Tatizo kuu la utafiti huu ni kama klorokini inayotumika katika matibabu ya malaria inaweza kufanywa ikubalike zaidi kwa matumizi ya watoto. Chloroquine diphosphate hutumika kama dawa muhimu katika matibabu ya malaria ya Plasmodium vivax inayohisi klorokini. Hata hivyo ladha chungu ya dawa inaweza kufanya matibabu kuwa magumu, hasa kwa watoto. Kwa wagonjwa watoto, dozi kwa kawaida hurekebishwa kulingana na uzito wa mwili; wakati hakuna fomulesheni inayofaa kwa watoto, mbinu kama kuvunja tembe, kusaga tembe au kuandaa kimiminika kutoka katika aina ngumu za dozi hujitokeza. Hatua hizi zinaweza kuongeza ladha chungu ya dawa na kusababisha mtoto kuitapika, kuitema au kutokamilisha matibabu.

Umuhimu wa utafiti unaonekana hapa: kwa dawa ya kuzuia malaria, haitoshi tu kuwa na ufanisi wa kibiolojia; hasa kwa watoto, dawa inapaswa kutolewa katika umbo linaloweza kumezwa, kuvumilika na kusaidia ufuasi wa matibabu. Kwa hiyo, uendelezaji wa fomulesheni za watoto si suala la teknolojia ya dawa pekee, bali pia ni suala muhimu kwa afya ya umma.

Mkakati uliotumika katika utafiti huu ni kuiunganisha klorokini na resini ya kubadilishana ioni. Resini za kubadilishana ioni ni vibebaji vya polima vinavyoweza kuingiliana na molekuli za dawa zenye chaji. Resini za aina hii zinaweza kuficha hisia ya ladha kwa kupunguza uwepo huru wa dawa zenye uchungu katika mazingira ya mdomo. Mantiki ni rahisi: kama dawa haitolewi mara moja mdomoni, hugusana kidogo na vipokezi vya ladha; inapofika katika mazingira yenye asidi zaidi na tofauti ya ioni, kama tumbo, inaweza kujitenga na resini na kuwa huru kwa ajili ya kufyonzwa.

Resini iliyotumika katika utafiti ni polacrilin potassium na imeonyeshwa kibiashara kama Amberlite IRP88. Kompleksi ya klorokini–resini iliandaliwa kwa uwiano wa dawa/resini wa 1:1. Mmenyuko ulifanyika katika mazingira ya asidi, kwenye pH 4,5–5,0, katika joto la kawaida na kwa kulindwa dhidi ya mwanga kwa kuchanganywa kwa saa 24. Baadaye, resinati ilitenganishwa kwa uchujaji wa utupu na kukaushwa katika tanuri la utupu kwa 30 °C, shinikizo la 1100 mbar, kwa saa 48. Katika utafiti, maudhui ya klorokini msingi katika kompleksi ya CLQ-R yaliripotiwa kuwa %42,6.

Lengo la kompleksi hii si kuficha ladha pekee. Mkakati bora wa kuficha ladha unapaswa kufanya kazi bila kuharibu shughuli ya dawa dhidi ya malaria, bila kubadilisha kwa kiasi kikubwa ufyonzwaji wake na bila kuunda hatari mpya ya sumu. Kwa hiyo watafiti waliitathmini CLQ-R kwa mitazamo kadhaa: uhai wa seli za Caco-2, shughuli ya in vitro dhidi ya plasmodia juu ya P. falciparum, hemolysis katika seli nyekundu za damu za binadamu, wasifu wa mkusanyiko wa plasma dhidi ya muda katika panya, vigezo vya biokemia, shughuli ya in vivo dhidi ya malaria katika panya walioambukizwa P. berghei ANKA, jaribio la recrudescence linalotathmini kuibuka tena kwa maambukizi, na jaribio la upendeleo wa ladha la chupa mbili.

Tathmini ya kwanza muhimu ya in vitro katika utafiti ni uhai wa seli za Caco-2. Ingawa seli za Caco-2 hutokana na adenokarsinoma ya koloni-rektamu ya binadamu, hutumika mara nyingi kama modeli ya seli katika tafiti za dawa zinazohusiana na kizuizi cha epitheliamu ya utumbo. Katika utafiti, CLQ na CLQ-R zilijaribiwa katika viwango tofauti, ndani ya masafa ya 0,01–100 µM. Resini pekee ilitathminiwa katika mkusanyiko wa 74 µg/mL. Kwa kipimo cha MTT, kiwango cha uhai wa seli zenye shughuli za kimetaboliki kilipimwa.

