Бул изилдөөнүн негизги көйгөйү, опиоид kullanımının коомдук деңгээлде izlenebilmesi için ишенимдүү, сезгич ve кеңири laboratuvarlarda колдонууга мүмкүн болгон ыкмаlere ihtiyaç duyulmasıdır. Opioid krizi айрыкча sentetik опиоидlerin, örneğin fentanil ve türevlerinin кеңириlaşmasıyla ciddi bir коомдук саламаттык sorununa dönüşmüştür. Geleneksel veri булактары; anketler, hastane жазуулары, aşırı doz ölümleri, tedavi başvuruları, kolluk verileri ve ele geçirilen madde жазуулары gibi кыйыр veya кечиккен көрсөткүчтөргө таянат. Bu kaynaklar önemli olsa da, toplumdaki чыныгы колдонуу тенденцияларын her zaman өз убагында, бейтарап ve деталдуу түрдө чагылдырбай калышы мүмкүн.

Агынды суу негизделген эпидемиология bu боштукту толтуруу için gelişen bir ыкмаdır. Bir bölgenin канализация sistemine karışan агынды суу, o bölgede yaşayan insanların заң ve заара yoluyla attığı ilaç метаболиттердинi, химиялык заттарды ve биологиялык издерди içerebilir. Bu örnekler анализделгенде жеке адамдарды эмес, жамаат деңгээлиндеги eğilimleri anlamak mümkün olur. Ошондуктан WBE, опиоид kullanımı gibi коомдук саламаттык açısından kritik konularda эрте эскертүү, bölgesel көзөмөлдөө ve ресурсту пландоо için баалуу курал olabilir.

Бирок агынды сууda опиоид analizi техникалык жактан кыйын. Максаттуу кошулмалар көп учурда ng/L ya da ppt деңгээлинде бар. Агынды суу матрицасы ise өтө татаал: органикалык зат, туздар, детергент калдыктары, биологиялык бөлүкчөлөр, diğer ilaçlar ve farklı химиялык кийлигишүүлөр aynı үлгүдө bulunabilir. Bu karmaşık zemin içinde çok düşük miktardaki опиоид метаболиттердинi ишенимдүү biçimde ayırmak, таануу ve өлчөө жогорку сезгичтикти талап кылат.

Bu çalışmanın мааниси ушул жерден көрүнөт. Адабиятта ppt деңгээлиндеki analizler көп учурда yüksek эригичтикlü kütle spektrometrisi yani HRMS veya premium seviye triple quadrupole sistemlerle ilişkilidir. Bu cihazlar çok güçlüdür; fakat pahalıdır, teknik uzmanlık gerektirir ve her коомдук саламаттык veya çevre көзөмөлдөө laboratuvarında bulunmayabilir. Araştırmacılar bu nedenle daha erişilebilir bir soru sormaktadır: Orta seviye bir triple quadrupole LC-MS/MS sistemiyle, doğru örnek hazırlama ve өлчөө optimizasyonu yapılırsa ppt деңгээлинде опиоид өлчөөü mümkün olabilir mi?

Çalışmanın yanıtı, belirli koşullar altında evettir. Yazarlar SCIEX Triple Quad 3500 gibi orta seviye kabul edilebilecek bir triple quadrupole platform üzerinde, SPE zenginleştirme, %100 suda yeniden çözündürme, büyük hacimli enjeksiyon ve scheduled MRM stratejisini birleştirerek yüksek duyarlılık elde etmiştir.

Изилдөөдө hedeflenen yedi analit şunlardır:

• Morfin: Hem doğrudan kullanılan bir опиоид analjezik hem de eroin metabolizmasıyla ilişkili önemli bir gösterge olarak ele alınır.
• M3G, morfin-3-glukuronid: Morfinin karaciğerde glukuronidasyonla oluşan метаболиттердинden biridir.
• M6G, morfin-6-glukuronid: Morfinin bir diğer glukuronid metabolitidir ve yapısal olarak M3G’ye çok benzer.
• Norfentanil: Fentanilin başlıca метаболиттердинden biridir ve sentetik опиоид maruziyeti açısından önemli bir göstergedir.
• Noroksikodon: Oksikodon metabolizmasıyla ilişkili bir metabolittir.
• Metadon: Ağrı yönetimi ve опиоид bağımlılığı tedavisinde kullanılan sentetik опиоидdir; kötüye kullanım potansiyeli nedeniyle көзөмөлдөө paneline alınmıştır.
• EDDP: Metadonun temel metabolitidir ve опиоид ikame tedavisi veya metadon maruziyeti bağlamında önemli bir агынды суу göstergesi olarak kullanılır.

