Aspirini, digoksini, amiodaroni na furosemidi ni viambato vinne hai vinavyotumika katika michakato tofauti ya moyo na mishipa, kama vile utendaji wa chembe sahani, nguvu ya kusinyaa kwa moyo, mpigo wa moyo na mzigo wa maji mwilini. Kupima molekuli hizi, ambazo miundo yake ya kikemia na tabia zake za kromatografia hutofautiana sana, kwa kuzitenganisha katika hali moja ya uchanganuzi si kazi rahisi katika uundaji wa mbinu ya uchanganuzi.

P. Sankar na wenzake walitengeneza mbinu ya kromatografia ya kioevu yenye utendaji wa juu ya awamu iliyogeuzwa katika hali ya izokratiki, yaani RP-HPLC, kwa ajili ya kubaini kwa wakati mmoja viambato hivyo vinne hai katika uchanganuzi mmoja wa kromatografia. Watafiti walilenga mbinu hiyo isiwe tu ya kupima dawa, bali pia iweze kuzitenganisha na bidhaa za uharibifu zinazotokea chini ya msongo wa asidi, besi, oksidishaji, joto na fotolitiki.

Utenganishaji ulifanywa kwenye kolamu ya ACE C18 yenye vipimo vya 250 × 4,6 mm na ukubwa wa chembe wa 5 µm, iliyotumika pamoja na kolamu kinga. Asetonitrili, methanoli na asidi trifluoroasetiki ya asilimia 0,05 zilitumika kama vijenzi vya awamu tembezi. Kiwango cha mtiririko kiliripotiwa kuwa 1,0 mL/dakika, ujazo wa sindano 20 µL, urefu wa wimbi la ugunduzi wa UV 234 nm na muda wa jumla wa uchanganuzi 20 dakika.

Katika hali zilizotengenezwa, digoksini ilielutiwa katika dakika 3,918, aspirini katika dakika 4,482, furosemidi katika dakika 4,852 na amiodaroni katika dakika 14,282. Hivyo, viambato vitatu hai viligunduliwa katika takribani dakika tano za kwanza za kromatogramu, huku amiodaroni ikigunduliwa katika eneo la baadaye kwa uwazi.

Utafiti uliripoti mwitikio wa mstari katika masafa ya 25–75 µg/mL. Vigawo vya ubainishaji vilitolewa kuwa 1,0000 kwa digoksini, 0,9999 kwa aspirini na amiodaroni, na 0,9993 kwa furosemidi. Thamani hizi zinaonyesha kuwepo kwa uhusiano mkubwa wa mstari kati ya eneo la kilele na mkusanyiko wa analiti katika masafa ya mkusanyiko yaliyotathminiwa.

Katika tafiti za usahihi, viwango vya nyongeza vya asilimia 80, 100 na 120 vilitumika. Urejeshaji wa wastani ulioripotiwa katika jedwali ulikuwa katika masafa ya asilimia 100,59–100,99 kwa aspirini, asilimia 100,24–101,27 kwa digoksini, asilimia 100,57–101,15 kwa amiodaroni na asilimia 100,22–101,34 kwa furosemidi. Thamani zote husika za mkengeuko sanifu linganishi zilibaki chini ya asilimia 2.

Katika tafiti za usahihi wa ndani ya siku na kati ya siku, thamani za RSD pia zilikuwa chini ya asilimia 2. Katika majaribio ya uimara yaliyotathmini ustahimilivu wa mbinu dhidi ya mabadiliko madogo ya joto la kolamu na urefu wa wimbi la ugunduzi, thamani za RSD zilibaki katika masafa ya asilimia 0,10–0,91 na matokeo ya vipimo takribani katika masafa ya asilimia 98,00–101,75.

Matokeo yaliyojitokeza zaidi katika majaribio ya uharibifu wa kulazimishwa yalionekana chini ya hali ya besi. Baada ya kutumia 0,1 M NaOH, kiasi kilichobaki kilichoripotiwa kilikuwa asilimia 85,74 kwa aspirini, asilimia 80,36 kwa digoksini, asilimia 95,82 kwa amiodaroni na asilimia 90,53 kwa furosemidi. Kati ya matokeo haya, upotevu mkubwa zaidi chini ya msongo wa besi ulionekana kwa digoksini, ukifuatiwa na aspirini.

Upotevu ulioripotiwa chini ya asidi, oksidishaji, joto, hali ya mazingira na mwanga wa UV ulikuwa mdogo zaidi kuliko katika hali ya besi. Katika uchanganuzi wa saa 24 wa suluhisho za kawaida na za sampuli, mabadiliko kutoka mwanzo yaliripotiwa kuwa asilimia 1,10 kwa aspirini, asilimia 0,84 kwa digoksini, asilimia 0,37 kwa amiodaroni na asilimia 0,80 kwa furosemidi.

Utafiti unadai kuwa mbinu hiyo inaweza kutenganisha viambato vinne hai katika uchanganuzi mmoja na inaonyesha utofauti mdogo katika vigezo vya msingi vya uthibitishaji. Hata hivyo, haijaelezwa wazi vijenzi vya awamu tembezi vilichanganywa kwa uwiano gani wa ujazo. Joto la kolamu limetolewa kuwa 40°C katika sehemu ya mbinu, huku katika jedwali la hali limeandikwa kuwa “joto la mazingira”. Pia kuna kutokulingana kati ya sehemu mbalimbali za maandishi kuhusu kiwango cha kalibresheni na idadi ya marudio.

Aidha, ingawa imeelezwa kuwa bidhaa za uharibifu zilitenganishwa kama vilele tofauti, vigawo vya utenganishaji, kromatogramu za uharibifu wa kulazimishwa, matokeo ya nambari ya usafi wa kilele na utambulisho wa bidhaa za uharibifu havijawasilishwa. Kwa hiyo, ingawa mbinu hiyo inatoa mkabala wa uchanganuzi wenye matumaini, maelezo ya majaribio yaliyokosekana yanapaswa kufafanuliwa na uthibitishaji huru kufanywa kabla ya kuitumia moja kwa moja kati ya maabara.

