Utafiti huu unachunguza mbinu ya kutengeneza jibini tendaji ambayo Lactobacillus plantarum (Lp) hulindwa mapema kwa whey protein isolate nanofibrils (WPNFs), kisha huwekwa katika awamu ya maji ya ndani ya emulsioni maradufu ya W1/O/W2 maji-mafuta-maji, na emulsioni hii yenye probiotiki hutumika kama kiini cha ndani katika uchapishaji wa chakula wa 3D wa koaksia. Emulsioni maradufu ya W1/O/W2 ni mfumo wa enkapsulesheni wa tabaka nyingi unaozungusha awamu ya maji ya ndani W1 yenye probiotiki kwa tabaka la mafuta na kusambaza muundo huu ndani ya awamu ya pili ya maji ya nje W2. Katika mfumo ulioboreshwa, %4,0 PGPR, %50 W1, %60 awamu ya mafuta na %5,0 WPI katika awamu ya nje zilitumika; uhai wa Lp ndani ya emulsioni ulihifadhiwa kwa %90,44 baada ya siku 14 katika 4 °C. Katika uchapishaji wa koaksia, emulsioni ilitumika kama kiini cha ndani na jibini lililosindikwa F20 lililorekebishwa kwa WPNF likatumika kama muundo wa nje; katika sampuli zilizochapishwa idadi ya probiotiki ilibaki takriban katika kiwango cha 6,78–8,06 log10 CFU/g na upotovu wa umbo baada ya siku 14 ulikuwa −%3,5 ± 1,5 pekee. Matokeo yanaonyesha kuwa emulsioni maradufu pamoja na uchapishaji wa koaksia wa 3D vinaweza kutoa mfumo wa uhandisi wa chakula unaoweza kulinda seli za probiotiki dhidi ya msongo wa kimitambo na wa mazingira; hata hivyo, utafiti huu uko katika kiwango cha maabara na haujajaribu athari za kiafya za kliniki wala mafanikio ya uzalishaji wa viwandani.

Emulsioni Maradufu ya W1/O/W2 ni Nini?

Emulsioni maradufu ya W1/O/W2 ni mfumo wa emulsioni wenye sehemu nyingi ambapo matone madogo ya maji ya ndani hufunikwa kwanza ndani ya awamu ya mafuta, kisha matone ya W1/O yaliyoundwa husambazwa ndani ya awamu ya pili ya maji ya nje W2; katika utafiti huu probiotiki Lactobacillus plantarum iliwekwa katika awamu ya ndani kabisa W1 na kutenganishwa kimwili na msongo wa mazingira kupitia tabaka la mafuta na awamu ya nje.

Faida kuu ya mpangilio huu ni uwezo wake wa kupunguza mgusano wa moja kwa moja kati ya sehemu ya kibayolojia yenye upendeleo kwa maji na matriksi ya nje ya chakula. Katika utafiti huu sifa hiyo ilitumika si kwa uhifadhi pekee bali pia kulinda dhidi ya nguvu za ukataji wa kimitambo ndani ya nozeli nyembamba ya koaksia, joto na hali kali za pH.

Kwa nini probiotiki haikuchanganywa moja kwa moja na jibini?

Chanzo kinaeleza kuwa jibini la Cheddar linaweza kufaa kama kibeba probiotiki, lakini mgusano wa moja kwa moja wa probiotiki na matriksi ya jibini unaweza kusababisha matatizo ya ubora kama hidrolisisi ya protini na mabadiliko ya harufu. Mantiki ya mbinu ya uchapishaji wa koaksia ni kuweka probiotiki katika kiini cha ndani na kutumia ganda la jibini kama muundo wa nje wa kinga.

Kwa hiyo mfumo unajaribu kutatua kwa wakati mmoja matatizo mawili tofauti ya kihandisi:

• kuunda awamu ya ndani inayoweza kuweka probiotiki hai,
• kutengeneza awamu ya nje ya jibini inayoweza kuhifadhi umbo lake baada ya uchapishaji wa 3D.

Whey Protein Nanofibrils Hulindaje Probiotiki?

WPNFs ni whey protein nanofibrils zinazokuwa na chaji chanya katika pH 2,0 na kuingiliana kielektrostatiki na uso wenye chaji hasi wa Lactobacillus plantarum, hivyo kuunda kizuizi halisi cha protini kuzunguka bakteria; picha za TEM zinaonyesha nanofibrili hizi zikiwa zimejifunga kwenye uso wa bakteria.

