Паклитаксел пайвастагии синфи таксанҳо мебошад, ки ба тақсимшавии ҳуҷайраҳо таъсир мерасонад ва дар табобати саратон истифода мешавад. Баккатин III бошад, яке аз сохторҳои асосӣ ва пешгузаштаҳои таксанӣ мебошад, ки метавонад дар истеҳсоли нимсинтетикии паклитаксел истифода шавад. Гарчанде ки ин пайвастагиҳо таърихан пеш аз ҳама бо навъҳои Taxus алоқаманд дониста шудаанд, ин таҳқиқот ба корҳои пешинае такя мекунад, ки мавҷудияти паклитаксел ва Баккатин III-ро дар бофтаҳои гуногуни фундуқ низ эҳтимолӣ мешуморанд.

Муҳаммад Сино ва ҳамкоронаш сатҳи паклитаксел ва Баккатин III-ро дар барг, пӯсти сабзи берунӣ, пӯсти сахт, мағзи хом ва мағзи бирёншудаи панҷ навъи фундуқи эронӣ таҳқиқ карданд. Навъҳои таҳқиқшуда Segoush, Eshkevar, Nakhoni, Paraki ва Shirvani буданд. Ҳамин тариқ, 25 намунаи навъ-матритса, ки аз таркиби панҷ навъ ва панҷ матритсаи гуногун ҳосил мешуданд, арзёбӣ гардиданд.

Бирён кардани мағзи фундуқ дар 150°C барои як соат анҷом дода шуд. Яке аз ҳадафҳои муҳимми таҳқиқот муайян кардани он буд, ки оё бирёнкунӣ миқдори ченшавандаи паклитаксел ва Баккатин III-ро тағйир медиҳад ё не.

Пеш аз таҳлил, матритсаи растанӣ ва фундуқ аз экстраксияи ибтидоии бо ултрасадо дастгиришаванда гузаронда шуд, сафедаҳо ва полисахаридҳо бо маҳлулҳои Carrez таҳшин карда шуданд ва баъдан микроэкстраксияи дисперсивии моеъ-моеъ, яъне DLLME, татбиқ гардид. Дар марҳилаи DLLME этанол ҳамчун ҳалкунандаи дисперсионӣ ва 1-октанол ҳамчун ҳалкунандаи экстраксионӣ истифода шуд.

Шароити DLLME, ки бо тарҳи композитии марказӣ ва усули сатҳи ҷавоб муайян карда шуд, 600 µL этанол, 60 µL 1-октанол, 1 g NaCl ва pH 6,5 буд. Гуфта шудааст, ки дар ҳаҷмҳои баландтари этанол ва 1-октанол таъсири суюқшавӣ, ва дар миқдори намаки зиёда аз 1 грамм шароити аз ҳад сершавӣ ҷавоби экстраксияро коҳиш медиҳанд.

Таҳлили хроматографӣ бо системаи Agilent 1260 HPLC ва детектори UV-Vis анҷом дода шуд. Барои ҷудокунии моддаҳо сутуни C18 бо андозаи 250 × 4,6 mm ва зарраҳои 5 µm истифода гардид. Фазаи ҳаракаткунанда аз метанол ва оби деионизатсияшуда бо таносуби ҳаҷмӣ 80:20 омода карда шуд; суръати ҷараён 1,0 mL/дақиқа ва дарозии мавҷи ошкорсозӣ 230 nm муайян гардид.

Тибқи бахши усулҳо, Баккатин III тақрибан дар 3,0 дақиқа ва паклитаксел тақрибан дар 4,5 дақиқа элюатсия шудааст. Ҳувияти пайвастагиҳо тавассути муқоисаи вақти нигоҳдории қуллаҳои намуна бо вақти нигоҳдории стандартҳои сертификатсияшуда муайян карда шуд.

Натиҷаи умумии аз ҳама намоёни таҳқиқот ин буд, ки сатҳҳои баландтарини паклитаксел ва махсусан Баккатин III дар баргҳои фундуқ чен карда шуданд. Паклитаксел дар намунаҳои барг дар ҳудуди 4,54–17,56 µg/g вазни хушк ва Баккатин III дар Ҷадвали 2 дар ҳудуди 6.851,67–8.660 µg/g вазни хушк гузориш шудааст.

Ҳангоми ба миллиграмм табдил додани арзишҳои барг барои Баккатин III, онҳо тақрибан ба 6,85–8,66 mg/g вазни хушк баробар мешаванд:

\[ 1000\ \mu\mathrm{g/g} = 1\ \mathrm{mg/g} \]

Аз ин рӯ, сатҳҳои Баккатин III, ки дар баргҳо чен шудаанд, садҳо маротиба аз сатҳҳои паклитаксел баландтаранд. Аммо такя кардани ин натиҷаҳои хеле баланд танҳо ба мувофиқати вақти нигоҳдории HPLC-UV зарурати тасдиқи онҳоро бо усули мустақил ва аз ҷиҳати сохторӣ интихобкунандатар махсусан муҳим мегардонад.

Аз ҷиҳати паклитаксел дар баргҳо, арзиши баландтарин дар навъи Segoush 17,56 ± 0,92 µg/g ва арзиши пасттарин дар навъи Eshkevar 4,54 ± 0,24 µg/g гузориш шудааст.

Дар натиҷаҳои барг барои Баккатин III байни матн ва ҷадвал фарқи гузориш вуҷуд дорад. Матни натиҷаҳо арзиши баландтаринро барои Segoush 8.515,32 ± 408,7 µg/g нишон медиҳад, дар ҳоле ки дар Ҷадвали 2 ва харитаи гармӣ навъи Paraki бо 8.660 ± 415,6 µg/g аз ҷиҳати ададӣ баландтар аст. Дар матн барои Shirvani 6.921,07 µg/g навишта шудааст, аммо дар ҷадвал 6.851,67 µg/g оварда шудааст.

Дар пӯсти сабзи берунӣ сатҳи баландтарини паклитаксел дар навъи Shirvani 5,70 ± 0,28 µg/g ва сатҳи баландтарини Баккатин III боз ҳам дар Shirvani 6.662,37 ± 355,1 µg/g чен шудааст.

Дар пӯсти сахт арзиши баландтарини паклитаксел дар навъи Shirvani 5,30 ± 0,29 µg/g ва арзиши баландтарини Баккатин III боз ҳам дар навъи Shirvani тақрибан 1.000,67 µg/g гузориш шудааст.

Дар мағзи хоми фундуқ сатҳи паклитаксел дар навъи Segoush ба арзиши баландтарини 4,15 ± 0,17 µg/g расидааст. Дар навъҳои Paraki ва Eshkevar бошад, мутаносибан тақрибан 0,05 ва 0,04 µg/g сатҳҳои хеле паст чен шудаанд.

Дар мағзи хоми фундуқ Баккатин III танҳо дар навъи Segoush дар сатҳи назаррас, 43,72 ± 1,56 µg/g, ошкор шудааст. Дар чор навъи дигар натиҷаҳо аз ҳади ошкорсозии усул поёнтар буданд. Барои таҳлили оморӣ шарҳ дода шудааст, ки ин натиҷаҳои ошкорнашуда бо нисфи арзиши LOD, яъне 0,004 µg/g, ифода шудаанд.

Дар мағзи бирёншудаи фундуқ сатҳи баландтарини паклитаксел дар навъи Paraki 4,81 ± 0,23 µg/g ва сатҳи баландтарини Баккатин III дар навъи Shirvani 67,22 ± 3,06 µg/g гузориш шудааст.

Хулоса ва бахши натиҷаҳои таҳқиқот таъкид мекунанд, ки дар мағзи бирёншуда нисбат ба мағзи хом миқдори бештари паклитаксел ва Баккатин III пайдо шудааст. Аммо ҳангоми таҳлил дар сатҳи навъ, афзоиш дар ҳамаи намунаҳо як самт надорад.