Tatizo la kiuchanganuzi ambalo utafiti unajaribu kutatua

Katika udhibiti wa ubora wa dawa, kuonyesha tu kwamba kiambato hai kipo haitoshi. Kiambato hai kinapaswa kuwepo kwa kiasi sahihi, kupimika bila kuchanganyika na vijenzi vingine, na kutenganishwa na bidhaa za uharibifu zinazoweza kutokea baada ya muda.

Hitaji hili huwa tata zaidi pale ambapo kuna zaidi ya kiambato kimoja hai katika fomulesheni au mpango mmoja wa uchanganuzi. Kila molekuli inaweza kuwa na:

• Polarity tofauti,
• Ukubwa tofauti wa molekuli,
• Tabia tofauti ya asidi-besi,
• Umumunyifu tofauti,
• Nguvu tofauti ya mwingiliano na uso wa kolamu.

Kwa hiyo, hali ya awamu tembezi inayotenganisha vizuri molekuli moja inaweza kusababisha molekuli nyingine kutoka mapema sana, vilele vyake kuingiliana, au kubaki kwenye kolamu kwa muda mrefu kupita kiasi.

Tatizo kuu la utafiti ni kubainisha hali ya pamoja itakayowezesha kupimwa kwa aspirini, digoksini, amiodaroni na furosemidi katika uchanganuzi mmoja wa izokratiki wa RP-HPLC.

Kwa nini viambato vinne hai vilishughulikiwa katika mbinu moja?

Utangulizi wa utafiti unaeleza kuwa dawa hizi zinaweza kutumiwa kwa madhumuni tofauti katika magonjwa ya moyo na mishipa:

• Aspirini: Asidi asetilsalisiliki inayozuia cyclooxygenase kwa namna isiyoweza kurejeshwa na kutumiwa kwa madhumuni ya kupambana na chembe sahani.
• Digoksini: Na⁺/K⁺-ATPase, glikosidi ya moyo inayoathiri nguvu ya kusinyaa kwa myocardiamu kwa kuizuia.
• Amiodaroni: Dawa ya kuzuia arithmia ya daraja la III yenye wigo mpana.
• Furosemidi: Diuretiki yenye nguvu ya kitanzi inayotumika katika uhifadhi wa maji unaohusiana na kushindwa kwa moyo na shinikizo la damu.

Katika Kielelezo 1, miundo ya kikemia ya molekuli nne imeonyeshwa pamoja. Aspirini ina muundo mdogo kiasi wa aromatiki, huku digoksini ikiwa na kiini kikubwa cha steroid na vitengo vya sukari. Amiodaroni hutofautishwa na muundo wake mpana wa aromatiki wenye iodini, na furosemidi kwa vikundi vya klorini, sulfonamidi na asidi kaboksili.

Utafiti haukuchanganua tofauti hizi za molekuli kwa modeli ya kiasi ya muundo-kromatografia. Hata hivyo, utofauti wa miundo unaonyesha kwa njia ya kuona kwa nini kutenganisha misombo hiyo minne katika kolamu moja na hali moja ya awamu tembezi kunahitaji uboreshaji wa mbinu.

Pengo katika fasihi lilifafanuliwaje?

Watafiti walieleza kuwa kuna mbinu mbalimbali za HPLC kwa uchanganuzi wa wakati mmoja wa aspirini pamoja na clopidogrel, rosuvastatin, prasugrel au viambato vingine hai, na wa furosemidi pamoja na diuretiki nyingine. Mbinu za HPLC au LC-MS/MS pia zimeripotiwa kwa digoksini na amiodaroni katika sampuli za plazma, fomulesheni za dawa na sampuli za uyeyushaji.

Kwa upande mwingine, ilidaiwa kuwa hakuna mbinu iliyothibitishwa inayolenga kubaini dawa zote nne kwa pamoja katika uchanganuzi mmoja wa RP-HPLC. Dai la uhalisia wa utafiti linategemea hoja hii.

Kwa mbinu iliyotengenezwa, lengo lilikuwa maabara iweze:

• Kufanya uchanganuzi mmoja badala ya uchanganuzi minne tofauti,
• Kupunguza muda wa uchanganuzi,
• Kupunguza matumizi ya viyeyusho,
• Kurahisisha udhibiti wa ubora wa sampuli zenye vijenzi vingi.

Hata hivyo, utafiti haujawasilisha ulinganisho halisi wa gharama za maabara au hesabu ya matumizi ya kiyeyusho kwa kila mbinu. Faida za gharama na ufanisi ni hitimisho la kiutendaji linalotokana na uwezo wa mbinu kupima vijenzi vinne katika uchanganuzi mmoja.

RP-HPLC ina maana gani?

Katika kromatografia ya kioevu yenye utendaji wa juu, sampuli ya kioevu hupitishwa kwenye kolamu iliyojazwa chembe ndogo kwa msaada wa awamu tembezi. Molekuli katika sampuli hutoka kwenye kolamu kwa nyakati tofauti kwa sababu husambaa kwa viwango tofauti kati ya awamu tuli ya kolamu na awamu tembezi.

Katika HPLC ya awamu iliyogeuzwa, uso wa kolamu ni hidrofobiki kiasi, huku awamu tembezi ikiwa na maji na vijenzi vya kiyeyusho kikaboni. Kadiri molekuli inavyoingiliana kwa nguvu zaidi na uso wa kolamu, ndivyo inavyoweza kubaki kwenye kolamu kwa muda mrefu zaidi. Hata hivyo, muda wa kubaki hautegemei hidrofobia pekee; hali ya uionishaji, muundo wa awamu tembezi, joto na muundo wa molekuli pia vinaweza kuathiri matokeo.