Kulingana na Jedwali 1, hakuna tofauti dhahiri iliyoripotiwa kati ya CLQ na CLQ-R katika viwango vya chini na vya kati. Katika mkusanyiko wa juu zaidi, yaani 100 µM, uhai wa seli ulipungua kwa maana ya kitakwimu. Katika jedwali, uhai wa seli katika 100 µM umetolewa kuwa 68,1 ± 11 kwa CLQ na 61,1 ± 11 kwa CLQ-R. Waandishi waliuhusisha upungufu wa uhai katika mkusanyiko huu wa juu na athari zinazojulikana za klorokini katika seli, hasa kujikusanya kwenye lysosome, kuongeza pH ya ndani ya lysosome na kuvuruga hatua za mwisho za autophagy. Kutokuwa na athari hasi kwa resini peke yake juu ya uhai wa seli kumetafsiriwa katika utafiti kuwa resini ilitenda kwa namna isiyo tendaji katika modeli hii ya seli.

Athari ya klorokini dhidi ya malaria huhusishwa na kujikusanya kwake katika vacuole ya mmeng’enyo ya vimelea na kuvuruga uondoaji sumu wa misombo yenye sumu inayotokea wakati wa mmeng’enyo wa hemoglobini. Katika utafiti huu, utaratibu huo haukuthibitishwa tena kwa majaribio ya kina, bali ulijadiliwa katika muktadha wa namna ya utendaji inayokubalika katika fasihi. Kuonyesha IC₅₀ ya juu zaidi kwa CLQ-R kuliko klorokini huru kulielezwa kwa tofauti katika kinetiki za kuachiliwa kwa klorokini kutoka kwenye kompleksi ya resini. Kuachiliwa kwa klorokini kutoka kwenye resini ni nyeti kwa pH; kupungua kwa kuachiliwa karibu na pH ya upande wowote kunaweza kuathiri muda ambao dawa huru hufika kwa kimelea.

Katika utafiti wa vimelea wa in vitro, aina ya 3D7 ya Plasmodium falciparum ilitumika. Vimelea vilipandwa kwenye sahani za visima 96 katika hatua ya pete iliyosawazishwa; parasitemia ya mwisho iliandaliwa kuwa %0,5 na hematokriti %2. CLQ na CLQ-R zilijaribiwa kwa dilutions za mfululizo wa mara mbili kutoka 200 nM hadi 3,12 nM. Baada ya saa 72 za incubation, uongezekaji wa vimelea ulipimwa kwa uchafuzi wa DNA wa SYBR Safe.

Dhana ya IC₅₀ iliyotolewa katika utafiti inaweza kueleweka hivi:

\[ IC_{50} \]

IC₅₀ huonyesha mkusanyiko unaohitajika kuzuia uongezekaji wa vimelea au mwitikio wa kibiolojia kwa kiwango cha %50 katika hali iliyojaribiwa. Kadiri thamani ilivyo ndogo, ndivyo shughuli katika hali hiyo ya jaribio inavyokubalika kuwa yenye nguvu zaidi. Katika utafiti huu, IC₅₀ iliripotiwa kuwa 13 nM kwa CLQ na 30 nM kwa CLQ-R. Ingawa thamani ya CLQ-R ilikuwa juu zaidi, kwa kuwa ilibaki katika masafa ya nanomolar, ilihitimishwa kuwa shughuli imara dhidi ya plasmodia ilihifadhiwa.

Utafiti pia ulidhibiti kama vipimo vya fluorescence vingeathiriwa kwa njia bandia na resini. Hii ni muhimu kwa sababu katika mbinu za fluorescence kama SYBR Safe, ikiwa nyenzo inayojaribiwa huongeza au hupunguza ishara, tafsiri inaweza kuwa potofu. Watafiti walisema kuwa resini ilisababisha mwingiliano wa fluorescence wa kiwango cha kupuuzika katika viwango vilivyotumika. Udhibiti huu ni muhimu kwa kusaidia kwamba athari ya CLQ-R dhidi ya plasmodia haikutokana na artefakti ya kipimo.