Bu panelin seçimi, çalışmanın гана “hangi bileşikler ölçülebilir?” sorusuna değil, WBE açısından “hangi metabolitler коомдук деңгээлде anlamlı gösterge olabilir?” sorusuna da odaklandığını көрсөтөт. Özellikle glukuronid метаболиттердинin dahil edilmesi маанилүү; çünkü bu metabolitler polar, yapısal olarak benzer ve агынды суу матрицасыnde düşük derişimlerde bulunabilen zor analitlerdir.

Çalışmanın analitik akışında ilk kritik aşama kalibrasyon ve kalite kontrol hazırlığıdır. Ana stok çözelti her analit için 2.000 ng/mL derişimde hazırlanmıştır. Seri seyreltmeyle 0,008–2.000 ng/mL арасында 19 noktalı kalibrasyon eğrileri oluşturulmuştur. Çoğu analit için 50 µL enjeksiyonda 0–250 ng/mL aralığında doğrusal çalışma aralığı belirlenmiştir. Düşük, orta ve yüksek düzey kalite kontrol örnekleriyle ыкмаin performansı değerlendirilmiştir.

Yöntemin kromatografik başarısında örnek çözündürme ortamı belirleyici olmuştur. Изилдөөдө başlangıçta farklı metanol/su oranları denenmiştir: %100 metanol, 75:25 metanol/su, 50:50 metanol/su, 25:75 metanol/su ve %100 su. LC gradyanının başlangıcı su ağırlıklı olduğu için, örneğin başlangıç mobil fazına uyumlu olması pik şeklini iyileştirmiştir. %100 suda yeniden çözündürme, айрыкча morfin, M3G ve M6G için daha keskin pikler ve daha yüksek sinyal vermiştir.

Sayfa 21’deki Сүрөт 4 bu optimizasyonu görsel olarak ачык түрдө көрсөтөт. Farklı başlangıç çözgen bileşimlerinde alınan kromatogramlar karşılaştırılır. Metanol oranı yüksek olduğunda bazı analitlerde pik önü yayılması, kuyruklanma veya düşük sinyal байкалатken, %100 su koşulunda morfin ve glukuronid метаболиттердинde daha düzgün ve daha güçlü pikler elde edilmiştir. Бул визуал, ыкмаin duyarlılığının гана kütle spektrometresinden değil, örneğin hangi çözgende enjekte edildiği gibi жөнөкөй görünen ama kritik bir kromatografik parametreden de etkilendiğini көрсөтөт.

İkinci kritik aşama katı faz ekstraksiyonudur. Агынды суу örnekleri pH 2,5’e asitlendirilmiş, böylece analitlerin kararlılığı ve Strata-XC polimerik sorbent kartuşa tutunması iyileştirilmiştir. Kartuşlar metanol ve asitlendirilmiş suyla koşullandırılmış; örnekler vakum altında yüklenmiş; kartuşlar suyla yıkanmış, vakum altında kurutulmuş ve analitler %2 amonyak içeren metanol ile elüe edilmiştir. Elüatlar 40 °C’de azot altında kurutulmuş ve analiz öncesinde HPLC dereceli su içinde yeniden çözündürülmüştür.

Scheme 1, yani şematik iş akışı, SPE sonrasındaki yeniden çözündürme ыкмаını görselleştirir. Şemada 50 mL örneğin SPE’den geçirilerek daha küçük hacimli ekstrakta dönüştürülmesi, kurutma/yeniden çözündürme ve farklı çözgen koşullarında analiz tüplerinin hazırlanması көрсөтүлөт. Bu şema, ыкмаin temel mantığını özetler: büyük hacimli çevresel үлгүдөn hedef analitleri yoğunlaştırmak, ardından cihazda daha yüksek enjeksiyon hacmiyle duyarlılığı artırmak.