Utafiti ulitumia kolamu ya ACE yenye awamu iliyofungwa ya C18. C18 inaelezea muundo wa kolamu ya awamu iliyogeuzwa ambapo minyororo mirefu ya kaboni imefungwa kwenye uso wa silika.

Elusheni ya izokratiki ni nini?

Katika mbinu ya izokratiki, muundo wa awamu tembezi hudumishwa bila kubadilika wakati wote wa uchanganuzi. Katika mbinu ya gradienti, uwiano wa kiyeyusho kikaboni au vijenzi vingine vya awamu tembezi hubadilishwa kadiri muda unavyopita.

Mbinu za izokratiki zinaweza kuwa rahisi kiasi kutekeleza na kuhamisha kati ya vifaa. Hata hivyo, vijenzi vyenye sifa tofauti sana za muda wa kubaki vinapokuwa katika uchanganuzi mmoja, lazima kuwe na uwiano kati ya kutenganisha misombo inayotoka mapema na kueluti kiwanja kinachotoka baadaye ndani ya muda unaokubalika.

Katika utafiti huu, digoksini, aspirini na furosemidi zilitoka kwa nyakati zilizo karibu katika dakika tano za kwanza, huku amiodaroni ikielutiwa katika dakika 14,282. Hali ya izokratiki ilikusudiwa kutenganisha kundi la misombo mitatu ya mapema na pia kueluti amiodaroni ndani ya uchanganuzi wa dakika 20.

Kifaa na mfumo wa kolamu uliotumika

Uchanganuzi ulifanywa kwa mfumo wa HPLC wa mfululizo wa Shimadzu LC-40. Mfumo una vijenzi vifuatavyo:

• Pampu ya njia nne,
• Kiondoa gesi mtandaoni DGU-40,
• Kigunduzi cha safu ya photodiode SPD-M40,
• Kichukua sampuli kiotomatiki SIL-40C,
• Programu ya ukusanyaji na uchakataji data LabSolutions 7.1.

Kwa utenganishaji, kolamu ya ACE C18 ilitumika pamoja na kolamu kinga:

• Urefu wa kolamu: 250 mm,
• Kipenyo cha ndani: 4,6 mm,
• Ukubwa wa chembe: 5 µm.

Awamu tembezi na viyeyushaji

Vijenzi vya awamu tembezi viliripotiwa katika utafiti kama ifuatavyo:

• Asidi trifluoroasetiki ya asilimia 0,05,
• Asetonitrili,
• Methanoli.

Elusheni ilifanywa kwa izokratiki. Hata hivyo, PDF haitoi uwiano wa ujazo wa vijenzi hivi vitatu katika awamu tembezi ya mwisho. Kauli “asilimia 100 asetonitrili”, “asilimia 100 methanoli” na “asilimia 0,05 TFA” zinafafanua njia tofauti za viyeyusho; hazionyeshi uwiano wa mchanganyiko uliopigwa pampu wakati wa uchanganuzi.

Viyeyushaji viwili tofauti viliripotiwa:

• Kiyeyushaji A: Methanoli:asetonitrili, 50:50 ujazo/ujazo.
• Kiyeyushaji B: Maji:asetonitrili, 50:50 ujazo/ujazo.

Imeelezwa kuwa awamu tembezi iliondolewa gesi kwa sonikesheni na kupitishwa kwenye kichujio cha utando cha 0,45 µm kabla ya matumizi.

Hali za kromatografia

Hali za msingi zilizoripotiwa katika sehemu ya mbinu ni hizi:

• Kiwango cha mtiririko: 1,0 mL/dakika,
• Ujazo wa sindano: 20 µL,
• Urefu wa wimbi la ugunduzi: 234 nm,
• Muda wa jumla wa uchanganuzi: 20 dakika,
• Joto la kolamu: 40°C katika maandishi ya mbinu.

Katika jedwali la hali, joto la kolamu limeandikwa “ambient”, yaani joto la mazingira. Matumizi ya 38 na 42°C katika majaribio ya uimara yanaashiria kuwa joto la kawaida ni 40°C. Tofauti hii ya uripoti inapaswa kufafanuliwa ili mbinu iweze kutekelezwa sawasawa katika maabara nyingine.

Suluhisho za kawaida ziliandaliwaje?

Utafiti unaeleza kuwa 25 mg za aspirini, digoksini, amiodaroni na furosemidi zilipimwa kila moja na kuyeyushwa kwa kiyeyushaji A. Maandishi yanasema kuwa 50 mL ya kiyeyushaji ilitumika na suluhisho lilikuwa 0,5 mg/mL, huku katika sentensi hiyo hiyo yakitaja flaski za ujazo za 100 mL.

Iwapo 25 mg ya dutu itaongezwa hadi 50 mL:

\[ C=\frac{25\ \mathrm{mg}}{50\ \mathrm{mL}}=0{,}5\ \mathrm{mg/mL} \]

Hapa:

• C, inaonyesha mkusanyiko wa suluhisho la akiba,
• 25 mg, ni kiasi cha kiambato hai kilichopimwa,
• 50 mL, inaonyesha ujazo wa mwisho unaodhaniwa.

Thamani ya 0,5 mg/mL katika maandishi inalingana na ujazo wa mwisho wa 50 mL. Kama ujazo wa mwisho ungekuwa 100 mL, mkusanyiko ungekuwa 0,25 mg/mL. Kwa hiyo, kuna utata wa uripoti kati ya ujazo wa flaski na mkusanyiko wa akiba ulioripotiwa.