Kipimo cha hemolysis pia ni kiashiria muhimu cha usalama. Seli nyekundu za damu za binadamu O+ ziliwekwa incubation na CLQ-R na resini katika hali zinazofanana na zile za jaribio la uongezekaji wa vimelea. Utolewaji wa hemoglobini ulitathminiwa kwa kipimo cha absorbance cha 545 nm. Kiwango cha hemolysis kilihesabiwa kwa fomula hii:

\[ \%\,hemoliz = \frac{A_{örnek} - A_{negatif\,kontrol}}{A_{pozitif\,kontrol} - A_{negatif\,kontrol}} \times 100 \]

Katika fomula hii, A_örnek inaonyesha absorbance iliyopimwa katika sampuli inayojaribiwa; A_{negatif kontrol} inaonyesha absorbance ya udhibiti usio na lysis; na A_{pozitif kontrol} inaonyesha absorbance ya udhibiti wa lysis kamili. Fomula huonyesha kwa asilimia kiwango ambacho sampuli huvunja seli nyekundu za damu. Katika utafiti, CLQ-R na resini pekee zilionyesha shughuli ndogo ya hemolysis, na thamani za hemolysis zilibaki chini ya %10 katika viwango vyote vilivyojaribiwa. Matokeo haya yanaonyesha kuwa fomulesheni haikusababisha madhara dhahiri kwa seli nyekundu za damu katika hali za in vitro.

Tathmini ya farmakokinetiki ilifanywa ili kuelewa kama CLQ-R huachilia klorokini katika mfumo wa tumbo na utumbo na kama hutoa mfiduo wa plasma unaofanana na klorokini huru. Panya walipewa CLQ, CLQ-R au resini kwa oral gavage. Kwa CLQ, 15,6 mg/kg ya klorokini msingi; kwa CLQ-R, 26 mg/kg ya klorokini msingi; na kwa resini, 61 mg/kg inayolingana na uzito wa resini katika matibabu ya CLQ-R zilitumika. Sampuli za damu zilichukuliwa katika nyakati 0,08; 0,25; 0,5; 0,75; 1; 2; 4 na 6 saa.

Viwango vya klorokini kwenye plasma vilipimwa kwa mbinu ya LC-MS/MS. Mipito ya massa ya 319,8 > 246,9 ilitumika kwa Chloroquine, na 237,0 > 194,0 kwa carbamazepine kama kiwango cha ndani. Ilielezwa kuwa mbinu ilithibitishwa katika masafa ya 10–2000 ng/mL, na vigezo kama unyeti, usahihi, utofauti wa ndani ya siku na kati ya siku, mstari, uthabiti, carryover, athari ya matrix na uchaguaji vilitathminiwa kulingana na vigezo vya ANVISA.

Katika jedwali la farmakokinetiki, CLQ na CLQ-R zinaonekana kuonyesha profaili zilizo karibu kulingana na dozi zilizosawazishwa. t_max ni saa 0,50 kwa CLQ na saa 0,75 kwa CLQ-R. AUC_0-6h/Dose imetolewa kuwa 2,33 kwa CLQ na 2,30 kwa CLQ-R. AUC_∞/Dose ni 2,79 kwa CLQ na 3,31 kwa CLQ-R. Nusu-maisha ya uondoaji iliripotiwa kuwa saa 2,34 kwa CLQ na saa 3,15 kwa CLQ-R. Matokeo haya yalitafsiriwa kuwa kufungwa kwa klorokini kwenye resini hakuvurugi kwa dhahiri mfiduo wa kimfumo.

Mojawapo ya dhana muhimu katika farmakokinetiki ni AUC. Mantiki ya utafiti inaweza kueleweka kwa uhusiano huu wa msingi:

\[ AUC = \int_{0}^{t} C(t)\,dt \]

Hapa C(t) huonyesha mkusanyiko wa dawa kwenye plasma kwa muda; AUC ni eneo lililo chini ya mviringo wa mkusanyiko dhidi ya muda. AUC husaidia kuelewa mfiduo wa jumla wa mwili kwa dawa. Katika utafiti huu, ukaribu wa thamani za AUC kwa CLQ na CLQ-R unaunga mkono kwamba kompleksi inaweza kupeleka klorokini kwenye mzunguko wa kimfumo baada ya matumizi ya mdomo.

