Сиклофосфамид доруи самараноке аст, ки дар табобати саратон ва баъзе бемориҳои системаи масуният истифода мешавад, аммо метавонад ба ҳуҷайраҳои репродуктивии зудтақсимшаванда зарар расонад. Он бо ба вуҷуд овардани осеби DNA, стресси оксидативӣ, вайроншавии митохондрия, аз даст рафтани ҳуҷайраҳои ҷинсӣ ва номувозинии гормонӣ дар хоя метавонад шумора ва ҳаракатнокии нутфаро кам кунад.

Ин таҳқиқ санҷидааст, ки оё фраксияи хоми полисахаридӣ, ки аз ашёи растании Polygonati Rhizoma-и бо лӯбиёи сиёҳ коркардшуда гирифта шуда, CP-1 номида мешавад, метавонад вайроншавии ҳаракатнокии нутфаро, ки бо сиклофосфамид ба вуҷуд оварда шудааст, коҳиш диҳад.

Дар таҳқиқ мушҳои наринаи ҳаштҳафтаинаи C57BL/6J истифода шуданд. Ба ҳайвонот панҷ рӯз пайдарпай ба дохили шикам:

\[ 50\ \mathrm{mg/kg/gün\ siklofosfamid} \]

дода шуд. Сипас мушҳо дар тӯли 30 рӯз:

• танҳо об,
• 20 mg/kg/gün CP-1,
• 100 mg/kg/gün CP-1 ё
• 2 mg/kg/gün кломифен цитрат

гирифтанд. Дар ҳар гурӯҳ ҳамагӣ панҷ муш буд.

Дар мушҳои гирифтаи сиклофосфамид консентратсияи нутфа, ҳаракатнокии умумӣ, ҳиссаи ҳаракатнокии пешрав ва ҳиссаи нутфаҳои зуд ба пеш ҳаракаткунанда ба таври равшан кам шуд. Истифодаи CP-1 ҳамаи ин нишондиҳандаҳоро қисман беҳтар кард. Дар графикҳо вояи 100 mg/kg-и CP-1 дар аксари ченакҳои ҳаракатнокии нутфа аз вояи 20 mg/kg самараноктар менамояд.

Ҳиссаи нутфаи пешрав, яъне PR, яке аз меъёрҳои асосӣ барои астенозооспермия дар таҳқиқ аст. Барои тавзеҳ онро чунин ифода кардан мумкин аст:

\[ \mathrm{PR\%} = \frac{\mathrm{ileri\ yönde\ hareket\ eden\ sperm\ sayısı}} {\mathrm{toplam\ değerlendirilen\ sperm\ sayısı}} \times 100 \]

Таҳқиқ астенозооспермияро чунин таъриф кардааст:

\[ \mathrm{PR} < 32\% \]

Арзиши PR дар гурӯҳи сиклофосфамид аз ин ҳад паст буд, дар ҳоле ки махсусан дар гурӯҳи CP-1-и вояи баланд ҳаракатнокӣ ба таври равшан зиёд шуд. Бо вуҷуди ин, таҳқиқ нутфаи мушро арзёбӣ кардааст; дар одамон таҳлили семен анҷом дода нашудааст.

Дар буришҳои хоя пас аз сиклофосфамид вайрон шудани сохтори найчаҳои семиниферӣ, бетартиб шудани ҳуҷайраҳои ҷинсӣ, пайдо шудани холигиҳо ва кам шудани ҳуҷайраҳои нутфа дар люмени найчаҳо дида шудааст. Пас аз CP-1 сохтори найчаҳо, қабатҳои ҳуҷайраҳои ҷинсӣ ва холҳои сперматогенези Johnsen қисман беҳтар шуданд.

Муҳаққиқон барои баррасии муфассали тағйироти ҳуҷайравии хоя пайдарпайии RNA-и якҳуҷайрагӣ анҷом доданд. Пеш аз назорати сифат 87.496 ва пас аз филтр 78.277 ҳуҷайра таҳлил шуд:

• Гурӯҳи Sham: 20.988 ҳуҷайра
• Гурӯҳи сиклофосфамид: 27.658 ҳуҷайра
• Гурӯҳи CP-1: 29.631 ҳуҷайра

Нӯҳ популятсияи асосии ҳуҷайра муайян шуд:

• Сперматогонияҳо
• Сперматоситҳо
• Сперматидҳо
• Ҳуҷайраҳои Leydig
• Ҳуҷайраҳои Sertoli
• Ҳуҷайраҳои эндотелӣ
• Фибробластҳо
• Макрофагҳо
• Ҳуҷайраҳои T

Дар гурӯҳи сиклофосфамид гуфта шудааст, ки гузариши сперматоситҳо ба сперматидҳо халалдор шуда, ҳиссаи сперматидҳо кам ва сперматоситҳо нисбатан ҷамъ шудаанд. CP-1 бо зиёд кардани ҳиссаи сперматидҳо тақсимоти ҳуҷайравиро қисман ба гурӯҳи солим наздик кард.

Таҳлили псевдовақт траекторияи рушди ҳуҷайраҳои ҷинсиро ба таври ҳисоббарорӣ чунин бозсозӣ кардааст:

\[ \mathrm{Spermatogonyum} \rightarrow \mathrm{Spermatosit} \rightarrow \mathrm{Spermatid} \]

Дар гурӯҳи CP-1 қисман барқарор шудани сперматидҳои марҳилаи дерини рушд мушоҳида шуд. Псевдовақт пайгирии воқеии ҳуҷайра дар вақти зинда нест; он тартиби омории рушд аст, ки аз монандии экспрессияи генҳои ҳуҷайраҳо бароварда мешавад.

Дар таҳлили якҳуҷайрагӣ бисёр генҳои марбут ба ҳаракати нутфа, сперматогенез, рушди сперматид ва сохтори қамчинча барҷаста шуданд. Аз ҷумла:

• Prm1 ва Prm2,
• Tnp1 ва Tnp2,
• Smcp,
• Odf2,
• Catsperz ва Catsper4,
• Tekt3,
• Dnaaf11,
• Crisp2

мавҷуд буданд.

Механизми асосии молекулавии пешниҳодшуда робитаи miR-27b бо CRISP2 аст:

\[ \mathrm{Siklofosfamid/PM} \rightarrow \mathrm{miR\!-\!27b}\uparrow \rightarrow \mathrm{CRISP2}\downarrow \rightarrow \mathrm{sperm\ hareketliliği}\downarrow \]

\[ \mathrm{CP\!-\!1} \rightarrow \mathrm{miR\!-\!27b}\downarrow \rightarrow \mathrm{CRISP2}\uparrow \rightarrow \mathrm{sperm\ hareketliliğiyle\ ilişkili\ programlar}\uparrow \]

Дар хояи муш ва ҳуҷайраҳои сперматоситии муши GC-2spd(ts), фосфорамид mustard — метаболити фаъоли сиклофосфамид — сатҳи miR-27b-ро баланд ва экспрессияи CRISP2-ро паст кард. CP-1 ин тағйиротро қисман баргардонд.

