Surunkali buyrak kasalligining rivojlanib buyrak yetishmovchiligiga o'tishidagi umumiy yakuniy yo'llardan biri buyrak fibrozidir. Fibroz vaqtida normal buyrak to'qimasi asta-sekin kollagen va boshqa hujayradan tashqari matriks tarkibiy qismlari bilan almashinadi; funksional to'qima arxitekturasi buziladi va buyrakning filtrlash qobiliyati kamayadi. Bu jarayonni faqat fibroblastlarning haddan tashqari faolligi bilan izohlab bo'lmaydi. Hujayra metabolizmi, buyrak naycha hujayralari, immun hujayralar va yallig'lanish signallari bir-birini kuchaytiradigan mikro-muhit hosil qiladi.

Ko'rib chiqilgan tadqiqot surunkali buyrak shikastlanishida metabolik o'zgarish qanday qilib uzoq davom etuvchi immun javob va fibrozga aylanishini tushuntiruvchi mexanizmni taklif qiladi. Tadqiqotchilarga ko'ra, shikastlangan buyrakda geksozamin biosintezi yo'li, ya'ni HBP faollashadi va hujayra ichida UDP-GlcNAc ishlab chiqarilishini oshiradi. UDP-GlcNAc oqsillarga O-bog'langan N-asetilglukozamin qo'shilishi uchun ishlatiladigan asosiy substratdir.

Tadqiqot taklif qilayotgan umumiy mexanizm quyidagicha umumlashtirilishi mumkin:

\[ \mathrm{HBP}\uparrow \rightarrow \mathrm{UDP\!-\!GlcNAc}\uparrow \rightarrow \mathrm{STAT3\!-\!T717\ O\!-\!GlcNAc}\uparrow \rightarrow \mathrm{SMURF1\ bağlanması}\downarrow \rightarrow \mathrm{STAT3\ yıkımı}\downarrow \]

\[ \mathrm{STAT3\ kararlılığı}\uparrow \rightarrow \mathrm{CXCL10}\uparrow \rightarrow \mathrm{CD4^+\ T\ hücresi\ göçü}\uparrow \rightarrow \mathrm{Th17/IL\!-\!17A}\uparrow \rightarrow \mathrm{böbrek\ fibrozisi}\uparrow \]

Tadqiqotda insonlardagi surunkali buyrak kasalligi ma'lumotlarida OGT va OGA ekspressiyasida yaqqol o'zgarish kuzatilmagan, biroq HBPning asosiy fermentlari GFPT1, GNPNAT1, PGM3 va UAP1 ko'paygani bildirilgan. Inson buyrak biopsiyalarida va ikki xil sichqon modelida umumiy oqsil O-GlcNAc darajalari oshgani kuzatilgan.

Sichqonlarda qo'llangan ikki fibroz modeli quyidagilar:

• Ureterni bog'lash orqali yaratilgan bir tomonlama ureter obstruksiyasi modeli — UUO
• 250 mg/kg foliy kislotasi inyeksiyasi bilan yaratilgan foliy kislotasi nefropatiyasi modeli — FA

HBPning tezlikni cheklovchi fermenti GFPT1ni bostirish uchun qo'llangan DON sichqon buyraklarida O-GlcNAc darajasini kamaytirgan; kollagen I va α-SMA kabi fibroz markerlarini, gistologik kollagen to'planishini va yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasini pasaytirgan. Zardob kreatinini va qon mochevina azoti ko'rsatkichlarida ham yaxshilanish bildirilgan.

RNA sekvenslash tahlilida buyrak shikastlanishi bilan oshadigan, DON davosi bilan yana pasayadigan 97 gen aniqlangan. Bu genlar kemokin retseptori faolligi, T hujayralari migratsiyasi va immun javoblar bilan bog'liq ekani ko'rsatilgan. Ayniqsa CXCL10–CXCR3 o'qi CD4+ T hujayralarining buyrakka jalb qilinishida markaziy bog'lanish sifatida ajralib chiqqan.

Tadqiqotda O-GlcNAc darajasini oshirish buyrak naycha hujayralarida CXCL10 ekspressiyasini ko'paytirgan. CXCR3 antagonisti AMG487 qo'llanishi esa CD4+ T hujayralari infiltratsiyasini, fibroz markerlarini va buyrak funksiyasi buzilishini kamaytirgan.

Ikkinchi immun bosqich Th17 hujayralaridir. Oqim sitometriyasi orqali buyrakdagi tirik CD4+ T hujayralari orasida IL-17A ishlab chiqaruvchi Th17 hujayralar ulushi o'lchangan. HBPni DON bilan bostirish Th17 ulushini va buyrakdagi IL-17A darajasini kamaytirgan. IL-17ni sekukinumab bilan bevosita neytrallash ham hayvon modelida shikastlanish va fibrozni yengillashtirgan.

Molekulyar tajribalar ushbu metabolik va immunologik o'zgarish markaziga STAT3 oqsilini qo'yadi. Tadqiqotchilar STAT3ning treonin 717, ya'ni T717 qismiga O-GlcNAc qo'shilishi oqsilning hujayra ichidagi umrini uzaytirishini bildirgan. Bu modifikatsiya STAT3ning gen darajasini oshirmagan; oqsilning parchalanishini to'sgan.

Normal sharoitda SMURF1 deb ataladigan E3 ubikuitin ligaza STAT3ga bog'lanib, oqsilning ubikuitinlanishini va proteazomda parchalanishini osonlashtirishi taklif qilinadi. T717 qismiga O-GlcNAc qo'shilganda SMURF1ning STAT3ga bog'lanishi kamayadi, STAT3 kamroq ubikuitinlanadi va hujayrada uzoqroq saqlanadi.

\[ \mathrm{STAT3 + SMURF1} \rightarrow \mathrm{STAT3\!-\!Ub_n} \rightarrow \mathrm{proteazomal\ yıkım} \]

O-GlcNAc modifikatsiyasi ushbu zanjirning birinchi bosqichini to'sib, STAT3ni barqarorlashtiradi. T717 qismi alaninga almashtirilgan STAT3-T717A mutantida oqsilning yarim umri qisqargani va ubikuitinlanish oshgani bildirilgan.

Tadqiqotchilar keyin STAT3ning T717 qismini nishonga olishi mumkin bo'lgan birikmalar uchun strukturaga asoslangan virtual skrining o'tkazgan. “FDA tomonidan tasdiqlangan birikmalar kutubxonasi” sifatida ta'riflangan 3.158 birikma skriningdan o'tkazilib, 38 nomzod tanlangan va eng yuqori reytingdagi inozitol nikotinat, sakinavir va rutin gidrat tajribada tekshirilgan.

