin Chen; Hongtao Wan; Dengke Yao; Min Peng; Xujie Deng; Jiangfeng Yin; Xianwu Zhang; Yu He; Jianyong Xiong; Faming Zhang; Dan Liu; Bo Yi.

Teng hissa qo‘shgan mualliflar: Zhijiang Huang, Xiaojian Zhu, Yanglin Chen va Hongtao Wan.

Mas’ul mualliflar: Dan Liu va Bo Yi.

Lead contact: Bo Yi.

Muassasalar: 2nd Abdominal Surgery Department, Jiangxi Cancer Hospital, The Second Affiliated Hospital of Nanchang Medical College; Jiangxi Medical College, Nanchang University; Jiangxi Key Laboratory of Oncology, Jiangxi Cancer Hospital; Department of Microbiota Medicine & Medical Center for Digestive Diseases, The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University; Jiangxi Province Key Laboratory of Drug Target Discovery and Validation, School of Pharmacy, Jiangxi Medical College, Nanchang University; MOE Basic Research and Innovation Center for the Targeted Therapeutics of Solid Tumors, School of Pharmacy, Jiangxi Medical College, Nanchang University; Jiangxi Provincial Key Clinical Specialty Construction Project–Colorectal Cancer Center, Jiangxi Cancer Hospital.

Manba turi: Hakamlik baholashidan o‘tmagan tadqiqot preprinti.

Platforma: SSRN.

SSRN qaydi: 6952197.

DOI: 10.2139/ssrn.6952197. DOI ma’lumoti PDF sarlavha sahifasida emas, rasmiy SSRN bibliografik qaydida berilgan.

SSRN yuklangan sana: 17 iyun 2026.

Hakamlik holati: Hakamlikdan o‘tmagan.

Litsenziya: Manba PDF va ko‘rib chiqilgan SSRN bibliografik qaydida qayta foydalanish uchun ochiq Creative Commons litsenziyasi ko‘rsatilmagani sababli ochiq litsenziya mavjud deb qabul qilinmagan.

Hayvon modeli: Olti haftalik erkak C57BL/6J sichqonlar; o‘tkir kolit uchun %2,5 DSS.

Odam bo‘limi: Tasdiqlangan yarali kolit tashxisi bo‘lgan 27 bemordan najas va klinik ma’lumot; TMP klinik aralashuvi bajarilmagan.

Hujayra modeli: RAW264.7 sichqon makrofag hujayra liniyasi.

Asosiy usullar: DSS kolit modeli, gistopatologiya, AB-PAS, MUC-2 immunogistokimyosi, immunoflyuoresans, ELISA, Western blot, 16S rRNA sekvenslash, LEfSe, GC-MS metabolomika, yo‘g‘on ichak RNA-seq, keng spektrli antibiotik bilan mikrobiotani kamaytirish, B. pseudolongum qayta kolonizatsiyasi, taurin qo‘llab-quvvatlashi, CCK-8, LPS stimulyatsiyasi va Foxo1 ingibitor tahlili.

16S rRNA platformasi: Illumina HiSeq, V3–V4 hududi, 2 × 250 bp paired-end.

Metabolomika: Agilent 7890B GC – 5977A MSD; HB-5MS kolonka; EI 70 eV; m/z 50–600.

RNA-seq: Mus musculus GRCm39 referens genomi; fastp, HISAT2, StringTie va DESeq2.

Ma’lumotlar mavjudligi: Sekvenslash ma’lumotlari BIG SUB/NGDC BioProject PRJCA059345; metabolomika ma’lumotlari MetaboLights MTBLS14055; RNA-seq ma’lumotlari SRA BioProject PRJNA1396770 sifatida manbada ko‘rsatilgan.

Odam tadqiqoti etikasi: The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University Ethics Committee, FMT-CN-121123. Yozma xabardor qilingan rozilik olingani bildirilgan.

Hayvon etikasi: Nanchang University Animal Ethics Committee, NCULAE-20240302099.

Manfaatlar to‘qnashuvi: Mualliflar manfaatlar to‘qnashuvi yo‘qligini bildirishgan.

Moliyalashtirish: National Natural Science Foundation of China (82560807, 82560565, 82404050); Key Project of the Natural Science Foundation of Jiangxi Province (20252BAC250152, 20252BAC250125); Youth Project of the Natural Science Foundation of Jiangxi Province (20252BAC200530); Scientific and Technological Research Project of the Jiangxi Provincial Department of Education (GJJ2403619); Jiangxi Provincial Health Commission Science and Technology Program (SKJP1320242247); Jiangxi Provincial Department of Education Science and Technology Research Project (GJJ2503436).

Asosiy talqin chegarasi: Tadqiqot TMP–B. pseudolongum–taurin–Foxo1–M2 makrofag o‘qini ko‘p-omik va funksional tajribalar bilan qo‘llab-quvvatlaydigan preklinik mexanizmni ko‘rsatadi. Natijalarni odamlar uchun TMP, B. pseudolongum yoki taurin ishlatishga oid bevosita davolash tavsiyasi sifatida talqin qilib bo‘lmaydi.