Бул preprint изилдөө эт/булчуң ткандарында жана сүт үлгүлөрүндө көп сандагы ветеринардык дары калдыктарын ошол эле анализ ыкмасы менен скринингдөөгө багытталган. Изилдөөчүлөр жогорку тактыктагы масс-спектрометрияны колдонгон LC-Q-Orbitrap негизиндеги ыкманы иштеп чыгып, 196 фармакологиялык активдүү затты камтыган чоң скрининг панелин түзүшкөн.

Изилдөөгө мурда төрт ар кандай үлгү даярдоо ыкмалары салыштырылган. Эң ылайыктуусу катары, ацетонитрил/суу аралашмасы менен андан кийин таза ацетонитрил менен жасалган эки жолу экстракциялоо тандалган. Андан соң ыкма Европалык Биримдиктин 2021/808 номериндеги аналитикалык ыкманы текшерүү критерийлерине ылайык, булчуң жана сүт матрицаларында бааланган.

Натыйжаларга караганда ыкма көптөгөн ветеринардык дары заттарынын калдыктарын как түрдө сканерлеп, алардын маанилүү бөлүгүн сандык түрдө өлчөй алат. Бирок айрым зат топтору — өзгөчө алеварамектиндер, айрым бета-лактамдар, макролиддер жана ионофордук антикоксидиялык заттар — төмөн деңгээлдерде дагы эле кыйынчылык жараткан аналиттер болуп эсептелет.

Ветеринардык дарылар мал чарбачылыгында ооруларды дарылоо, алдын алуу жана кээ бир өндүрүш процесстерин башкаруу үчүн колдонулат. Бирок бул заттарды туура эмес, ашыкча же туура эмес колдонуу эт, сүт, жумуртка сыяктуу мал азыктарында калдыктарды калтырышы мүмкүн.

Фуд коопсуздугу боюнча негизги көйгөй мындай: Лабораториялар жүздөгөн абдан ар түрдүү химиялык касиетке ээ заттарды бир эле учурда ишенимдүү кантип текшере алат?

Бул оңой маселе эмес. Себеби ветеринардык дары-дармектер бирдей эмес. Антибиотиктер, антипаразиттер, тынчтандыруучулар, оору басуучулар, антикоксидианттар жана башка көптөгөн топтор ар башка эригичтик, полярлык, туруктуулук жана иондоо мүнөздөмөлөрүн көрсөтөт. Бир экстракция ыкмасы кээ бир заттарды абдан жакшы чыгарып берсе, айрымдарын жоготушу мүмкүн.

Ошондой эле тамак-аш матрицасы да татаал. Сүт май, белок, минерал жана кантты камтыйт. Эт/ Булчуң тканы белок жана липид боюнча тыгыз. Бул компоненттер талдоо учурунда сигналдарды басаңдатышы мүмкүн, ката оң натыйжаларга алып келиши же айрым калдыктарды аныктоону кыйындатышы мүмкүн.

Бул изилдөөнүн негизги көйгөйү мындай:

Эт жана сүт сыяктуу татаал тамак-аш матрицаларында, бир эле ыкма менен көп сандагы ветеринардык дары-дармектердин калдыктарын кеңири жана ишенимдүү түрдө аныктоо мүмкүнбү?

Метод эмне сунуш кылат?

Бул изилдөө, LC-Q-Orbitrap HRMS деген жогорку чечилиштик массалык спектрометрия ыкмасын колдонот.

Бул билдирүүнү жөнөкөйлөштүрөлү:

• LC суюк хроматография. Ал үлгүдөгү компоненттерди убакыттын өтүшү менен бөлүп берет.
• Q-Orbitrap, жогорку чечимдүү масс-спектрометр болуп саналат. Молекулаларды абдан так масса өлчɵɵ менен тааныйт.
• HRMS жогорку чечимдүү масс-спектрометрия дегенди билдирет. Бул окшош массадагы кошулмаларды айырмалоодо классикалык төмөн чечимдүү ыкмаларга караганда артыкчылык бере алат.

Изилдөөчүлөр 196 максаттуу аналит үчүн сканерлөө ыкмасын түзүшкөн. Бул аналиттердин арасында антибактериалдык препараттар, сульфонамиддер, тетрацлининдер, хинолондор, макролиддер, бензимидазолдор, авермектиндер, тынчтандыруучу препараттар, антикоксидиялык заттар жана кээ бир антиинфламматориялык дары-дармектер бар.