Imeelezwa kuwa 2,5 mL ilichukuliwa kutoka suluhisho la akiba na kuongezwa hadi 50 mL. Ikiwa mkusanyiko wa awali wa akiba unachukuliwa kuwa 0,5 mg/mL, mkusanyiko wa suluhisho la kazi huwa:

\[ C_2=\frac{C_1V_1}{V_2} =\frac{0{,}5\ \mathrm{mg/mL}\times2{,}5\ \mathrm{mL}} {50\ \mathrm{mL}} =0{,}025\ \mathrm{mg/mL} \]

\[ 0{,}025\ \mathrm{mg/mL}=25\ \mu\mathrm{g/mL} \]

Thamani hii inalingana na mkusanyiko wa kawaida wa 0,025 mg/mL ulioripotiwa katika tafiti za ufaafu wa mfumo.

Ni hali gani zilizojaribiwa katika uboreshaji wa mbinu?

Majaribio matatu ya kromatografia yamelanishwa katika Kielelezo 2.

Jaribio la kwanza: bafa ya fosfati na asetonitrili

Katika hali ya kwanza iliyotumia bafa ya 20 mM potassium dihydrogen orthophosphate, pH 3,0 na asetonitrili:

• Mstari msingi ulivurugika,
• Idadi ya sahani nadharia ilikuwa ndogo,
• Ufuataji mkia wa kilele haukukubalika.

Jaribio la pili: TFA ya asilimia 0,1

Katika hali iliyotumia asetonitrili, methanoli na asidi trifluoroasetiki ya asilimia 0,1, ilielezwa kuwa misombo ilielutiwa mapema na maumbo ya vilele hayakufaa.

Hali iliyochaguliwa: TFA ya asilimia 0,05

Katika hali ya tatu iliyotumia asetonitrili, methanoli na asidi trifluoroasetiki ya asilimia 0,05:

• Vilele vyenye ulinganifu zaidi,
• Nyakati zinazofaa zaidi za kubaki,
• Thamani kubwa za sahani nadharia,
• Ufuataji mkia unaokubalika,
• Vilele vilivyotenganishwa kwenye mstari msingi viliripotiwa kupatikana.

Katika Kielelezo 2c, vilele vya digoksini, aspirini na furosemidi viko katika sehemu nyembamba ya takribani dakika 4–5 ya kromatogramu, huku amiodaroni ikionekana karibu dakika 14.

Nyakati za kubaki zinaonyesha nini?

Tofauti ya muda wa kubaki kati ya aspirini na furosemidi ni:

\[ 4{,}852-4{,}482=0{,}370\ \mathrm{dakika} \]

Tofauti kati ya digoksini na aspirini ni:

\[ 4{,}482-3{,}918=0{,}564\ \mathrm{dakika} \]

Watafiti wanaripoti kuwa vilele vilitenganishwa kwenye mstari msingi. Hata hivyo, utafiti hautoi vigawo vya nambari vya utenganishaji kati ya vilele vilivyo jirani. Hasa kwa sababu aspirini na furosemidi ziko karibu, kuripoti thamani za utenganishaji kungeweza kuonyesha kwa uwazi zaidi uwezo wa mbinu wa kutenganisha.

Kwa nini ufaafu wa mfumo hutathminiwa?

Ufaafu wa mfumo hukagua kama kifaa, kolamu na mbinu zinaonyesha utendaji unaotarajiwa kabla ya sampuli za uchanganuzi kupimwa. Vigezo vifuatavyo vilitathminiwa katika utafiti:

• Muda wa kubaki,
• Eneo la kilele,
• Kigezo cha ufuataji mkia,
• Idadi ya sahani nadharia.

Maandishi yanaeleza kuwa asilimia ya RSD ya muda wa kubaki na eneo la kilele ilikuwa chini ya 2, kigezo cha ufuataji mkia kilikuwa chini ya 2 na idadi ya sahani nadharia ilikuwa zaidi ya 500.

Katika Jedwali 2, badala ya thamani kamili za kigezo cha ufuataji mkia na idadi ya sahani nadharia, zimetolewa thamani za asilimia ya RSD zinazoonekana kuhusiana na vigezo hivyo. Kwa hiyo, dai la ufaafu katika maandishi na matokeo kamili ya ufaafu wa mfumo hayawezi kuthibitishwa kikamilifu kutoka kwenye jedwali.

Uteuzi ulitathminiwaje?

Katika jaribio la uteuzi:

• Kiyeyusho tupu,
• Plasebo,
• Kiwango,
• Kromatogramu za sampuli zililinganishwa.

Katika Kielelezo 3, kromatogramu tupu na za plasebo hazionyeshi kilele dhahiri cha kuingilia katika nyakati za kubaki za viambato vinne hai; katika kromatogramu za kiwango na sampuli, vilele lengwa vinaonekana.

Imeelezwa kuwa usafi wa kilele ulitathminiwa kwa kigunduzi cha safu ya photodiode. Hata hivyo, faharasa ya nambari ya usafi wa kilele, kizingiti cha usafi au matokeo ya ulinganisho wa spektra hayajatolewa.

Mstari ulitathminiwaje?

Mstari huonyesha kama mwitikio wa kifaa huongezeka kwa namna inayotabirika na sawia kadiri mkusanyiko unavyoongezeka. Katika utafiti, mikunjo ya kalibresheni iliundwa kwa kuchora eneo la wastani la kilele dhidi ya mkusanyiko.

Mlinganyo msingi wa kalibresheni ya mstari:

\[ y=mx+b \]

ni huu.

• y, inaonyesha eneo la kilele cha kromatografia,
• x, inaonyesha mkusanyiko wa analiti,
• m, inaonyesha mteremko,
• b, inaonyesha ukato wa mhimili wa y.