Паклитаксел дар навъи Segoush аз 4,15 то 1,05 µg/g ва дар навъи Nakhoni аз 2,75 то 2,46 µg/g коҳиш ёфтааст. Дар навъҳои Eshkevar, Paraki ва Shirvani бошад, афзоиш ёфтааст. Баккатин III, ки дар мағзи хоми чор навъ ошкор нашуда буд, пас аз бирёнкунӣ ченшаванда гардид; аммо дар навъи Segoush аз 43,72 то тақрибан 23,90 µg/g коҳиш ёфтааст.

Ҳамин тариқ, додаҳо нишон медиҳанд, ки бирёнкунӣ метавонад сатҳи ченшавандаи таксанҳоро дар бисёр навъҳо зиёд кунад, аммо таъсир аз пайвастагӣ ва навъи фундуқ вобаста аст. Хулосаи универсалии «бирёнкунӣ миқдори таксанҳоро дар ҳамаи навъҳо зиёд мекунад» аз ҷониби додаҳо дастгирӣ намешавад.

Муҳаққиқон афзоишеро, ки пас аз бирёнкунӣ дида шудааст, ҳамчун далели қатъии синтези нави паклитаксел арзёбӣ накардаанд. Дар байни шарҳҳои пешниҳодшуда вайрон шудани деворҳои ҳуҷайра, озод шудани таксанҳои баста ё дастнорас, осонтар ворид шудани ҳалкунанда ба матритса, баланд шудани самаранокии экстраксия ва ғайрифаъол шудани ферментҳои эндогении тағйирдиҳандаи таксан бо таъсири гармӣ зикр шудаанд.

Ҳамчунин баррасӣ шудааст, ки қисми афзоиши Баккатин III метавонад ба аз даст рафтани занҷири канории паклитаксел ё озод шудани пешгузаштаҳои баста алоқаманд бошад. Аммо дар таҳқиқот маҳсулоти табдили кимиёвии пеш ва пас аз бирёнкунӣ пайгирӣ нашуда, тавозуни масса тартиб дода нашудааст ва табдили мустақими паклитаксел ба Баккатин III нишон дода нашудааст.

Барои усули таҳияшуда барқароршавии паклитаксел дар ҳудуди 92,05–99,42 фоиз ва барқароршавии Баккатин III дар ҳудуди 92,59–98,53 фоиз гузориш шудааст. Арзишҳои инҳирофи стандартии нисбӣ барои паклитаксел 4,11–5,50 фоиз ва барои Баккатин III 3,59–5,33 фоизро ташкил додаанд.

Барои паклитаксел ҳади ошкорсозӣ 1,86–2,17 ng/g ва ҳади миқдорсанҷӣ 6,13–7,16 ng/g; барои Баккатин III ҳади ошкорсозӣ 2,11–2,35 ng/g ва ҳади миқдорсанҷӣ 6,96–7,75 ng/g дода шудааст.

Бо вуҷуди ин, дар бораи ҳудуди хаттӣ дар дохили таҳқиқот тафовутҳои муҳим мавҷуданд. Матни усул ва валидатсия ҳудуди 1–1000 ng/g-ро гузориш мекунад, дар ҳоле ки дар Ҷадвали 1 1–500.000 ng/g ва дар ҷадвали муқоиса 10–200.000 ng/g оварда шудааст. Аз ин рӯ, ҳудуди дақиқи кори тасдиқшудаи усулро аз PDF ҳамчун як арзиши ягона ва муттасил баровардан имконнопазир аст.

Ғайр аз ин, шарҳи Шакли 3 қуллаи якумро паклитаксел ва қуллаи дуюмро Баккатин III меномад. Баръакс, дар бахши усулҳо қуллаи аввал дар 3,0 дақиқа ба Баккатин III ва қуллаи дуюм дар 4,5 дақиқа ба паклитаксел нисбат дода шудааст. Ин тамғагузории баръакс низ масъалаи гузоришест, ки дар тафсири хроматограмма бояд равшан карда шавад.

Таҳқиқот нишон намедиҳад, ки хӯрдани фундуқ ё фундуқи бирёншуда саратонро пешгирӣ ё табобат мекунад. Ҷаббиши таксанҳо аз ғизо, биодастрасӣ дар бадани инсон, мубодилаи моддаҳо, бехатарӣ, вояи муассир ё натиҷаи клиникӣ таҳқиқ нашудааст. Сатҳи пайвастагиҳои растании ченшуда набояд бо табобати тиббии паклитаксел баробар дониста шавад.

Масъалаи асосии илмии таҳқиқот

Паклитаксел таксане мебошад, ки сохтори молекулавии мураккаб дорад. Дар муқаддимаи таҳқиқот гуфта мешавад, ки мушкили гирифтани он аз манбаи табиӣ ва равандҳои мураккаби синтез таҳқиқоти манбаъҳои алтернативии растаниро ҳавасманд кардаанд.

Пештар гузориш шуда буд, ки таксанҳо метавонанд дар қисмҳои ғайрихӯрдании дарахти фундуқ, аз ҷумла барг, пӯсти сахт ва пӯсти берунӣ, мавҷуд бошанд. Аммо муқоисаи навъҳо ва бофтаҳои гуногуни фундуқ бо як усули аналитикӣ, махсусан таҳқиқи он ки бирёнкунӣ сигнали паклитаксел ва Баккатин III-ро дар мағзи фундуқ чӣ гуна тағйир медиҳад, маҳдуд боқӣ мондааст.

Таҳқиқот се саволи асосиро баррасӣ мекунад:

1. Паклитаксел ва Баккатин III дар кадом бофтаҳои фундуқ дар сатҳи баландтар мавҷуданд?
2. Оё тақсимоти таксанҳо байни панҷ навъи фундуқ фарқ мекунад?
3. Бирёнкунӣ дар 150°C барои як соат ба миқдори ченшавандаи паклитаксел ва Баккатин III дар мағзи фундуқ чӣ гуна таъсир мерасонад?

Масъалаи дуюми тарафи аналитикии таҳқиқот ҷудо кардани сатҳҳои пасти таксанҳо аз матритсаи мураккаби фундуқ, ки равған, сафеда, карбогидрат ва дигар ҷузъҳои растаниро дар бар мегирад, дар муддати кӯтоҳ мебошад.

Робитаи байни паклитаксел ва Баккатин III

Дар таҳқиқот паклитаксел ҳамчун таксане баррасӣ мешавад, ки бевосита дар табобати саратон истифода мешавад, ва Баккатин III ҳамчун сохтори пешгузаштае, ки дар истеҳсоли паклитаксел метавонад истифода шавад.

Баккатин III тамоми сохтори молекулавии паклитаксел нест. Он ядрои асосии таксанӣ мебошад, ки баъзе занҷирҳои канории фарқкунандаи паклитакселро надорад. Аз ин рӯ, миқдори зиёди Баккатин III дар як намуна маънои мавҷудияти ҳамон миқдори паклитакселро надорад.

Он ки дар бисёр матритсаҳо миқдори Баккатин III нисбат ба паклитаксел хеле баландтар аст, нишон медиҳад, ки бофтаҳои фундуқ метавонанд аз паклитаксели тайёр бештар аз пешгузаштаҳои таксан ё сохторҳои вобастаи таксан бой бошанд. Аммо ҷараёни биосинтетикӣ ё суръати табдил таҷрибавӣ чен карда нашудааст.

Кадом навъҳо ва бофтаҳои фундуқ таҳқиқ шуданд?

Намунаҳо аз минтақаҳои деҳоти Roudsar дар вилояти Gilan-и Эрон ҷамъоварӣ шудаанд. Панҷ навъи фундуқ чунинанд:

• Segoush,
• Eshkevar,
• Nakhoni,
• Paraki,
• Shirvani.