Bu noktada önemli bir тең салмак vardır. Изилдөөдө %100 suda yeniden çözündürmenin bazı analitlerin geri kazanımını düşürdüğü belirtilmiştir. Fakat aynı işlem 5 µL yerine 50 µL enjeksiyona olanak vermiştir. Yani mutlak geri kazanımda %10–40 деңгээлинде azalma olsa bile, enjeksiyon hacmindeki 10 kat artış toplam sinyal açısından net avantaj sağlamıştır. Bu, analitik kimyada sık görülen bir optimizasyon gerçeğini көрсөтөт: En iyi ыкма, tek bir parametrenin en yüksek olduğu ыкма değil; duyarlılık, pik şekli, geri kazanım, tekrarlanabilirlik ve matriks toleransı арасында en iyi тең салмакyi kuran ыкмаdir.

Kütle spektrometresi ыкмаi pozitif elektrospray iyonizasyon yani ESI pozitif modda иштелип чыккан. Her analit için multiple reaction monitoring, yani MRM өтүүleri optimize edilmiştir. MRM, triple quadrupole kütle spektrometrisinde belirli bir ana iyonun belirli ürün iyonlarına ажырооsını izleyerek seçicilik ve duyarlılık камсыз кылат. Bu изилдөөдө her analit için bir kantitatif ana өтүү ve bir veya iki doğrulayıcı өтүү seçilmiştir.

MRM mantığı жөнөкөйçe şu şekilde düşünülebilir:

\[ Q1: \text{ana iyon} \rightarrow Q3: \text{ürün iyon} \]

Burada Q1, hedef молекулаün belirli kütle/yük oranına sahip ana iyonunu seçer. Çarpışma hücresinde bu iyon parçalanır. Q3 ise belirli ürün iyonunu izler. Bir bileşiğin hem doğru ana iyonu hem de doğru ürün iyonu doğru alıkonma өз убагында görülüyorsa, tanımlama daha ишенимдүү hale gelir.

Sayfa 19’daki Сүрөт 1, изилдөөдөki her опиоид veya metabolit için temsilî ажыроо spektrumlarını sunar. EDDP, M6G, M3G, morfin, norfentanil, noroksikodon ve metadon için ana kütleler ve belirgin ürün iyonları көрсөтүлөт. Bu şekil, MRM өтүүlerinin neden seçildiğini destekleyen ажыроо kanıtı olarak маанилүү. Мисалы M3G ve M6G aynı nominal öncül kütleye çok yakın yapısal izomerlerdir; bu nedenle alıkonma zamanı ve ürün iyon өтүүleri birlikte kullanılmadan ишенимдүү ayrım zorlaşabilir.

Scheduled MRM ыкмаi, her analitin гана beklenen alıkonma zamanı çevresindeki zaman penceresinde izlenmesini камсыз кылат. Изилдөөдө MRM penceresi 40 saniye olarak verilmiştir. Bu ыкма, cihazın aynı anda көзөмөлдөөk zorunda olduğu өтүү sayısını azaltır, her өтүү için veri toplama verimliliğini artırır ve sinyal/gürültü oranını iyileştirebilir. Yazarlar, scheduled MRM ыкмаinin glukuronid метаболиттердинde sinyal/gürültü oranını unscheduled ыкмаe göre yaklaşık %10 artırdığını belirtmiştir.

LC ayırımı için Kinetex Biphenyl kolon kullanılmıştır. Bu kolon seçimi, yapısal olarak benzer опиоид метаболиттердинin ayrımı için маанилүү. Mobil faz A, 2 mM amonyum format içeren LC-MS dereceli sudur. Mobil faz B, 2 mM amonyum format içeren metanoldür. Gradyan 11 dakikalık bir analitik koşu içinde çalışacak şekilde ayarlanmıştır. Başlangıçta %100 A kullanılmış, 4. dakikada %80 A/%20 B, 7–9,5 dakika арасында %100 B, ardından yeniden başlangıç koşullarına dönüş uygulanmıştır. Kolon sıcaklığı 30 °C olarak optimize edilmiştir.