Вақте ки mimik-и miR-27b ба ҳуҷайраҳо дода шуд, сатҳи mRNA ва сафедаи CRISP2 кам шуд; бо ингибитори miR-27b ё CP-1 CRISP2 боз баланд гардид. Ин натиҷа дастгирӣ мекунад, ки CP-1 метавонад пахшкунии CRISP2-ро, ки тавассути miR-27b сурат мегирад, кам кунад.

Аммо дар таҳқиқ санҷиши нави luciferase reporter, ки пайвастшавии мустақими miR-27b ба минтақаи ҳадафи mRNA-и Crisp2-ро нишон диҳад, анҷом дода нашудааст. Робитаи мустақими ҳадаф ба адабиёти пешина ва натиҷаҳои mimic/inhibitor-и ҳозира такя мекунад.

CP-1 инчунин нишондиҳандаҳои вобаста ба стресси оксидативӣ ва илтиҳобро тағйир дод. Дар гурӯҳи сиклофосфамид:

• малондиалдегид — MDA зиёд шуд,
• фаъолияти супероксиддисмутаза — SOD кам шуд,
• фаъолияти маҷмӯи генҳои ROS баланд шуд,
• TNF-α, IL-1β ва IL-6 зиёд шуданд.

Бо CP-1 MDA кам, фаъолияти SOD ва экспрессияи Prdx6b зиёд шуд; дар фарҳанги ҳуҷайра сатҳи TNF-α, IL-1β ва IL-6 паст гардид.

Дар гормонҳои хуноба пас аз сиклофосфамид тестостерон ва inhibin B кам, FSH ва LH зиёд шуданд. CP-1, махсусан дар вояи баланд, тестостерон ва inhibin B-ро зиёд намуда, афзоиши FSH ва LH-ро қисман коҳиш дод.

Ин бозёфтҳо нишон медиҳанд, ки CP-1 метавонад на тавассути як роҳи ягона, балки ҳамзамон ба дифференсиатсияи ҳуҷайраҳои ҷинсӣ, генҳои вобаста ба ҳаракати нутфа, стресси оксидативӣ, илтиҳоб ва тавозуни гормонӣ таъсир кунад.

Бо вуҷуди ин, таҳқиқ нишон намедиҳад, ки CP-1 дар одамон безурётиро табобат мекунад. Муваффақияти ҷуфтшавӣ, сатҳи ҳомиладорӣ, шумораи наслҳои таваллудшуда, саломатии насл ё натиҷаҳои семени инсон арзёбӣ нашудаанд. CP-1 молекулаи ягонаи химиявӣ ва пок нест, балки омехтаи хоми гетерогении полисахаридҳо бо диапазони васеи массаи молекулавӣ мебошад.

Мушкилоти асосии таҳқиқ чист?

Ҳадафи химиотерапия нобуд кардани ҳуҷайраҳои саратонӣ аст; аммо ҳуҷайраҳои солими зудтақсимшаванда низ метавонанд аз табобат зарар бинанд. Дар системаи репродуктивии мард сперматогонияҳо ва сперматоситҳо пайваста тақсим ва дифференсиатсия мешаванд, бинобар ин ба доруҳои ситотоксикӣ ҳассосанд.

Сиклофосфамид дар бадан ба метаболитҳои фаъол табдил меёбад. Фосфорамид mustard, ки дар таҷрибаҳои ҳуҷайравии таҳқиқ истифода шудааст, яке аз ин метаболитҳои фаъол аст. Матн осеби сиклофосфамидро бо равандҳои зерин мепайвандад:

• пайдо шудани пайвандҳои салибӣ байни занҷирҳои DNA,
• вайроншавии давраи ҳуҷайра,
• апоптози ҳуҷайраҳои ҷинсӣ,
• аз даст рафтани фаъолияти митохондрия,
• кам шудани истеҳсоли ATP,
• баланд шудани намудҳои фаъоли оксиген,
• вайрон шудани микро муҳити Sertoli–germ cell,
• тағйироти танзими гормонӣ,
• кам шудани зичӣ ва ҳаракатнокии нутфа.

Саволи асосии таҳқиқ чунин аст:

Фраксияи полисахаридии CP-1, ки аз Polygonati Rhizoma-и бо лӯбиёи сиёҳ коркардшуда гирифта шудааст, тавассути кадом механизмҳои ҳуҷайравӣ ва молекулавӣ сперматогенез ва ҳаракатнокии нутфаро, ки аз сиклофосфамид зарар дидаанд, беҳтар карда метавонад?

Астенозооспермия чист?

Астенозооспермия нокифоя будани қобилияти нутфа барои ҳаракати самараноки пешрав аст. Ҳатто агар шумораи нутфа муқаррарӣ бошад, агар нутфа ба самти тухмҳуҷайра пеш рафта натавонад, эҳтимоли бордоршавӣ кам мешавад.

Дар таҳқиқ барои астенозооспермия ҳиссаи ҳаракатнокии пешрави камтар аз 32% истифода шудааст:

\[ \mathrm{PR\%} < 32\% \]

PR аз progressive motility, яъне ҳаракатнокии пешрав, меояд.

Ҳаракатнокии умумии нутфа ва ҳаракатнокии пешрав як чиз нестанд. Нутфае, ки дар ҷояш меларзад ё даврашакл ҳаракат мекунад, метавонад ҳамчун ҳаракаткунанда ҳисоб шавад; аммо барои расидан ба тухмҳуҷайра бояд ба таври хаттӣ ё дар камони васеъ ба пеш ҳаракат кунад.

CP-1 дақиқан чист?

CP-1 фраксияи хоми полисахаридӣ аст, ки аз ашёи Polygonati Rhizoma-и бо лӯбиёи сиёҳ коркардшуда гирифта шуда, дар таҳқиқ “Crude Polysaccharide 1” номида мешавад.

Ифодаи “полисахариди хом” муҳим аст. CP-1 доруи пок бо сохтори якхелаи молекулавии пурра муайяншуда нест. Он омехтаи ҷузъҳо бо вазнҳои гуногуни молекулавӣ ва эҳтимол занҷирҳои гуногуни қандӣ мебошад.

CP-1 чӣ гуна омода шудааст?

Марҳилаҳои асосии гузоришшуда чунинанд:

1. Polygonati Rhizoma-и бо лӯбиёи сиёҳ коркардшуда хушк ва майда карда шуд.
2. Ашёи хом 48 соат дар 25 °C бо 95% этанол нигоҳ дошта шуд.
3. Пас аз хориҷ кардани этанол, боқимонда як соат дар об пешакӣ тар карда шуд.
4. Бо 25 литр оби дистиллшуда дар 100 °C се соат экстраксия анҷом дода шуд.
5. Экстраксияи оби гарм се маротиба такрор шуд.
6. Экстрактҳо якҷо шуда, то як даҳуми ҳаҷми ибтидоӣ консентратсия шуданд.
7. Дар 40% этанол, 24 соат дар 4 °C таҳшинкунӣ гузаронида шуд.
8. Таҳшин бо центрифугакунӣ дар 15.000 g барои 10 дақиқа гирифта шуд.
9. Маҳсулот лиофилизатсия шуда, боз дар об ҳал гардид.
10. Бо усули Sevag ҳадди ақал чор маротиба сафедазудоӣ анҷом дода шуд.