Дар ҳар навъ панҷ матритса арзёбӣ гардид:

• Барг,
• Пӯсти сабзи берунӣ ё zuruf,
• Пӯсти сахти қаҳваранг,
• Мағзи хоми фундуқ,
• Мағзи бирёншудаи фундуқ.

Ҳамин тариқ, 25 комбинатсияи навъ-матритса ба даст омад. Дар PDF равшан гуфта нашудааст, ки аз ҳар навъ чанд дарахт, боғ ё намунаи мустақили биологӣ ҷамъоварӣ шудааст. Аммо зикр гардидааст, ки ҳар намунаи омодашуда се маротиба ба дастгоҳ ворид карда шудааст.

Се тазриқи такрорӣ такроршавандагии дастгоҳ ва таҳлилро арзёбӣ мекунанд. Аммо онҳо бо намунаҳои мустақили дарахт ё ҳосил яксон нестанд. Шарҳ дода нашудани шумораи такрорҳои мустақили биологӣ номуайян мегузорад, ки тағйирёбии табиии байни навъҳо то чӣ андоза намояндагӣ шудааст.

Хушккунӣ ва омодасозии намунаҳо

Баргҳо ва пӯстҳои берунӣ дар ҳарорати хона барои як ҳафта хушк карда шуданд. Пас аз орд кардан баргҳо аз элаки 70 mesh ва пӯстҳои берунӣ аз элаки 25 mesh гузаронда шуданд.

Ҳамаи фундуқҳо як ҳафта дар ҳарорати хона хушк карда шуда, барои кам кардани намии боқимонда 24 соати иловагӣ дар нури мустақими офтоб гузошта шуданд. Пас аз ҷудо кардани мағзи хом онҳо орд карда, аз элаки 25 mesh гузаронда ва барои марҳилаҳои баъдӣ дар 4°C нигоҳ дошта шуданд.

Таъсири хушккунии офтобӣ ба устувории таксанҳо алоҳида арзёбӣ нашудааст. Аз ин рӯ, миқдори ченшуда на танҳо сатҳи ибтидоии бофтаи тоза, балки сатҳи ченшавандаи боқимондаро пас аз хушккунӣ ва нигоҳдорӣ низ ифода мекунад.

Раванди бирёнкунӣ чӣ гуна иҷро шуд?

Танӯр пешакӣ то 150°C гарм карда шуд ва намунаҳо барои як соат бирён карда шуданд. Барои паҳншавии баробари гармӣ гуфта шудааст, ки намунаҳо дар фосилаҳои муайян омехта карда мешуданд.

Пас аз бирёнкунӣ намунаҳо ба ҳарорати хона расонда шуда, баъд таҳлил гардиданд. Дар таҳқиқот:

• Ҳарорати дохилии маҳсулот,
• Талафи намӣ,
• Фаъолияти об,
• Тақсимоти ҳарорат дар дохили танӯр,
• Тағйири ранг ё масса дар охири бирёнкунӣ гузориш нашудааст.

Аз ин рӯ, 150°C ва як соат шароити номиналии коркард мебошанд; ҳарорати воқеии дохилӣ ё вояи гармие, ки ҳар намуна гирифтааст, маълум нест.

Чаро экстраксияи ибтидоӣ вобаста ба матритса тағйир дода шуд?

Барги фундуқ, пӯсти сабз, пӯсти сахт ва мағзи фундуқ сохтори кимиёвии яксон надоранд. Барг метавонад аз лиҳози лигноселлюлоза ва пигментҳо бой бошад, дар ҳоле ки мағзи фундуқ матритсаи дигар бо миқдори зиёди равған мебошад.

Муҳаққиқон ҳаҷми ибтидоии этанолро барои ҳар матритса бо таҷрибаҳои яктағйирёбанда алоҳида арзёбӣ карданд. Дар ҳар таҷриба 0,5 g намунаи ордшуда истифода шуд ва ҳаҷми этанол аз 0 то 4 mL тағйир дода шуд.

Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки як ҳалкунандаи экстраксионӣ дар ҳамаи матритсаҳо самаранокии яксон надорад. Аммо дар протоколи умумии микроэкстраксия навишта шудааст, ки ба ҳамаи намунаҳо 3 mL этанол илова шудааст, дар ҳоле ки дар бахши баъдии натиҷаҳо гуфта мешавад, ки ҳаҷмҳои хоси матритса истифода шудаанд. Барои такроршавандагии протоколи ниҳоӣ ин ду тавзеҳ бояд бо ҳам мувофиқ карда шаванд.

Коркарди бо ултрасадо дастгиришаванда

Маҳлули намуна дар ваннаи ултрасадоӣ дар 40°C коркард шуд. Дар бахши усулҳо вақти ултрасадо 30 дақиқа нишон дода шудааст. Дар бахше, ки натиҷаҳои бирёнкунӣ баррасӣ мешаванд, ибораи «15 дақиқа дар 40°C» истифода шудааст.

Ин фарқи вақт барои интиқоли усул муҳим аст, зеро давомнокии ултрасадо метавонад вайроншавии ҳуҷайра, самаранокии экстраксия ва тағйири эҳтимолии пайвастагиҳоро таъсир диҳад.

Чаро маҳлулҳои Carrez истифода шуданд?

Пас аз коркарди ултрасадо ва центрифугакунии аввал, ба қисми болоӣ як миллилитр Carrez I ва як миллилитр Carrez II илова шудааст. Ҳадаф таҳшин кардани сафедаҳо ва полисахаридҳо ва гирифтани фазаи болоии тозатар буд.

Аммо дар тавзеҳи омодасозии маҳлулҳо номуайянии муҳим вуҷуд дорад. Барои Carrez I истифодаи калий гексацианоферрат зикр шудааст, дар ҳоле ки барои Carrez II низ боз калий гексацианоферрат навишта шудааст. Ҳамзамон дар бахши маводҳо ацетати руҳ низ дар рӯйхати реактивҳои харидашуда оварда шудааст.

Аз ин рӯ, аз PDF муайян кардани дақиқи он ки Carrez II бо кадом намак омода шудааст, имконнопазир аст. Ин ҷузъ барои рафтори таҳшиншавии сафеда ва такрор кардани усул дар лабораторияҳои дигар бояд равшан карда шавад.

Усули DLLME чӣ гуна кор мекунад?

Дар микроэкстраксияи дисперсивии моеъ-моеъ ҳаҷми хурди ҳалкунандаи экстраксионӣ бо ёрии ҳалкунандаи дисперсионӣ дар маҳлули намуна ба шакли қатраҳои бисёр майда паҳн мешавад. Аз сабаби зиёд шудани сатҳи умумии тамос, пайвастагиҳои ҳадаф метавонанд зуд аз намунаи обӣ ба фазаи экстраксионӣ гузаранд.

Дар таҳқиқот:

• Этанол ҳамчун ҳалкунандаи дисперсионӣ,
• 1-октанол ҳамчун ҳалкунандаи экстраксионӣ,
• NaCl барои таъсири намаккунӣ истифода шуд.

Дар марҳилаи оптимизатсияшуда 600 µL этанол ва 60 µL 1-октанол ба намуна илова шуда, омехта сахт вортикс карда ва дар 9.000 rpm барои панҷ дақиқа центрифуга шуд. Фазаи ҷудошудаи 1-октанол ба системаи HPLC дода шуд.

Таъсири намаккунӣ

Қабул шудааст, ки илова кардани 1 g NaCl ба намуна ҳалшавандагии пайвастагиҳои ҳадафро дар фазаи обӣ кам карда, гузариши онҳоро ба фазаи 1-октанол дастгирӣ мекунад. Ин механизми умумӣ ҳамчун «salting-out» ё таъсири берункунии намак маълум аст.