Jedwali 3 linatoa vigezo vya biokemia. Watafiti walitathmini viashiria kama kolesteroli, uric acid, AST, ALT, albumini, protini jumla, urea, alkaline phosphatase, glukosi na kreatinini baada ya saa 24 na 48. CLQ na CLQ-R zilisababisha ongezeko la kiwango cha alkaline phosphatase baada ya saa 48. Katika kundi la CLQ-R, kiwango cha kreatinini kilipatikana kuwa juu kuliko kundi la udhibiti. Hata hivyo waandishi walisema kuwa mabadiliko haya hayakuzidi masafa ya marejeo ya kisaikolojia yaliyotajwa katika fasihi. Kwa hiyo utafiti unasema kuwa haukuona ishara dhahiri ya sumu ya kimfumo ya kibayokemia katika tathmini ya muda mfupi kwa panya. Hata hivyo, matokeo haya hayamaanishi usalama wa muda mrefu au usalama kwa binadamu.

Kwa ufanisi wa in vivo dhidi ya malaria, panya C57BL/6 walioambukizwa Plasmodium berghei ANKA GFP walitumika. Modeli hii haiigi kila kipengele cha malaria ya binadamu moja kwa moja; lakini ni modeli ya panya inayotumika sana katika utafiti wa malaria na uchunguzi wa misombo ya kupambana na malaria. Katika utafiti, majaribio mawili makuu ya in vivo yalifanywa: jaribio la kukandamiza la siku nne na jaribio la recrudescence linalofuatilia kuibuka tena kwa maambukizi baada ya matibabu.

Katika jaribio la kukandamiza la siku nne, panya waligawanywa katika makundi saa mbili baada ya kuambukizwa na matibabu ya kila siku kwa CLQ, CLQ-R au resini yakaanza. Matibabu yaliendelea hadi siku ya 4 na parasitemia ilipimwa kwa flow cytometry. Shughuli dhidi ya plasmodia ilihesabiwa kwa fomula hii:

\[ Aktivite(\%) = 100 - \left(\frac{ortalama\,parazitemi_{tedavi}}{ortalama\,parazitemi_{tedavisiz}} \times 100\right) \]

Fomula hii huonyesha kwa asilimia kiwango ambacho parasitemia ya wastani katika kundi lililotibiwa imepungua ikilinganishwa na kundi lililoambukizwa bila matibabu. Ikiwa parasitemia katika kundi lililotibiwa ni ya chini sana, asilimia ya shughuli huwa kubwa. Katika utafiti, mwisho wa siku ya 14, kizuizi cha %99,84 kiliripotiwa kwa CLQ na %98,54 kwa CLQ-R. Resini pekee haikuonyesha shughuli ya maana dhidi ya malaria.

Kielelezo 2 kinaonyesha matokeo makuu matatu ya jaribio la kukandamiza la in vivo. Katika paneli A, athari za matibabu juu ya uzito wa wanyama hutathminiwa na inaelezwa kuwa CLQ, CLQ-R au resini hazikusababisha mabadiliko dhahiri ya uzito ikilinganishwa na kundi lililoambukizwa bila matibabu. Katika paneli B, mviringo wa parasitemia unaonyeshwa; kundi lililoambukizwa bila matibabu na kundi la resini yanaonyesha ongezeko la parasitemia, ilhali katika makundi ya CLQ na CLQ-R ukuaji wa vimelea hukandamizwa kwa nguvu. Jedwali katika paneli C linatoa asilimia za shughuli dhidi ya plasmodia katika siku za 4., 7. na 14. CLQ-R kuonyesha shughuli ya %98,64 siku ya 4., %99,72 siku ya 7., na %98,54 siku ya 14. inaunga mkono kuwa kompleksi imehifadhi ufanisi wa in vivo.

Katika jaribio la recrudescence, panya walipokea dozi moja ya CLQ, CLQ-R au resini siku ya 3 ya maambukizi. Kisha parasitemia ilifuatiliwa hadi saa 96, na uhai ulifuatiliwa hadi siku ya 22. Katika Kielelezo 3A, kundi lililoambukizwa bila matibabu na kundi la resini yanaonyesha ongezeko la parasitemia, ilhali katika makundi ya CLQ na CLQ-R parasitemia hubaki chini. Katika Kielelezo 3B, matokeo ya uhai siku ya 22 hutolewa: uhai ni %0 katika kundi lililoambukizwa bila matibabu na katika kundi la resini; uhai wa %40 uliripotiwa katika kundi la CLQ na %50 katika kundi la CLQ-R. Tofauti hii ilitafsiriwa katika utafiti kuwa CLQ-R imehifadhi ufanisi dhidi ya malaria unaofanana na klorokini huru.