Sayfa 20’deki Сүрөт 2, analitik standartlarla spike edilmiş bir агынды суу örneğinde hedef analitlerin extracted ion chromatogram yani XIC görünümünü көрсөтөт. Norfentanil, noroksikodon, EDDP, metadon, M3G, M6G ve morfin gibi bileşikler ayrılmış pikler halinde чагылдырылат. Бул визуал, ыкмаin karmaşık агынды суу матрицасыnde hedef analitleri ayırma kapasitesini göstermesi açısından маанилүү.

Sayfa 20’deki Сүрөт 3 ise aynı tarihte alınmış giriş ve çıkış агынды суу örneklerine ait temsilî kromatogramları көрсөтөт. İnfluent yani tesise giren агынды сууda ve effluent yani arıtma sonrası çıkan агынды сууda hedef analitlerin kantitatif өтүүleri izlenmiştir. Бул визуал, ыкмаin гана standart çözeltilerde değil, gerçek saha örneklerinde de kullanılabildiğini көрсөтөт.

Doğrusallık sonuçları ыкмаin ишенимдүүliğini destekler. Tablo 3’e göre tüm опиоид analitlerinde kalibrasyon eğrileri yüksek doğrusal uyum göstermiştir. R² değerleri morfin için 0,9998; M3G için 0,9999; M6G için 0,9999; norfentanil için 0,999; noroksikodon için 0,9992; EDDP için 0,9992 olarak verilmiştir. R², kalibrasyon eğrisinin ölçülen sinyal ile derişim арасындаki ilişkiyi ne kadar iyi açıkladığını көрсөтөт. 1’e çok yakın değerler, doğrusal kantifikasyon натыйжалуулугунn güçlü olduğunu көрсөтөт.

Çalışmanın duyarlılığı alt kantifikasyon limitleriyle gösterilmiştir. Tablo 4’e göre örnek деңгээлиндеki LOQ değerleri şöyledir:

• Noroksikodon: 0,31 ng/L
• EDDP: 0,61 ng/L
• Morfin: 4,88 ng/L
• M6G: 0,61 ng/L
• M3G: 0,08 ng/L
• Norfentanil: 0,61 ng/L
• Metadon: 9,77 ng/L

Bu değerler, çoğu analit için tek haneli ng/L деңгээлинде veya daha iyi өлчөө yapılabildiğini көрсөтөт. M3G için 0,08 ng/L gibi çok düşük bir örnek LOQ мааниси raporlanmıştır. Morfin ve metadon için LOQ daha yüksektir, fakat yine de агынды суу analizi açısından düşük düzeydedir.

Изилдөөдө LOQ belirleme mantığı sinyal/gürültü oranına таянат. Temel ilişki төмөнкүдөй берилиши мүмкүн:

[ S/N > 10 ]

Burada S sinyali, N ise gürültüyü ifade eder. S/N oranının 10’dan büyük olması, analitin гана tespit edilmediğini, ошол эле учурда kabul edilebilir ишенимдүүlikle nicel olarak ölçülebildiğini gösteren кеңири bir analitik kriterdir.

Yöntem doğruluğu ve kesinliği kalite kontrol örnekleriyle değerlendirilmiş ve өлчөөlerin standart kabul kriterleri içinde, nominal маанисиn ±%15 aralığında olduğu belirtilmiştir. Bu, ыкмаin гана сезгич değil, ошол эле учурда tekrarlanabilir ve kantitatif analiz için uygun olduğunu destekler.

Matriks etkisi değerlendirmesi de маанилүү. Агынды суу gibi karmaşık örneklerde aynı analit saf suda ve агынды сууda farklı sinyal verebilir. Bu etki iyon baskılanması veya iyon artışı şeklinde görülebilir. Изилдөөдө deiyonize suya spike edilmiş örneklerle агынды сууya spike edilmiş örnekler karşılaştırılmış; kalibrasyon eğrisi büyüklüğü, eğim ve doğrusallık farklarının %5’in altında olduğu belirtilmiştir. Bu, ыкмаde matriks таасиринn sınırlı kaldığını көрсөтөт.