Milinganyo iliyoripotiwa katika utafiti ni kama ifuatavyo:

Digoksini:

\[ y=38\,752{,}7697x+15\,272{,}2000 \]

\[ R^2=1{,}0000 \]

Aspirini:

\[ y=14\,066{,}7087x-17\,834{,}8000 \]

\[ R^2=0{,}9999 \]

Furosemidi:

\[ y=108\,966{,}1435x+664\,621{,}6000 \]

\[ R^2=0{,}9993 \]

Amiodaroni:

\[ y=29\,556{,}5918x-18\,371{,}2000 \]

\[ R^2=0{,}9999 \]

Vigawo vyote vya ubainishaji viko juu ya 0,999. Thamani hizi zinaunga mkono kuwa eneo la kilele lina uhusiano mkubwa wa mstari na mkusanyiko katika masafa ya mkusanyiko yaliyotathminiwa katika utafiti.

Hata hivyo, sehemu ya mbinu inataja viwango 10 vya kalibresheni vinavyofunika viwango vya 50–150, huku sehemu ya matokeo ikitaja upunguzaji sita katika masafa ya 25–75 µg/mL. Idadi ya viwango vya kalibresheni na mikusanyiko yake kamili haijatolewa kwa namna inayolingana katika maandishi yote.

Usahihi na urejeshaji hupima nini?

Usahihi huonyesha jinsi kiasi kinachopatikana kwa mbinu kilivyo karibu na thamani inayojulikana au ya kinadharia. Katika utafiti, viwango vya nyongeza vya asilimia 80, asilimia 100 na asilimia 120 vilitumika na kila kiwango kikachanganuliwa mara tatu.

Maana ya msingi ya kihisabati ya urejeshaji inaweza kuonyeshwa kwa madhumuni ya ufafanuzi kama ifuatavyo:

\[ \text{Geri kazanım (\%)}= \frac{\text{ölçülen miktar}} {\text{eklenen teorik miktar}} \times100 \]

Matokeo yaliyo karibu na asilimia 100 yanaonyesha kuwa mbinu inaweza kupima tena kwa kiwango kikubwa kiasi cha kiambato hai kilichoongezwa.

Matokeo yaliyoripotiwa katika Jedwali 2:

Masafa ya urejeshaji yaliyotolewa katika maandishi ya matokeo ni mapana zaidi kuliko thamani katika jedwali hili. Kwa mfano, kwa aspirini, maandishi yanaonyesha masafa ya asilimia 99,81–101,84, huku jedwali likionyesha asilimia 100,59–100,99. Kwa kuwa data ghafi za vipimo hazijawasilishwa, haiwezi kubainishwa kama tofauti hii inawakilisha marudio mengine au ni kutokulingana kwa uripoti.

Usahihi wa kurudiwa na asilimia ya RSD

Usahihi wa kurudiwa hutathmini jinsi vipimo vinavyorudiwa chini ya hali sawa au zinazofanana vilivyo karibu na kila kimoja. Utafiti ulitathmini kurudiwa ndani ya siku na usahihi wa kati ya siku.

Fomula ya asilimia ya RSD iliyotolewa wazi katika utafiti ni:

\[ \%RSD= \frac{s}{\bar{x}} \times100 \]

Hapa:

• s, inaonyesha mkengeuko sanifu wa vipimo,
• \bar{x}, inaonyesha wastani wa vipimo,
• RSD inaonyesha mkengeuko sanifu linganishi.

Kadiri RSD inavyopungua, ndivyo inavyoeleweka kuwa usambazaji wa vipimo vinavyorudiwa ni mwembamba zaidi ukilinganishwa na wastani.

Katika maandishi ya matokeo, thamani ya RSD ya ndani ya siku ya furosemidi imeandikwa kuwa asilimia 0,94, huku Jedwali 2 likitoa asilimia 0,79. Thamani zote mbili ziko chini ya kikomo cha asilimia 2 kilichotumiwa katika utafiti; hata hivyo, maandishi na jedwali hayalingani kuhusu thamani sahihi ya kuripoti.

Jaribio la uimara linaonyesha nini?

Uimara hutathmini kama mabadiliko madogo yanayofanywa kwa makusudi katika hali za mbinu yanabadilisha matokeo kwa kiasi kikubwa.

Katika utafiti:

• Joto la kolamu lilibadilishwa hadi 38 na 42°C,
• Urefu wa wimbi la ugunduzi ulitumika kuwa 233 na 237 nm.

Joto la kawaida likichukuliwa kuwa 40°C, mabadiliko ya 38 na 42°C yanalingana na ±2°C. Ingawa urefu wa wimbi wa kawaida ni 234 nm, thamani za 233 na 237 nm hazitengenezi mabadiliko sawa ya ±2 nm. Kwa hiyo, maelezo ya “±2 nm” katika maandishi hayalingani na urefu wa mawimbi uliotolewa kwenye jedwali.

Katika hali zote za uimara:

• Thamani za RSD zilibaki katika masafa ya asilimia 0,10–0,91,
• Matokeo ya vipimo yalibaki katika masafa ya asilimia 98,00–101,75.

Matokeo ya chini zaidi ya kipimo yaliyoripotiwa ni masafa ya digoksini yaliyoshuka hadi asilimia 98,00 katika hali ya 233 nm. Thamani ya juu zaidi ni masafa ya aspirini yaliyofikia asilimia 101,75 katika hali ya 237 nm.

Kwa nini utafiti wa uharibifu wa kulazimishwa ulifanywa?

Mbinu ya uchanganuzi inayoweza kuonyesha uthabiti inapaswa kuweza kutenganisha kilele cha kiambato kikuu hai na vijenzi vingine vinavyotokea wakati wa uharibifu. Kwa hiyo, viambato hai huwekwa katika hali kali zaidi kuliko uhifadhi wa kawaida.

Misongo iliyotumika katika utafiti:

• Msongo wa asidi: 0,1 N HCl,
• Msongo wa besi: 0,1 M NaOH,
• Msongo wa oksidishaji: Asilimia 0,1 H₂O₂,
• Msongo wa joto: saa mbili katika 105°C,
• Hali ya mazingira: siku mbili katika joto la chumba,
• Msongo wa fotolitiki: siku saba katika 254 nm,
• Msongo wa fotolitiki: siku saba katika 366 nm.