Jaribio la kuficha ladha lina nafasi muhimu sana katika utafiti. Hii ni kwa sababu lengo halisi la fomulesheni ya CLQ-R ni kufanya ladha ya dawa ikubalike zaidi huku ikihifadhi ufanisi wake. Kwa kusudi hili, jaribio la upendeleo wa chupa mbili la saa 48 lilifanywa. Panya walipewa chupa mbili kwa wakati mmoja, moja ikiwa na maji na nyingine ikiwa na suluhisho linalojaribiwa. Kiasi cha kioevu kilichotumiwa kilipimwa na uwiano wa upendeleo ukahesabiwa:

\[ PR(\%) = \frac{tadant\,alımı}{tadant\,alımı + su\,alımı} \times 100 \]

Katika fomula hii PR huonyesha uwiano wa upendeleo. Ikiwa PR iko chini ya %50, inakubalika kwamba wanyama wanapendelea maji kuliko suluhisho la jaribio, yaani wanaonyesha aversion kwa suluhisho hilo. Ikiwa PR iko juu ya %50, hutafsiriwa kama upendeleo kwa suluhisho la jaribio.

Katika majaribio ya awali, ilielezwa kuwa katika viwango vya chini vya klorokini, yaani katika viwango vya 10^-5 mM na 10^-2 mM, panya hawakuonyesha aversion dhahiri kwa suluhisho la klorokini. Katika mkusanyiko wa 10 mM, matumizi ya suluhisho la klorokini yalipungua kwa dhahiri ikilinganishwa na maji. Kwa hiyo 10 mM ilichaguliwa kama mkusanyiko wa kizingiti ambapo uchungu hutambulika kwa majaribio yaliyofuata ya kuficha ladha.

Kielelezo 4 kinaonyesha tofauti ya upendeleo wa ladha kati ya CLQ na CLQ-R. Katika suluhisho la CLQ, panya walitumia maji zaidi na alama ya upendeleo kwa CLQ ilikuwa takribani %34,9. Kwa kuwa thamani hii iko chini ya %50, inaonyesha aversion kwa klorokini huru. Katika suluhisho la CLQ-R, alama ya upendeleo ilitolewa kuwa takribani %50,4. Thamani hii inaonyesha kuwa CLQ-R inaweza kuficha ladha vizuri zaidi kuliko klorokini huru. Resini pekee ilionyesha alama ya upendeleo ya takribani %59,17; waandishi walitafsiri hili kuwa resini huenda iliongeza kidogo palatability ya suluhisho.

Matokeo haya yana maana ya vitendo kwa fomulesheni za watoto. Dawa chungu zinaweza kufanya ufuasi wa matibabu kuwa mgumu kwa watoto. Ikiwa fomulesheni inaweza kuficha ladha ya dawa na kuhifadhi ufanisi wake, inaweza kuwa mkakati mgombea wenye thamani kwa kuendeleza bidhaa ya kumezwa inayokubalika zaidi. Hata hivyo jaribio la upendeleo wa ladha kwa panya halibadilishi utafiti wa kukubalika kwa watoto binadamu. Kwa watoto binadamu, mambo mengi huingia, kama ladha, harufu, umbile, ujazo, marudio ya dozi, jinsi mzazi anavyoitoa dawa na sababu za kitamaduni.

Nguvu za utafiti zinaweza kukusanywa katika vichwa kadhaa. Kwanza, haukubaki kwenye dai la kuficha ladha kwa msingi wa fizikia-kemia pekee, bali pia ulijaribu shughuli ya kifamakolojia. Pili, tathmini ya ngazi nyingi ilifanywa, ikiwemo modeli ya in vitro ya P. falciparum, jaribio la hemolysis ya seli nyekundu za damu za binadamu, farmakokinetiki ya panya, uchambuzi wa biokemia, modeli ya in vivo ya P. berghei na jaribio la kitabia la ladha. Tatu, ilidhibitiwa kuwa resini pekee haipunguzi uongezekaji wa vimelea, haiharibu kwa maana vipimo vya fluorescence na haisababishi hemolysis ya in vitro. Nne, kwamba kompleksi haikuficha tu ladha na kuifanya dawa isiwe na kazi bali iliendelea kuwa na ufanisi, iliungwa mkono na data za in vitro na in vivo.