Дар таҳқиқот ҳудуди 0–2 g NaCl арзёбӣ шуда, ҷавоби беҳтарин дар сатҳи 1 g гузориш шудааст. Дар миқдори зиёда аз як грамм аз ҳад сершавӣ ва коҳиши самаранокии раванд мушоҳида шудааст.

Чаро 60 µL 1-октанол истифода шуд?

Вақте ҳаҷми ҳалкунандаи экстраксионӣ хеле хурд аст, фазае, ки пайвастагиҳои ҳадаф дар он ҷамъ мешаванд, метавонад ба консентратсияи баландтар расад. Баръакс, ҳангоми зиёд шудани ҳаҷм ҳамон миқдори аналит дар ҳаҷми бузургтари ҳалкунанда паҳн шуда, суюқ мешавад.

Дар таҳқиқот ҷавоби баландтарини ғанигардонӣ бо 60 µL 1-октанол ба даст омадааст. Дар ҳаҷмҳои баландтар таъсири суюқшавӣ бартарӣ пайдо кардааст.

Чаро 600 µL этанол интихоб шуд?

Этанол имкон медиҳад, ки 1-октанол дар маҳлули намуна ба шакли қатраҳои майда паҳн шавад. Ҳангоми афзоиши ҳаҷми этанол то 600 µL тамоси байни намуна ва фазаи экстраксионӣ зиёд шуда, дар ҳаҷмҳои баландтар бошад, аз сабаби суюқшавии бештар ҷавоб кам шудааст.

Маънои интихоби pH 6,5

pH-и экстраксия дар ҳудуди 3–9 арзёбӣ шуда, ҷавоби максималӣ дар pH 6,5 гирифта шудааст. Таҳқиқот пешниҳод мекунад, ки дар шароити бештар турш ё ишқорӣ сохторҳои аналити ҳадаф метавонанд тағйир ёбанд ва экстраксия ноком гардад.

Аммо маҳсулоти табдилӣ дар шароити турш ё ишқорӣ алоҳида таҳлил нашудаанд. Аз ин рӯ, таъсири pH натиҷаи оптимизатсияи амалиётӣ мебошад, ки ба коҳиши ҷавоби хроматографӣ асос ёфтааст.

Тарҳи композитии марказӣ ва усули сатҳи ҷавоб

Чор тағйирёбандаи DLLME дар панҷ сатҳ якҷоя санҷида шуданд:

• Ҳаҷми этанол: 300–1000 µL,
• Ҳаҷми 1-октанол: 60–120 µL,
• pH: 3–9,
• Миқдори NaCl: 0–2 g.

Тарҳи композитии марказӣ аз 30 таҷриба истифода шуд. Бар хилофи оптимизатсияи яктағйирёбанда, усули сатҳи ҷавоб таъсири мутақобилаи тағйирёбандаҳоро низ арзёбӣ мекунад.

Барои модели дараҷаи дуюм чунин арзишҳо гузориш шуданд:

• F = 24,88,
• p < 0,0001,
• R² = 0,9587,
• R²-и ислоҳшуда = 0,9202,
• R²-и пешгӯишуда = 0,8484,
• Дақиқии кофӣ = 20,449.

Санҷиши lack of fit F = 0,53 ва p = 0,8135 буд. Натиҷаи ғайримаънодори lack of fit ҳамчун далели он тафсир шудааст, ки модели таҷрибавӣ сохтори бузурги систематикии шарҳнашударо боқӣ намегузорад.

Арзишҳои R² чӣ гуна хонда мешаванд?

Коэффисиенти муайянкунӣ нишон медиҳад, ки модел чӣ қадар тағйирёбии ҷавоби мушоҳидашударо шарҳ медиҳад:

\[ R^2 = 1 - \frac{\sum(y_i-\hat{y}_i)^2}{\sum(y_i-\bar{y})^2} \]

• \(y_i\) ҷавоби ченшуда дар таҷриба,
• \(\hat{y}_i\) ҷавоби пешгӯишудаи модел,
• \(\bar{y}\) миёнаи ҳамаи ҷавобҳои таҷрибавиро ифода мекунад.

R² = 0,9587 нишон медиҳад, ки модел тақрибан 95,87 фоизи тағйирёбии ҷавоби таҷрибавиро шарҳ медиҳад. Коҳиши R²-и пешгӯишуда то 0,8484 нишон медиҳад, ки қобилияти пешгӯии шароити нав аз мувофиқати модел ба додаҳои мавҷуда камтар, вале ҳанӯз баланд аст.

Шакли 1 чӣ мегӯяд?

Дар панели якуми Шакли 1 арзишҳои пешгӯишудаи модел бо натиҷаҳои воқеии таҷриба муқоиса шудаанд. Ҷамъ шудани нуқтаҳо дар атрофи хатти диагоналӣ мувофиқати пешгӯӣ ва мушоҳидаро нишон медиҳад.

Панели дуюм графики эҳтимолии боқимондаҳои нормализатсияшуда мебошад. Он ки нуқтаҳо асосан сохтори хаттиро пайравӣ мекунанд, тафсири тақрибан нормалӣ будани боқимондаҳоро дастгирӣ мекунад.

Панели сеюм графики табдили Box-Cox мебошад. Арзиши оптималии lambda 0,88 ва фосилаи эътимод 0,65–1,05 дода шудааст. Азбаски Lambda = 1 дар фосилаи эътимод қарор дорад, хулоса шудааст, ки табдили қуввагӣ лозим нест.

Се сатҳи сеандозаи сатри поён таъсири мутақобилаи:

• NaCl ва ҳаҷми этанол,
• pH ва ҳаҷми этанол,
• NaCl ва ҳаҷми 1-октанолро нишон медиҳанд.

Дар сатҳҳо ҷавоб дар атрофи 600 µL этанол, pH 6,5, 1 g NaCl ва 60 µL 1-октанол боло меравад.

Шароити ҷудокунии HPLC

Ҳувияти пайвастагиҳо то чӣ андоза қатъӣ тасдиқ шуд?

Муайян кардани паклитаксел ва Баккатин III ба он асос ёфтааст, ки қуллаҳои намуна дар вақти нигоҳдории якхела бо стандартҳои сертификатсияшуда дида шудаанд. Ғайр аз ин, ба намунаи бирёншудаи Eshkevar стандарт илова карда шуда, баланд шудани қуллаҳо нишон дода шудааст.

Ин равиш муайянкунии аналитикиро дастгирӣ мекунад; аммо вақти нигоҳдории HPLC-UV худ аз худ ба сохтори молекулавӣ хос нест. Дар матритсаи мураккаби растанӣ ё ғизоӣ пайвастагии дигаре, ки дар вақти монанд элюатсия мешавад, метавонад дар ҳамон дарозии мавҷ абсорбсия диҳад.

Дар таҳқиқот:

• Масс-спектрометрия,
• Муқоисаи покии спектри UV,
• Сутуни дуюми хроматографӣ,
• Тасдиқ бо фазаи ҳаракаткунандаи дигар,
• NMR ё дигар таҳлили сохтории қуллаи ҷамъоваришуда истифода нашудааст.

Хусусан миқдори хеле баланди Баккатин III, ки дар баргҳо гузориш шудааст, бояд бо усули аз ҷиҳати сохторӣ интихобкунандатар, мисли LC-MS/MS, мустақилона тасдиқ гардад.

Муодилаҳои калибронӣ

Модели асосии хаттии калибронӣ чунин аст:

[ y = mx + b ]

• \(y\) майдони қуллаи хроматографӣ,
• \(x\) консентратсияи аналит,
• \(m\) нишебии калибронӣ ва ҳассосият,
• \(b\) буриши меҳвари y-ро ифода мекунад.

