Bu preprint ish, go‘sht/mushak to‘qimasi va sut namunalarida ko‘plab veterinariya dorilarining izlarini bir xil tahlil usuli bilan tekshirishni maqsad qilmoqda. Tadqiqotchilar, yuqori aniqlikdagi massa-spektrometriyadan foydalangan LC-Q-Orbitrap asosidagi bir usul ishlab chiqqan va 196 farmakologik faol moddani o‘z ichiga olgan keng qamrovli tekshirish panelini yaratgan.

Tadqiqotda birinchi bo'lib to'rtta turli namuna tayyorlash usullari solishtirildi. Eng to'g'ri yondashuv sifatida, asetonitril/suv aralashmasi va sof asetonitril bilan ikki marta ajratib olish tanlandi. So'ngra usul mushak va sut matritsalarida Yevropa Ittifoqining 2021/808 tahliliy usul tasdiqlash mezonlariga muvofiq baholandi.

Natijalarga ko'ra, usul ko'plab veterinar preparat qoldiqlarini ham sifat jihatdan aniqlay oladi, ham ularning muhim qismini miqdor jihatdan o'lchay oladi. Biroq ba'zi modda guruhlari — xususan avermektinlar, ba'zi beta-laktamlar, makrolidlar va ionofor antikoksidiyantlar — past darajalarda hamon qiyin tahlil qilinadigan moddalar bo'lib qoladi.

Veterinar dori vositalari chorvachilikda kasalliklarni davolash, oldini olish va ba'zi ishlab chiqarish jarayonlarini boshqarish uchun ishlatiladi. Biroq, bu moddalarni noto'g'ri, ortiqcha yoki noo‘rin ishlatish go‘sht, sut, tuxum kabi hayvon mahsulotlarida qoldiq qoldirishi mumkin.

Oziq-ovqat xavfsizligi nuqtai nazaridan asosiy muammo shundan iborat: Laboratoriyalar yuzlab turli kimyoviy xususiyatlarga ega moddalarni bir vaqtning o'zida ishonchli tarzda qanday skanerlashi mumkin?

Bu oson masala emas. Chunki veterinar dorilari yagona turdagi emas. Antibiotiklar, antiparazitarlar, tinchlantiruvchilar, og'riq qoldiruvchilar, antikoksidiyallar va boshqa ko'plab guruhlar turlicha eruvchanlik, polarite, barqarorlik va ionlash xatti-harakatini ko'rsatadi. Bir ekstraksiya usuli ba'zi moddalarni juda yaxshi chiqarishi mumkin, ba'zilarini esa yo'qotishi mumkin.

Shuningdek, oziq-ovqat matritsasi ham murakkabdir. Sut yogʻ, oqsil, minerallar va shakarni oʻz ichiga oladi. Goʻsht/moʻymo toʻqimasi oqsil va lipidlar jihatidan zichdir. Ushbu tarkibiy qismlar tahlil jarayonida signallarni bostirishi, noto'g'ri musbat natijalarga olib kelishi yoki baʼzi qoldiqlarni aniqlashni qiyinlashtirishi mumkin.

Ushbu ishning asosiy muammosi shundadir:

Go‘sht va sut kabi murakkab oziq-ovqat matritsalarida, ko‘p sonli veterinariya dori qoldiqlarini bir xil usul bilan ham keng qamrovli, ham ishonchli tarzda aniqlash mumkinmi?

Usul nimani taklif qiladi?

Tadqiqot, LC-Q-Orbitrap HRMS nomli yuqori aniqlikdagi mass spektrometriya yondashuvini ishlatadi.

Keling, bu ifodani soddalashtiraylik:

• LC, suyuq xromatografiyadir. Namunadagi tarkibiy qismlarni vaqt bo‘yicha ajratadi.
• Q-Orbitrap, yuqori aniqlikdagi massa spektrometridir. Molekulalarni juda nozik massa o'lchami bilan aniqlaydi.
• HRMS, yuqori aniqlikdagi massaspektrometriya degan ma'noni bildiradi. O'xshash massaga ega birikmalarni ajratishda klassik past aniqlikdagi yondashuvlarga nisbatan ustunlik berishi mumkin.

Tadqiqotchilar 196 ta maqsadli analizni aniqlash uchun skrining usulini ishlab chiqqan. Ushbu analizlar orasida antibakteriallar, sulfonamidlar, tetratsiklinlar, kinolonlar, makrolidlar, benzimidazollar, avermektinlar, tinchlantiruvchi vositalar, antikoksidiyalilar va ba'zi yallig'lanishga qarshi dorilar mavjud.