Тақсимоти массаи молекулавии CP-1

Хроматографияи gel permeation нишон дод, ки CP-1 ду минтақаи асосии массаи молекулавӣ дорад.

Индекси полидисперсӣ бо робитаи зерин ҳисоб мешавад:

\[ \mathrm{PDI} = \frac{M_w}{M_n} \]

Дар таҳқиқ:

\[ \mathrm{PDI} = 27{,}18 \]

гузориш шудааст. Ин ба тақсимоти хеле васеи массаи молекулавӣ ишора мекунад ва нишон медиҳад, ки CP-1 полисахариди яксон ва пок нест.

Характеризатсияи қанд ва FT-IR

Дар хроматограммаи иловагии GC-MS қуллаҳои maltose, arabinose, xylose, glucose ва fructose нишонгузорӣ шудаанд. Аммо ҷадвали муфассали таркиб, ки таносубҳои молярии ин қандҳоро диҳад, пешниҳод нашудааст.

Дар спектри FT-IR:

• тақрибан 3402 cm⁻¹ кашиши O–H,
• тақрибан 2949 cm⁻¹ кашиши C–H,
• тақрибан 1639 cm⁻¹ банди вобаста ба оби пайвастшуда ё карбонил,
• тақрибан 1426 cm⁻¹ хамшавии C–H ё ларзиши карбоксилат,
• дар минтақаҳои 1048, 936 ва 827 cm⁻¹ сигналҳои вобаста ба пайвандҳои гликозидӣ ва ҳалқаҳои пиранозӣ

гузориш шудаанд. Ин спектр сохтори асосан карбогидратии маҳсулотро дастгирӣ мекунад, аммо нишон намедиҳад, ки фаъолияти биологӣ аз кадом занҷири махсуси полисахарид бармеояд.

Номуайянӣ дар таърифи манбаи растанӣ

Дар муқаддима гуфта мешавад, ки Polygonati Rhizoma ризомаи Polygonatum sibiricum аст. Аммо дар бахши баҳс навишта шудааст, ки CP-1 аз полисахаридҳои Polygonatum cyrtonema гирифта шудааст.

Ин ду намуд як нестанд. Матни боршуда шахсияти дақиқи ботаникии ашёи растании истифодашударо пайваста намедиҳад. Дар таҳқиқоти маҳсулоти табиӣ намуд, минтақаи парвариш, вақти ҷамъоварӣ ва усули коркард метавонанд таркиби химиявиро тағйир диҳанд, бинобар ин ин фарқ муҳим аст.

Тарҳи таҷрибаи ҳайвонот

Дар таҳқиқ мушҳои наринаи C57BL/6J-и 8 ҳафтаина ва 20 ± 2 грамм истифода шуданд. Пас аз як ҳафта мутобиқшавӣ модели сиклофосфамид сохта шуд.

Матн мегӯяд, ки мушҳо ба гурӯҳҳо тасодуфӣ тақсим шудаанд, аммо тарзи тасодуфисозӣ шарҳ дода нашудааст. Гуфта шудааст, ки баҳогузории гистологии Johnsen кӯр анҷом дода шудааст; маълум нест, ки натиҷаҳои дигар низ кӯр арзёбӣ шудаанд ё не.

Индекси узвҳои репродуктивӣ

Вазни хоя, эпидидим ва vesicula seminalis ба вазни бадан тақсим шуда, индекси узвҳо ҳисоб шуд:

\[ \mathrm{Organ\ indeksi} = \frac{\mathrm{organ\ ağırlığı}} {\mathrm{vücut\ ağırlığı}} \]

Дар гурӯҳи сиклофосфамид индексҳои хоя ва узвҳои ёрирасони репродуктивӣ кам шуданд; дар гурӯҳҳои CP-1 қисман беҳбудӣ дида шуд. Вояи баланди CP-1 одатан барқароршавии қавитар аз вояи паст нишон дод.

Нутфа чӣ гуна чен шуд?

Ҳар ду эпидидим ба 500 µL PBS-и дорои 10% FBS гузошта шуда, барои озод шудани нутфа майда шуданд. Суспензия 30 дақиқа дар 37 °C нигоҳ дошта шуд ва дар камераи пешакӣ гармшудаи ҳисобкунии нутфа бо системаи таҳлили компютерии нутфа санҷида шуд.

Ҳар ченак барои кам кардани тағйирёбии техникӣ се маротиба такрор шуд. Ин се такрор маънои се ҳайвони алоҳида надорад; шумораи намунаҳои биологӣ дар ҳар гурӯҳ панҷ аст.

Шакли 1 натиҷаҳои нутфаро чӣ гуна нишон медиҳад?

Дар сутунҳои Шакли 1 арзишҳои дақиқ навишта нашудаанд. Аз баландии график тақрибан:

Ин арзишҳо аз ҷадвали маълумоти хом нестанд; онҳо аз меҳварҳои график тақрибан хонда шудаанд. Арзишҳои дақиқи инфиродӣ дар PDF дода нашудаанд.

Дар графики ҳаракати тези пешрав нишонаи вояи пасти CP-1 ҳамчун “40 mg/kg” навишта шудааст. Усулҳо, графикҳои дигар ва маълумоти иловагӣ вояи пастро 20 mg/kg таъриф мекунанд. Аз ин рӯ, 40 mg/kg дар Шакли 1D эҳтимолан носозгории нишонагузории шакл аст; аз PDF муайян кардан мумкин нест, ки кадом арзиш дуруст аст.

Морфологияи нутфа

Дар Шакли 1E дар гурӯҳи CTX тасвирҳои нутфаи камтар ва камҳаракаттар нишон дода шудаанд; дар гурӯҳҳои CP-1 ва sham майдонҳои зичтари нутфа дида мешаванд.

Аммо барои морфологияи нутфа арзёбии миқдорӣ, ки аномалияҳои сар, қисми миёна ё думро бо фоиз гузориш кунад, вуҷуд надорад. Тасвирҳо микрофотографияҳои намояндагӣ мебошанд.

Гистологияи хоя ва холҳои Johnsen

Дар гурӯҳи sham найчаҳои семиниферӣ муназзам, ҳуҷайраҳои ҷинсӣ қабатнок ва нутфаҳои баркамол дар люмен намоёнанд.

Дар гурӯҳи CTX:

• тартиби найчаҳои семиниферӣ вайрон шудааст,
• шумораи найчаҳо ва зичии ҳуҷайраҳо кам шудааст,
• қабати базалӣ осеб дидааст,
• вакуолаҳо пайдо шудаанд,
• нутфа дар люмен кам шудааст.