Ushbu uch nomzod ichida faqat rutin gidrat STAT3 O-GlcNAc modifikatsiyasini va STAT3 oqsil darajasini kamaytirgani bildirilgan. Rutin gidrat STAT3 mRNA sini o'zgartirmagan, biroq CXCL10 ekspressiyasini pasaytirgan. T717 mutatsiyasiga ega STAT3da xuddi shu ta'sir kuzatilmagani mualliflar tomonidan T717 qismiga xos mexanizmni qo'llab-quvvatlovchi dalil sifatida talqin qilingan.

UUO sichqonlarida og'iz orqali 5 mg/kg/kun rutin gidrat berilishi; STAT3 va fosforlangan STAT3 darajalarini, CD4+ T hujayralari infiltratsiyasini, Th17 differensiallanishini, buyrak shikastlanishi markerlarini va gistologik fibrozni kamaytirgan. Zardob kreatinini va BUN ko'rsatkichlarida ham yaxshilanish bildirilgan.

Bu natijalar rutin gidrat insonlarda surunkali buyrak kasalligini davolashini ko'rsatmaydi. Topilmalar hujayra kulturasi va kichik hayvon guruhlariga asoslangan. Moddaning insonlardagi so'rilishi, mos dozasi, buyrak kasallari uchun xavfsizligi, uzoq muddatli toksikligi va klinik samaradorligi o'rganilmagan.

Tadqiqotning asosiy muammosi nima?

Surunkali buyrak kasalligida turli boshlang'ich sabablar bo'lishi mumkin: gipertoniya, metabolik kasalliklar, immunologik shikastlanish, toksik ta'sirlar yoki takroriy o'tkir buyrak shikastlanishlari. Boshlang'ich sabab o'zgarsa ham, rivojlangan kasalliklarda umumiy patologik yakun paydo bo'ladi: buyrak fibrozi.

Fibrozda:

• normal buyrak to'qimasi shikastlanadi,
• miofibroblastga o'xshash hujayralar faollashadi,
• kollagen va hujayradan tashqari matriks to'planadi,
• buyrak naychalari va tomir atrofi qayta tuziladi,
• faoliyat ko'rsatuvchi nefronlar soni kamayadi.

Ma'lum yallig'lanish va gemodinamik mexanizmlar bu jarayonning faqat bir qismini tushuntiradi. Tadqiqot e'tibor qaratgan bo'shliq — hujayra metabolizmidagi o'zgarish qanday qilib barqaror immun javobga aylanishi va bu javob fibrozni qanday davom ettirishidir.

Geksozamin biosintezi yo'li nima?

Geksozamin biosintezi yo'li glyukoza metabolizmining kichik, ammo tartibga soluvchi jihatdan muhim tarmog'idir. U hujayradagi glyukoza, glutamin, yog' kislotalari va nukleotid metabolizmidan keluvchi kirishlarni birlashtirib UDP-GlcNAc ishlab chiqaradi.

Yo'lning soddalashtirilgan oqimi tadqiqot mantiqini tushuntirish uchun quyidagicha ko'rsatilishi mumkin:

\[ \mathrm{Fruktoz\!-\!6\!-\!fosfat + Glutamin} \xrightarrow{\mathrm{GFPT1}} \mathrm{Glukozamin\!-\!6\!-\!fosfat} \]

\[ \mathrm{Glukozamin\!-\!6\!-\!fosfat} \xrightarrow{\mathrm{GNPNAT1,\ PGM3,\ UAP1}} \mathrm{UDP\!-\!GlcNAc} \]

Bu tenglamalar maqolada yagona reaksiya ketma-ketligi sifatida berilmagan; HBP fermentlarining funksional tartibini tushunarli qilish maqsadida ko'rsatilgan.

Tadqiqotda ko'rib chiqilgan asosiy HBP fermentlari quyidagilar:

HBP faqat energiya ishlab chiqarish yo'li emas. U hujayraning oziq moddalar va stress holatini oqsillar funksiyasini o'zgartiradigan kimyoviy signalga aylantiradi.

O-GlcNAc modifikatsiyasi nima?

O-GlcNAc modifikatsiyasi hujayra ichidagi oqsillarning serin yoki treonin qoldiqlariga bitta N-asetilglukozamin guruhining qo'shilishidir. Fosforlanishga o'xshab, bu tez va qaytariluvchi oqsilni boshqarish usulidir.

O-GlcNAc transferaza, ya'ni OGT, shakar guruhini oqsilga qo'shadi:

\[ \mathrm{Protein\!-\!OH + UDP\!-\!GlcNAc} \xrightarrow{\mathrm{OGT}} \mathrm{Protein\!-\!O\!-\!GlcNAc + UDP} \]

O-GlcNAcase, ya'ni OGA esa bu guruhni oqsildan olib tashlaydi:

\[ \mathrm{Protein\!-\!O\!-\!GlcNAc} \xrightarrow{\mathrm{OGA}} \mathrm{Protein\!-\!OH + GlcNAc} \]

Ushbu asosiy tenglamalar tadqiqotning biokimyoviy mantiqini tushuntirish maqsadida berilgan.

Oqsildagi O-GlcNAc o'zgarishi:

• oqsilning hujayra ichidagi joylashuvini,
• boshqa oqsillar bilan o'zaro ta'sirini,
• faolligini,
• fosforlanishini,
• ubikuitinlanishini,
• yarim umrini

o'zgartirishi mumkin.

Tadqiqotning birinchi asosiy topilmasi: Muammo OGT/OGA miqdoridan ko'ra substrat oqimi bo'lishi mumkin

Inson surunkali buyrak kasalligiga oid Nephroseq ma'lumotlarida OGT va OGA ekspressiyasi sog'lom buyraklardan sezilarli darajada farq qilmagani bildirilgan. Aksincha, GFPT1, GNPNAT1, PGM3 va UAP1 ekspressiyasi oshgan.

Inson CKD biopsiyalaridagi immunogistokimyoviy tekshiruvda umumiy O-GlcNAc darajasi oshgani ko'rsatilgan. Rasm izohida bu tahlil uchun n = 20 berilgan; biroq namunalar CKD bosqichlari yoki sog'lom nazorat guruhlari bo'yicha qanday taqsimlangani asosiy matnda batafsil tushuntirilmagan.

UUO va foliy kislotasi nefropatiyasi modellarida ham:

• HBP fermentlarining mRNA darajalari oshgan,
• HBP fermentlarining oqsil darajalari oshgan,
• umumiy O-GlcNAc modifikatsiyasi ko'paygan,
• OGT ekspressiyasida yaqqol o'zgarish kuzatilmagan.

Mualliflar bu naqshni HBP oqimining va UDP-GlcNAc substrat ta'minotining ortishi bilan izohlaydi.