Namuna tayyorlashda to‘rtta turli usul solishtirilgan. Maqsad, iloji boricha ko‘p moddalarni yetarli darajada tiklab olish bilan chiqarib olish. Solishtirish yakunida amaliylik, xarajat, qamrov va tayyorlash bosqichlari hisobga olinib, ikki marta ekstraksiya yondashuvi tanlangan.

Tanlangan usulning umumiy mantiqi shunday:

1. Namuna tayyorlanmoqda.
2. Ichki standartlar va maqsad moddalar aralashmalari bilan sinovdan o'tkazilmoqda.
3. Asetonitril/suv aralashmasi bilan birinchi ekstraksiya qilinmoqda.
4. Ikkinchi ekstraksiya sof asetonitril bilan amalga oshirilmoqda.
5. Ekstrakt zichlashtirilmoqda va mos erituvchi bilan qayta eritilmoqda.
6. LC-Q-Orbitrap bu qurilmada tahlil qilinadi.
7. Skanerlash molekulyar ion, ushlab turish vaqti va kamida bitta ion ma'lumotini birgalikda baholash orqali amalga oshiriladi.

Formulalar Nima Aytyapti?

Ushbu ish og'ir matematik formulalar o'rniga analitik ishlash mezonlariga asoslangan. Eng muhim tushunchalar quyidagilar:

1. Noto'g'ri musbat ko‘rsatkich

Noto'g'ri musbat, aslida qoldiq o'z ichiga olmagan namunaning shubhali deb belgilanishidir. Tadqiqotda spetsifiklik baholanganida bo'sh namunalarda signal paydo bo'lgan yoki bo'lmaganiga qaralgan.

Oddiy qilib aytganda:

Noto'g'ri musbat stavkasi = Shubhali signal beruvchi boʻsh namuna soni / Umumiy boʻsh namuna soni

Bu nisbatan qanchalik past bo'lsa, usul shunchalik selektiv deb hisoblanadi.

2. Noto'g'ri salbiy nisbat

Noto'g'ri manfiy, aslida qoldiq o‘z ichiga olgan namunani usul tomonidan o‘tkazib yuborilishidir. Oziq-ovqat nazoratida noto'g'ri manfiy yanada muhim bo‘lishi mumkin, chunki haqiqiy qoldiq e'tibordan chetda qolishi mumkin.

Oddiy qilib aytganda:

Noto'g'ri salbiy nisbati = Aniqlanmagan qo‘shilgan namunalar soni / Jami qo‘shilgan namunalar soni

Tadqiqotda, aniqlash qobiliyatini aniqlashda eng past konsentratsiya darajasi 5% yoki undan kam noto'g'ri salbiy ko'rsatkich hisobga olindi.

3. CCβ

CCβ, usulning ma'lum bir moddani ishonchli aniqlay oladigan konsentratsiya darajasini ifodalaydi. Oziq-ovqat qoldiqlarini tahlil qilishda bu tushuncha muhim, chunki usul faqat “ko'ryapman” demasdan, qaysi darajada ishonchli skanerlash amalga oshira olishini ham ko'rsatishi kerak.

4. Qayta tiklash va aniqlik

Qayta tiklash, namunaga qo‘shilgan moddadan tahlil oxirida qancha miqdorda o‘lchanishi mumkinligini ko‘rsatadi. Juda past qayta tiklash, moddaning ekstraksiya jarayonida yo‘qolganini tasavvur qilishi mumkin. Juda yuqori qiymatlar esa matritsa ta'siri yoki signalning buzilganligini bildirishi mumkin.

Aniqlik esa takroriy o‘lchovlarning bir-biriga qanchalik yaqinligini bildiradi. Ushbu ishda laboratoriya ichidagi takrorlanish CVR qiymati bilan baholangan.