Дар мушҳои гирифтаи CP-1 гуфта шудааст, ки қабатҳои ҳуҷайраҳои ҷинсӣ боз мураттаб шуда, сперматосит ва сперматид зиёд ва сохтори найчаҳо қисман барқарор шудааст.

Холи Johnsen дараҷаи анҷомёбии сперматогенезро дар найчаҳои семиниферӣ аз 0 то 10 арзёбӣ мекунад. Дар таҳқиқ аз ҳар хоя ҳадди ақал 50 найча ба таври тасодуфӣ ва кӯр хол дода шудааст.

График тақрибан 9–10 барои sham, 5–6 барои CTX ва 7–8 барои гурӯҳҳои CP-1 нишон медиҳад. Ин натиҷа нишон медиҳад, ки CP-1 осебро кам мекунад, аммо бофтаро пурра ба сатҳи sham барнамегардонад.

Ҳадафи RNA-seq-и якҳуҷайрагӣ

Вақте ки тамоми бофтаи хоя якҷо чен мешавад, сигналҳои навъҳои гуногуни ҳуҷайра омехта мешаванд. RNA-seq-и якҳуҷайрагӣ бо чен кардани профили экспрессияи гении ҳар ҳуҷайра алоҳида ҳадаф дорад, ки:

• кадом навъҳои ҳуҷайра кам ё зиёд шудаанд,
• дар кадом ҳуҷайраҳо генҳои муайян тағйир ёфтаанд,
• дар кадом марҳилаи сперматогенез рушди ҳуҷайра баста шудааст,
• иртиботи байни ҳуҷайраҳо чӣ гуна тағйир ёфтааст

муайян гардад.

Намунаҳои якҳуҷайрагӣ чӣ гуна омода шуданд?

Хояҳо дар тӯли 30 дақиқа баъд аз гирифтан ба маҳлули муҳофизатӣ гузошта шуданд. Бофтаҳо ба қисмҳои хурд бурида шуда, 15 дақиқа дар 37 °C ферментативӣ ҳазм шуданд.

Суспензияи ҳуҷайра аз филтри 40 µm гузаронида, эритроситҳо хориҷ шуданд ва зичии ҳуҷайра:

\[ 2 \times 10^5\ \mathrm{hücre/mL} \]

танзим карда шуд.

Гирифтани ҳуҷайра ва баркодкунӣ бо системаи Singleron Matrix ва тайёр кардани китобхона бо маҷмӯаи GEXSCOPE анҷом дода шуд. Хонданҳо ба геноми истинодии муш GRCm38 ҳамоҳанг карда шуданд.

Меъёрҳои назорати сифат

Ҳуҷайраҳои зерин хориҷ шуданд:

• ҳуҷайраҳое, ки камтар аз 300 ген доштанд,
• ҳуҷайраҳои эҳтимолии дугона бо зиёда аз 4.500 ген,
• ҳуҷайраҳои дорои зиёда аз 75.000 UMI,
• ҳуҷайраҳое, ки ҳиссаи генҳои митохондриалӣ аз 50% зиёд буд.

Аз 87.496 ҳуҷайра 78.277 дар таҳлил нигоҳ дошта шуд.

Дар як қисми усул версияи CeleScope 2.0.7 ва дар қисми дигар 1.11.0 навишта шудааст. Ин фарқи версияи нармафзор барои такроршавандагии натиҷаҳо ба тавзеҳ ниёз дорад.

Харитаи ҳуҷайравии UMAP чиро нишон медиҳад?

UMAP усули визуализатсияест, ки ҳуҷайраҳои дорои экспрессияи монанди генро дар харитаи дучена ба ҳам наздик нишон медиҳад. Нуқтаҳо ҷойгиршавии анатомии воқеиро нишон намедиҳанд; онҳо монандии транскриптомиро ифода мекунанд.

Дар Шакли 2 нӯҳ навъи ҳуҷайра кластерҳои ҷудогона ташкил мекунанд. Ҳуҷайраҳои ҷинсӣ мувофиқи марҳилаи рушд дар траекторияи васеъ ҷой гирифтаанд, дар ҳоле ки Leydig, Sertoli, endotel, fibroblast ва ҳуҷайраҳои масуният кластерҳои ҷудо ташкил медиҳанд.

Ҳиссаи ҳуҷайраҳо чӣ гуна тағйир ёфт?

Дар ҳиссаи сперматогонияҳо байни гурӯҳҳо фарқи калон дида нашуд. Тағйири асосӣ дар марҳилаҳои сперматосит ва сперматид буд.

• Дар гурӯҳи sham сперматидҳо зиёд ва сперматоситҳо нисбатан каманд.
• Дар гурӯҳи CTX ҳиссаи сперматид кам ва сперматосит зиёд шудааст.
• Дар гурӯҳи CP-1 ҳиссаи сперматид нисбат ба CTX зиёд шудааст.

Ин тақсимот чунин тафсир шудааст, ки сиклофосфамид гузариши сперматосит ба сперматидро манъ мекунад ва CP-1 ин марҳилаи рушдро қисман дубора фаъол месозад.

Шумораи ҳуҷайра ва шумораи ҳайвонот як чиз нест

Он ки дар таҳлили якҳуҷайрагӣ даҳҳо ҳазор ҳуҷайра мавҷуд аст, маънои даҳҳо ҳазор намунаи мустақили биологиро надорад. Ҳуҷайраҳои аз як муш гирифташуда таърихи умумии биологӣ доранд.

PDF равшан намекунад, ки барои ҳар гурӯҳ хояҳои чанд муш якҷо шудаанд, чанд китобхонаи мустақили якҳуҷайрагӣ сохта шудаанд ё оё такрори биологӣ дар сатҳи гурӯҳ иҷро шудааст.

Агар ҳуҷайраҳо ҳамчун мушоҳидаҳои комилан мустақил дар омор истифода шуда бошанд, p-арзишҳо метавонанд аз воқеият хурдтар намоянд. Ин маҳдудияти муҳиме аст, ки дар таҳқиқҳои якҳуҷайрагӣ псевдорепликатсияи ҳуҷайравӣ ном дорад.

Таҳлили псевдовақт чиро нишон медиҳад?

Нармафзори Monocle2 ҳуҷайраҳоро аз рӯи экспрессияи ген ба тартиби рушди эҳтимолӣ ҷойгир кардааст. Траектория:

\[ \mathrm{SPG} \rightarrow \mathrm{SPC} \rightarrow \mathrm{SPD} \]

аст.

Дар ин ҷо:

• SPG: сперматогония,
• SPC: сперматосит,
• SPD: сперматид

маъно доранд.

Дар гурӯҳи CTX ҳиссаи сперматидҳои қисми охири траекторияи рушд кам шуд; дар гурӯҳи CP-1 тақсимот қисман ба гурӯҳи солим наздик гардид.

Псевдовақт таҷрибае нест, ки ҳамон ҳуҷайра ҳангоми табдил аз сперматогония ба сперматид дар вақти воқеӣ пайгирӣ шавад. Он тартиб додани транскриптомҳои лаҳзавии ҳуҷайраҳои гуногун аз рӯи рушд мебошад.