Muhim farq: OGT va OGA ekspressiyasining o'zgarmasligi ushbu fermentlarning katalitik faolligi albatta o'zgarmaganini isbotlamaydi. Tadqiqotda OGT/OGA miqdori ko'rib chiqilgan, ammo asosiy matnda to'g'ridan-to'g'ri ferment faolligi o'lchovi xabar qilinmagan. Shu sababli topilmalar HBPni kuchli tushuntirish sifatida qo'llab-quvvatlaydi; OGT yoki OGA faolligining umuman hissasi yo'qligini qat'iy tasdiqlamaydi.

Inson ma'lumotlarida buyrak funksiyasi bilan bog'liqlik

Inson ma'lumotlarida GFPT1, PGM3 va GNPNAT1 ekspressiyasining ko'proq buzilgan glomerulyar filtratsiya bilan bog'liq ekani bildirilgan. OGT va OGA uchun xuddi shu bog'liqlik kuzatilmagan.

2-rasm izohida buzilgan buyrak funksiyasi:

\[ \mathrm{GFR} < 60\ \mathrm{mL/dakika/1{,}73\ m^2} \]

sifatida ta'riflangan.

Bu inson ma'lumotlari kuzatuv xarakteriga ega. HBP fermentining yuqori bo'lishi buyrak funksiyasi buzilishiga sabab bo'lgan bo'lishi mumkin; buyrak shikastlanishi HBP fermentlarini oshirgan bo'lishi mumkin yoki ikkala o'zgarish ham uchinchi bir jarayon natijasi bo'lishi mumkin. Sababiylik hayvon va hujayra tajribalari bilan o'rganilgan.

Birinchi hayvon modeli: Bir tomonlama ureter obstruksiyasi

8–10 haftalik erkak BALB/c sichqonlarda chap ureter ikki nuqtadan bog'langan va orasi kesilgan. Nazorat hayvonlarida xuddi shu jarrohlik amaliyoti bajarilgan, ammo ureter bog'lanmagan. Buyraklar operatsiyadan yetti kun o'tgach olingan.

UUO modeli tez rivojlanadigan tubulointerstitsial shikastlanish, yallig'lanish va fibrozni hosil qiladi. Bu model inson CKD sining barcha sabablarini ifodalamaydi; fibroz mexanizmlarini qisqa vaqt ichida o'rganish uchun ishlatiladigan tajriba modelidir.

Ikkinchi hayvon modeli: Foliy kislotasi nefropatiyasi

Erkak BALB/c sichqonlarga:

\[ 250\ \mathrm{mg/kg\ folik\ asit} \]

bir martalik intraperitoneal tarzda yuborilgan. Nazoratlar faqat tashuvchi eritma olgan. Hayvonlar 28-kunda baholangan.

Foliy kislotasi modeli naycha shikastlanishi, yallig'lanish va vaqt o'tishi bilan fibroz hosil qiladi. Ikki xil model qo'llanishi mexanizm faqat ureter tutilishiga xos emasligini qo'llab-quvvatlaydi. Shunga qaramay, har ikkala model ham insonlarda yillar davomida rivojlanadigan murakkab CKD jarayonini to'liq takrorlamaydi.

HBPni DON bilan bostirish

Tadqiqotda GFPT1 va HBP oqimini bostirish uchun 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, ya'ni DON ishlatilgan:

\[ 20\ \mathrm{mg/kg/gün,\ intraperitoneal} \]

DON qo'llangandan keyin:

• buyrak O-GlcNAc darajasi kamaygan,
• kollagen I darajasi pasaygan,
• α-SMA darajasi pasaygan,
• Masson bo'yashida kollagen to'planishi kamaygan,
• PAS bo'yashida to'qima shikastlanishi va yallig'lanish infiltratsiyasi yengillashgan,
• zardob kreatinini va BUN ko'tarilishi kamaygan.

Bu natijalar UUO va foliy kislotasi modellarining ikkalasida ham takrorlangani uchun mualliflar HBP manbali O-GlcNAc oshishi fibroz va funksiya yo'qolishiga hissa qo'shadi degan xulosaga kelgan.

Biroq asosiy matnda faqat farmakologik HBP bostirilishi ko'rsatilgan. GFPT1 buyrak hujayralarida genetik yo'l bilan o'chirilgan yoki ortiqcha ifodalangan tajriba xabar qilinmagan. Shu sababli DONning barcha ta'sirlari faqat GFPT1 orqali yuzaga kelishi qat'iy isbotlanmagan.

RNA sekvenslash qaysi yo'lni ko'rsatdi?

UUO, sham va DON qo'llangan UUO buyraklarida transkriptom tahlili o'tkazilgan. Buyrak shikastlanishi bilan oshadigan va DON bilan yana pasayadigan 97 gen aniqlangan.

Gen Ontologiyasi tahlilida:

• C-X-C kemokin retseptori faolligi,
• immun javoblar,
• T hujayralari bilan bog'liq signallar

ajralib chiqqan.

Cd4, Cxcr3 va Cxcr6 asosiy genlar orasida bildirilgan. KEGG tahlili esa Th17 hujayra differensiallanishiga aloqador yo'llar boyiganini ko'rsatgan.

CXCL10–CXCR3 o'qi nima qiladi?

CXCL10 ayrim immun hujayralarni kimyoviy konsentratsiya gradienti bo'ylab shikastlangan to'qimaga tortadigan kemokindir. CXCR3 esa ayniqsa faollashgan T hujayralarda uchraydigan retseptorlardan biridir.

Tadqiqot taklif qilayotgan hujayraviy oqim quyidagicha:

\[ \mathrm{Böbrek\ tübül\ hücresi\ CXCL10}\uparrow \rightarrow \mathrm{CXCR3^+\ CD4^+\ T\ hücresi\ göçü}\uparrow \]

DON qo'llanishi buyrakdagi Cxcl10 va Cd4 mRNA darajalarini hamda CD4+ T hujayra infiltratsiyasini kamaytirgan.

HK-2 inson proksimal naycha hujayralarida OGA ingibitori Thiamet G yordamida O-GlcNAc darajasi oshirilganda CXCL10 ekspressiyasi ko'paygan. Shu tariqa O-GlcNAc signali faqat immun hujayralarga emas, immun hujayralarni chaqiruvchi buyrak epiteliy hujayralariga ham ta'sir qilishi mumkinligi ko'rsatilmoqchi bo'lgan.

AMG487 tajribasi nimani sinadi?

CXCR3ning funksional rolini baholash uchun UUO sichqonlariga:

\[ 5\ \mathrm{mg/kg/gün\ AMG487,\ intraperitoneal} \]

berilgan.

CXCR3 antagonizmi:

• CD4+ T hujayralarining buyrakka kirishini kamaytirgan,
• kollagen I va α-SMA darajalarini pasaytirgan,
• zardob kreatinini va BUN natijalarini yaxshilagan.