Jedwali la uharibifu linapaswa kusomwaje?

Thamani katika Jedwali 4 hazionyeshi asilimia iliyoharibika, bali asilimia ya dawa iliyobaki iliyopimwa baada ya msongo. Kiwango cha takribani cha upotevu kinaweza kuhesabiwa kwa uhusiano ufuatao:

\[ \text{Yaklaşık kayıp (\%)}= 100-\text{kalan miktar (\%)} \]

Kwa nini msongo wa besi unajitokeza zaidi?

Upotevu wa takribani uliokokotolewa katika hali ya besi:

• Digoksini: asilimia 19,64,
• Aspirini: asilimia 14,26,
• Furosemidi: asilimia 9,47,
• Amiodaroni: asilimia 4,18.

Hivyo, kwa dawa zote nne, upotevu mkubwa zaidi katika jedwali unaonekana chini ya msongo wa besi. Digoksini na aspirini zimeonyesha upotevu mkubwa hasa.

Utafiti haujatambua bidhaa za kikemia za uharibifu unaohusishwa na upotevu huu wala kutatua taratibu za uharibifu. Kwa hiyo, matokeo yanaonyesha ni dawa zipi zilipungua zaidi chini ya msongo upi; hayaelezi muundo wa molekuli zilizotokea.

Kikomo cha dai la mbinu inayoonyesha uthabiti

Watafiti wanaeleza kuwa misombo mikuu ilitenganishwa na bidhaa za uharibifu. Hata hivyo, katika PDF:

• Kromatogramu tofauti za uharibifu wa kulazimishwa,
• Thamani za utenganishaji kati ya kilele kikuu na kilele cha karibu zaidi cha uharibifu,
• Matokeo ya nambari ya usafi wa kilele kwa safu ya photodiode,
• Uwiano wa wingi,
• Utambulisho wa bidhaa za uharibifu haujawasilishwa.

Kwa hiyo, data iliyowasilishwa inaonyesha kuwa kiasi cha dawa hubadilika chini ya msongo. Ushahidi kuhusu uwezo wa mbinu kutenganisha bidhaa za uharibifu umebaki katika kiwango cha muhtasari katika utafiti.

Uthabiti wa suluhisho

Suluhisho za kawaida na sampuli zilitathminiwa katika vipindi vya saa 0, 6, 12, 18 na 24. Ingawa safu moja katika kichwa cha jedwali inaonekana kama “saa ya 8”, kuandikwa “saa 0–18” katika safu ya ulinganisho kunaashiria kuwa hatua hiyo ni saa ya 18.

Kigezo cha kukubalika cha utafiti ni ± asilimia 2 na imeelezwa kuwa matokeo yote yalibaki ndani ya mpaka huu. Mabadiliko makubwa zaidi katika saa 24 yalikuwa asilimia 1,10 kwa aspirini.

Mbinu ilitengenezwa kwa matumizi gani?

Watafiti wanaeleza kuwa mbinu inaweza kutumiwa kwa udhibiti wa kawaida wa ubora wa fomulesheni za dawa na tathmini ya uthabiti.

Utafiti haulengi madhumuni yafuatayo:

• Kupima kiwango cha digoksini au amiodaroni katika damu ya mgonjwa,
• Ufuatiliaji wa dawa wa matibabu,
• Uchanganuzi wa famakokinetiki,
• Utafiti wa ulinganifu wa kibayolojia,
• Kulinganisha ufanisi wa kliniki wa dawa,
• Kubainisha dozi maalum kwa mgonjwa.

Kwa kuwa plazma, seramu, mkojo au matriksi nyingine ya kibayolojia haikuchanganuliwa, haiwezi kuhitimishwa kuwa mbinu inaweza kutumika katika sampuli za kibayolojia.

Umuhimu wa utafiti kwa mtazamo wa kihistoria

Tafiti za awali za kromatografia kwa kiasi kikubwa zilishughulikia dawa moja kati ya hizi au mchanganyiko mdogo wa dawa mbili au tatu. Utafiti huu unatoa muundo wa mbinu wa kupima viambato vinne tofauti vya moyo na mishipa kwa kolamu moja ya C18 na uchanganuzi mmoja wa izokratiki.

Umuhimu wake kwa sasa

Kubaini zaidi ya kiambato kimoja hai katika uchanganuzi mmoja kunaweza kusaidia kupunguza muda wa matumizi ya kifaa na hatua za uchanganuzi katika maabara za udhibiti wa ubora. Kupata vilele vinne katika uchanganuzi wa dakika ishirini kunatoa mwanzo wa kiutendaji wa kuanzisha jukwaa moja la uchanganuzi badala ya mbinu tofauti.

Hata hivyo, sharti kuu la kuhamishika kwa mbinu ni kufafanua wazi uwiano wa awamu tembezi na maelezo ya maandalizi ya sampuli. Baadhi ya maelezo haya hayajakamilika au hayalingani katika preprint ya sasa.

Mambo yanayopaswa kufanywa siku zijazo

• Uwiano wa TFA, asetonitrili na methanoli katika awamu tembezi unapaswa kutolewa kwa usahihi.
• Inapaswa kufafanuliwa kama joto la kolamu ni joto la mazingira au 40°C.
• Idadi ya viwango vya kalibresheni na mikusanyiko yake kamili inapaswa kusahihishwa.
• Ujazo wa mwisho na mkusanyiko halisi wa suluhisho la akiba unapaswa kuandikwa wazi.
• Idadi kamili za sahani na vigezo vya ufuataji mkia vinapaswa kutolewa kwa ufaafu wa mfumo.
• Vigawo vya utenganishaji vya vilele vilivyo jirani vinapaswa kuripotiwa.
• Thamani za LOD na LOQ zinapaswa kubainishwa au kuwasilishwa.
• Kromatogramu za uharibifu wa kulazimishwa na matokeo ya nambari ya usafi wa kilele yanapaswa kuongezwa.
• Uwiano wa wingi wa uharibifu unapaswa kutathminiwa.
• Uhamishaji wa mbinu unapaswa kujaribiwa katika maabara huru au kwa loti tofauti za kolamu.
• Maandalizi ya sampuli na athari ya matriksi katika bidhaa halisi za dawa yanapaswa kuthibitishwa kwa kina.