Tablo 5, suda yeniden çözündürme sonrasında döteryumlu iç standartların geri kazanımını verir. Noroksikodon-d3 için %23 ± 4,52; EDDP-d3 için %13 ± 3,54; morfin-d3 için %80 ± 2,99; M6G-d3 için %26 ± 10,33; M3G-d3 için %35 ± 6,84; norfentanil-d5 için %56 ± 4,06; metadon-d3 için %24 ± 4,01 geri kazanım bildirilmiştir. Bu değerler bazı analitlerde orta veya düşük mutlak geri kazanımı көрсөтөт. Бирок döteryumlu iç standartlar колдонулганы için ekstraksiyon kayıpları ve matriks kaynaklı değişkenlik kantifikasyonda telafi edilebilmiştir.

Gerçek агынды суу örnekleri Greater Albany, New York bölgesindeki bir агынды суу arıtma tesisinden alınmıştır. Toplam altı örnek analiz edilmiştir: aynı haftanın Pazartesi, Perşembe ve Pazar günlerinden birer influent ve effluent örneği. Örnekler daha önceki bir çalışma için toplanmış, plastik şişelerde -20 °C’de saklanmış ve bu ыкмаin gerçek dünya колдонууга мүмкүн болгонliğini değerlendirmek için kullanılmıştır.

Tablo 6, gerçek örneklerde ölçülen опиоид/metabolit derişimlerini ng/L cinsinden verir. Morfin, M3G ve M6G tüm test edilen giriş ve çıkış örneklerinde tespit edilmemiştir. Buna karşılık noroksikodon, EDDP, norfentanil ve metadon farklı düzeylerde bulunmuştur.

Bu değerler, ыкмаin gerçek агынды суу örneklerinde ng/L деңгээлиндеki опиоид метаболиттердинi ayırt edebildiğini көрсөтөт. Бирок изилдөөдөki bu sonuçlar doğrudan toplumdaki kesin kullanım miktarlarını hesaplamaya dönüştürülmemiştir. WBE’de tüketim tahmini yapabilmek için агынды суу debisi, nüfus eşleştirmesi, metabolit kararlılığı, канализация içinde bozunma, arıtma tesisi dinamikleri ve dışsal kaynaklar gibi ek faktörler керек. Bu çalışma daha çok analitik ыкмаin duyarlılığı ve колдонууга мүмкүн болгонliği üzerine odaklanmaktadır.

Изилдөөдө morfin ve glukuronidlerinin gerçek örneklerde bulunmaması iki şekilde yorumlanabilir: Örneklerde bu bileşikler gerçekten ölçülebilir düzeyde olmayabilir veya depolama/bozunma, örnekleme zamanı, канализация koşulları ve matriks etkileri gibi nedenlerle kantitatif düzeyin altına düşmüş olabilir. Yazarlar bu yokluğu, degradasyon veya örneklerde ölçülebilir derişim bulunmaması ihtimaliyle ilişkilendirmiştir.

Tablo 7, çalışmanın ыкмаini daha önceki LC-MS/MS агынды суу опиоид analiz ыкмаларыyle karşılaştırır. Bu çalışmanın öne çıkan noktası; HRMS gerektirmeden, orta seviye SCIEX Triple Quad 3500 platformunda, 50 µL büyük hacimli enjeksiyon ve %100 sulu yeniden çözündürme optimizasyonuyla tek haneli ng/L duyarlılık sunmasıdır. Ayrıca 11 dakikalık analitik çalışma süresi, ыкмаin rutin analiz için pratik olabileceğini көрсөтөт.

Bu çalışmanın geçmiş açısından önemi, агынды суу негизделген эпидемиологияnin коомдук саламаттык көзөмөлдөө aracı olarak giderek daha fazla ilgi görmesine karşılık, ыкмаin кеңириlaştırılmasını sınırlayan cihaz erişimi sorununa odaklanmasıdır. Eğer yüksek duyarlılık гана çok pahalı cihazlarla mümkün olursa, WBE daha az sayıda laboratuvarın yapabildiği sınırlı bir alan olarak kalabilir. Bu çalışma, iyi optimize edilmiş örnek hazırlama ve LC-MS/MS koşullarıyla daha erişilebilir cihazların da güçlü sonuç verebileceğini göstermektedir.

Bugün açısından çalışmanın мааниси, опиоид krizi gibi hızlı değişen коомдук саламаттык sorunlarında daha fazla laboratuvarın topluluk деңгээлинде çevresel көзөмөлдөө yapabilmesine katkı sunabilecek bir analitik çerçeve sağlamasıdır. Özellikle norfentanil gibi sentetik опиоид göstergeleri ve EDDP gibi metadon metabolitleri, WBE çalışmalarında коомдук деңгээлдеki eğilimleri anlamaya yardımcı olabilir.