Bu tajriba CXCL10–CXCR3 yo'li shunchaki RNA tahlilida ko'rilgan belgi emas, balki fibroz fenotipiga funksional ravishda hissa qo'shishini qo'llab-quvvatlaydi.

Th17 hujayralari nega muhim?

Th17 hujayralari, asosan IL-17A ishlab chiqaradigan CD4+ yordamchi T hujayralardir. Buyrak shikastlanishi vaqtida ushbu hujayralar ishlab chiqaradigan signallar:

• epiteliy hujayralaridagi stress va shikastlanishni kuchaytirishi,
• TGF-β kabi profibrotik omillarni oshirishi,
• epiteliy-mezenximal xususiyatlar o'zgarishini qo'llab-quvvatlashi,
• hujayradan tashqari matriks to'planishini tezlashtirishi mumkin.

Oqim sitometriyasida Th17 hujayralari tirik CD4+ T limfotsitlari darvozasidagi IL-17A musbat hujayralar sifatida ta'riflangan:

\[ \mathrm{Th17\ oranı} = \frac{\mathrm{IL\!-\!17A^+\ CD4^+\ T\ hücreleri}}{\mathrm{toplam\ canlı\ CD4^+\ T\ hücreleri}} \times 100 \]

DON davosi Th17 ulushini, Il17a mRNA sini va IL-17A oqsilini kamaytirgan.

IL-17ni neytrallash

Tadqiqotda IL-17 yo'lini bevosita to'xtatish uchun sekukinumab:

\[ 20\ \mathrm{mg/kg/gün,\ intraperitoneal} \]

qo'llangan. Qo'shimcha rasm izohiga ko'ra, IL-17 neytrallanishi buyrak shikastlanishi va fibrozni kamaytirgan.

Bu ma'lumot Th17/IL-17 komponenti shunchaki HBP ingibitsiyasiga hamroh ikkilamchi o'zgarish emas, balki fibrotik natijalarga hissa qo'shishi mumkinligini qo'llab-quvvatlaydi. Biroq sekukinumab tajribasining tafsilotlari asosiy PDFda mavjud bo'lmagan qo'shimcha materialga qoldirilgan.

STAT3 nega markaziy molekula sifatida tanlandi?

STAT3 hujayra tashqarisidan keluvchi sitokin va o'sish omili signallarini yadroda gen ekspressiyasiga aylantiradigan transkripsiya omilidir. U Th17 hujayralari differensiallanishining asosiy regulyatorlaridan biri bo'lib, CXCL10 kabi kemokinlar ekspressiyasiga ham ta'sir qilishi mumkin.

Immunoflyuorestsent tajribalarda STAT3 signali va O-GlcNAc signali bir xil hujayraviy hududlarda birga joylashgani bildirilgan.

DON davosi:

• STAT3 oqsilini kamaytirgan,
• fosforlangan STAT3 darajasini kamaytirgan,
• STAT3 mRNA sini o'zgartirmagan.

Bu farq boshqaruv gen transkripsiyasidan keyin, ya'ni post-translyatsion darajada yuz berishini ko'rsatadi.

STAT3 ingibitsiyasi

STAT3 ingibitori Stattic:

\[ 10\ \mathrm{mg/kg/gün,\ intraperitoneal} \]

sichqonlarda ishlatilgan; hujayra tajribalarida ham STAT3 signalini bostirish uchun qo'llangan.

STAT3 ingibitsiyasi:

• CXCL10 transkripsiyasini,
• CD4+ T hujayra infiltratsiyasini,
• Th17 differensiallanishini,
• fibroz markerlarini

kamaytirgan. Bu natijalar STAT3 HBP/O-GlcNAc signali bilan immun fibroz o'rtasidagi bog'lanishda funksional oraliq tugun ekanini qo'llab-quvvatlaydi.

Oqsilning yarim umri qanday o'lchandi?

HK-2 hujayralarida yangi oqsil sintezini to'xtatish uchun siklogeksimid, ya'ni CHX ishlatilgan. Hujayralar 0, 3, 6, 9, 12 va 24 soatlarda tekshirilgan; mavjud STAT3 oqsilining qanchalik tez kamayishi baholangan.

Oqsilning kamayishini soddalashtirilgan holda quyidagi munosabat bilan tushuntirish mumkin:

\[ P(t) = P_0 e^{-kt} \]

\[ t_{1/2} = \frac{\ln 2}{k} \]

Bu yerda:

• P(t), t vaqtida STAT3 miqdorini,
• P₀, boshlang'ich STAT3 miqdorini,
• k, parchalanish tezligi konstantasini,
• t_1/2, oqsilning yarim umrini

ifodalaydi.

Bu tenglamalar maqolada berilmagan; CHX yarim umr tajribasining matematik mantiqini tushuntirish uchun qo'shilgan.

DON qo'llanganda STAT3 oqsili tezroq yo'qolgani va yarim umri qisqargani bildirilgan.

T717 qismi qanday aniqlandi?

Tadqiqotchilar STAT3da oltita ehtimoliy O-GlcNAc modifikatsiya joyini bashorat qilgan va ushbu joylarda aminokislota o'zgarishlarini hosil qiluvchi mutant oqsillar yaratgan.

T717, S719, T721 va S727 mutatsiyalari STAT3 O-GlcNAc darajasini kamaytirgan. Biroq faqat T717 mutatsiyasi STAT3ning yarim umrini sezilarli darajada qisqartirgan.

Shu sababli tadqiqot:

• bir nechta joy O-GlcNAc modifikatsiyasini qabul qilishi mumkinligini,
• oqsil barqarorligi uchun hal qiluvchi joy T717 ekanini

taklif qiladi.

Ubikuitin–proteazom tizimi

Hujayra vazifasi tugagan yoki shikastlangan oqsillarni ubikuitin deb ataladigan kichik oqsillar bilan belgilab, proteazomga yuboradi.

\[ \mathrm{STAT3} \xrightarrow{\mathrm{E3\ ligaz}} \mathrm{STAT3\!-\!Ub_n} \xrightarrow{\mathrm{proteazom}} \mathrm{parçalanmış\ ürünler} \]

MG132 bilan proteazom bostirilganda DONning normal STAT3 oqsilini kamaytiruvchi ta'siri qaytarilgan. T717A mutantida esa MG132 xuddi shu naqshni ko'rsatmagan.

T717 mutatsiyasi STAT3 ubikuitinlanishini oshirgan. T717A mutantining ubikuitinlanishi O-GlcNAc darajasini ko'paytiruvchi yoki kamaytiruvchi muolajalardan sezilarli darajada ta'sirlanmagan. Bu natijalar T717 O-GlcNAc bilan ubikuitinlanish o'rtasidagi asosiy boshqaruv nuqtasi ekanini qo'llab-quvvatlaydi.