Nguvu za utafiti

• Viambato vinne hai vyenye miundo tofauti ya kikemia vilishughulikiwa katika uchanganuzi mmoja.
• Uboreshaji wa mbinu ulifanywa kwa kulinganisha awamu tembezi na hali tofauti za mtiririko.
• Mfumo wa HPLC wenye kigunduzi cha safu ya photodiode ulitumika.
• Kromatogramu tupu, za plasebo, za kiwango na za sampuli zililinganishwa.
• Majaribio ya mstari, usahihi, usahihi wa kurudiwa na uimara yalifanywa.
• Hali nyingi za msongo, zikiwemo asidi, besi, oksidishaji, joto, mazingira na urefu mbili za mawimbi ya UV, zilitathminiwa.
• Uthabiti wa suluhisho kwa saa 24 ulitathminiwa.
• Vigawo vyote vya ubainishaji wa kalibresheni vilikuwa juu ya 0,999.
• Thamani za RSD katika majaribio ya urejeshaji na usahihi zilibaki chini ya asilimia 2.
• Mbinu inatoa uchanganuzi wa izokratiki wa dakika 20.

Mapungufu ya utafiti

• Utafiti ni preprint ambayo haijapitia mapitio ya rika.
• Uwiano wa mwisho wa mchanganyiko wa vijenzi vya awamu tembezi haujatolewa.
• Joto la kolamu limeandikwa 40°C katika sehemu ya mbinu na joto la mazingira katika jedwali.
• Maelezo ya maandalizi ya suluhisho la akiba yana kauli za 50 mL na 100 mL kwa pamoja.
• Katika sehemu ya mstari, viwango 10 na upunguzaji sita vimetajwa tofauti.
• Mfululizo kamili wa mikusanyiko ya viwango vya kalibresheni haujatolewa.
• Kwa ufaafu wa mfumo, sehemu ya mbinu inataja marudio matano huku majedwali yakitaja marudio sita.
• Idadi kamili za sahani nadharia na vigezo vya ufuataji mkia hazijaripotiwa wazi.
• Thamani za nambari za utenganishaji kati ya vilele hazijawasilishwa.
• Matokeo ya nambari ya usafi wa kilele hayajatolewa.
• Ingawa unyeti umetajwa, hakuna matokeo ya LOD na LOQ.
• Masafa ya maandishi katika sehemu ya usahihi si sawa na thamani za Jedwali 2.
• Thamani ya usahihi wa ndani ya siku ya furosemidi imeripotiwa tofauti katika maandishi na jedwali.
• Ingawa “±2 nm” imesemwa kwa uimara, 233 na 237 nm zilitumika.
• Miundo ya bidhaa za uharibifu wa kulazimishwa haijatambuliwa.
• Kromatogramu za uharibifu wa kulazimishwa hazijawasilishwa.
• Uwiano wa wingi wa uharibifu haujatathminiwa.
• Viwango vya usafi vya viwango vya viambato hai na taarifa za ufuatiliaji zilizoidhinishwa hazijatolewa.
• Fomulesheni ya kina ya bidhaa maalum ya kibiashara na matokeo halisi ya assay ya bidhaa hayajawasilishwa.
• Sampuli za kibayolojia au wagonjwa wa kliniki hawakuchunguzwa.

Utafiti unasema nini?

• Viambato vinne hai viliweza kugunduliwa katika uchanganuzi mmoja wa izokratiki kwenye kolamu ya ACE C18.
• Digoksini, aspirini na furosemidi zilielutiwa takribani katika dakika tano za kwanza; amiodaroni ilielutiwa katika dakika 14,282.
• Muda wa jumla wa uchanganuzi ni dakika 20.
• Vilele vinavyoweza kupimwa vilipatikana kwa viambato vinne hai katika 234 nm.
• Mwitikio mkubwa wa mstari ulionekana katika masafa yaliyoripotiwa ya 25–75 µg/mL.
• Thamani ndogo za RSD zilipatikana katika matokeo ya usahihi na usahihi wa kurudiwa.
• Mabadiliko madogo ya joto na urefu wa wimbi hayakubadilisha sana matokeo ya mbinu.
• Msongo wa besi ulisababisha upotevu mkubwa zaidi kwa viambato vinne hai kuliko misongo mingine.
• Mabadiliko katika suluhisho kwa saa 24 yalibaki chini ya asilimia 2.

Utafiti hausemi nini?

• Hauonyeshi kuwa mbinu inafaa kwa ufuatiliaji wa dawa wa matibabu katika damu ya mgonjwa.
• Hautathmini kama matumizi ya kliniki ya dawa nne kwa pamoja ni salama au yenye ufanisi.
• Haujalishi dozi za kliniki za dawa au matokeo ya matibabu.
• Hautambui utambulisho wa kikemia wa bidhaa za uharibifu.
• Kwa kuwa uwiano wa awamu tembezi haujatolewa, hauonyeshi kuwa mbinu inaweza kuzalishwa tena kikamilifu.
• Hauripoti utenganishaji wa nambari wa vilele vilivyo jirani.
• Hauonyeshi utendaji wa LOD na LOQ wa mbinu katika mikusanyiko ya chini sana.
• Haithibitishi kuwa mbinu itafanya kazi bila kuingiliwa kwa miundo yote ya bidhaa za dawa na viambato saidizi.
• Hauonyeshi kuwa mbinu imethibitishwa katika maabara tofauti au mifumo tofauti ya HPLC.