Gelecek açısından ыкма, daha geniş опиоид panellerine, yeni sentetik опиоид метаболиттердинe, farklı şehirlerdeki агынды суу örneklerine ve uzunlamasına zaman serisi çalışmalarına genişletilebilir. Ayrıca örnekleme stratejileri, туруктуулук değerlendirmeleri, arıtma sürecindeki giderim oranları ve nüfusa göre кадимкиize edilmiş yük hesaplamalarıyla birleştirildiğinde коомдук саламаттык planlamasında daha güçlü veri sağlayabilir. Бирок bu çalışma tek başına böyle epidemiyolojik çıkarımlar yapmamaktadır; analitik өлчөө ыкмаinin duyarlılık ve колдонууга мүмкүн болгонliğini göstermektedir.

Gündelik yaşama etkisi doğrudan bireysel test veya kolluk amaçlı көзөмөлдөө değildir. Агынды суу негизделген эпидемиология, etik olarak doğru uygulandığında жеке адамдарды эмес, anonim жамаат деңгээлиндеги eğilimleri көзөмөлдөөye yöneliktir. Böyle bir ыкма, tedavi hizmetlerinin planlanması, zarar azaltma programlarının hedeflenmesi, yeni sentetik опиоид dalgalarının erken fark edilmesi veya коомдук саламаттык булактарыnın daha doğru yönlendirilmesi gibi alanlarda кыйыр yarar sağlayabilir. Fakat bu ыкма, bireysel kullanım kanıtı, klinik tanı veya cezai көзөмөлдөө aracı olarak yorumlanmamalıdır.

Çalışmanın güçlü yönleri şunlardır: orta seviye triple quadrupole platformda ppt деңгээлинде duyarlılık hedeflemesi; SPE ile 100 kat ön deriştirme; %100 suda yeniden çözündürme ve büyük hacimli enjeksiyon stratejisi; scheduled MRM ile glukuronid metabolitleri dahil yapısal olarak benzer analitleri ayırma çabası; yüksek doğrusallık değerleri; gerçek агынды суу örneklerinde uygulama; literatür ыкмаларыyle karşılaştırmalı değerlendirme.

Sınırlılıkları da ачык түрдө görülmelidir. Çalışma hakem değerlendirmesinden geçmemiş preprinttir. Örnek sayısı sınırlıdır; гана Greater Albany bölgesinden aynı haftaya ait altı örnek analiz edilmiştir. Morfin ve glukuronidleri gerçek örneklerde tespit edilmemiştir, bu nedenle ыкмаin bu analitlerde gerçek saha pozitifleri üzerinden kapsamlı performansı gösterilmemiştir. Bazı analitlerde suyla yeniden çözündürme sonrası geri kazanım düşüktür. Metadon gibi bazı bileşiklerde örnek LOQ мааниси diğerlerine göre daha yüksektir. Ayrıca çalışma, ölçülen derişimlerden toplumsal tüketim miktarı hesaplaması yapmamaktadır.

Sonuç olarak bu изилдөө, агынды сууda опиоид ve metabolit analizinin гана en pahalı kütle spektrometrisi platformlarına bağımlı olmak zorunda olmadığını gösteren önemli bir analitik ыкма иштеп чыгуу çalışmasıdır. Asıl katkı, SPE zenginleştirme, sulu yeniden çözündürme, büyük hacimli enjeksiyon ve scheduled MRM optimizasyonunun bir araya geldiğinde orta seviye bir triple quadrupole cihazda bile ppt деңгээлинде опиоид көзөмөлдөөyi mümkün kılabileceğini göstermesidir. Бирок sonuçlar preprint statüsündedir ve daha geniş örnek setleriyle, farklı агынды суу koşullarıyla ve hakem değerlendirmesiyle güçlendirilmesi керек.