Mapungufu ya utafiti pia yanapaswa kusemwa wazi. Kwanza, utafiti huu ni preprint ambayo haijapitia tathmini ya rika. Pili, si utafiti wa kliniki; matumizi kwa watoto, usahihi wa dozi, ufuasi wa matibabu, usalama wa muda mrefu au ufanisi wa kliniki haukutathminiwa. Tatu, modeli za wanyama zilizotumika haziakisi moja kwa moja sifa zote za ugonjwa kwa binadamu. Nne, tathmini ya ladha inategemea tabia ya panya; hii inaweza kuwa kiashiria cha awali tu kwa kukubalika kwa wagonjwa watoto. Tano, thamani ya IC₅₀ ya CLQ-R iko juu kuliko ya klorokini huru; tofauti hii katika utafiti imehusishwa na uachiliaji unaotegemea pH na upatikanaji wa dawa. Sita, uchambuzi wa biokemia ni tathmini za muda mfupi; kwa matumizi sugu, makundi tofauti ya umri, dozi tofauti au usalama wa matibabu yanayorudiwa, tafiti pana zaidi zinahitajika.

Kwa mtazamo wa historia, klorokini ni dawa inayojulikana kwa muda mrefu na bado ni muhimu katika aina fulani za malaria. Hata hivyo kubadilisha dawa za zamani kuwa fomulesheni rafiki kwa watoto bado ni tatizo linalohitaji kutatuliwa, hasa katika maeneo yenye rasilimali chache. Kwa mtazamo wa leo, utafiti huu unaunga mkono wazo la kufanya dawa iliyopo ikubalike zaidi kwa kutumia mkakati mpya wa kibebaji cha dawa. Kwa mtazamo wa baadaye, kompleksi za resini kama CLQ-R zinaweza kuendelezwa kwa ajili ya suspensions za kumezwa za watoto, tembe za kutafuna au aina za dozi zilizorekebishwa upya. Hata hivyo ili uwezekano huu ugeuke kuwa bidhaa halisi, hatua za ziada kama uthabiti wa dawa, uzalishaji unaoweza kupanuliwa, usawa wa dozi, tafiti za ladha kwa binadamu, kukubalika kwa watoto na ufaafu wa kliniki zinahitajika kukamilishwa.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Mbinu ya utafiti imejengwa juu ya kuandaa kompleksi ya klorokini–resini na kisha kuijaribu kwa upande wa in vitro, in vivo, farmakokinetiki, biokemia na hisia ya ladha. Jedwali lifuatalo linafupisha kwa mpangilio vipengele vikuu vya mbinu.

Kuandaa kompleksi ya CLQ-R: Resinati ya klorokini iliandaliwa kwa mbinu ya batch iliyofafanuliwa katika utafiti wa awali wa kundi la watafiti. Klorokini na resini zilitumika kwa uwiano wa dawa/resini wa 1:1. Mchanganyiko ulichanganywa kwa saa 24 katika mazingira ya asidi ya pH 4,5–5,0, katika joto la kawaida na ukilindwa dhidi ya mwanga. Kisha uchujaji wa utupu ulifanywa na bidhaa ikakaushwa kwa 30 °C kwa saa 48. Ufanisi wa upakiaji wa dawa ulihesabiwa kwa spektrofotometria ya UV-visible kulingana na tofauti ya maudhui ya klorokini katika supernatant kabla na baada ya uundaji wa kompleksi. Maudhui ya klorokini msingi katika kompleksi yaliripotiwa kuwa %42,6.

Matokeo ya uhai wa seli za Caco-2: CLQ na CLQ-R zilijaribiwa katika viwango vya 0,01; 0,1; 1; 10 na 100 µM. Resini pekee ilitathminiwa katika mkusanyiko wa 74 µg/mL. Data zilizotolewa katika Jedwali 1 ni hizi:

* p<0,05 na ** p<0,01 zilitolewa kama umuhimu ikilinganishwa na kundi la udhibiti. Jedwali hili linaonyesha kuwa resini pekee haikupunguza uhai wa Caco-2, na kwamba katika mkusanyiko wa juu CLQ na CLQ-R zilipunguza uhai kwa maana. Katika utafiti, athari hii ilijadiliwa kuwa inaweza kuendana na kujikusanya kwa klorokini kwenye lysosome na athari zake juu ya autophagy.

Shughuli ya in vitro dhidi ya plasmodia: CLQ na CLQ-R zilitathminiwa katika vimelea vya P. falciparum 3D7 kwa kipimo cha fluorescence cha SYBR Safe. Kielelezo 1A kinaonyesha mikunjo ya dozi-majibu, Kielelezo 1B kinaonyesha ulinganisho wa IC₅₀, na Kielelezo 1C kinaonyesha data za hemolysis. IC₅₀ iliripotiwa kuwa 13 nM kwa CLQ na 30 nM kwa CLQ-R. Ingawa thamani ya CLQ-R ilikuwa juu kwa maana ya kitakwimu, iliendelea kuhifadhi shughuli imara katika masafa ya nanomolar.