Utayarishaji wa WPNF

Suluhisho la %5,0 (w/w) WPI lilirekebishwa hadi pH 2,0 na kuchanganywa kwa sumaku kwa dakika 30. Kisha suluhisho lilisentrifujishwa katika 4 °C kwa 9000 r/min kwa dakika 15 na kupitishwa kwenye kichujio cha 0,45 μm.

Filtrati ilihifadhiwa katika 80 °C, 200 rpm kwa saa 10. Mchakato huu uliwezesha protini za WPI kuunda miundo ya fibrila.

Kufunika probiotiki kwa WPNF

Lactobacillus plantarum 1.0665 iliripotiwa kuwa na idadi ya awali ya seli hai ya 9,26 log10 CFU/mL. Seli ziliamilishwa katika kimiminika cha MRS katika 37 °C kwa saa 24; baada ya hatua za kusentrifujisha, kuosha kwa bafa ya fosfati na kusimamishwa tena ndani ya CaCl2, suluhisho la Lp liliongezwa kwenye suluhisho la WPNF kwa uwiano wa 1:49 (v/v).

Mchanganyiko ulivorteksiwa kwa dakika 15 na kuachwa katika halijoto ya chumba kwa saa 1. Katika picha za TEM, uso wa bakteria wa udhibiti ulikuwa laini, ilhali baada ya matumizi ya WPNF fibrila zilionekana wazi kuzunguka uso wa seli.

Chanzo kinaripoti zeta potential ya +27,68 ± 1,52 mV kwa WPNF na −0,38 ± 0,09 mV kwa suspenzi ya bakteria. Chaji hizi zinazokinzana zinaendana na utaratibu wa kielektrostatiki unaounga mkono kujipanga kwa WPNF–bakteria.

Muundo wa emulsioni maradufu

Fructooligosaccharide (FOS) ya %5,0 (w/v) iliongezwa kwenye awamu ya ndani yenye probiotiki. FOS ilitumika kama sehemu ya prebiotiki ili kusaidia bakteria wakati wa uhifadhi.

Katika hatua ya kwanza ya uundaji wa emulsioni, PGPR iliyeyushwa katika mafuta ya zeituni na awamu ya W1 yenye Lp-WPNF ikaongezwa katika awamu hii ya mafuta ili kuunda emulsioni ya W1/O kwa homogenization yenye nguvu kubwa ya ukataji.

Katika hatua ya pili, emulsioni ya W1/O ilihomogenishwa tena na awamu ya nje ya maji W2 yenye WPI ili kutengeneza muundo wa W1/O/W2.

Uundaji Bora Zaidi wa Emulsioni Maradufu Ulibainishwaje?

Katika utafiti, ukubwa wa matone, zeta potential na uthabiti wa uhifadhi vilitathminiwa pamoja, na %4,0 PGPR, %50 awamu ya maji ya ndani, %60 awamu ya mafuta na %5,0 WPI katika awamu ya nje ya maji vikachaguliwa kuwa hali bora kwa mfumo wa W1/O/W2.

Mkusanyiko wa PGPR

PGPR ilipoongezwa kutoka %2,0 hadi %4,0, ukubwa wa matone ya W1/O ulipungua kutoka 1353,3 nm hadi 139,8 nm. Katika %5,0 PGPR ukubwa wa matone uliongezeka tena hadi 545,6 nm.

Zeta potential ya emulsioni iliyotumia %4,0 PGPR iliripotiwa kuwa −35,25 mV na mkusanyiko huu ukachaguliwa kwa majaribio yaliyofuata.

Uwiano wa awamu ya maji ya ndani

Wakati uwiano wa W1 ulikuwa %50, ukubwa wa matone ya W1/O ulifikia thamani ya chini ya 69,08 nm. Katika uwiano wa juu zaidi wa maji, kutotosha kwa emulsifier iliyopo kufunika kikamilifu eneo la uso linalopanuka kulihusishwa na uundaji wa matone makubwa zaidi.

Uwiano wa awamu ya mafuta

Katika emulsioni ya W1/O/W2, awamu ya mafuta ilipokuwa %60 ukubwa wa matone ulipungua hadi 553,01 nm na hali hii ikachaguliwa kwa majaribio yaliyofuata. Iliripotiwa kuwa katika %60–70 awamu ya mafuta hakuna awamu ya seramu iliyotokea wakati wa uhifadhi.