Grafik / Jadval / Shema Asosiy Xabari

Maqoladagi rasmli tasvirlarning asosiy xabari quyidagicha umumlashtirilishi mumkin:

Birinchi grafik to‘rt xil ekstraksiya usulining nechta analitni qabul qilinadigan tiklanish oralig‘ida aniqlaganini ko‘rsatadi. Asosiy xabar shuki: sof asetonitrilga asoslangan oddiyroq usul keng qamrovli koʻp qoldiq tahlili uchun yetarli emas. Asetonitril/suv aralashmasi va EDTA ni o‘z ichiga olgan ikki martali ekstraksiya yondashuvi kengroq analit qamrovini taqdim etadi. Ba’zi tozalash bosqichlari nazariy jihatdan matritsani kamaytirishi mumkin; biroq ba’zi analitlarning yo‘qolishiga ham sabab bo‘lishi mumkin.

Noto'g'ri musbatlarni ko‘rsatadigan grafik, faqat molekula ioni va ushlash vaqtiga qarash yetarli emasligini tushuntiradi. Kamida bitta diagnostik ion qo‘shish, noto'g'ri musbatlik xavfini sezilarli darajada kamaytiradi. Bu, hatto yuqori aniqlikdagi qurilmalarda ham yagona signaldan ishonch hosil qilish yetarli bo‘lmasligi mumkinligini ko‘rsatadi.

CCβ grafigi, usulning qaysi moddalarni qaysi konsentratsiya darajasida ishonchli aniqlay olishini umumlashtiradi. Asosiy xabar: Moddalarning katta qismi 5–10 µg/kg oralig‘ida aniqlanishi mumkin; lekin ba’zi qiyin analizlarda aniqlash qobiliyati 50–100 µg/kg darajasiga yetishi mumkin.

Validatsiya umumiy grafigi, qayta tiklash va aniqlik nuqtai nazaridan usulning ko‘plab analizlarda qabul qilinadigan samaradorlikni ko‘rsatadi. Ammo barcha 196 modda bir xil muvaffaqiyat bilan o‘lchanmaydi. Ba'zilari miqdoriy o‘lchovlarga mos keladi, ba'zilari esa faqat sifat nazorati doirasida baholanadi.

Haqiqiy namuna amaliyotini ko‘rsatadigan grafik, tahlil qilingan namunalarining katta qismida veterinar dori qoldiqlari shubhasining yuzaga kelmaganini; shubhali signallar esa ko‘proq mushak/go‘sht namunalarida va ayniqsa parrandalar mushagida kuzatilganini ko‘rsatadi. Sut namunalarida ushbu ish doirasida VMP qoldig‘i aniqlanmadi. Biroq, bu natija faqat tekshirilgan namuna to‘plami uchun amal qiladi.

Tajriba Qanday O'tkazilgan?

Ish bir necha asosiy bosqichlardan iborat.

Birinchi bosqichda standart moddalar va ichki standartlar tayyorlangan. Maqsadli panel 196 Farmakologik faol moddalarni qamrab oladigan tarzda tuzilgan.

Ikkinchi bosqichda to'rt xil ekstraktsiya usuli cho'chqa mushak to'qimasida taqqoslangan. Namunalarga ma'lum darajada maqsadli analitlar qo'shilgan va har bir usul moddalarni qanchalik yaxshi ajratib olishini o'lchangan.

Uchinchi bosqichda tanlangan ekstraksiya usuli LC-Q-Orbitrap qurilmasi bilan birlashtirilgan. Tahlilda toʻliq skanerlash va ma'lumotdan mustaqil parchalanish yondashuvi qoʻllanilgan. Shunday qilib, nafaqat maqsad molekulaning to'g'ri massasi, balki parchalanish ma'lumotlari ham toʻplangan.

To'rtinchi bosqichda usul validatsiyasi o'tkazilgan. Mushak va sut uchun turli bo'sh namunalar ishlatilgan, turli qo'shimcha darajalari sinovdan o'tkazilgan, noto'g'ri musbat, noto'g'ri manfiy, aniqlash qobiliyati, tiklanish va aniqlik baholangan.

Beshinchi bosqichda usul malaka sinovlarida sinovdan o'tkazilgan. Malaka sinovlari laboratoriyaning usul ish faoliyatini tashqi namunalar bilan baholash imkonini beradi. Ushbu ishlarda turli yillarda va turli tashkilotchilar tomonidan taqdim etilgan sinov namunalari ishlatilgan.

So'nggi bosqichda usul haqiqiy namunalar ustida qo'llanilgan. Fransiyadagi rasmiy nazorat va kuzatuv rejasi doirasida 144 go'sht/qovurg'a va 50 sut namunalari tahlil qilingan.

Natijalar Nimalarni Ko‘rsatmoqda?