Генҳое, ки дар ҷараёни рушд тағйир меёбанд

Дар графикҳои псевдовақт:

• Prm1, Prm2, Tnp1, Tnp2, Smcp, Oaz3 ва Odf2 ба самти марҳилаи сперматид зиёд шуданд.
• Crisp2 дар марҳилаҳои сперматосит ва сперматид равшан буд.
• Catsperz, Catsper4, Dmrtb1 ва Prdx6b бештар бо марҳилаи сперматосит алоқаманд буданд.

Генҳои марбут ба митохондрия ва метаболизми энергия, ба мисли Ndufb5, Ndufc1 ва Atp6v1g1, низ дар ҷараёни рушд тағйир ёфтанд. Ин нишон медиҳад, ки рушди нутфа на танҳо аз ҷиҳати сохторӣ, балки аз ҷиҳати истеҳсоли энергия низ бозбарномарезии калони ҳуҷайравиро талаб мекунад.

Таҳлили генҳои фарқкунанда

Меъёрҳои интихоб барои генҳо дар таҳқиқ чунинанд:

\[ \mathrm{Düzeltilmiş}\ p < 0{,}05 \]

\[ |\log_2(\mathrm{kat\ değişimi})| > 0{,}15 \]

Сперматоситҳо гурӯҳи ҳуҷайраи ҷинсӣ буданд, ки бештарин генҳои тағйирёфта дар онҳо дида шуд.

Дар диаграммаи Venn 47 гени муштарак нишон дода шудааст. Аммо шарҳи шакл, нишонаҳои муқоисаи Venn ва тавсифи матни асосӣ дар бораи “генҳое, ки бо CTX кам ва бо CP-1 зиёд мешаванд” пурра мувофиқ нестанд.

Дар шарҳи шакл баъзе маҷмӯаҳо “CTX нисбат ба sham боло” ва “CTX нисбат ба CP-1 боло” номгузорӣ шудаанд, дар ҳоле ки матн мегӯяд генҳое ба мисли Crisp2 дар CTX кам ва бо CP-1 зиёд мешаванд. Аз ин рӯ, самти буриши 47 генро танҳо аз нишонаҳои шакл бо итминон бозсозӣ кардан мумкин нест.

Аммо qPCR, ELISA ва Western blot барои Crisp2 самти пешниҳодшудаи матнро дастгирӣ мекунанд: пас аз CTX ё PM камшавӣ ва пас аз CP-1 афзоиш.

CRISP2 чист ва чаро муҳим аст?

CRISP2 узви оилаи сафедаҳои ихроҷшавандаи бой аз cysteine мебошад, ки дар нутфа мавҷуданд. Дар таҳқиқ гуфта шудааст, ки он дар сперматосит ва сперматидҳо зиёд ифода мешавад.

CRISP2 бо равандҳои зерин алоқаманд аст:

• Ҳаракати қамчинчаи нутфа
• Реаксияи акросомӣ
• Ҳамкории нутфа–тухмҳуҷайра
• Комплекси канали калсий CatSper

Дар харитаи экспрессияи UMAP сигнали Crisp2 махсусан дар минтақаҳои сперматосит ва сперматид зич аст.

Пайванди эҳтимолӣ бо канали CatSper

CatSper комплекси канали ионӣ дар думи нутфа аст, ки воридшавии калсийро танзим мекунад. Тағйироти калсий метавонанд шакли зарбаи дум ва ҳаракати пурқуввати пешравро таъсир диҳанд.

Дар таҳқиқ экспрессияи Catsperz ва Catsper4 баъд аз CTX ё PM кам ва баъд аз CP-1 зиёд шудааст.

Робитаи пешниҳодшуда чунин аст:

\[ \mathrm{CRISP2/CatSper\ işlevi} \rightarrow \mathrm{Ca^{2+}\ düzenlenmesi} \rightarrow \mathrm{kamçı\ hareketi} \rightarrow \mathrm{sperm\ hareketliliği} \]

Аммо дар таҳқиқ ҷараёни калсий дар нутфа ё ҷараёни канали CatSper мустақим чен нашудааст. Аз ин рӯ, механизми калсий аз рӯи экспрессияи ген ва дониши биологии пешина пешниҳод мешавад.

miR-27b чӣ гуна метавонад амал кунад?

МикроRNA-ҳо молекулаҳои хурди RNA мебошанд, ки бо пайвастшавӣ ба mRNA-и ҳадаф метавонанд истеҳсоли сафедаро кам кунанд. Дар таҳқиқ фарз шудааст, ки miR-27b CRISP2-ро манфӣ танзим мекунад.

Дар хояи муш:

• CTX → афзоиши miR-27b
• CTX → камшавии Crisp2 камшавӣ
• CTX + CP-1 → камшавии miR-27b
• CTX + CP-1 → афзоиши Crisp2 афзоиш

мушоҳида шуд.

Сафедаи CRISP2-и хуноба низ дар гурӯҳи CTX кам ва дар гурӯҳи CP-1 зиёд шуд. Аммо таҳқиқ алоҳида тасдиқ накардааст, ки CRISP2-и хуноба миқдори функсионалии сафедаро дар хоя то чӣ андоза дуруст инъикос мекунад.

Таҷрибаҳои фарҳанги ҳуҷайра

Ҳуҷайраҳои сперматоситии муш GC-2spd(ts) истифода шуданд. Фосфорамид mustard, метаболити фаъоли сиклофосфамид, дар диапазони 25–200 µg/mL санҷида шуд.

Гуфта шудааст, ки 100 µg/mL PM вояест, ки зиндамонии ҳуҷайраро тақрибан 50% коҳиш медиҳад. CP-1 дар диапазони 5–135 µg/mL арзёбӣ шуд ва барои мудохила бар зидди осеби PM 100 µg/mL CP-1 интихоб гардид.

Дар матни иловагӣ дар як ҷо гуфта мешавад, ки бо зиёд шудани консентратсияи CP-1 зичии оптикӣ меафзояд ва дар ҷумлаи баъдӣ гуфта мешавад, ки дар консентратсияи баландтар зичии оптикӣ коҳиш меёбад. График ҳангоми санҷиши CP-1 танҳо дар диапазон афзоишро нишон медиҳад, аммо ҳангоми якҷо бо PM татбиқ шудан беҳтарин барқароршавӣ дар атрофи 100 µg/mL дида мешавад. Ду ҷумлаи матн пурра мутобиқ нестанд.

Таҷрибаи mimic ва inhibitor-и miR-27b

Ҳуҷайраҳо ба чор гурӯҳ тақсим шуданд:

• Назорати манфӣ
• 37,5 nM mimic-и miR-27b
• 37,5 nM mimic-и miR-27b + inhibitor
• mimic-и miR-27b + 100 µg/mL CP-1

Mimic-и miR-27b mRNA ва сафедаи CRISP2-ро кам кард. Inhibitor CRISP2-ро қисман баргардонд. CP-1 низ дар ҳузури mimic сатҳи CRISP2-ро баланд кард.