Matokeo ya farmakokinetiki: Profaili za mkusanyiko wa plasma za CLQ na CLQ-R zililinganishwa baada ya matumizi moja ya mdomo. Vigezo vilivyosawazishwa kwa dozi vinatolewa katika Jedwali 2:

Data hizi zinaonyesha kuwa CLQ-R inaweza kupeleka klorokini kwenye mzunguko wa kimfumo baada ya matumizi ya mdomo na kwamba wasifu wa jumla wa mfiduo wa farmakokinetiki uko karibu na CLQ huru. Waandishi wanasema kwamba CLQ-R inapofika tumboni, klorokini hujitenga na matriksi ya polima kutokana na ioni shindani katika maji ya tumbo na mazingira ya asidi.

Vigezo vya biokemia: Katika vigezo vya biokemia vilivyopimwa baada ya saa 24 na 48, kwa jumla hakuna mabadiliko yaliyoripotiwa kuvuka masafa ya marejeo ya kisaikolojia. Mwishoni mwa saa 48, ongezeko la alkaline phosphatase katika makundi ya CLQ na CLQ-R, na ongezeko la kreatinini katika kundi la CLQ-R, yalipatikana kuwa ya maana kitakwimu; lakini ilielezwa kuwa mabadiliko haya hayakutoka nje ya masafa ya marejeo. Matokeo haya yalitafsiriwa kuwa hakuna ishara dhahiri ya sumu ya kibayokemia katika jaribio la muda mfupi kwa panya.

Jaribio la kukandamiza la in vivo la siku nne: Panya C57BL/6 waliambukizwa P. berghei ANKA GFP na kutibiwa kwa CLQ, CLQ-R au resini. Parasitemia ilifuatiliwa kwa flow cytometry. Thamani za shughuli dhidi ya plasmodia zilizotolewa katika Kielelezo 2C ni hizi:

DPI inamaanisha siku baada ya maambukizi. Jedwali hili linaonyesha kuwa CLQ na CLQ-R zilikandamiza parasitemia kwa nguvu; resini pekee haikuonyesha shughuli dhidi ya malaria.

Recrudescence na jaribio la uhai: Katika Kielelezo 3A, parasitemia baada ya matibabu imeonyeshwa, na katika Kielelezo 3B data za uhai siku ya 22 zimeonyeshwa. Kundi lililoambukizwa bila matibabu na kundi la resini yalionyesha uhai wa %0 siku ya 22. Katika kundi la CLQ, uhai wa %40, na katika kundi la CLQ-R, uhai wa %50 uliripotiwa. Matokeo haya yanaonyesha kuwa CLQ-R inaweza kuwa na athari inayofanana na klorokini huru katika kuzuia kuongezeka tena kwa maambukizi.

Kuficha ladha na jaribio la upendeleo: Katika jaribio la upendeleo wa chupa mbili la saa 48, panya walipewa maji na suluhisho la jaribio kwa pamoja. Katika Kielelezo 4, alama za matumizi na upendeleo kwa CLQ, CLQ-R na resini zimeonyeshwa. Alama ya upendeleo imetolewa kuwa takribani %34,9 kwa CLQ, %50,4 kwa CLQ-R, na %59,17 kwa resini.

Ongezeko la alama ya upendeleo ya CLQ-R ikilinganishwa na CLQ linaweza kuhesabiwa hivi:

[ 50.4 - 34.9 = 15.5 ]

Thamani hii inaonyesha kuwa CLQ-R ilionyesha alama ya upendeleo iliyo juu kwa pointi 15,5 kuliko klorokini huru. Matokeo haya ndiyo ugunduzi wa vitendo muhimu zaidi wa utafiti kwa upande wa fomulesheni za watoto; hata hivyo jaribio la upendeleo wa kitabia kwa panya si ushahidi wa moja kwa moja wa kliniki kwa kukubalika kwa ladha au ufuasi wa matibabu kwa watoto binadamu.