Tadqiqot natijalari bir necha sarlavhada qisqacha bayon qilinishi mumkin.

Birinchi navbatda, yuqori rezolyutsiyali LC-Q-Orbitrap usuli keng qamrovli veterinar dorilar qoldiqlarini tekshirish uchun kuchli vositadir. Bitta tahlil yondashuvi bilan turli dori oilalaridan ko‘plab moddalar kuzatilishi mumkin bo‘ldi.

Ikkinchisi, namuna tayyorlash usuli natijalar ustida belgilovchidir. To'rt usul orasida eng mos yondashuv, asetonitril/suv aralashmasi va keyin sof asetonitril ishlatiladigan ikki martali ekstraktsiya usuli bo'lgan. Ushbu usul, keng analiz doirasi va amaliy laboratoriya ishlatish nuqtai nazaridan yanada muvozanatli ko'rinadi.

Uchinchisi, yuqori aniqlikdagi mass o‘lchovi o‘zi yakka yetarli emas. Noto'g'ri musbatlarni kamaytirish uchun ushlab turish vaqti va molekula ionidan tashqari, bo‘lak ion ma'lumotlaridan foydalanish muhimdir. Tadqiqot bu qo‘shimcha ma'lumotning o‘ziga xosligini oshirishini ko‘rsatadi.

To'rtinchisi, usul barcha analitlarda bir xil natija bermaydi. Ba'zi avermektinlar, ba'zi makrolidlar, beta-laktamlar va antikoksidiyaller past darajada aniqlash qiyinroq bo‘lgan. Bu, juda keng qamrovli usullarning tabiiy cheklanishidir: qamrov oshgan sari, har bir modda uchun ideal shartni topish qiyinlashadi.

Beshinchisi, usul ko‘plab moddalar uchun miqdoriy o‘lchov qilishi mumkin bo‘lgan samaraga erishdi. Tadqiqotda 106 analit mushak to‘qimasida, 115 analit esa sut matrisida miqdoriy jihatdan baholanishi mumkin deb topildi. Boshqalar uchun usul ko‘proq sifatni aniqlash maqsadida ishlatilishi mumkin.

Oltinchidan, malaka testlari usul tashqi baholashda umuman qoniqarli natijalar berganini ko'rsatdi. Bu usul nafaqat laboratoriya ichidagi tasdiqlash orqali, balki haqiqiy boshqaruv tizimlariga o'xshash tashqi testlar bilan ham sinovdan o'tkazilganini ko'rsatadi.

Yettinchisi, haqiqiy namuna amaliyotida tahlil qilingan 194 namunaning katta qismida veterinar dori qoldig‘i aniqlanmagan. Shubhali namunalarga ko‘proq mushak/go‘sht namunalari kirgan; sut namunalari ushbu tadqiqot doirasida qoldiq topilmagan. Biroq bu ma'lumot faqat tekshirilgan namunalarning natijasi sifatida talqin qilinishi kerak.

Bu Nima Uchun Muhim?

Oziq-ovqat xavfsizligi laboratoriyalari uchun eng muhim ehtiyojlardan biri — juda ko‘p qoldiqlarni tez, ishonchli va keng qamrovli tarzda tekshira olishdir. Har bir modda uchun alohida usulni qo‘llash nafaqat vaqt, balki xarajat va ish yuki nuqtai nazaridan ham qiyin.

Ushbu tadqiqot ushbu sohada yuqori aniqlikdagi mass-spektrometriyaning afzalliklarini ko'rsatadi. Q-Orbitrap kabi tizimlar faqat bir nechta oldindan belgilangan moddalar emas, balki katta ro'yxatni yuqori massa aniqligi bilan skanerlashi mumkin. Bundan tashqari, agar ma'lumotlar to'g'ri qayd etilsa, kelajakda yangi paydo bo'lgan moddalar uchun retrospektiv tahlil yuzaga kelishi mumkin.

Bu yondashuv, rasmiy oziq-ovqat nazorat rejyalarida muhim bo‘lishi mumkin. Chunki hayvonlar oziq-ovqatlarida qoldiq kuzatish faqat “bir modda bormi?” savolidan iborat emas. Analitik usul; noto'g'ri musbat natijalarni kamaytirishi, noto'g'ri manfiy natijalarni cheklashi, me’yoriy chegaralar bilan mos keladigan aniqlash qobiliyatini taqdim qilishi va haqiqiy namunalar uchun qo‘llanilishi lozim.