Mkusanyiko wa WPI

Wakati %5,0 WPI ilitumika katika awamu ya nje, ukubwa wa matone ulifikia kiwango cha chini cha 579,4 nm. Kiwango cha chini cha protini kilihusishwa na ufunikaji usiotosha wa kiolesura, na kiwango cha juu zaidi kilihusishwa na uwezekano wa protein aggregation au depletion flocculation.

Uthibitisho wa hadubini

Katika uchambuzi wa CLSM, Lp ilionyeshwa kwa bluu kwa DAPI, WPNFs kwa kijani kwa Nile blue na mafuta ya zeituni kwa nyekundu kwa Nile Red. Katika picha zilizounganishwa, kuingiliana kwa ishara hizi ndani ya matone ya emulsioni na kutokuwepo kwa ishara ya bluu ya bakteria katika awamu ya nje W2 kunaunga mkono kuwa probiotiki ilihifadhiwa katika awamu ya ndani.

Mfumo wa W1/O/W2 Ulilinda Uhai wa Probiotiki kwa Kiwango Gani?

Emulsioni maradufu ya W1/O/W2 ilitoa uhai wa juu zaidi kwa kiasi kikubwa kuliko seli za Lp zisizolindwa chini ya hali za uhifadhi, joto na pH kali; baada ya siku 14 za uhifadhi katika 4 °C, uhai wa probiotiki ulihifadhiwa kwa %90,44.

Katika siku 14 za uhifadhi, kiwango cha seli hai kilipungua kutoka 8,92 log CFU/g hadi 8,48 log CFU/g. Kinyume chake, kupungua katika kikundi cha udhibiti kisicholindwa kulikuwa kubwa zaidi.

Utafiti pia unapendekeza kuwa tabaka la kati la mafuta katika emulsioni maradufu huunda kizuizi halisi dhidi ya msongo wa pH kwa kuzuia asidi au besi kutoka awamu ya nje ya maji kufikia awamu ya ndani W1.

Chanzo kina tofauti ndogo lakini muhimu ya kuripoti hapa: katika sehemu ya mbinu, vipimo vya msongo wa pH vinaelezwa kuwa pH 2,0 na 11,0, wakati Kielelezo 4 na maandishi ya matokeo yanaonyesha pH 2,0 na 12,0. Kwa hiyo, haiwezekani kubainisha kwa uhakika kutoka PDF ni hali gani ya alkali iliyotumika kwa kweli.

Ulinzi dhidi ya joto

Katika sehemu ya mbinu, hali za majaribio zimetolewa kuwa 65 °C kwa dakika 30 na 90 °C kwa sekunde 15. Hata hivyo, katika maandishi ya matokeo sentensi moja inasema kuwa kikundi cha udhibiti kilionyesha uhai wa %9,87 baada ya “60 °C kwa dakika 30”. Thamani hii ya joto haiendani na mbinu na Kielelezo 4; data haijasahihishwa kimya kimya hapa.

Sentensi hiyo hiyo inaripoti uhai wa %73,53 katika emulsioni ya W1/O/W2. Mwelekeo wa jumla wa majaribio unaunga mkono kuwa emulsioni maradufu hutoa uhai wa juu kuliko seli zisizolindwa chini ya msongo wa joto.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Reolojia ya kiini cha ndani

Kwa kuwa katika uchapishaji wa koaksia wa 3D kiini cha ndani lazima kipite kwenye nozeli nyembamba yenye kipenyo cha 0,4 mm, mnato mdogo na tabia ya shear-thinning ni muhimu.

Mnato unaoonekana wa emulsioni za W1/O/W2 zenye awamu ya mafuta ya %60 na %70 ulipungua sana kadiri shear rate ilivyoongezeka. Tabia hii ya shear-thinning inaonyesha kuwa nyenzo inaweza kuwa yenye mtiririko ndani ya nozeli.

Katika masafa yote ya frequency, storage modulus \(G'\) ilibaki juu kuliko loss modulus \(G''\). Hii inaonyesha kuwa emulsioni, ingawa ni yenye mtiririko, ina tabia dhahiri ya mtandao elastiki/nusu-imara.