Ин натиҷа нишон медиҳад, ки CP-1 метавонад ба таъсири пахшкунандаи miR-27b муқобилат кунад. Аммо муайян нашудааст, ки CP-1 дар кадом марҳилаи:

• транскрипсияи miR-27b,
• камолоти miRNA,
• пайвастшавӣ ба mRNA,
• ё устувории сафедаи CRISP2

таъсир мекунад.

Бозёфтҳои стресси оксидативӣ

Дар гурӯҳи сиклофосфамид фаъолияти маҷмӯи генҳои вобаста ба намудҳои фаъоли оксиген махсусан дар сперматогония, сперматосит ва ҳуҷайраҳои Leydig баланд буд.

Малондиалдегид яке аз маҳсулоте аст, ки ҳангоми осеби оксидативии липидҳои мембрана пайдо мешавад. SOD бошад ферменти антиоксидантӣ аст, ки радикалҳои супероксидро безарар мегардонад.

Намунаи таҷрибавӣ чунин аст:

\[ \mathrm{CTX} \rightarrow \mathrm{MDA}\uparrow + \mathrm{SOD}\downarrow \]

\[ \mathrm{CP\!-\!1} \rightarrow \mathrm{MDA}\downarrow + \mathrm{SOD}\uparrow \]

Гуфта шудааст, ки вояи баланди CP-1 аз вояи паст таъсири қавитар дошта, назорати мусбат барои SOD беҳтарин барқароршавиро нишон додааст.

Prdx6b гени ферменти антиоксидантӣ аст, ки дар безараргардонии пероксиди гидроген ва гидропероксидҳои органикӣ иштирок мекунад. Дар гурӯҳи PM + CP-1 экспрессияи Prdx6b аз гурӯҳи PM баландтар буд.

Бозёфтҳои илтиҳоб

Дар ҳуҷайраҳои GC-2spd(ts), ки бо PM осеб дидаанд:

• TNF-α,
• IL-1β,
• IL-6

баланд шуданд.

100 µg/mL CP-1 ҳамаи ин се нишондиҳандаи илтиҳобиро кам кард. Ин натиҷа ба фарҳанги ҳуҷайра тааллуқ дорад; нишон намедиҳад, ки илтиҳоби системавӣ дар хунобаи муш ё одамон кам шудааст.

Натиҷаҳои гормонӣ

Дар гурӯҳи сиклофосфамид:

• Тестостерон кам шуд,
• Inhibin B кам шуд,
• FSH зиёд шуд,
• LH зиёд шуд.

CP-1 ин тағйиротро вобаста ба воя қисман баргардонд.

FSH ва LH-и баланд метавонанд ҳамроҳ бо тақвияти сигнали системаи марказии гормонӣ дар ҷавоб ба коҳиши фаъолияти хоя дида шаванд. Inhibin B ҳамчун нишондиҳандаи вобаста ба қобилияти сперматогенез арзёбӣ шудааст.

Таҳқиқ гормонҳоро дар хуноба чен кардааст; механизми мустақими ҳуҷайравии синтези гормон дар гипофиз, Sertoli ё Leydig санҷида нашудааст. Аз ин рӯ, аз тағйироти хуноба танҳо бо итминон гуфтан мумкин нест, ки “CP-1 секресияи гормонро мустақим зиёд кард”.

Иртиботи байни ҳуҷайраҳо

Таҳлили CellChat иртиботи ligand–receptor байни ҳуҷайраҳои ҷинсӣ ва ҳуҷайраҳои соматикии дастгиркунандаро дар хоя пешгӯӣ кардааст.

Дар гурӯҳи sham байни сперматогония, сперматосит ва сперматидҳо бо ҳуҷайраҳои Sertoli, Leydig, endotel ва macrophage пайвандҳои зич дида мешаванд.

Пас аз CTX махсусан шумораи иртиботҳои пешбинишудаи ҳуҷайраҳои Sertoli бо дигар ҳуҷайраҳо ба таври равшан кам шуда, баъд аз CP-1 як қисми ин пайвандҳо барқарор шуданд.

Бо вуҷуди ин, дар графики иловагӣ дар ҳамаи гурӯҳҳои ҳуҷайра камшавии яксамтаи иртибот дида намешавад. Баъзе шумораҳои пайванди spermatocyte ва spermatid дар CTX аз sham баландтар менамоянд. Аз ин рӯ, тафсири бехатартар ин аст, ки сиклофосфамид шабакаи иртиботии ҳуҷайраҳоро умумӣ тағйир дода, шабакаи дастгирии марказӣ ба Sertoli-ро ба таври равшан вайрон мекунад.

Натиҷаҳои CellChat пешгӯӣ мебошанд. Онҳо ихроҷи воқеии сафеда ё тамоси физикии байни ҳуҷайраҳоро мустақим чен намекунанд; пайвандҳои эҳтимолии ligand–receptor-ро аз экспрессияи ген ҳисоб мекунанд.

Арзёбии ҷигар ва бехатарӣ

Дар маълумоти иловагӣ сатҳи ALT ва AST байни гурӯҳҳо фарқи маънодор надошт. Муаллифон инро ҳамчун далели “дар доираи бехатар” будани вояи CP-1 тафсир кардаанд.

Аммо танҳо ALT ва AST:

• дар бораи осеби кӯтоҳмуддати ҷигар маълумоти маҳдуд медиҳанд,
• фаъолияти гурдаро арзёбӣ намекунанд,
• заҳролудии дарозмуддатро нишон намедиҳанд,
• осеби гистологиро дар узвҳои дигар рад намекунанд,
• бехатарии генетикии ҳуҷайраҳои репродуктивиро исбот намекунанд.

Гарчанде дар шарҳи шакл “фаъолияти ҷигар ва гурда” гуфта шудааст, танҳо ALT ва AST чен шудаанд. Креатинин, BUN ё гистологияи гурда гузориш нашудаанд.

Оё таъсири CP-1 танҳо бо як механизм шарҳ дода мешавад?