Муодилаҳои додаи таҳқиқот:

Паклитаксел:

\[ y = 18242x - 27{,}593 \]

\[ R^2 = 0{,}9997 \]

Баккатин III:

\[ y = 110{,}6x + 137{,}8 \]

\[ R^2 = 0{,}9991 \]

Ҳар ду коэффисиенти муайянкунӣ робитаи қавии хаттиро нишон медиҳанд. Аммо ҳудуди калибронӣ байни матн ва ҷадвалҳо муттасил нест:

• Матни усул ва валидатсия: 1–1000 ng/g,
• Бахши омодасозии стандарт: 1–10.000 ng/mL,
• Ҷадвали 1: 1–500.000 ng/g,
• Ҷадвали 3: 10–200.000 ng/g.

То бартараф шудани ин фарқҳо муайян кардани дақиқи ҳудуди воқеан валидатсияшудаи усул имконнопазир аст.

Ҳади ошкорсозӣ ва ҳади миқдорсанҷӣ

Дар таҳқиқот ҳади ошкорсозӣ ҳамчун сатҳе муайян шудааст, ки қуллаи аналит ба се баробари садои замина мерасад, ва ҳади миқдорсанҷӣ ҳамчун даҳ баробар:

\[ S/N_{\mathrm{LOD}} = 3 \]

\[ S/N_{\mathrm{LOQ}} = 10 \]

Дар ин ҷо:

• \(S\) сигнали аналит,
• \(N\) садои заминаи хроматографиро ифода мекунад.

Дар матни муқоисавии Ҷадвали 3 барои усул инчунин ибораи «1 ng/mL LOD» истифода шудааст. Ин арзиш бо арзишҳои хоси матритса дар ng/g, ки дар Ҷадвали 1 оварда шудаанд, яксон нест ва воҳидҳоро мустақим муқоиса кардан мумкин нест.

Дақиқӣ: инҳирофи стандартии нисбӣ

Формулаи асосии инҳирофи стандартии нисбӣ чунин аст:

\[ \mathrm{RSD}(\%) = \frac{s}{\bar{x}} \times 100 \]

• \(s\) инҳирофи стандартии ченкуниҳои такрорӣ,
• \(\bar{x}\) миёнаи ченкуниҳоро ифода мекунад.

Арзишҳои RSD барои паклитаксел 4,11–5,50 фоиз ва барои Баккатин III 3,59–5,33 фоиз буданд. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки усул дар ченкуниҳои такрорӣ дар ҳамон шароит тақрибан 3,6–5,5 фоиз тағйирёбӣ дорад.

Барқароршавӣ

Барқароршавӣ нишон медиҳад, ки аз миқдори маълуме, ки ба намуна илова шудааст, пас аз тамоми омодасозӣ ва таҳлил чӣ қадар дубора чен мешавад. Робитаи шарҳдиҳанда чунин аст:

\[ \mathrm{Geri\ kazanım}(\%) = \frac{C_{\mathrm{eklenmiş\ örnek}}-C_{\mathrm{başlangıç}}} {C_{\mathrm{eklenen}}} \times 100 \]

• \(C_{\mathrm{намунаи\ бо\ стандарт}}\) миқдори умумии ченшуда дар намунаи бо стандарт иловашуда,
• \(C_{\mathrm{ибтидоӣ}}\) миқдори табиии аналит дар намуна,
• \(C_{\mathrm{иловашуда}}\) миқдори маълуми стандарти илова кардашударо ифода мекунад.

Пасттарин барқароршавии паклитаксел дар пӯсти сахт 92,05 фоиз ва баландтарин дар барг 99,42 фоиз гузориш шудааст. Барои Баккатин III пасттарин барқароршавӣ дар мағзи хом 92,59 фоиз ва баландтарин дар пӯсти сахт 98,53 фоиз буд.

Омили ғанигардонӣ

Дар таҳқиқот омили ғанигардонӣ ҳамчун таносуби сатҳи аналит дар ҳалкунандаи экстраксионӣ ба сатҳи он дар маҳлули ибтидоии намуна шарҳ дода шудааст:

\[ EF = \frac{C_{\mathrm{ekstraksiyon\ fazı}}}{C_{\mathrm{örnek\ çözeltisi}}} \]

Барои паклитаксел EF 9,70–12,31 ва барои Баккатин III 10,30–12,82 гузориш шудааст. Азбаски EF таносуб аст, одатан бе воҳид мебошад. Дар матни натиҷаҳо ба охири арзишҳои Баккатин III аломати фоиз илова шудааст, дар ҳоле ки Ҷадвали 1 онҳоро ҳамчун таносуб нишон медиҳад.

Натиҷаҳои MANOVA: матритса ё навъ муҳимтар аст?

Ҳангоми якҷоя ҳамчун тағйирёбандаҳои вобаста баррасӣ кардани паклитаксел ва Баккатин III:

• Таъсири навъ: Pillai’s Trace = 1,325; F(8,50) = 12,26; p < 0,001; кандаи қисмии η² = 0,662,
• Таъсири матритса: Pillai’s Trace = 1,819; F(8,50) = 62,63; p < 0,001; кандаи қисмии η² = 0,909,
• Таъсири навъ × матритса: Pillai’s Trace = 1,785; F(32,50) = 12,99; p < 0,001; кандаи қисмии η² = 0,893 гузориш шудааст.

Аз рӯи арзишҳои кандаи қисмии η², қавитарин таъсир навъи матритса мебошад. Таъсири мутақобилаи навъ ва матритса низ хеле калон аст. Ин нишон медиҳад, ки баланд ё паст будани миқдори таксан дар як навъи муайян хусусияти собити мустақил аз бофта нест.

Ба ибораи дигар, Shirvani дар пӯсти берунӣ ва пӯсти сахт арзишҳои баланд нишон медиҳад, дар мағзи хом бошад Segoush аз ҷиҳати паклитаксел пешсаф аст, дар мағзи бирёншуда бошад Paraki баландтарин арзиши паклитакселро медиҳад.

Шакли 2: Тақсимоти нишон додашуда дар харитаҳои гармӣ

Харитаи гармии паклитаксел дар тарафи чапи Шакли 2 нишон медиҳад, ки баргҳо дар маҷмӯъ сатҳҳои баландтарин доранд. Бо вуҷуди ин, баъзе комбинатсияҳои навъ-матритса аз ин намунаи умумӣ фарқ мекунанд:

• Барги Segoush бо 17,56 µg/g баландтарин арзиши паклитаксел мебошад.
• Пӯсти берунии Shirvani 5,70 µg/g ва пӯсти сахташ 5,30 µg/g дар матритсаҳои мувофиқ пешсафанд.
• Мағзи бирёншудаи Paraki бо 4,81 µg/g баландтарин арзиши байни намунаҳои бирёншуда мебошад.
• Дар мағзи хоми Eshkevar ва Paraki паклитаксел дар сатҳи хеле паст аст.

Дар харитаи гармии Баккатин III дар тарафи рост, баргҳо бо ҳудуди тақрибан 6.852–8.660 µg/g аз ҳамаи матритсаҳои дигар равшан фарқ мекунанд. Пӯсти берунӣ сатҳи дуюм ва пӯсти сахт сатҳи сеюмро ташкил медиҳад. Арзишҳо дар мағзи фундуқ нисбат ба инҳо хеле пасттаранд.

Харитаи гармӣ натиҷаи MANOVA-ро, ки барои Баккатин III бофта нисбат ба навъ муайянкунандаи қавитар мебошад, ба таври визуалӣ дастгирӣ мекунад.

Натиҷаҳои барг

Азбаски барои паклитаксел дисперсияҳо баробар набуданд, Welch ANOVA истифода шуд ва фарқи қавии байни навъҳо муайян гардид: Welch F = 902,79; p < 0,001.