Үрөнү даярдоодо төрт ар башка ыкма салыштырылган. Максат – мүмкүн болушунча көп затты жетиштүү калыбына келтирүү менен чыгарып алуу. Салыштыруунун соңунда практикалыкты, баасын, камтылуусун жана даярдоо этаптарын эске алуу менен эки жолу чыгарып алуу ыкмасы тандалган.

Тандалган ыкманын жалпы логикасы мындай:

1. Үлгү даярдалууда.
2. Ал ички стандарттар жана максаттуу зат аралашмалары менен сыноодон өтөт.
3. Ацетонитрил/суу аралашмасы менен биринчи экстракция жүргүзүлөт.
4. Таза ацетонитрил менен экинчи экстракция жасалып жатат.
5. Экстракт куурулатылып, ылайыктуу эриткич менен кайра эрип жатат.
6. LC-Q-Orbitrap түзүлүшүндө анализделүүдө.
7. Молекула иону, кармоо убактысы жана эң жок дегенде бир бөүк ион маалыматы бирге бааланып, сканерлөө жүргүзүлөт.

Формулалар Эмне Дегени?

Бул изилдөө аналитикалык көрсөткүчтөргө негизделген, интенсивдүү математикалык формулалардан көрө. Эң маанилүү түшүнүктөр:

1. Туура эмес оң көрсөткүчү

Ката оң натыйжа, чындыгында калдыктарды камтыбаган үлгүнүн шектүү деп белгилениши болуп саналат. Изилдөөнү жүргүзүүдө өзгөчөлук бааланганда бош үлгүлөрдө сигнал пайда болуп-пайда боло турганына каралган.

Жөнөкөй айтканда:

Туура эмес оң көрсөткүчтө турган ылкуу = Шектүү сигнал берген бош үлгүлөрдүн саны / Бүт бош үлгүлөрдүн саны

Бул көрсөткүч канчалык төмөн болсо, ыкма ошончолук тандоо жүргүзүүчү деп эсептелет.

2. Туура эмес терс көрсөткүч

Ката терс натыйжа деген, чындыгында калдыктарды камтыган үлгүнүн ыкма менен өткөрүлүп жиберилиши болуп саналат. Тамак-аш контролунда ката терс натыйжа дагы маанилүү болот, анткени чыныгы калдыктар көз жаздымда калат.

Жөнөкөй айтканда:

Туура эмес терс көрсөткүч = Аныкталбай калган кошулган үлгүлөрдүн саны / Жалпы кошулган үлгүлөрдүн саны

Изилдөөдө, аныктоо мүмкүнчүлүгүн аныктоодо жалган терс көрсөткүчү 5% же андан аз болгон эң төмөнкү концентрация деңгээли эске алынган.

3. CCβ

CCβ, ыкманын белгилүү бир затты ишенимдүү аныктай алган концентрация деңгээлин түшүндүрөт. Тамак-аш калдыктарын талдоодо бул түшүнүк маанилүү, анткени ыкма жөн гана «көрүп турам» деп айтуудан эле токтобойт; кайсы деңгээлде ишенимдүү скрининг жүргүзө аларын да көрсөтүшү керек.

4. Калыбына келтирүү жана тактык

Кайтаруу көрсөткүчү үлгүгө кошулган заттын анализдин аягында канча өлчөнүп алынганын көрсөтөт. Абдан төмөн кайтаруу көрсөткүчү заттын экстракция учурунда жоголгонун көрсөтүшү мүмкүн. Абдан жогорку көрсөткүчтөр болсо, матрица таасири же сигналдын бузулушу жөнүндө сигнал бере алат.

Тактык кайталанган өлчөөлөрдүн бири-бирине канчалык жакын экенин көрсөтөт. Бул изилдөөдө лаборатория ичиндеги кайталануу CVR бааланган.

График / Кесте / Диаграмма Негизги Билдирүүсү

Макаладагы сүрөттөрдүн негизги билдирүүсү төмөнкүдөй кыскача айтылышы мүмкүн:

Биринчи график төрт ар кандай экстракция ыкмалары канча аналитти кабыл алынган калыбына келтирүү диапазонунда кармаганын көрсөтөт. Негизги билдирүү мындай: Ацетонитрилге негизделген жөнөкөй ыкма кеңири масштабдагы көп калдыктарды анализдөө үчүн жетиштүү эмес. Ацетонитрил/суу аралашмасы жана EDTA камтыган кош экстракция ыкмасы кеңири аналиттик чөйрөнү сунуш кылат. Кээ бир тазалоо кадамдары теориялык жактан матрицаны азайта алат; бирок кээ бир аналиттердин жоголушуна да себеп болушу мүмкүн.