Matokeo ya jumla ya utafiti:

• Kompleksi ya CLQ-R iliandaliwa kwa uwiano wa dawa/resini wa 1:1 na ilionyesha maudhui ya klorokini msingi ya %42,6.
• Resini pekee haikupunguza uhai wa Caco-2.
• Katika 100 µM, CLQ na CLQ-R zote zilipunguza kwa maana uhai wa seli za Caco-2.
• CLQ-R ilihifadhi shughuli imara dhidi ya P. falciparum 3D7 kwa IC₅₀ ya 30 nM katika kiwango cha nanomolar.
• CLQ-R na resini zilionyesha shughuli ndogo ya hemolysis katika seli nyekundu za damu za binadamu; thamani za hemolysis zilibaki chini ya %10.
• Vigezo vya farmakokinetiki vya CLQ-R vilipatikana kuwa karibu na CLQ huru.
• CLQ-R ilikandamiza parasitemia kwa nguvu katika modeli ya panya ya P. berghei ANKA.
• Katika jaribio la kukandamiza la siku nne, shughuli ya CLQ-R dhidi ya plasmodia siku ya 14 ilitolewa kuwa %98,54.
• Katika jaribio la recrudescence, uhai siku ya 22 kwa wanyama waliotibiwa kwa CLQ-R uliripotiwa kuwa %50.
• Katika jaribio la upendeleo wa ladha la chupa mbili, CLQ-R ilionyesha alama ya upendeleo ya juu kuliko klorokini huru.
• Utafiti unaonyesha kuwa CLQ-R ina uwezo kwa maendeleo ya fomulesheni ya kumezwa rafiki kwa watoto; lakini si utafiti wa kliniki.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Maudhui haya yameandaliwa kwa kuzingatia utafiti wenye kichwa “Functional Assessment of Chloroquine–Resin Complexes for Improved Oral Antimalarial Formulations” ulioandaliwa na Tatiana A. Pádua, Mariana X. V. Passos, Ellen D. Mascarenhas, Thadeu Estevam M. M. Costa, Gabriel P. E. Silveira, Douglas P. Pinto, Ramayana M. M. Brito, Alexander G. Maier, Lilian L. Bueno, Eduardo G. R. de Sousa, Elaine C. Rosas na Thiago F. Guimarães.

Aina ya chanzo ni makala ya utafiti ya preprint. Katika maandishi kuna tamko wazi la “This preprint research paper has not been peer reviewed”. Kwa hiyo utafiti haujapitia tathmini ya rika. DOI, kukubaliwa mwisho na jarida au taarifa inayoonyesha kukamilika kwa mchakato wa tathmini ya rika haiwezi kuthibitishwa kutoka kwenye maandishi.

Maelezo yaliyomo katika makala hii yameandaliwa kwa kuzingatia mbinu, majedwali, vielelezo, data za farmakokinetiki, matokeo ya majaribio ya in vitro na in vivo, jaribio la upendeleo wa ladha na hitimisho za waandishi katika utafiti. Hakuna dai lisilokuwapo katika PDF lililoongezwa, kama mafanikio ya kliniki, ufanisi wa moja kwa moja kwa wagonjwa watoto, bidhaa iliyoidhinishwa, hakikisho la matibabu, hakikisho la usalama au pendekezo la matumizi kwa binadamu.

Utafiti si utafiti wa kliniki. Kukubalika kwa ladha, ufuasi wa matibabu, farmakokinetiki, usalama au ufanisi kwa watoto binadamu havikutathminiwa. Katika sehemu ya in vitro, vimelea vya P. falciparum 3D7, seli za Caco-2 na seli nyekundu za damu za binadamu zilitumika. Katika sehemu ya in vivo, panya Swiss Webster na C57BL/6 walitumika. Ufanisi dhidi ya malaria ulitathminiwa kwa modeli ya panya ya P. berghei ANKA. Athari ya kuficha ladha ilichunguzwa kwa panya kwa jaribio la upendeleo wa chupa mbili.

Inaweza kuhitimishwa kuwa kompleksi ya CLQ-R ina uwezo kwa maendeleo ya fomulesheni rafiki kwa watoto; hata hivyo ili uwezo huu ugeuke kuwa bidhaa halisi ya watoto, tafiti za ziada juu ya uthabiti wa dawa, usahihi wa dozi, upanuzi wa uzalishaji, tafiti za ladha kwa binadamu, kukubalika kwa watoto, usalama wa kliniki na ufanisi zinahitajika. Kwa sababu ya hadhi ya preprint, inapaswa kuzingatiwa kwamba matokeo yanaweza kubadilika baada ya tathmini ya rika au kuhitaji uthibitisho wa ziada.