Барои Баккатин III Welch F = 0,39 ва p = 0,81 гузориш шудааст. Гарчанде ки миёнаҳои ададӣ фарқ доранд, аз сабаби тағйирёбии баланди дохили гурӯҳ фарқи аз ҷиҳати оморӣ маънодор байни навъҳо пайдо нашуд.

Натиҷаҳои пӯсти сабзи берунӣ

Баландтарин арзишҳои ҳам паклитаксел ва ҳам Баккатин III дар пӯсти сабзи берунӣ дар навъи Shirvani чен шудаанд. Таъсири навъ барои ҳар ду аналит маънодор буд.

Натиҷаҳои пӯсти сахт

Пӯсти сахти Shirvani барои ҳар ду пайвастагӣ баландтарин арзишро нишон дод. Миқдори Баккатин III боз ҳам аз паклитаксел хеле баландтар буд.

Натиҷаҳои мағзи хоми фундуқ

Он ки Баккатин III дар мағзи хом танҳо дар навъи Segoush дар сатҳи назаррас ошкор шуд, яке аз равшантарин намунаҳои таъсири қавии навъ × матритса мебошад.

Натиҷаҳои мағзи бирёншудаи фундуқ

Дар намунаҳои бирёншуда аз ҷиҳати паклитаксел Paraki ва аз ҷиҳати Баккатин III Shirvani пешсаф буданд. Он ки навъҳои дорои арзиши баландтарин барои ду аналит гуногунанд, нишон медиҳад, ки таъсири бирёнкунӣ бо як механизми ягонаи умумӣ пурра шарҳ дода намешавад.

Муқоисаи мустақими мағзи хом ва бирёншуда

Ин ҷадвал равшан нишон медиҳад, ки самти таъсири бирёнкунӣ аз навъ ва аналит вобаста аст. Ибораи таҳқиқот, ки «самти афзоиш мувофиқ буд», бо натиҷаҳои Segoush ва Nakhoni пурра мувофиқат намекунад.

Оё бирёнкунӣ воқеан паклитаксели нав ҳосил кард?

Таҳқиқот ба ин савол ҷавоби қатъӣ намедиҳад. Афзоиши моддаи хроматографӣ пас аз бирёнкунӣ метавонад натиҷаи ҳадди ақал чор раванд бошад:

• Вайроншавии сохтори ҳуҷайра ва осон шудани экстраксия,
• Озод шудани ҳавзҳои таксании баста ё дастнорас,
• Ғайрифаъол шудани ферментҳои вайронкунандаи таксан бо гармӣ,
• Табдили кимиёвии як ҳосилаи таксан ба дигараш.

Ғайр аз ин, талафи намӣ ва дигар моддаҳои бухоршаванда ҳангоми бирёнкунӣ метавонад ба баланд шудани зоҳирии консентратсияе, ки ба вазни хушк ҳисоб шудааст, мусоидат кунад. Аммо таҳқиқот массаи умумии хушк ё тавозуни намиро пеш ва пас аз бирёнкунӣ пешниҳод накардааст, бинобар ин андозаи ин таъсир ҳисоб карда намешавад.

Барои нишон додани ташаккули молекулаи нав бояд тавозуни массаи ҳамаи таксанҳо, маҳсулоти мобайнӣ ва маҳсулоти вайроншавӣ пеш ва пас аз бирёнкунӣ якҷоя пайгирӣ карда шавад. Таҳқиқоти ҳозира танҳо сигналҳои ниҳоии ченшавандаи паклитаксел ва Баккатин III-ро муқоиса мекунад.

Шакли 3: Хроматограммаи иловаи стандарт

Шакли 3 хроматограммаҳои намунаи бирёншудаи Eshkevar-ро пеш аз иловаи стандарт ва пас аз илова кардани 50 ng/g стандарти омехта нишон медиҳад.

Пас аз иловаи стандарт баланд шудани ду қулла дар минтақаҳои ҳадаф нишон медиҳад, ки пайвастагиҳои ченшуда дар ин вақтҳои нигоҳдорӣ бо стандартҳои ҳадаф мувофиқанд.

Аммо шарҳи шакл қуллаи 1-ро паклитаксел ва қуллаи 2-ро Баккатин III меномад. Дар шароити усул бошад, Баккатин III дар 3,0 дақиқа ва паклитаксел дар 4,5 дақиқа мебарояд. Дар шакл қуллаи якум тақрибан 3,0 ва қуллаи дуюм тақрибан 4,5 дақиқа аст. Аз ин рӯ, агар матни усул асос гирифта шавад, номҳои қуллаҳо дар шарҳи шакл баръакс навишта шудаанд.

Арзиши эҳтимолии баргҳои фундуқ ҳамчун манбаъ

Азбаски сатҳҳои баландтарини таксанҳо дар баргҳо пайдо шудаанд, таҳқиқот биомассаи барги боғҳои фундуқро ҳамчун манбаи эҳтимолии табиии таксан арзёбӣ мекунад.

Аммо «консентратсияи баланди аналитикӣ» ва «манбаи аз ҷиҳати саноатӣ муносиб» як чиз нестанд. Барои арзёбии саноатӣ инчунин:

• Биомассаи умумии барг,
• Вақти ҷамъоварӣ ва тағйироти мавсимӣ,
• Самаранокии ҷудокунии пок,
• Тасдиқи воқеии ҳувияти таксанҳо,
• Арзиши истеҳсолот,
• Таъсири экологӣ,
• Тағйирёбии байни партияҳо,
• Покӣ ва меъёрҳои сифати фармасевтӣ бояд арзёбӣ шаванд.

Ин таҳқиқот ин ҷанбаҳоро чен накардааст; танҳо сигналҳои HPLC-UV дар намунаҳои муайян муқоиса шудаанд.

Таҳқиқот дар бораи истеъмоли фундуқ ва саратон чӣ нишон медиҳад?

Дар бахши «татбиқи амалӣ»-и мақола аз хусусиятҳои зиддисаратонии паклитаксел ва Баккатин III баромада, гуфта мешавад, ки дохил кардани фундуқ ба сабади ғизоӣ метавонад ташвиқ карда шавад.

Аммо дар таҳқиқот:

• Инсон ё ҳайвони таҷрибавӣ бо фундуқ ғизо дода нашудааст.
• Ҷаббиши паклитаксел аз фундуқ чен нашудааст.
• Устувории пас аз ҳозима таҳқиқ нашудааст.
• Сатҳи таксан дар хун ё бофта муайян нашудааст.
• Ҳуҷайраи саратон, модели варам ё натиҷаи клиникӣ таҳқиқ нашудааст.
• Бехатарии ғизоӣ ё миқдори муассири истеъмол арзёбӣ нашудааст.

Аз ин рӯ, аз ин додаҳо наметавон хулоса кард, ки «хӯрдани фундуқ табобати паклитаксел медиҳад», «фундуқи бирёншуда саратонро пешгирӣ мекунад» ё «аз сабаби таксанҳо бояд бештар фундуқ истеъмол кард».

Бояд дар хотир дошт, ки ин таҳқиқот дар бораи тақсимоти аналитикии пайвастагиҳо дар бофтаҳои растанӣ мебошад, на дар бораи истеъмоли ғизо.

Аҳамияти таҳқиқот аз дидгоҳи гузашта

Дар таҳқиқоти пешина дар бораи мавҷудияти таксанҳо дар барг, пӯсти сахт ва қисми дохилии фундуқ натиҷаҳои гуногун гузориш шудаанд. Баъзе таҳқиқот дар мағзи фундуқ паклитаксел ё Баккатин III-ро ошкор накардаанд; баъзеи дигар бошад, махсусан дар фраксияҳои дорои пӯсти қаҳваранг сатҳҳои паст чен кардаанд.

Таҳқиқоти ҳозира пешниҳод мекунад, ки фарқи натиҷаҳо метавонад аз навъи генетикӣ, матритсаи намуна, мавҷудияти пӯст, техникаи экстраксия ва ҳассосияти аналитикӣ вобаста бошад.