Ката оң натыйжаларды көрсөткөн график, молекулалык ионго жана кармоо убактысына гана карап туруунун жетишсиз экенин түшүндүрөт. Кеткен диагностикалык бөлүкчөдөгү ионду кошуу ката оң натыйжалардын тобокелдигин олуттуу азайтат. Бул жогорку чечилишке ээ аппараттарда да бир сигналга гана таянуу жетишсиз болушу мүмкүн экенин көрсөтүп турат.

CCβ график кайсы заттарды кайсы концентрация деңгээлинде ишенимдүү аныктай алат деп кыскача көрсөтөт. Негизги билдирүү: Көпчүлүк заттар 5–10 µg/kg аралыгында кармалышы мүмкүн; Бирок, айрым татаал анализдерде аныктоо жөндөмдүүлүгү 50–100 µg/kg.

Батыштыруу кыскача графиктери ыкманын калыбына келтирүү жана тактык жагынан көптөгөн анализдерде кабыл алына турган натыйжаларды берерин көрсөтөт. Бирок бардык 196 зат ошол эле ийгилик менен өлчөнө албайт. Айрымдары сандык өлчөө үчүн ылайык болсо, айрымдары гана сапаттык скрининг деңгээлинде бааланат.

Чыныгы үлгүнү колдонуу көрсөткөн график, анализденген үлгүлөрдүн көбүндө ветеринардык дары-дармек калдыктары жөнүндө шек жаратпаганын; ал эми шектүү сигналдардын көбүнчө булчуң/эт үлгүлөрүндө жана өзгөчө канаттуулардын булчугунда көрүнөрүн көрсөтүп турат. Сүт үлгүлөрүндө бул изилдөөнүн алкагында VMP калдыктары белгиленген эмес. Бирок бул жыйынтык тек гана каралган үлгү топтому үчүн жарактуу.

Тажрыйбалар кандай жасалган?

Иш бир нече негизги этаптан турат.

Баштапкы этапта стандарттык материалдар жана ички стандарттар даярдалган. Максаттуу панель 196 фармакологиялык активдүү затты камтыган түрдө түзүлгөн.

Экинчи этапта төрт ар кандай чыгаруу ыкмасы чочконун булчуң тканына салыштырмалуу каралган. Үлгүлөр белгилүү деңгээлдеги максаттуу анализаторлор менен байытылган жана ар бир ыкманын заттарды канчалык жакшы чыгарганы өлчөлгөн.

Үчүнчү этапта тандаган экстракция ыкмасы LC-Q-Orbitrap түзмөгү менен бириктирилген. Анализде толук сканерлөө жана маалыматка көзкарандысыз ажыратуу ыкмасы колдонулуптур. Мындайча айтканда, максат молекуланын туура массасы жана ажыратуу маалыматы чогултулган.

Төртүнчү этапта методду текшерүү жүргүзүлгөн. Ар кандай бош үлгүлөр булчуң жана сүт үчүн колдонулган, ар кандай кошумча деңгээлдери текшерилген, жалган оң натыйжалар, жалган терс жыйынтыктар, аныктоо жөндөмдүүлүгү, калыбына келүү жана тактык бааланган.

Бешинчи баскычта ыкма ылайыктуулук тесттеринде сыноодон өткөн. Лайыктуулук тесттери лабораторияга ыкманын аткарылышын тышкы үлгүлөр менен баалоого мүмкүнчүлүк берет. Бул изилдөөгө ар кандай жылдарда жана ар кандай уюштуруучулар тарабынан берилген тест үлгүлөрү колдонулду.

Акыркы этапта ыкма чыныгы мисалдарга колдонулган. Франциядагы расмий көзөмөл жана байкоо планынын алкагында 144 эти/мөңглөрү жана 50 сүт үлгүсү талданган.

Натыйжалар эмне көрсөтүп жатат?

Иштөө натыйжалары бир нече бөлүмдө кыскача айтылышы мүмкүн.