Kwa kuwa emulsioni yenye awamu ya mafuta ya %60 ilionyesha modulus na mnato wa chini kuliko ile ya %70, ilionekana kufaa zaidi kwa nozeli nyembamba ya koaksia.

Kiini cha nje: jibini lililosindikwa F20

Jibini safi la Cheddar lilionekana kuwa gumu mno kwa uchapishaji wa moja kwa moja. Kwa hiyo, suluhisho la %5 WPNF liliongezwa kwa Cheddar iliyoyeyushwa kwa uwiano tofauti na sampuli za F10, F20, F30 na F40 zikatayarishwa.

F20 ni fomula ya jibini lililosindikwa inayotumia sehemu ya %20 ya suluhisho la WPNF. Maelezo haya hayamaanishi kuwa kuna %20 WPNF safi katika dutu kavu ya jibini la mwisho.

Katika vipimo vya dynamic shear recovery, strain ndogo (%1) iliwakilisha hali tulivu, na strain kubwa (%200) iliwakilisha hali ya mtiririko ndani ya nozeli. Chini ya strain kubwa, \(G'\) na \(G''\) zilipungua haraka; strain iliporudishwa hadi %1, moduli zilirejea haraka.

F20 ilichaguliwa na watafiti kama fomula iliyotoa uwiano bora zaidi kati ya urahisi wa extrusion na urejeaji wa muundo baada ya uchapishaji.

Athari ya joto kwa kiini cha nje

Sampuli za jibini zilichunguzwa kati ya 25–70 °C. \(G'\) na \(G''\) ziliongezeka kwanza, zikafikia kiwango cha juu karibu na 35 °C, kisha zikapungua kutokana na kuyeyuka kwa mafuta ya jibini na kulegea kwa matriksi ya protini.

Kwa uchapishaji, kiini cha nje kilitolewa kwa extrusion katika 45 °C.

Utendaji wa uchapishaji wa F20

Katika Kielelezo 6, uchapishaji wa Cheddar na F10 ulionyesha mistari iliyokatika na uso usio laini, wakati F20 na F30 zilitengeneza mistari endelevu zaidi. F40 ilikuwa laini kupita kiasi na haikuweza kuhifadhi umbo lake vya kutosha.

Mfano wa waridi uliochapishwa kwa kutumia F20 ulionyesha uso laini, mipaka iliyo wazi na uhifadhi wa umbo la pande tatu. Chanzo kinatoa vipimo vya sampuli hii kuwa urefu wa 51,41 mm, upana wa 44,91 mm na kimo cha 39,20 mm.

Kwa Nini Uchapishaji wa Koaksia wa 3D Ulifanikiwa Zaidi Kuliko Uchapishaji wa Mseto?

Kwa sababu uchapishaji wa koaksia wa 3D hutoa kwa extrusion kwa wakati mmoja emulsioni ya probiotiki yenye mnato mdogo na matriksi ya jibini inayobeba umbo kama mitiririko tofauti ya ndani na nje badala ya kuvichanganya, uliweza kuongeza mzigo wa probiotiki huku ukihifadhi usaidizi wa kimitambo wa muundo wa nje wa jibini.

Uchapishaji wa mseto

Katika mbinu ya mseto, emulsioni ya W1/O/W2 ilichanganywa moja kwa moja na jibini la Cheddar kwa uwiano wa %3, %5 au %7.

Nyenzo zenye %3 na %5 emulsioni ziliweza kutolewa kwa extrusion, lakini vipande vya mchemraba vilivyochapishwa vilibadilika umbo haraka. Sehemu za chini zilitanuka na katikati ikaporomoka.

Mchanganyiko wenye %7 emulsioni haukuweza kuchapishwa kwa mafanikio kwa sababu haukuweza kubeba tabaka zilizokusanywa juu kwa juu.

Uchapishaji wa koaksia

Katika mfumo wa koaksia, kipenyo cha nozeli ya ndani kilikuwa 0,4 mm na kiwango cha mtiririko wa emulsioni ya ndani kikawekwa 0,08 mL/min. Kipenyo cha nozeli ya nje kilikuwa 1,05 mm na kasi ya uchapishaji wa jibini ilikuwa 25 mm/s.

Nyenzo ya nje F20 ilitolewa kwa extrusion katika 45 °C huku awamu ya ndani W1/O/W2 ikitolewa kwa wakati mmoja katika halijoto ya chumba.