SMURF1 qanday topildi?

Normal STAT3 va T717A mutantiga bog'lanadigan oqsillarni taqqoslash uchun ko-immunopretsipitatsiya, SDS-PAGE va massa-spektrometriya ishlatilgan.

T717A mutatsiyasida STAT3ga ko'proq bog'langan oqsillardan biri E3 ubikuitin ligaza SMURF1 bo'lgan.

Keyingi tajribalarda:

• STAT3 va SMURF1ning jismoniy o'zaro ta'siri ko-immunopretsipitatsiya bilan tasdiqlangan,
• SMURF1ning ortiqcha ekspressiyasi STAT3 oqsilini kamaytirgan,
• CXCL10 mRNA sini pasaytirgan,
• O-GlcNAc darajasining oshirilishi SMURF1 ta'sirini kamaytirgan,
• T717A mutatsiyasi SMURF1–STAT3 bog'lanishini kuchaytirgan.

Taklif qilinayotgan molekulyar model quyidagicha:

STAT3ning barqaror qolishi fibrozga qanday ta'sir qiladi?

Hujayrada uzoqroq saqlanadigan STAT3 buyrak naycha hujayrasidagi profibrotik transkripsion dasturni davom ettirishi mumkin. Tadqiqotga ko'ra, buning ikki asosiy natijasi bor:

1. CXCL10 oshishi: CXCR3 tashuvchi CD4+ T hujayralari buyrakka jalb qilinadi.
2. Th17 differensiallanishi: Buyrakka kelgan CD4+ T hujayralari IL-17A ishlab chiqaruvchi Th17 fenotipiga yo'naladi.

Bu ikki mexanizm bir-birini to'ldiradi. Birinchisi immun hujayrani shikastlangan buyrakka olib keladi; ikkinchisi kelgan hujayrani fibrozni kuchaytiruvchi immun kichik turga aylantiradi.

Rutin gidrat qanday topildi?

STAT3 T717 qismining uch o'lchovli tuzilishiga asoslangan virtual skrining o'tkazilgan. Tadqiqotda ishlatilgan birikmalar kutubxonasi 3.158 moddadan iborat.

Skrining bosqichlari yakunida:

• 38 nomzod birikma tanlangan,
• eng yuqori reytingdagi uch birikma tajribaviy tekshiruvga olingan.

Bu uch birikma:

1. Inozitol nikotinat
2. Sakinavir
3. Rutin gidrat

sifatida bildirilgan.

Rutin gidrat flavonoiddir. Tadqiqotning asosiy da'vosi bu birikma faqat umumiy antioksidant yoki yallig'lanishni kamaytiruvchi xususiyat ko'rsatmasligi, balki STAT3ning T717 qismidagi O-GlcNAc modifikatsiyasini nishonga olishidir.

Rutin gidratning hujayra tajribalaridagi ta'siri

Rutin gidrat:

• normal STAT3ning O-GlcNAc modifikatsiyasini kamaytirgan,
• STAT3 oqsil darajasini pasaytirgan,
• STAT3 mRNA darajasini o'zgartirmagan,
• CXCL10 ekspressiyasini kamaytirgan.

T717A mutantiga ega STAT3da xuddi shu ta'sir kuzatilmagani mualliflar tomonidan T717 qismiga yo'naltirilgan o'ziga xoslikning dalili sifatida talqin qilingan.

Biroq asosiy matnda rutin gidratning STAT3ga bog'lanish kuchini to'g'ridan-to'g'ri o'lchaydigan sirt plazmon rezonansi, izotermik titrlash kalorimetriyasi yoki shunga o'xshash miqdoriy biofizik bog'lanish tajribasi xabar qilinmagan. Topilmalar virtual modellashtirish, mutatsiyaga bog'liqlik, immunopretsipitatsiya va oqsil ekspressiyasi natijalariga asoslanadi.

Rutin gidratning hayvon tajribasidagi ta'siri

UUO sichqonlariga og'iz orqali:

\[ 5\ \mathrm{mg/kg/gün\ rutin\ hidrat} \]

berilgan. 6-rasm izohida davolash bir hafta davom etgani ko'rsatilgan.

Rutin gidratdan keyin:

• STAT3 va p-STAT3 darajasi kamaygan,
• zardob kreatinini va BUN ko'rsatkichlari yaxshilangan,
• KIM-1 shikastlanish markeri kamaygan,
• CD4+ T hujayra infiltratsiyasi kamaygan,
• Th17 hujayra ulushi pasaygan,
• HE, PAS, Sirius Red va Masson bo'yashlarida to'qima shikastlanishi va kollagen to'planishi kamaygan.

Bu topilmalar rutin gidratni yangi tadqiqot nomzodiga aylantiradi. Biroq bitta qisqa muddatli hayvon dozasining samarali topilishi preparat insonlarda xavfsiz yoki samarali bo'lishini anglatmaydi.

1-rasm ko'rsatadigan jarayon

1-rasm izohiga ko'ra tadqiqot:

• inson ma'lumotlar bazalarida OGT, OGA va HBP fermentlarini taqqoslagan,
• 20 ta inson CKD buyrak biopsiyasida O-GlcNAc immunogistokimyosini o'tkazgan,
• UUO va foliy kislotasi modellarining tajriba oqimini ko'rsatgan,
• har ikki modelda HBP fermentlarini RT-qPCR, Western blot va immunogistokimyo bilan tekshirgan.

Yuklangan PDFda 1-rasmning haqiqiy tasvir panellari mavjud emas; faqat rasmning izoh matni berilgan. Shu sababli bo'yash intensivligi, tasma tasvirlari, taqsimot grafiklari va xatolik chiziqlari vizual ravishda mustaqil baholanmagan.

2-rasm ko'rsatadigan jarayon

2-rasm izohiga ko'ra:

• HBP fermentlari bilan GFR o'rtasidagi bog'liqlik tekshirilgan,
• DONning O-GlcNAc darajasiga ta'siri o'lchangan,
• kollagen I va α-SMA Western blotlari bajarilgan,
• BUN va kreatinin baholangan,
• PAS, Masson va immunogistokimyo tasvirlari ishlatilgan.

UUO va FA modellaridagi buyrak funksiyasi o'lchovlarida ayrim guruhlar uchun n = 4, to'qima tahlillarida esa ko'pincha n = 5 deb ko'rsatilgan.

3-rasm ko'rsatadigan jarayon

3-rasm:

• RNA sekvenslash farq tahlillarini,
• DON bilan qaytgan 97 genni,
• GO va KEGG boyitilishini,
• CD4 va CXCL10 o'lchovlarini,
• AMG487 tajribalarini,
• Th17 oqim sitometriyasini,
• IL-17A mRNA va oqsil natijalarini

birlashtiradi.