Биринчиден, жогорку чечилишке ээ LC-Q-Orbitrap ыкмасы кеңири спектрдеги ветеринардык дары калдыктарын изилдөө үчүн күчтүү курал болуп саналат. Бир анализ ыкмасы менен ар кандай дары үй-бүлөлөрүнөн көптөгөн заттарды көзөмөлдөөгө болот.

Экинчиден, үлгү даярдоо ыкмасы натыйжаларга чоң таасир көрсөтөт. Төрт ыкманын ичинен эң ылайыктуусу – ацетонитрил/су аралашмасы жана андан кийин таза ацетонитрил колдонулган эки жолу чыгарып алуу ыкмасы болуп чыккан. Бул ыкма кеңири аналитик колдонуу мүмкүнчүлүгү жана лабораторияда практикалык пайдалануу жагынан тең салмактуу көрүнөт.

Үчүнчү, жогорку өзгөрүлмлүү массаны өлчөө өзүнчө жетиштүү эмес. Туура эмес оң натыйжаларды азайтуу үчүн кармоо убактысын жана молекула ионуна кошумча бөлүк иону маалыматтарын колдонуу маанилүү. Изилдөө, бул кошумча маалыматтын тактыгын жогорулатарын көрсөткөн.

Төртүнчүдөн, ыкма бардык аналитиктерде бирдей натыйжа бербейт. Айрым авермектиндер, айрым макролиддер, бета-лактамдар жана антикоксидиалдар төмөн деңгээлде аныктоо кыйын болгон. Бул, абдан кеңири камтылган ыкмалардын табигый чектөөсү: Камтуу кеңейген сайын ар бир зат үчүн идеалдуу шартты табуу кыйын болот.

Бешинчиси, ыкма көптөгөн заттар үчүн сандык өлчөмдү жүргүзө ала турган көрсөткүчкө жеткен. Изилдөөгө 106 аналит булчуң ткандарында, 115 аналит болсо сүт матрицасында сандык жактан бааланууга боло турганы аныкталган. Калгандары үчүн ыкма көбүрөөк сапаттык скрининг максатында колдонсо болот.

Алтынчысы, компетенттүүлүк тесттери ыкманын тышкы баалоодо жалпысынан канааттандырарлык жыйынтык бергенин көрсөткөн. Бул ыкма тек лаборатория ичиндеги валидация менен гана эмес, чыныгы башкаруу системаларына окшош тышкы сыноолор менен да сынап көрүлгөнүн көрсөтөт.

Жетининчиси, чыныгы мисал колдонмосунда анализден өткөн 194 үлгүнүн көбүндө ветеринардык дары-дармек калдыктары аныкталган эмес. Шектүү үлгүлөр көбүнчө булчуң/эт үлгүлөрүндө байкалган; сүт үлгүлөрүнөн бул изилдөө чегинде калдыктар табылган эмес. Бирок бул маалымат, болгону каралган үлгүлөрдүн жыйынтыгы катары бааланууга тийиш.

Бул Эмне Үчүн Маанилүү?

Азык-түлүк коопсуздугу лабораториялары үчүн эң маанилүү муктаждыктардын бири, көптөгөн калдыктарды ылдам, ишенимдүү жана кеңири камтып текшере алуу болуп саналат. Ар бир зат үчүн өзүнчө ыкманы колдонуу убакыт, чыгым жана жумуш жүгүн эске алганда кыйын.

Бул иш жогорку чечимдүү масса-спектрометриясынын бул тармактагы артыкчылыгын көрсөтөт. Q-Orbitrap сыяктуу тутумдар, алдын ала аныкталган бир нече заттар гана эмес, кеңири максаттуу тизмени жогорку масса тактыгы менен сканерлей алат. Мындан тышкары, эгер маалымат жазуусу ылайыктуу жүргүзүлсө, келечекте жаңы пайда болгон заттарды артка кайтаруу анализдөө мүмкүнчүлүгү да жаралышы мүмкүн.

Бул ыкма расмий тамак-аш көзөмөл пландарында маанилүү болушу мүмкүн. Анткени жаныбар тамактарындагы калдыктарды көзөмөлдөө жөн гана "зат барбы?" деген суроо эмес. Аналитикалык ыкма; Ал жалган оң натыйжаларды азайтып, жалган терс натыйжаларды чектешет, регулятордук чектерге ылайык аныктоо мүмкүнчүлүгүн сунушташы керек жана чыныгы үлгүлөргө тиешелүү болушу керек.