Katika chanzo, kutovuja nje kwa emulsioni ya ndani iliyopakwa rangi nyekundu kwa rangi ya chakula kunawasilishwa kama ushahidi wa kuona kwamba tabaka la nje la F20 lilizunguka kiini cha ndani kwa mafanikio.

Usahihi wa umbo

Katika sampuli za koaksia, baada ya siku 14 kulionekana tu kupungua kidogo kwa kingo; kusambaa kwa sehemu ya chini au kuporomoka kwa tabaka kulikoonekana katika sampuli za mseto hakukuonekana.

Je, Uchapishaji wa 3D Uliua Seli za Probiotiki?

Seli za probiotiki zisizolindwa zilipoteza uhai kwa kiasi kikubwa wakati nozeli ya ndani ya 0,4 mm ilipotumika, ilhali uhai wa seli zilizofunikwa kwa emulsioni ya W1/O/W2 ulibaki juu ya %95 baada ya uchapishaji wa mseto na wa koaksia; matokeo haya yanaonyesha kuwa emulsioni ina jukumu muhimu la kinga dhidi ya msongo wa shear wakati wa extrusion.

Katika kikundi cha udhibiti kilichoundwa kwa kupitisha suluhisho la probiotiki moja kwa moja kwenye nozeli ya koaksia ya 0,4 mm, uhai uliripotiwa kuwa %55,23 pekee.

Kwa upande mwingine, katika probiotiki zilizolindwa na W1/O/W2, viwango vya uhai baada ya uchapishaji wa mseto na wa koaksia havikutofautiana kwa kiwango muhimu kitakwimu.

Mwisho wa uhifadhi, idadi ya bakteria hai katika sampuli zilizochapishwa ilibaki katika kiwango cha **6,78–8,06 log10 CFU/g**.

Chanzo kinalinganisha kiwango hiki na viwango vinavyoonekana kuwa vya kutosha kwa vyakula vya probiotiki; hata hivyo, matokeo haya ya uhai wa kimikrobiolojia hayathibitishi moja kwa moja kuwa bidhaa inatoa manufaa ya kiafya ya kliniki kwa binadamu.

Uhifadhi wa harufu

Katika uchambuzi wa pua ya kielektroniki, Cheddar, F20, jibini la probiotiki lililochapishwa kwa koaksia na emulsioni ya W1/O/W2 vililinganishwa.

Profaili za rada za F20 na bidhaa iliyochapishwa kwa koaksia zilipatikana kuwa karibu. Kwa upande mwingine, profaili ya harufu ya emulsioni ya kiini cha ndani ilikuwa tofauti wazi.

Katika uchambuzi wa PCA, PC1 ilieleza %76,4 ya utofauti wote na PC2 %13,3. Hivyo, vipengele viwili vya kwanza kwa pamoja viliwakilisha %89,7 ya utofauti wote.

Kuwekwa karibu katika kundi moja kwa sampuli za F20 na koaksia katika nafasi ya PCA kunaunga mkono tafsiri kwamba tabaka la nje la jibini linaweza kuficha athari ya harufu ya emulsioni ya ndani.

Hitimisho zinazoungwa mkono na utafiti

• WPNF inaweza kuunda muundo wa kinga wa kimwili kwenye uso wa seli za Lp.
• Seli za probiotiki zinaweza kuhifadhiwa katika awamu ya maji ya ndani ya emulsioni maradufu ya W1/O/W2.
• Emulsioni maradufu iliyoboreshwa inaweza kudumisha uhai wa juu wa Lp kwa siku 14.
• Mfumo wa W1/O/W2 unaweza kutoa ulinzi dhidi ya joto, pH na msongo wa extrusion.
• Jibini lililosindikwa F20 linaweza kutumika kama muundo wa nje unaofaa katika uchapishaji wa koaksia wa 3D.
• Uchapishaji wa koaksia ulitoa uthabiti wa juu zaidi wa kijiometri kuliko uchapishaji wa mseto.
• Bidhaa iliyochapishwa kwa koaksia ilionyesha upotovu mdogo wa umbo katika siku 14 za uhifadhi wa baridi.
• Matriksi ya nje ya jibini ilipunguza kuakisiwa kwa profaili ya harufu ya emulsioni ya ndani kwenye bidhaa ya mwisho.