4-rasm ko'rsatadigan jarayon

4-rasmda:

• STAT3–O-GlcNAc birgalikdagi joylashuvi,
• STAT3 oqsil va mRNA taqqoslanishi,
• CHX yarim umr tajribasi,
• STAT3 joy mutatsiyalari,
• MG132 proteazom tajribasi,
• STAT3 ubikuitinlanishi

tekshirilgan.

5-rasm ko'rsatadigan jarayon

5-rasm SMURF1 aniqlanishi va STAT3 bilan o'zaro ta'sirini ko'rsatuvchi:

• massa-spektrometriya,
• ko-immunopretsipitatsiya,
• SMURF1 ortiqcha ekspressiyasi,
• CXCL10 o'lchovi,
• normal STAT3 va T717A mutantining ubikuitinlanish tajribalarini

o'z ichiga oladi.

6-rasm ko'rsatadigan jarayon

6-rasm rutin gidratning:

• STAT3 O-GlcNAc modifikatsiyasiga,
• T717A mutantiga,
• CXCL10 va CXCR3 ekspressiyasiga,
• kreatinin va BUN ko'rsatkichlariga,
• KIM-1 va CD4 ekspressiyasiga,
• buyrak gistologiyasiga,
• Th17 hujayra ulushiga

ta'sirini umumlashtiradi.

Biroq 1–6-rasmlarning haqiqiy tajriba panellari yuklangan 36 sahifalik PDFda mavjud emas. PDF natijalar matnidan keyin rasm izohlari bilan yakunlanadi. Shu sababli maqoladagi vizual natijalarning kattaligi, taqsimoti va xom tasvir sifati faqat izohlar asosida baholangan.

Tadqiqotning kuchli tomonlari

• Ko'p qatlamli tajriba dizayni: Inson ma'lumoti, inson buyrak to'qimasi, ikki hayvon modeli va ikki hujayra liniyasi birga ishlatilgan.
• Ikki xil fibroz modeli: Topilmalar faqat ureter obstruksiyasi modeliga tayanmaydi.
• Yo'l bo'ylab ko'p martalik aralashuv: HBP, CXCR3, STAT3 va IL-17 alohida farmakologik vositalar bilan nishonga olingan.
• Transkriptom tahlili: Oldindan tanlangan bir necha gen o'rniga kengroq immun naqsh o'rganilgan.
• Mutatsiya tajribalari: STAT3dagi aniq T717 joyi sinovdan o'tkazilgan.
• Oqsil parchalanish mexanizmi: CHX, MG132 va ubikuitin tajribalari birgalikda ishlatilgan.
• E3 ligazni aniqlash: Massa-spektrometriya va ko-immunopretsipitatsiya bilan SMURF1 bog'lanishi o'rganilgan.
• Mexanizmdan nomzod birikmaga o'tish: Strukturaga asoslangan skriningdan so'ng rutin gidrat hujayra va hayvon tajribalarida baholangan.
• Inson buyrak to'qimasi bilan tasdiqlash: Mexanizm faqat hujayra kulturasi yoki sichqon ma'lumotlariga tayanmagan.
• Ma'lumot ulashish rejasi: RNA-seq ma'lumotlari PRJNA14422936 BioProject kirish raqami bilan ko'rsatilgan.

Tadqiqotning cheklovlari

• Hakemlik bahosi yo'q: Tadqiqot preprintdir.
• Klinik tadqiqot emas: Hech bir CKD bemoriga DON, AMG487, Stattic, sekukinumab yoki rutin gidrat berilmagan.
• Kichik hayvon guruhlari: Ko'p tajriba guruhlarida n = 5, ayrim buyrak funksiyasi tahlillarida n = 4 ishlatilgan.
• Faqat erkak sichqonlar: Jinsga bog'liq biologik farqlar baholanmagan.
• Qisqa muddatli modellar: UUO yetti kun, foliy kislotasi modeli 28 kun kuzatilgan.
• Inson CKD sini to'liq aks ettirmaydi: Inson kasalligi odatda yillar davomida va ko'plab hamroh omillar bilan rivojlanadi.
• Genetik HBP tasdig'i cheklangan: GFPT1ning buyrakka xos o'chirilishi yoki ortiqcha ekspressiyasi asosiy matnda ko'rsatilmagan.
• Farmakologik o'ziga xoslik muammosi: DONning barcha ta'sirlari faqat GFPT1/HBP orqali yuz berishi aniq tasdiqlanmagan.
• OGT/OGA faolligi o'lchanmagan: Ekspressiyaning o'zgarmasligi ferment faolligi o'zgarmaganini isbotlamaydi.
• Inson namunalarining xususiyatlari yetishmaydi: Bemorlarning yoshi, jinsi, CKD sababi, bosqichi, diabet holati va davolashlari batafsil berilmagan.
• Rasmlar PDFda mavjud emas: Faqat rasm izohlari bor.
• Qo'shimcha usullar mavjud emas: Matnda qolgan tajriba usullari qo'shimcha materialda berilishi aytiladi; bu material yuklangan faylda yo'q.
• Randomizatsiya va ko'r qilish tushuntirilmagan: Hayvonlar guruhlarga qanday taqsimlangani va gistologik baholashlar ko'r holda o'tkazilgan-o'tkazilmagani bildirilmagan.
• Namuna hajmi hisob-kitobi berilmagan: Hayvonlar sonining statistik asoslanishi taqdim etilmagan.
• Tajriba takrorlari cheklangan hisobot qilingan: Tajribalar kamida ikki marta takrorlangani aytilgan; biologik va texnik takrorlar tafsiloti berilmagan.
• Statistik hisobot cheklangan: Asosan bir yo'nalishli ANOVA, o'rtacha ± SEM va yulduzcha bilan p chegaralari berilgan.
• Ta'sir kattaligi va ishonch oraliqlari yetishmaydi: Ko'p natijalar uchun aniq sonli farqlar, ishonch oraliqlari va xom ma'lumotlar asosiy matnda berilmagan.
• Ko'p martalik taqqoslash tuzatishi tushuntirilmagan: Ko'plab gen, oqsil va davolash guruhlari baholangan.
• Rutin gidrat uchun doza-javob tahlili yo'q: Turli dozalar samaradorligi va toksikligi taqqoslanmagan.
• Farmakokinetik ma'lumot yo'q: So'rilish, qondagi daraja, buyrak to'qimasiga o'tish va yarim umr o'rganilmagan.
• Uzoq muddatli xavfsizlik noma'lum: Surunkali qo'llash, jigar ta'siri, dori o'zaro ta'sirlari va immunologik nojo'ya ta'sirlar o'rganilmagan.
• Bevosita bog'lanish testi cheklangan: Rutin gidrat–STAT3 bog'lanishi asosiy matnda miqdoriy biofizik usul bilan ko'rsatilmagan.
• Standart davolash bilan taqqoslash yo'q: Rutin gidrat mavjud CKD yoki antifibrotik yondashuvlar bilan taqqoslanmagan.
• Rasm va qo'shimcha material raqamlanishida tahririy muammolar bor: Ayrim rasm izohlarida panel harflari takrorlangan va tajriba tafsilotlari to'liq berilmagan.