Verianla o‘quvchisi uchun bu maqolaning ahamiyati shundaki: Bir ovqatning xavfsizligi faqat ishlab chiqarish bosqichidagi qoidalarga emas, balki bu qoidalarni bajaradigan analitik texnologiyalarning kuchiga ham bog‘liq. Zamonaviy oziq-ovqat nazorati, kimyoviy izlarni juda past darajada va juda murakkab matritsalarda o‘qiy oladigan qurilmalarga tayanadi.

Diqqat Nuqtalari

Bu maqola hakam baholashidan oʻtmagan bir preprintdir. Topilmalar mustaqil ilmiy baholash jarayonidan soʻng oʻzgarishi mumkin.

Ushbu ish sog‘liq bo‘yicha tavsiya yoki iste’molchi xavfini baholash emas. Maqsad go‘sht va sut namunalarda veterinar dori qoldiqlarini aniqlashda ishlatiladigan laboratoriya usulining samaradorligini ko‘rsatishdan iborat.

Usul 196 moddani qamrab olgan bo‘lsa-da, barcha moddalar bo‘yicha teng darajada natija ko‘rsatmagan. Baʼzi moddalar past konsentratsiyalarda aniqlash qiyin bo‘lgan yoki faqat sifatli skrining doirasida baholanishi mumkin bo‘lgan.

Haqiqiy misol qo‘llanilishi 194 ta namuna bilan chegaralangan. Ushbu natijalar umumiy oziq-ovqat bozori haqida keng va aniq foiz sifatida o‘qilmasligi kerak.

Yuqari aniq mass-spektrometriya kuchli; ammo mutaxassis ma'lumotlarni qayta ishlash, mos namunani tayyorlash, to'g'ri tekshirish va kerak bo‘lganda tasdiqlovchi tahlilni talab qiladi.

Natija

Ushbu preprint tadqiqot go'sht va sut kabi hayvon oziq-ovqatlaridagi veterinar dori qoldiqlarini to'liq skrining qilish uchun LC-Q-Orbitrap asosidagi usul ishlab chiqilgani va tasdiqlanganini ko'rsatadi.

Usul 196 ta maqsad moddani qamrab oladi. Ularning muhim qismini past µg/kg darajalarida aniqlay oladi; 106 tahlil qilinadigan moddani mushak to‘qimasida, 115 tahlil qilinadigan moddani sut matritsasida miqdoriy o‘lchash imkonini beradi. Shunga qaramay, ba'zi murakkab modda guruhlari hali ham optimizatsiya talab qiladi.

Tadqiqotning eng kuchli xabari shundaki, zamonaviy oziq-ovqat nazoratida qarorlarni bitta qurilma signali bilan qabul qilish o'rniga, molekulyar ion, ushlab turish vaqti, fragment ion ma'lumotlari, tasdiqlash mezonlari va tashqi malaka testlari birgalikda baholanishi kerak. Keng qamrovli skrining usullari oziq-ovqat xavfsizligini nazorat qilishda kuchli vosita bo'lishi mumkin; Biroq, har bir tahlil va har bir matritsa uchun ehtiyotkorlik bilan tasdiqlash zarur.

Manba va Usul Eslatma

Ushbu maqola, go'sht/mushak to'qimasi va sut namunalarida 196 veterinar dori qoldiqlarining LC-Q-Orbitrap HRMS bilan tekshirilishini tushuntiruvchi hakem baholanishidan o'tmagan preprint ishning soddalashtirilgan o'zbekcha sharhi hisoblanadi. Matn to'liq tarjima emas; ishning maqsadi, usuli, validatsiya mantiqi, grafik va jadvallarning asosiy xabari Verianla o'quvchisi uchun qayta tushuntirilgan.

Ish; to‘rtta turli ekstraktsiya usulining taqqoslanishi, tanlangan juft ekstraktsiya yondoshuvining LC-Q-Orbitrap tizimi bilan birlashtirilishi, EU 2021/808 mezonlariga ko‘ra validatsiya, yetarlilik testlari va 194 ta haqiqiy namuna qo‘llanilishi asosida tashkil etilgan. Topilmalar laboratoriya usulining samaradorligini ko‘rsatadi; to'g'ridan-to'g'ri iste’molchi salomatligi xavfi yoki bozor miqyosidagi qoldiq darajasi sifatida talqin qilinmasligi kerak.