Натиҷаҳо намунаи таъсири васеътар аз як роҳи хаттиро нишон медиҳанд:

Ҷиҳатҳои қавии таҳқиқ

• Сатҳҳои сершумори таҷриба истифода шудаанд: Муш, гистологияи хоя, фарҳанги ҳуҷайра, транскриптомикаи якҳуҷайрагӣ, qPCR, ELISA ва Western blot якҷо арзёбӣ шудаанд.
• Ду вояи CP-1 муқоиса шудаанд: 20 ва 100 mg/kg барои намунаи вобаста ба воя маълумот медиҳанд.
• Назорати мусбат истифода шудааст: Гурӯҳи кломифен цитрат илова шудааст.
• Нутфа бо CASA чен шудааст: Консентратсия ва ҳаракатнокӣ бо компютер арзёбӣ шуданд.
• Гистология кӯр холгузорӣ шудааст: Ҳадди ақал 50 найчаи семиниферӣ бо системаи Johnsen баррасӣ шуд.
• Харитаи хоя аз 78.277 ҳуҷайра сохта шудааст: Тағйирот дар сатҳи навъи ҳуҷайра ҷудо карда шуданд.
• Траекторияи рушд таҳлил шудааст: Вайроншавии гузариши сперматосит–сперматид нишон дода шуд.
• Мудохилаи miRNA анҷом дода шуд: Таҷрибаҳои mimic ва inhibitor-и miR-27b аз коррелятсияи одӣ пештар рафтанд.
• Сатҳи сафеда тасдиқ шуд: CRISP2 ба ғайр аз mRNA бо Western blot ва ELISA-и хуноба санҷида шуд.
• CP-1 қисман химиявӣ характериза шудааст: Тақсимоти массаи молекулавӣ, GC-MS ва FT-IR пешниҳод шудаанд.
• Стресси оксидативӣ, илтиҳоб ва гормонҳо якҷо арзёбӣ шудаанд.

Маҳдудиятҳои таҳқиқ

• Баррасии ҳамсолон нест: Таҳқиқ preprint аст.
• Маълумоти муаллифон дар PDF нест: Масъулияти илмӣ ва муассиса аз матни боршуда тасдиқ намешаванд.
• Шумораи ҳайвонот хеле кам аст: Дар ҳар гурӯҳ ҳамагӣ панҷ муш.
• Ҳисоби андозаи намуна дода нашудааст: Чаро панҷ ҳайвон кофӣ дониста шудааст, шарҳ дода нашудааст.
• Тафсилоти тасодуфисозӣ нест: Тарзи гурӯҳбандӣ нишон дода нашудааст.
• Кӯркунӣ маҳдуд аст: Танҳо барои холи Johnsen кӯр будани арзёбӣ ошкоро навишта шудааст.
• Маълумоти инсон нест: Намунаи семени инсон, гурӯҳи беморон ё табобати клиникӣ вуҷуд надорад.
• Фертилитети воқеӣ чен нашудааст: Ҷуфтшавӣ, ҳомиладорӣ, таваллуди зинда ё саломатии насл арзёбӣ нашудаанд.
• CP-1 молекулаи пок нест: Омехтаи гетерогенӣ бо индекси полидисперсӣ 27,18 аст.
• Ҷузъи фаъол номаълум аст: Нишон дода нашудааст, ки таъсир аз кадом занҷири полисахарид меояд.
• Номи навъи растанӣ носозгор аст: Дар матн ҳам Polygonatum sibiricum ва ҳам Polygonatum cyrtonema омадааст.
• Таркиби қанд пурра миқдорӣ нест: Таносубҳои молярии моносахаридҳо пешниҳод нашудаанд.
• Нишонаи вояи паст носозгор аст: Дар Шакли 1D 40 mg/kg ва дар усулҳо ва дигар шаклҳо 20 mg/kg навишта шудааст.
• Такрори биологии якҳуҷайрагӣ шарҳ дода нашудааст: Маълум нест, аз чанд муш чанд китобхонаи мустақил сохта шудааст.
• Хатари псевдорепликатсияи ҳуҷайравӣ вуҷуд дорад: Эҳтимол даҳҳо ҳазор ҳуҷайра мисли ҳайвоноти мустақил тафсир шудаанд.
• Версияҳои нармафзор носозгоранд: Барои CeleScope ду версияи гуногун дода шудааст.
• Самти DEG норавшан аст: Байни шарҳи Venn ва самтҳои ген дар матни асосӣ носозгорӣ вуҷуд дорад.
• Тафсилоти ислоҳи санҷишҳои сершумор маҳдуд аст: Гарчанде дар баъзе таҳлилҳо ислоҳ зикр мешавад, усули он барои ҳамаи муқоисаҳои ҳуҷайравӣ равшан нест.
• Андозаи дақиқи таъсир пешниҳод нашудааст: Бисёр натиҷаҳо танҳо дар сутунграфикҳо ҳастанд.
• Ҷадвали маълумоти хом нест: Натиҷаҳои инфиродии ҳайвонот ва фосилаҳои эътимод нишон дода нашудаанд.
• Санҷиши мустақими ҳадафи miRNA нест: Санҷиши нави luciferase reporter анҷом дода нашудааст.
• Функсияи CatSper мустақим чен нашудааст: Ҷараёни калсий ё электрофизиологияи канал иҷро нашудааст.
• Якпорчагии DNA-и нутфа чен нашудааст: Маълум нест, ки ҳатто бо афзоиши ҳаракатнокӣ осеби генетикӣ ислоҳ шудааст ё не.
• Морфологияи нутфа миқдорӣ нест: Тасвирҳои намояндагӣ ҳастанд, аммо фоизи аномалия ҳисоб нашудааст.
• Бехатарии дарозмуддат нест: Танҳо табобати 30-рӯза арзёбӣ шудааст.
• Нишондиҳандаҳои бехатарӣ нокифояанд: Танҳо ALT ва AST ҳамчун далели умумии бехатарӣ истифода шудаанд.
• Бехатарии гурда чен нашудааст: Гарчанде дар сарлавҳаи шакл “фаъолияти гурда” гуфта шудааст, биохимияи реналӣ пешниҳод нашудааст.
• Мувофиқати клиникии вояҳои PM ва CP-1-и ҳуҷайравӣ номаълум аст.
• Матни иловагии зиндамонии ҳуҷайра дар дохили худ зиддият дорад.
• Рақами дастрасии маълумот дода нашудааст: Дар PDF сабти анбори кушода барои маълумоти якҳуҷайрагӣ нест.

Таҳқиқ чӣ мегӯяд?

• Сиклофосфамид дар мушҳо шумора ва ҳаракатнокии нутфаро кам кардааст.
• CP-1 ин талафотро қисман ислоҳ кардааст.
• Вояи 100 mg/kg дар аксари ченакҳо аз 20 mg/kg қавитар менамояд.
• CP-1 гистологияи хоя ва холи Johnsen-ро беҳтар кардааст.
• Сиклофосфамид гузариши рушди сперматосит ба сперматидро вайрон кардааст.
• CP-1 популятсияи сперматидро қисман барқарор кардааст.
• CP-1 барномаҳои гениро, ки бо ҳаракати нутфа ва сперматогенез алоқаманданд, боло бурдааст.
• CTX ва PM miR-27b-ро зиёд ва CRISP2-ро кам кардаанд.
• CP-1 miR-27b-ро кам ва CRISP2-ро зиёд кардааст.
• Mimic-и miR-27b CRISP2-ро пахш кардааст; inhibitor ва CP-1 ин пахшкуниро қисман коҳиш додаанд.
• CP-1 нишондиҳандаҳои стресси оксидативӣ ва илтиҳобро кам кардааст.
• CP-1 вайроншавии гормонҳои хунобаро қисман ислоҳ кардааст.
• CP-1 баъзе шабакаҳои иртиботи байни ҳуҷайраҳои хояро дубора қавӣ кардааст.