Tadqiqot nima deydi?

• Ko'rib chiqilgan inson CKD to'qimalarida va ikki sichqon modelida umumiy oqsil O-GlcNAc darajasi oshgan.
• Bu oshishga HBP fermentlari ko'payishi hamroh bo'lgan.
• OGT va OGA ekspressiyasida yaqqol o'zgarish bildirilmagan.
• HBPni DON bilan bostirish sichqonlarda fibroz va buyrak funksiyasi buzilishini kamaytirgan.
• HBP/O-GlcNAc signali CXCL10–CXCR3 yo'li orqali CD4+ T hujayralarini buyrakka jalb qiladi.
• Bu signal Th17 differensiallanishi va IL-17A ishlab chiqarilishi bilan bog'liq.
• STAT3 metabolik signal bilan immun javob o'rtasidagi markaziy molekula sifatida aniqlangan.
• STAT3 T717 qismidagi O-GlcNAc modifikatsiyasi oqsilning yarim umrini uzaytirgan.
• O-GlcNAc SMURF1ning STAT3ga bog'lanishini va STAT3 ubikuitinlanishini kamaytirgan.
• Rutin gidrat hujayra tajribalarida STAT3 O-GlcNAc modifikatsiyasini kamaytirgan.
• Rutin gidrat qisqa muddatli UUO sichqon modelida fibroz va immun infiltratsiyani kamaytirgan.

Tadqiqot nima demaydi?

• Rutin gidrat insonlarda CKDni davolashini ko'rsatmaydi.
• Rutin saqlovchi oziq-ovqat yoki qo'shimchalar buyrak fibrozini oldini olishini ko'rsatmaydi.
• Insonlar uchun samarali yoki xavfsiz dozani belgilamaydi.
• Rutin gidrat dializ zaruratini yoki buyrak yetishmovchiligini oldini olishini ko'rsatmaydi.
• HBP barcha CKD turlarida bir xil darajada faol ekanini ko'rsatmaydi.
• OGT va OGAning CKDda umuman roli yo'qligini isbotlamaydi.
• STAT3 fibrozdagi yagona O-GlcNAc nishoni ekanini ko'rsatmaydi.
• Th17 hujayralari buyrak fibrozidagi yagona immun hujayra turi ekanini ko'rsatmaydi.
• DON insonlarda xavfsiz ishlatiladigan antifibrotik davo ekanini ko'rsatmaydi.
• Rutin gidrat STAT3 T717ga bevosita va juda selektiv bog'lanishini o'zi bilan qat'iy tasdiqlamaydi.
• Qisqa muddatli sichqon yaxshilanishi uzoq muddatli CKD rivojlanishini to'xtatishini isbotlamaydi.

O'tmish nuqtai nazaridan ahamiyati

Buyrak fibrozi bo'yicha tadqiqotlar uzoq vaqt TGF-β, fibroblast faollashuvi, gemodinamik stress va yallig'lanish sitokinlariga e'tibor qaratgan. So'nggi yillarda shikastlangan buyrak hujayralarining metabolik dasturlari ham fibrozni boshqarishi tushunila boshlandi.

Ushbu tadqiqot metabolik qayta dasturlanishni faqat hujayraning energiyadan foydalanishi bilan bog'lamaydi; metabolik oqim oqsil modifikatsiyasi orqali immun hujayralar xatti-harakatiga aylanishi mumkinligini ko'rsatishga urinadi.

Bugungi nuqtai nazardan ahamiyati

Tadqiqotning asosiy konseptual hissasi buyrak fibrozini alohida “metabolik kasallik” yoki “yallig'lanish kasalligi” deb ko'rish o'rniga integratsiyalashgan immunometabolik buzilish sifatida ko'rib chiqishidir.

HBP:

• hujayraning oziq holatini sezadi,
• UDP-GlcNAc ishlab chiqarilishini o'zgartiradi,
• STAT3 oqsil barqarorligini boshqaradi,
• kemokin ishlab chiqarilishi va T hujayra migratsiyasiga ta'sir qiladi,
• Th17 javobi va fibrozni kuchaytiradi.

Bunday yo'l bitta hujayra turini emas, balki buyrak naycha hujayrasi, T limfotsit va fibrotik mikro-muhit o'rtasidagi aloqani nishonga olish imkonini berishi mumkin.

Kelajak nuqtai nazaridan ahamiyati

Keyingi tadqiqotlar quyidagi savollarga javob berishi kerak:

• CKDda HBPni ishga tushiruvchi eng yuqori signal nima?
• Gipoksiya, endoplazmatik retikulum stressi yoki ayrim sitokinlar HBPni qanday faollashtiradi?
• STAT3dan tashqari qaysi profibrotik oqsillar O-GlcNAc bilan barqarorlashadi?
• T717 modifikatsiyasi inson buyrak to'qimasida bevosita va miqdoriy tasdiqlanishi mumkinmi?
• HBPning buyrak hujayralariga xos genetik bostirilishi fibrozni kamaytiradimi?
• Rutin gidratning buyrak to'qimasidagi haqiqiy konsentratsiyasi qancha?
• Rutin gidrat uzoq muddatli va sekinroq rivojlanadigan CKD modellarida samaralimi?
• Preparatning immun tizimi, jigar va boshqa organlarga uzoq muddatli ta'siri qanday?
• Yanada selektiv va kuchli T717ga yo'naltirilgan hosilalar ishlab chiqish mumkinmi?
• Insonlarda xavfsiz doza oralig'ini topish mumkinmi?

Kundalik hayot va bemor uchun bu nimani anglatadi?

Tadqiqot buyrak kasallari rutin saqlovchi oziq-ovqat yoki qo'shimchalarni davolash maqsadida ishlatishini tavsiya qilmaydi. Rutin gidrat faqat hujayra kulturasida va tajriba sichqon modellarida baholangan.

Surunkali buyrak kasalligida oziq qo'shimchalari va o'simlik mahsulotlari:

• buyrak funksiyasiga qarab organizmda to'planishi,
• retsept bo'yicha dorilar bilan o'zaro ta'sirlashishi,
• mahsulotning tozaligi va dozasiga qarab turlicha ta'sir ko'rsatishi,
• kaliy yoki boshqa moddalarni o'z ichiga olishi mumkin.