Аҳамияти имрӯзии таҳқиқот

Саҳми аналитикии таҳқиқот пешниҳод кардани равиши ултрасадо-DLLME-HPLC мебошад, ки гуфта мешавад дар камтар аз як соат нисбат ба равандҳои тӯлонии безараргардонии равған ва мацератсия анҷом меёбад.

Бо ҳаҷми хурди 1-октанол тақрибан 10–13 маротиба ғанигардонӣ метавонад чен кардани сатҳҳои пастро бо детектори UV, ки нисбат ба масс-спектрометрия интихобнокии камтар ва дастрасии бештар дорад, осон кунад.

Бо вуҷуди ин, бартарии амалии усул бояд на танҳо аз рӯи вақт ва истеъмоли ҳалкунанда, балки ҳамчунин бо хавфи мусбати бардурӯғ, интихобнокии байни матритсаҳо ва такроршавандагӣ дар лабораторияҳои дигар арзёбӣ карда шавад.

Талабот барои таҳқиқоти оянда

• Натиҷаҳои HPLC-UV бояд бо LC-MS/MS мустақилона тасдиқ шаванд.
• Барои паклитаксел ва Баккатин III ионҳои маҳсулот ва таносуби ионҳо нишон дода шаванд.
• Арзишҳои хеле баланди Баккатин III дар баргҳо дар лабораторияҳои дигар такрор карда шаванд.
• Такрорҳои биологӣ аз дарахтҳо, боғҳо ва мавсимҳои ҳосили мустақил истифода шаванд.
• Ҳудуди калибронӣ ва воҳидҳо дар тамоми матн ва ҷадвалҳо муттасил гарданд.
• Ҳувияти қуллаҳои Шакли 3 равшан карда шавад.
• Таркиби Carrez II равшан ва тасдиқ карда шавад.
• Муайян карда шавад, ки вақти ултрасадо 15 ё 30 дақиқа буд.
• Ҳаҷми ибтидоии этанол барои ҳар матритса дар протоколи ниҳоӣ равшан навишта шавад.
• Пеш ва пас аз бирёнкунӣ тавозуни намӣ ва массаи хушк тартиб дода шавад.
• Тавозуни массаи паклитаксел, Баккатин III ва таксанҳои вобаста пурра бароварда шавад.
• Ҳосилаҳои таксан, ки ҳангоми бирёнкунӣ пайдо ё гум мешаванд, бо таҳлили ғайримақсаднок таҳқиқ шаванд.
• Таъсири ҳарорат ва давомнокии гуногун алоҳида санҷида шавад.
• Таъсири ҳарорат ва давомнокии нигоҳдорӣ ба устувории таксанҳо арзёбӣ шавад.
• Барои даъвои манбаи саноатӣ таҳлили ҷудокунӣ, поксозӣ, арзиш ва таъсири экологӣ анҷом дода шавад.

Ҷиҳатҳои қавии таҳқиқот

• Панҷ навъи фундуқ ва панҷ бофта/матритсаи гуногун дар як таҳқиқот муқоиса шудаанд.
• Қисмҳои хӯрданӣ ва ғайрихӯрдании фундуқ якҷоя арзёбӣ шуданд.
• Мағзи хом ва бирёншуда мустақим муқоиса шуданд.
• Тағйирёбандаҳои DLLME бо тарҳи композитии марказӣ ва усули сатҳи ҷавоб оптимизатсия шуданд.
• Таъсири мутақобилаи этанол, 1-октанол, pH ва намак таҳқиқ шудааст.
• Нишон дода шуд, ки ниёзи ибтидоии ҳалкунанда барои матритсаҳо яксон нест.
• Барои усул LOD, LOQ, RSD, барқароршавӣ ва омили ғанигардонӣ гузориш шудааст.
• Навъ, матритса ва таъсири навъ × матритса бо MANOVA якҷоя арзёбӣ шудаанд.
• Ҳангоми баробар набудани дисперсия Welch ANOVA ва Games-Howell истифода шуданд.
• Бо хроматограммаи иловаи стандарт баланд шудани сигнал дар минтақаҳои қуллаи ҳадаф нишон дода шуд.
• Натиҷаҳо барои ҳамаи матритсаҳо ва навъҳо дар ҷадвали ададӣ пешниҳод шуданд.

Маҳдудиятҳои таҳқиқот

• Таҳқиқот preprint аст ва аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст.
• Ҳувияти пайвастагӣ асосан ба муқоисаи вақти нигоҳдории HPLC-UV такя мекунад.
• LC-MS/MS ё усули мустақили сохторӣ истифода нашудааст.
• Арзишҳои хеле баланди Баккатин III бо техникаи ортогоналӣ тасдиқ нашудаанд.
• Шумораи намунаҳои мустақили биологӣ равшан нишон дода нашудааст.
• Маълум нест, ки се тазриқ такрори техникӣ аст ё намунаи мустақил, ки барои тафсири оморӣ муҳим мебошад.
• Намунаҳо танҳо аз минтақаи муайяни Эрон ҷамъоварӣ шудаанд.
• Соли ҳосил, марҳилаи пухтарасӣ ва синни дарахт муфассал дода нашудааст.
• Таъсири хушккунии офтобӣ ба миқдори таксанҳо арзёбӣ нашудааст.
• Ҳарорати воқеии дохилии намуна ва талафи намӣ ҳангоми бирёнкунӣ чен нашудааст.
• Бирёнкунӣ танҳо бо як ҳарорат ва як вақт санҷида шудааст.
• Маълум нашудааст, ки афзоиши паклитаксел ва Баккатин III аз ташаккули нав ё аз экстраксияи беҳтар аст.
• Маҳсулоти вайроншавӣ ва табдили пас аз бирёнкунӣ таҳлил нашудаанд.
• Таъсири бирёнкунӣ дар ҳамаи навъҳо як самт надорад.
• Баъзе консентратсияҳо байни матн ва Ҷадвали 2 фарқ мекунанд.
• Вақти нигоҳдории бахши усул бо номгузории қуллаҳои Шакли 3 баръакс менамояд.
• Ҳудуди хаттӣ байни матн ва ҷадвалҳо хеле фарқ мекунад.
• Воҳидҳои ng/g ва ng/mL барои LOD дар бахшҳои гуногун омехта шудаанд.
• Таркиби Carrez II равшан нест.
• Вақти ултрасадо дар як бахш 30 ва дар бахши дигар 15 дақиқа навишта шудааст.
• Байни протоколи умумии экстраксия ва ҳаҷмҳои хоси этанол барои матритса фарқ вуҷуд дорад.
• Ибораи «дар таҳқиқот дода истифода нашуд» дар бахши дастрасии додаҳо бо додаҳои таҷрибавии пешниҳодшуда мувофиқат намекунад.
• Истеъмоли фундуқ, биодастрасӣ ё натиҷаи клиникии саратон таҳқиқ нашудааст.

Таҳқиқот чӣ мегӯяд?

• Сигналҳои паклитаксел ва Баккатин III дар бофтаҳои гуногуни панҷ навъи фундуқи эронӣ чен шудаанд.
• Навъи матритса дар тақсимоти ду таксан нисбат ба таъсири навъ муайянкунандаи қавитар мебошад.
• Баргҳо барои ҳар ду пайвастагӣ сатҳҳои баландтарини умумиро нишон доданд.
• Баккатин III дар бисёр бофтаҳо нисбат ба паклитаксел дар миқдори хеле баландтар гузориш шудааст.
• Пӯсти сабзи берунӣ ва пӯсти сахт низ таксани ченшаванда доранд.
• Миқдори таксан дар мағзи хом байни навъҳо хеле фарқ мекунад.
• Бирёнкунӣ дар бисёр комбинатсияҳои навъ-пайвастагӣ миқдори ченшавандаро зиёд кардааст.
• Таъсири бирёнкунӣ аз навъ ва пайвастагии ҳадаф вобаста аст.
• 600 µL этанол, 60 µL 1-октанол, 1 g NaCl ва pH 6,5 ҳамчун шароити беҳтарини DLLME гузориш шудаанд.
• Усули пешниҳодшуда тақрибан 92–99 фоиз барқароршавӣ ва тақрибан 10–13 маротиба ғанигардонӣ таъмин кардааст.