Verianla окуучусу үчүн бул макаланын мааниси бул жерде: Тамак-аштын коопсуздугу болгону өндүрүш этаптарындагы эрежелерге эмес, ошол эрежелерди көзөмөлдөй алган аналитикалык технологиялардын күчүнө да көз каранды. Замандын тамак-аш контролу химиялык издерди өтө төмөн деңгээлдерде жана өтө татаал матрицаларда окуй алган түзмөктөргө негизделет.

Назар салуу пункттары

Бул макала калыстар тобунун баасынан өткөн эмес preprint болуп саналат. Жыйынтыктар көз карандысыз илимий баалоо процессинен кийин өзгөрүшү мүмкүн.

Иш саламаттык сактоо боюнча кеңеш же керектөөчү коркунуч баалоосу эмес. Максат - эт жана сүт үлгүлөрүндө ветеринардык дары-дармектердин калдыктарын изилдөө үчүн колдонулган лабораториялык ыкманын көрсөткүчтөрүн көрсөтүү.

Метод 196 беренени камтыганына карабастан, бардык беренелерде бирдей натыйжаны көрсөтө алган эмес. Айрым беренелер төмөн концентрацияларда кыйын аныкталган же болгону сапаттык текшерүү чегинде бааланган.

Чыныгы мисал колдонмо 194 үлгү менен чектелет. Бул натыйжаларды жалпы азык рыногу жөнүндө кең жана так көрсөткүч катары окууга болбойт.

Жогорку тактыктагы масса спектрометриясы күчтүү; бирок адистештирилген маалымат өңдөө, ылайыктуу үлгүлөрдү даярдоо, так валлдация жана зарыл болгондо текшерүүчү анализди талап кылат.

Жыйынтык

Бул preprint изилдөө, эт жана сүт сыяктуу мал азыктарында ветеринардык дары калдыктарын кеңири чыпкалоо үчүн LC-Q-Orbitrap негизделген ыкманын иштелип чыгып, текшерилгенин көрсөтөт.

Ысым, 196 максаттуу затты камтыйт. Анын маанилүү бөлүгүн төмөнкү µg/kg деңгээлдеринде аныктап кала алат; 106 аналитти булчуң кездемелеринде, 115 аналитти сүт матрицасында сандык түрдө өлчөй алган көрсөткүчтү көрсөтөт. Бирок кээ бир кыйын зат топтору дагы деле оптимизацияны талап кылат.

Иштин эң күчтүү билдирүүсү мындай: заманбап азык-түлүк көзөмөлүндө чечим кабыл алууда бир гана түзмөктүн сигналын эске алуу эмес, молекула иону, кармоо убактысы, бөлүк ионун маалыматы, ырастоо критерийлери жана тышкы компетенттүүлүк сыноолору биргеликте бааланууга тийиш. Кеңири камтуу ыкмалары азык-түлүк коопсуздугун көзөмөлдөөдө күчтүү куралдар болушу мүмкүн; бирок ар бир анализ жана ар бир матрица үчүн этият ырастоо зарыл.

Булак жана ыкма эскертмеси

Бул макала эт/эскек тканы жана сүт үлгүлөрүндө 196 ветеринардык дары калдыкчаларынын LC-Q-Orbitrap HRMS аркылуу сканерленишин баяндаган сынчыл баалоодон өтпөгөн preprint изилдөөнүн жөнөкөйлөштүрүлгөн кыргызча баяны болуп саналат. Мәтин сөзмө-сөз котормо эмес; изилдөөнүн максаты, ыкмасы, валидация логикасы, графиктер жана таблицалардын негизги мааниси Verianla окурман үчүн кайра баяндалды.

Изилдөө; Ал төрт ар кандай экстракция ыкмасын, тандалган кош экстракция ыкмасын LC-Q-Orbitrap системасы менен айкалыштыруу, EU 2021/808 критерийлери боюнча валидация, чеберчилик тесттери жана 194 чыныгы үлгү колдонмосунун негизинде түзүлгөн. Жыйынтыктар лабораториялык ыкманын натыйжалуулугун көрсөтөт; Бул түздөн-түз керектөөчүлөрдүн ден соолугуна коркунуч же рыноктук калдыктардын деңгээли катары түшүнүлбөшү керек.