Изилдөөнүн Ыкмасы жана Жыйынтыктары

Çalışmanın ыкмаi, hedef опиоид/metabolit panelinin seçilmesi, standart ve kalite kontrol çözeltilerinin hazırlanması, агынды суу örneklerinde SPE ile zenginleştirme, %100 suda yeniden çözündürme, büyük hacimli HPLC-MS/MS enjeksiyonu, scheduled MRM optimizasyonu, kalibrasyon/doğrusallık/LOQ değerlendirmesi, geri kazanım ve matriks etkisi incelemesi ve gerçek агынды суу örneklerinin analizi aşamalarından oluşur.

Hedef analit paneli:

LC gradyan profili: Изилдөөдө 11 dakikalık bir HPLC gradyanı kullanılmıştır.

Bu gradyan, polar glukuronidlerden daha hidrofobik analitlere kadar farklı kimyasal özellikteki bileşiklerin tek koşuda ayrılmasına olanak vermiştir. Kolon sıcaklığı 30 °C olarak belirlenmiş ve pik önü/kuyruklanma sorunları azaltılmıştır.

Scheduled MRM parametreleri: Tablo 1’de çok sayıda kantitatif ve doğrulayıcı өтүү listelenmiştir. Çalışmanın pratik anlamı açısından bazı ana kantitatif өтүүler şu şekilde özetlenebilir:

Bu tabloda M3G ve M6G’nin aynı ana kütle civarında olmasına rağmen farklı alıkonma zamanlarıyla ayrılması айрыкча маанилүү. Bu ayrım, morfin glukuronidlerinin ишенимдүү kantifikasyonu için kritik analitik gerekliliktir.

Doğrusallık ve өлчөө aralıkları:

R² değerlerinin 0,999 ve üzerinde olması, ыкма sinyalinin ölçülen derişimle çok güçlü doğrusal ilişki verdiğini көрсөтөт. Bu, kantitatif LC-MS/MS analizleri için temel ишенимдүүlik göstergelerinden biridir.

Alt kantifikasyon limitleri:

Bu sonuçlar ыкмаin ana teknik iddiasını destekler: orta seviye triple quadrupole platformla, айрыкча SPE zenginleştirme ve büyük hacimli enjeksiyon sayesinde ng/L hatta bazı analitlerde ng/L altı eşdeğer duyarlılığa ulaşılabilmiştir.

Geri kazanım sonuçları:

Geri kazanımların tüm analitlerde yüksek olmaması, ыкмаin dürüstçe görülmesi gereken bir sınırlılığıdır. Buna rağmen büyük hacimli enjeksiyon ve izotop etiketli iç standartlar, nihai kantitatif performansı desteklemiştir.

Gerçek агынды суу örneklerinden elde edilen bulgular:

• Altı gerçek агынды суу örneği analiz edilmiştir: üç giriş suyu ve üç çıkış suyu.
• Noroksikodon, EDDP, norfentanil ve metadon ölçülebilir düzeylerde bulunmuştur.
• Morfin, M3G ve M6G test edilen örneklerde tespit edilmemiştir.
• EDDP değerleri 53,8–115,1 ng/L арасында değişmiştir.
• Norfentanil değerleri 13,8–32,0 ng/L арасында değişmiştir.
• Metadon değerleri 26,2–98,2 ng/L арасында değişmiştir.
• Ölçülen değerler, ыкмаin gerçek агынды суу matrikslerinde kullanılabileceğini göstermiştir.

Изилдөөдө kullanılan ve açıklayıcı olarak önemli olan temel ilişkiler:

[ S/N > 10 ]

Bu ifade, alt kantifikasyon limitinin belirlenmesinde kullanılan sinyal/gürültü kriterini özetler. Sinyal gürültünün en az 10 katı olduğunda analitin ишенимдүү şekilde ölçülebilir olduğu kabul edilmiştir.

\[ \text{Ön deriştirme faktörü} \approx 100 \]

Bu ifade, SPE adımının örnek деңгээлиндеki düşük derişimli analitleri yoğunlaştırma таасирин түшүндүрөт. Изилдөөдө örnek LOQ değerleri hesaplanırken bu 100 katlık SPE konsantrasyonu dikkate alınmıştır.

\[ 5\,\mu L \rightarrow 50\,\mu L \]

Bu ifade, enjeksiyon hacminin 10 kat artırıldığını көрсөтөт. %100 sulu yeniden çözündürme, büyük hacimli enjeksiyonu pik şeklini bozmadan mümkün hale getirmiştir.