Таҳқиқот чӣ намегӯяд?

• Нишон намедиҳад, ки хӯрдани фундуқ саратонро пешгирӣ ё табобат мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки паклитаксели фундуқ аз рӯдаи ҳозима ҷаббида мешавад.
• Исбот намекунад, ки фундуқи бирёншуда аз ҷиҳати саломатӣ аз фундуқи хом беҳтар аст.
• Нишон намедиҳад, ки бирёнкунӣ дар ҳар навъ паклитаксел ва Баккатин III-ро зиёд мекунад.
• Синтези паклитаксели нав ҳангоми бирёнкунӣ бевосита исбот нашудааст.
• Исбот намекунад, ки афзоиши Баккатин III аз табдили паклитаксел бармеояд.
• Ҳувияти қуллаҳои ченшуда бо масс-спектрометрия тасдиқ нашудааст.
• Нишон намедиҳад, ки баргҳои фундуқ манбаи аз ҷиҳати иқтисодӣ татбиқшавандаи фармасевтӣ мебошанд.
• Нишон намедиҳад, ки натиҷаҳои панҷ навъи Эрон ба ҳамаи навъҳои фундуқ дар ҷаҳон татбиқ мешаванд.
• Нишон намедиҳад, ки усули пешниҳодшуда дар лабораторияҳои дигар мустақилона тасдиқ шудааст.

Усул ва натиҷаҳои таҳқиқот

Хулосаи техникии тарҳи таҷрибавӣ

Шароити оптимизатсияшудаи DLLME

Омори модели сатҳи ҷавоб

Хулосаи валидатсияи усули HPLC

Тақсимоти умумӣ аз рӯи матритса

Хулосаи натиҷаҳои ANOVA ва MANOVA

Паёмҳои техникии шаклҳо

Арзёбии ҷамъбастии натиҷаҳои техникӣ

• Омили қавитарини сатҳи ду таксан навъи бофта ё матритсаи фундуқ буд.
• Таъсири навъ махсусан барои паклитаксел назаррас аст.
• Таъсири қавии навъ × матритса таърифи як «навъи дорои таксани аз ҳама баланд»-ро манъ мекунад.
• Баргҳо сатҳҳои баландтарини умумии ҳам паклитаксел ва ҳам Баккатин III-ро нишон доданд.
• Миқдори Баккатин III дар барг, пӯсти берунӣ ва пӯсти сахт аз паклитаксел хеле баландтар аст.
• Сатҳи паклитаксел ва Баккатин III дар мағзи хом байни навъҳо хеле фарқ кард.
• Пас аз бирёнкунӣ паклитаксел дар се навъ афзоиш ва дар ду навъ коҳиш ёфт.
• Баккатин III дар чор навъ аз сатҳи ошкорнашаванда ба сатҳи ченшаванда гузашт; дар Segoush коҳиш ёфт.
• Додаҳо нишон медиҳанд, ки таъсири бирёнкунӣ яксамта ва дар ҳамаи навъҳо яксон нест.
• Усули DLLME-HPLC омодасозии кӯтоҳи намуна ва тақрибан 10–13 маротиба ғанигардониро таъмин кардааст.
• Натиҷаҳои валидатсия иҷрои аналитикии қобили қабулро гузориш мекунанд; аммо номувофиқии ҷузъиёти усул такроршавандагиро маҳдуд мекунад.

Қайд оид ба манбаъ ва усул

Ин мундариҷа ба таҳқиқоти “Monitoring of Paclitaxel and Baccatin III in different hazelnut matrices and varieties: Investigation of roasting effects in hazelnut kernel using an efficient microextraction method coupled with liquid chromatography”, ки аз ҷониби Mohammad Sina, Seyedeh Zahra Nasirifar, Sahar Shamsifar, Seyede Marzieh Hosseini, Marzieh Kamankesh ва Abdorreza Mohammadi омода шудааст, асос ёфтааст.

Таҳқиқот як мақолаи таҷрибавии preprint мебошад, ки сатҳи паклитаксел ва Баккатин III-ро дар намунаҳои барг, пӯсти сабзи берунӣ, пӯсти сахт, мағзи хом ва мағзи бирёншудаи панҷ навъи фундуқи Эрон чен кардааст.

Дар матн ошкоро огоҳии “This preprint research paper has not been peer reviewed” мавҷуд аст. Аз ин рӯ, таҳқиқот аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст. Дар PDF маълумоти тасдиқшудаи қабул ба маҷалла ё нашри ниҳоии ҳамтоёндида вуҷуд надорад.

Таҳлил ба экстраксияи ибтидоии бо ултрасадо дастгиришаванда, таҳшини Carrez, микроэкстраксияи дисперсивии моеъ-моеъ ва ченкунии HPLC-UV асос ёфтааст. Муайянкунии пайвастагӣ асосан бо муқоисаи вақти нигоҳдорӣ бо стандартҳои сертификатсияшуда ва таҷрибаҳои иловаи стандарт анҷом дода шудааст.

Дар таҳқиқот масс-спектрометрия ё усули мустақили дигари тасдиқи сохтор истифода нашудааст. Аз ин рӯ, махсусан натиҷаҳои баландтарини Баккатин III дар баргҳо бояд бо усулҳои интихобкунандатаре мисли LC-MS/MS тасдиқ шаванд.

Дар бахшҳои гуногуни PDF оид ба ҳудуди хаттии усул, баъзе вақтҳои нигоҳдорӣ/номҳои қулла, таркиби Carrez II, вақти ултрасадо ва ҳаҷми ибтидоии этанол номувофиқӣ мавҷуд аст.

Таҷрибаи бирёнкунӣ танҳо бо як шароит — 150°C барои як соат — маҳдуд буд. Муайян нашудааст, ки афзоиши пас аз бирёнкунӣ аз ташаккули нави таксан, озод шудани пайвастагиҳои баста, ғайрифаъолшавии ферментҳо, талафи намӣ ё осон шудани экстраксия бармеояд.

Таҳқиқот клиникӣ нест. Дар инсонҳое, ки фундуқ мехӯранд, ҷаббиши паклитаксел, хавфи саратон, ҷавоби табобат ё бехатарӣ арзёбӣ нашудааст. Сатҳҳои ченшудаи таксанҳо исбот намекунанд, ки фундуқ метавонад ҳамчун табобати саратон ё ғизои муҳофизатӣ истифода шавад.

Муаллифон изҳор кардаанд, ки ихтилофи манфиатҳо надоранд. Ҳамчунин гуфта шудааст, ки барои беҳтар кардани забон, интихоби калима ва хондании матн ChatGPT истифода шуда, мундариҷаи илмӣ, таҳлили додаҳо ва натиҷаҳо аз ҷониби муаллифон таҳия ва бозбинӣ шудаанд.

Ин мақолаи тоҷикӣ танҳо ба протоколҳои таҷрибавӣ, ҷадвалҳо, шаклҳо, натиҷаҳои ададӣ ва муҳокимаи муаллифони preprint-и боршуда асос ёфтааст. Даъвоҳои дар таҳқиқот набуда оид ба фоидаи клиникӣ, пешгирии саратон, тавсияи истеъмол, муваффақияти истеҳсолоти саноатӣ ё манбаи тасдиқшудаи фармасевтӣ илова нашудаанд.