Hitimisho ambazo utafiti hauungi mkono

• Faida ya kiafya ya kliniki ya bidhaa kwa binadamu haijaonyeshwa.
• Ukikoloni wa probiotiki katika utumbo haukupimwa katika jaribio hili.
• Maisha ya rafu ya muda mrefu zaidi ya siku 14 hayajathibitishwa.
• Uzalishaji endelevu wa kiwango cha viwandani haujajaribiwa.
• Hakuna jopo la hisia la watumiaji lililofanywa; tathmini ya harufu inategemea pua ya kielektroniki.
• Uwezekano wa kiuchumi au gharama ya uzalishaji wa kibiashara haijahesabiwa.
• Haijathibitishwa kuwa uchapishaji wa koaksia utatoa mafanikio sawa kwa fomula zote za jibini.

Kutokuwa na uhakika ndani ya chanzo

Makala ina kutokulingana kwa taarifa kati ya 11,0 na 12,0 katika hali za msongo wa pH, na kati ya 60 °C na 65 °C katika sehemu ya msongo wa joto. Aidha, sentensi inayosema vipimo vya uchapishaji wa koaksia “havikutofautiana kwa maana” na muundo huku ikiandika P<0,05 ina mkanganyiko wa ndani wa kitakwimu. Maandishi ya Verianla hayasahihishi kimya kimya thamani hizi, bali yanaacha kutokuwa na uhakika wa chanzo kuonekana.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Kichwa asili: Encapsulation of probiotics in W1/O/W2 emulsion for coaxial 3D printing probiotic-riched cheese products.

Waandishi: Yupeng Qi, Yuhe Wang, Jiali Hu, Bo Song, Lei Zhang, Chunhong Liu na Jing Xu.

Waandishi wenza wa kwanza: Yupeng Qi na Yuhe Wang.

Waandishi wa mawasiliano: Chunhong Liu na Jing Xu.

Taasisi: Northeast Agricultural University; Key Laboratory of Agricultural Functional Molecule Design and Utilization of Heilongjiang Province; Key Laboratory of Soybean Biology of Ministry of Education China; Heilongjiang Green Food Science Research Institute.

Jukwaa: SSRN.

SSRN Abstract No.: 6889393.

Aina ya chanzo: Preprint ya utafiti wa majaribio.

Hali ya mapitio ya kitaalamu: Haijapitia peer review.

DOI: Haijaainishwa katika chanzo.

Ufadhili: Heilongjiang Provincial Postdoctoral Science Foundation.

Mgongano wa maslahi: Waandishi wametangaza kuwa hakuna mgongano wa maslahi ya kifedha unaojulikana wala uhusiano binafsi unaoweza kuathiri utafiti.

Probiotiki:Lactobacillus plantarum 1.0665.

Mfumo mkuu wa enkapsulesheni: Emulsioni maradufu ya W1/O/W2 maji-mafuta-maji yenye Lp iliyofunikwa kwa WPNF.

Emulsioni iliyoboreshwa: %4,0 PGPR, %50 W1, %60 awamu ya mafuta na %5,0 WPI katika awamu ya nje.

Uchapishaji wa koaksia: Nozeli ya ndani 0,4 mm na 0,08 mL/min; nozeli ya nje 1,05 mm; awamu ya nje ya jibini F20 ilitolewa kwa extrusion katika 45 °C na kasi ya uchapishaji ya 25 mm/s.

Mbinu za uchambuzi: TEM, CLSM, kipimo cha zeta potential na ukubwa wa matone, reolojia, jiometri ya uchapishaji wa 3D, kuhesabu koloni, pua ya kielektroniki na PCA.

Takwimu: Majaribio yalifanywa kwa marudio matatu tofauti, matokeo yalitolewa kama wastani ± mkengeuko wa kawaida, SPSS V20.0 ilitumika kwa ANOVA na kiwango cha jumla cha umuhimu kikawekwa p<0,05.

Kizuizi kikuu: Utafiti umewekewa kikomo na uchapishaji wa kiwango cha maabara na siku 14 za uhifadhi wa baridi. Ingawa uhai wa seli za probiotiki umeonyeshwa, athari za kiafya za kliniki, utendaji halisi katika mfumo wa mmeng'enyo na uthibitisho wa kiwango cha viwandani haujathibitishwa.