Shuning uchun bu tadqiqot o'z-o'zicha rutin qo'shimchasini boshlash uchun klinik dalil bermaydi. Inson davosiga o'tish uchun toksiklik, farmakokinetika, doza belgilash va nazoratli klinik sinovlar zarur.

Tadqiqotning usuli va topilmalari

Tadqiqot yondashuvining texnik xulosasi

Qo'llangan farmakologik aralashuvlar

Hujayra tajribalarida ishlatilgan asosiy vositalar

Tajriba zanjirining texnik mantiqi

1. Inson va sichqon buyragida HBP va O-GlcNAc oshishi ko'rsatildi.
2. HBP bostirilganda fibroz va buyrak funksiyasi natijalari baholandi.
3. RNA-seq orqali immun javob va kemokin o'qi aniqlandi.
4. CXCR3, STAT3 va IL-17 alohida aralashuvlar bilan sinovdan o'tkazildi.
5. STAT3 oqsilining yarim umri O-GlcNAc holatiga bog'liqligi ko'rsatildi.
6. Mutatsiyalar bilan T717 funksional joy sifatida aniqlandi.
7. SMURF1 STAT3 parchalanishini ta'minlovchi E3 ligaza sifatida taklif qilindi.
8. Virtual skrining bilan T717 qismini nishonga olishi mumkin bo'lgan nomzodlar tanlandi.
9. Rutin gidrat hujayra va sichqon tajribalarida tasdiqlandi.

Asosiy molekulyar model

Aralashuv natijalarining texnik xulosasi

Rutin gidrat skriningining xulosasi

Texnik jihatdan eng muhim natija

Tadqiqotning eng muhim ilmiy taklifi — buyrak fibrozida metabolik signal bilan immun javob bitta molekulyar zanjir orqali bog'lanishi mumkinligi.

HBPning oshishi faqat hujayra ichidagi shakar metabolizmini o'zgartirmaydi. UDP-GlcNAc miqdorini oshirib STAT3 oqsiliga T717 joyidan kimyoviy belgi qo'shadi, bu belgi STAT3ni hujayraviy parchalanishdan himoya qiladi va uning uzoqroq faol qolishini ta'minlaydi.

Barqaror STAT3 ko'proq CXCL10 ishlab chiqarilishini, CD4+ T hujayra migratsiyasini va Th17 javobini qo'llab-quvvatlaydi. Shu tariqa qisqa muddatli metabolik o'zgarish o'zini davom ettiruvchi immun-fibrotik mikro-muhitga aylanishi mumkin.

Rutin gidrat ushbu zanjirni T717 modifikatsiyasi darajasida uzish mumkinligini ko'rsatadigan tadqiqot vositasi va nomzod birikma sifatida taqdim etilgan. Biroq u hali CKD dori vositasi sifatida baholanmasligi kerak.

Manba va usul izohi

Ushbu mazmun Hongxia Yang, Bin Liu, Guangtao Li, Dan Zhang, Shangguo Wang, Zehua Zhang, Xiaodong Zhao, Jiaxin Liu, Qianhui Li, Yifan Song, Yang Tan, Shuyue Ma, Honglan Zhou, Yishu Wang va Yanghe Zhang tomonidan tayyorlangan “Hexosamine Biosynthesis Pathway Driven O-GlcNAcylation of STAT3 Orchestrates Renal Fibrosis via a T cell Mediated Immune Pathway in CKD” nomli tadqiqotga asoslanadi.

Tadqiqot inson buyrak to'qimasi, ochiq inson ekspressiya ma'lumotlari, erkak BALB/c sichqonlarda UUO va foliy kislotasi nefropatiyasi modellarini, HK-2 va 293T hujayralarini, RNA sekvenslash, mutatsiya, immunopretsipitatsiya, ubikuitinlanish va strukturaga asoslangan virtual skrining usullarini birlashtiruvchi preklinik mexanizm va dori nomzodi kashfiyoti preprintidir.

Matnda ochiq ravishda “This preprint research paper has not been peer reviewed” va “Preprint not peer reviewed” iboralari mavjud. Demak, tadqiqot hakamlik bahosidan o'tmagan. PDFda yakuniy jurnal qabul qilinishi yoki hakamlikdan o'tgan nashr maqomi tasdiqlanmagan.

Hayvon tajribalari Jilin University College of Basic Medical Sciences IACUC kengashi tomonidan 2025-530 protokol raqami bilan tasdiqlangani ko'rsatilgan. Inson buyrak to'qimasi tadqiqotlari uchun First Hospital of Jilin University etik kengashidan 2024-1151 raqamli tasdiq olingani va ishtirokchilardan yozma xabardor rozilik olingani bildirilgan.

RNA-seq ma'lumotlari NCBI Sequence Read Archive ichida PRJNA14422936 BioProject raqami bilan ulashilgani ko'rsatilgan. Boshqa ma'lumotlar maqola, qo'shimcha fayllar yoki asosli so'rov asosida mas'ul muallifdan olinishi mumkinligi aytilgan.

Tadqiqot National Natural Science Foundation of China, Jilin Province Natural Science Foundation va matnda sanab o'tilgan boshqa institutsional fondlar tomonidan qo'llab-quvvatlangan. Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini bildirgan.

Yuklangan 36 sahifalik PDFda 1–6-rasmlarning tajriba tasvirlari va grafik panellari mavjud emas, faqat rasm izohlari berilgan. Asosiy usullar bo'limida qolgan tajriba usullari qo'shimcha materialda berilishi aytilgan bo'lsa-da, ushbu material yuklangan faylda yo'q.

Rutin gidrat faqat hujayra kulturasi va qisqa muddatli sichqon tajribalarida baholangan. Insonlarda doza, farmakokinetika, xavfsizlik, samaradorlik yoki klinik natija ma'lumoti yo'q. Tadqiqot rutin qo'shimchasidan foydalanishni, mavjud CKD davolarini to'xtatishni yoki rutin gidratni davolash maqsadida ishlatishni qo'llab-quvvatlamaydi.

Tadqiqotdagi “birinchi toifadagi nishonga yo‘naltirilgan ingibitor” iborasi mualliflarning preklinik ma'lumotlarga tayangan ta'rifidir. Bu ibora klinik tasdiqlangan dori, isbotlangan davolash yoki insonlarda ko'rsatilgan nishon o'ziga xosligini anglatmaydi.

Ushbu maqola faqat yuklangan PDFdagi usullar, rasm izohlari, tajriba natijalari va mualliflar talqinlari asosida tayyorlangan. PDFda bo'lmagan klinik samaradorlik, inson dozalari, davolash ustunligi, xavfsizlik kafolati yoki buyrak kasalligini tuzatish haqidagi da'volar qo'shilmagan.