Mbinu na Matokeo ya Utafiti

Muhtasari wa kiufundi wa mbinu

Matokeo ya muda wa kubaki na ufaafu wa mfumo

Jedwali linatoa thamani za asilimia ya RSD zinazoonekana kuhusiana na kurudiwa kwa vigezo hivi badala ya idadi kamili za sahani nadharia na kigezo cha ufuataji mkia.

Matokeo ya mstari

Muhtasari wa pamoja wa usahihi na usahihi wa kurudiwa

Muhtasari wa matokeo ya uimara

Viwango vya takribani vya upotevu katika hali za msongo

Thamani hizi za upotevu ni hesabu za ufafanuzi zilizopatikana kwa kutoa kiasi kilichobaki kilichoripotiwa kutoka 100. Haziwakilishi moja kwa moja kiasi au utambulisho wa bidhaa za uharibifu.

Ujumbe wa kisayansi wa vielelezo

Tathmini ya pamoja ya matokeo ya kiufundi

• Analiti zote nne ziliweza kupimwa kwa kolamu moja ya C18 na hali ya ugunduzi ya 234 nm.
• Ingawa vilele vitatu vya mapema viko karibu, watafiti waliripoti utenganishaji kwenye mstari msingi.
• Amiodaroni ilielutiwa kwa kuchelewa kwa uwazi kuliko vijenzi vingine vitatu.
• Mikunjo ya kalibresheni ilionyesha mstari mkubwa katika masafa yaliyotathminiwa.
• Urejeshaji ulipatikana karibu na asilimia 100.
• Matokeo ya usahihi wa ndani ya siku na kati ya siku yalionyesha utofauti mdogo.
• Mabadiliko madogo ya joto na urefu wa wimbi hayakusababisha mkengeuko mkubwa katika matokeo.
• Hali kali zaidi ya uharibifu wa kulazimishwa ni mazingira ya besi.
• Suluhisho zilibaki ndani ya kikomo cha mabadiliko cha asilimia 2 kilichotumiwa katika utafiti kwa saa 24.
• Uwiano wa awamu tembezi, matokeo kamili ya ufaafu wa mfumo na kromatogramu za msongo ndiyo taarifa kuu zilizokosekana kwa upande wa uwezo wa kuzalisha mbinu tena.

Maelezo ya Chanzo na Mbinu

Maudhui haya yanategemea utafiti ulioandaliwa na P. Sankar, S. Padmavathi, Vijayan, S. Anbazhagan na K. Reeta Vijayarani wenye kichwa “Analytical method development and validation of simultaneous estimation of aspirin, digoxin, amiodarone, and furosemide by RP-HPLC”.

Utafiti huu ni makala ya preprint ya utafiti inayotengeneza mbinu ya izokratiki ya RP-HPLC kwa ajili ya kubaini aspirini, digoksini, amiodaroni na furosemidi katika uchanganuzi mmoja wa kromatografia na kutathmini utendaji wa msingi wa kiuchanganuzi wa mbinu hiyo.

Maandishi yana onyo la wazi “This preprint research paper has not been peer reviewed”. Kwa hiyo, utafiti haujapitia mapitio ya rika. PDF haina taarifa kwamba umekubaliwa na jarida au kwamba toleo la mwisho lililopitiwa na rika limechapishwa.

Waandishi wanaeleza kuwa mbinu ilitathminiwa kwa ufaafu wa mfumo, uteuzi, mstari, usahihi, usahihi wa kurudiwa na uimara kwa mujibu wa ICH Q2(R1). Majaribio ya msongo wa asidi, besi, oksidishaji, joto, mazingira na fotolitiki pia yalifanywa.

Utafiti si utafiti wa kliniki. Hakuna mgonjwa, damu, plazma, seramu au sampuli nyingine ya kibayolojia iliyochunguzwa. Ufanisi wa matibabu wa dawa, usalama wa matumizi ya pamoja, dozi au viwango vya damu kwa wagonjwa havikutathminiwa.

Mbinu ilitengenezwa kwa madhumuni ya udhibiti wa ubora wa dawa. Ingawa masafa finyu ya matibabu ya digoksini yametajwa katika utangulizi, mbinu iliyowasilishwa si mbinu ya plazma au seramu iliyothibitishwa kwa ufuatiliaji wa dawa wa matibabu.

Utafiti unaeleza kuwa awamu tembezi ina asidi trifluoroasetiki ya asilimia 0,05, asetonitrili na methanoli; hata hivyo, hautoi uwiano wa mwisho wa ujazo wa vijenzi. Kuna tofauti za uripoti kati ya sehemu mbalimbali za maandishi kuhusu joto la kolamu, ujazo wa suluhisho la akiba, kiwango cha kalibresheni na idadi ya marudio.

Ingawa imeelezwa kuwa bidhaa za uharibifu zilitenganishwa na vilele vikuu vya dawa, kromatogramu za uharibifu wa kulazimishwa, thamani za nambari za usafi wa kilele, vigawo vya utenganishaji na utambulisho wa bidhaa za uharibifu havijawasilishwa. Kwa hiyo, dai la kuonyesha uthabiti linapaswa kutathminiwa kwa tahadhari ndani ya mipaka ya data iliyotolewa katika preprint.

Waandishi waliripoti kutokuwepo kwa ufadhili wa nje na mgongano wa maslahi, na kwamba data zinazounga mkono utafiti zimo ndani ya makala.

Maudhui haya ya Kituruki yaliandaliwa kwa kutegemea tu maelezo ya mbinu, kromatogramu, majedwali, matokeo ya nambari na maoni ya waandishi katika PDF iliyopakiwa. Hakuna madai ambayo hayapo katika PDF yaliyoongezwa kuhusu mafanikio ya kliniki, usalama wa mgonjwa, utendaji uliothibitishwa kati ya maabara au uwezekano wa matumizi ya uhakika katika bidhaa zote za dawa.