Çalışmanın genel teknik bulguları:

• SCIEX Triple Quad 3500 gibi orta seviye bir triple quadrupole platformda ppt деңгээлинде опиоид ve metabolit kantifikasyonu gösterilmiştir.
• %100 su içinde yeniden çözündürme, айрыкча morfin, M3G ve M6G için pik şeklini ve sinyal yoğunluğunu iyileştirmiştir.
• 50 µL büyük hacimli enjeksiyon, analitik duyarlılığı artırmıştır.
• SPE ile 100 kat ön deriştirme ыкмаin düşük ng/L düzeylerine ulaşmasını sağlamıştır.
• Scheduled MRM, айрыкча yapısal olarak benzer glukuronid metabolitleri için seçiciliği ve duyarlılığı desteklemiştir.
• Tüm analitlerde kalibrasyon doğrusallığı güçlüdür ve R² değerleri ≥ 0,999 olarak verilmiştir.
• Matriks etkileri %5’in altında raporlanmıştır.
• Gerçek агынды суу örneklerinde noroksikodon, EDDP, norfentanil ve metadon ölçülmüştür.
• Yöntem, WBE uygulamalarının daha erişilebilir cihazlarla кеңириlaştırılabileceğini göstermektedir.

Булак жана Ыкма Жөнүндө Эскертүү

Бул мазмун, Thomas Regan, Ian Riley, Muhit Rana, Pengfei Xie ve Avni A. Argun тарабынан даярдалган “Highly sensitive HPLC-MS/MS quantitation of опиоидs and morphine glucuronides in wastewater using a mid-range triple quadrupole platform” аттуу эмгекке таянып даярдалган.

Булак түрү preprint изилдөө макаласы. Metinde ачык түрдө “This preprint research paper has not been peer reviewed” деген билдирүү бар. Ошондуктан çalışma hakem değerlendirmesinden geçmemiştir. DOI, nihai dergi kabulü veya hakemlik sürecinin tamamlandığını gösteren bilgi metin üzerinden doğrulanamamaktadır.

Bu makaledeki açıklamalar, изилдөөдө verilen HPLC-MS/MS ыкма иштеп чыгуу süreci, SPE zenginleştirme iş akışı, %100 suda yeniden çözündürme ve büyük hacimli enjeksiyon stratejisi, scheduled MRM parametreleri, kromatogramlar, kalibrasyon/doğrusallık verileri, LOQ sonuçları, geri kazanım değerleri ve Greater Albany, NY bölgesinden gerçek агынды суу örnekleri üzerinde yapılan uygulama негизинде даярдалган. PDFде жок коомдук саламаттык etkisi, klinik tanı, bireysel kullanım tespiti, yasal çıkarım, tedavi başarısı veya kesin epidemiyolojik tüketim hesaplaması eklenmemiştir.

Çalışma klinik çalışma değildir. İnsan hasta grubu, tedavi protokolü, bireysel biyolojik örnek analizi veya klinik tanı değerlendirmesi içermez. Çalışma, çevresel агынды суу örneklerinde опиоид ve метаболиттердин topluluk деңгээлинде izlenmesine yönelik analitik ыкма иштеп чыгуу çalışmasıdır. Ошондуктан bulgular bireylerin uyuşturucu kullanımı hakkında bilgi vermez; гана агынды суу матрицасыnde belirli analitlerin ölçülebilirliğini ve ыкмаin натыйжалуулугун көрсөтөт.

Çalışmanın en güçlü katkısı, yüksek эригичтикlü veya premium seviye cihazlar gerektirmeden, orta seviye triple quadrupole LC-MS/MS platformda ppt деңгээлинде опиоид көзөмөлдөөye yönelik erişilebilir bir iş akışı önermesidir. Bununla birlikte çalışma sınırlı sayıda gerçek агынды суу örneğiyle yapılmıştır; morfin ve glukuronidleri saha örneklerinde tespit edilmemiştir; bazı analitlerde geri kazanım düşüktür. Preprint statüsü nedeniyle bulguların hakem değerlendirmesi sonrasında değişebileceği veya ek doğrulama gerektirebileceği эске алынышы керек.