Таҳқиқ чӣ намегӯяд?

• Нишон намедиҳад, ки CP-1 дар одамон астенозооспермияро табобат мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки дар беморони химиотерапия фертилитетро муҳофизат мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки сатҳи ҳомиладорӣ ё таваллуди зиндаро зиёд мекунад.
• Исбот намекунад, ки осеби DNA-и нутфаро пешгирӣ мекунад.
• Нишон намедиҳад, ки ҳангоми табобати саратон бехатар истифода мешавад.
• Нишон намедиҳад, ки таъсири зиддисаратонии сиклофосфамидро тағйир намедиҳад.
• Нишон намедиҳад, ки CP-1 бо химиотерапия ҳамкории доруӣ надорад.
• Вояи бехатар ё самаранокро барои одамон муайян намекунад.
• Нишон намедиҳад, ки вояҳои 20 ё 100 mg/kg-и мушро мустақим ба вояи инсон табдил додан мумкин аст.
• Исбот намекунад, ки таъсир танҳо ба роҳи miR-27b/CRISP2 вобаста аст.
• Муайян намекунад, ки кадом молекулаи дохили CP-1 фаъол аст.
• Нишон намедиҳад, ки истеъмоли Polygonati Rhizoma ё лӯбиёи сиёҳ ҳамин натиҷаро медиҳад.
• Нишон намедиҳад, ки иловаҳои гиёҳӣ безурётии вобаста ба химиотерапияро пешгирӣ мекунанд.

Аҳамият аз нигоҳи гузашта

Осеби репродуктивии мард аз химиотерапия муддати дароз тавассути стресси оксидативӣ, осеби DNA ва вайроншавии гормонҳо таҳқиқ шудааст. Ин таҳқиқ ба ҳамон мушкилот дар сатҳи навъи ҳуҷайра менигарад ва мекӯшад нишон диҳад, ки кадом марҳилаи сперматогенез махсусан халалдор мешавад.

Маълумоти якҳуҷайрагӣ нишон медиҳанд, ки баъд аз сиклофосфамид танҳо “коҳиши умумии генҳо дар хоя” нест; гузариши сперматосит ба сперматид, шабакаи дастгирии Sertoli ва генҳои ҳаракати нутфа метавонанд алоҳида халалдор шаванд.

Аҳамият барои имрӯз

Саҳми асосии консептуалии таҳқиқ он аст, ки талафоти ҳаракатнокии нутфа аз химиотерапияро дар чор сатҳи вобаста ба ҳам баррасӣ мекунад:

1. Осеби сохтории бофтаи хоя
2. Тақсимоти рушди ҳуҷайраҳои ҷинсӣ
3. Барномаи молекулавии марбут ба miR-27b/CRISP2/CatSper
4. Микро муҳити оксидативӣ, илтиҳобӣ ва гормонӣ

Ин равиш нишон медиҳад, ки танҳо шумораи нутфа кофӣ нест; марҳилаи рушди нутфа, метаболизми энергия, сигнали калсий ва ҳуҷайраҳои дастгиркунандаи хоя бояд якҷо арзёбӣ шаванд.

Аҳамият барои оянда

Барои бурдани натиҷаҳо ба таҳқиқи пешрафта корҳои зерин заруранд:

• Гурӯҳҳои калонтар ва мустақили ҳайвонот
• Китобхонаҳои якҳуҷайрагии мустақил барои ҳар муш
• Таҳлили ҳар ду хоя ҳамчун такрори биологии алоҳида
• Ҷудо кардани CP-1 ба зерфраксияҳои пок
• Муайян кардани сохтори полисахариди фаъол
• Тасдиқи химиявӣ ва генетикии навъи растанӣ
• Санҷиши reporter-и пайвастшавии мустақими miR-27b–Crisp2
• Ченкунии ҷараёни калсий ва канали CatSper дар нутфа
• Таҳлили пора-порашавии DNA-и нутфа ва якпорчагии хроматин
• Таҳқиқи ҷуфтшавӣ, ҳомиладорӣ ва таваллуди зинда
• Санҷиши бехатарии рушдӣ ва генетикии насл
• Баррасии он ки CP-1 таъсири зиддисаратонии сиклофосфамидро тағйир медиҳад ё не
• Таҳқиқи фармакокинетика ва тақсимоти бофтавӣ
• Бехатарии дарозмуддати ҷигар, гурда ва масуният
• Тасдиқ бо органоиди хояи инсон ё намунаҳои нутфаи инсон
• Танҳо баъд аз тасдиқи кофии пешклиникӣ озмоишҳои назоратшудаи клиникӣ

Маъно барои ҳаёти ҳаррӯза ва беморон

Барои мардоне, ки химиотерапия мегиранд, саломатии репродуктивӣ масъалаи муҳими сифати зиндагӣ аст. Аммо ин таҳқиқ истифодаи худсаронаи CP-1, Polygonati Rhizoma ё маҳсулоти гиёҳии монандро аз ҷониби беморони саратон дастгирӣ намекунад.

Маҳсулоти гиёҳӣ ё полисахаридӣ метавонанд:

• ҷаббиш ва метаболизми доруҳои химиотерапияро тағйир диҳанд,
• бо ферментҳои ҷигар ҳамкорӣ кунанд,
• ба системаи масуният таъсир расонанд,
• байни маҳсулот аз нигоҳи покӣ ва воя фарқ кунанд,
• назариявӣ самаранокии табобати саратонро тағйир диҳанд.

Дар таҳқиқ санҷида нашудааст, ки CP-1 таъсири сиклофосфамидро дар куштани ҳуҷайраҳои саратонӣ нигоҳ медорад ё не.

Барои бемороне, ки пеш аз химиотерапия мехоҳанд фертилитети худро ҳифз кунанд, ин таҳқиқ тавсияи клиникии табобат нест, балки самти таҷрибавии таҳқиқ барои механизмҳои муҳофизатии оянда мебошад.

Усул ва натиҷаҳои таҳқиқ

Хулосаи техникии тарҳи таҳқиқ

Тақсимоти маълумоти якҳуҷайрагӣ

Модели асосии молекулавӣ

Маънои техникии Шакли 2

Шакли 2 харитаи транскриптомии якҳуҷайрагии хояро ташкил медиҳад. Кластерҳои UMAP нӯҳ навъи ҳуҷайраро ҷудо мекунанд, dot plot генҳои marker-и ҳуҷайраҳоро ва heatmap имзои хоси экспрессияи ҳар навъи ҳуҷайраро нишон медиҳад.

Паёми асосии графики ҳиссаи ҳуҷайраҳо коҳиши популятсияи сперматид пас аз CTX ва барқароршавии қисман бо CP-1 аст.

Маънои техникии Шакли 3

Шакли 3:

• генҳои фарқкунанда,
• ғанигардонии GO,
• холҳои маҷмӯи генҳои ҳаракати нутфа,
• натиҷаҳои qPCR-и miR-27b ва Crisp2,
• ELISA-и CRISP2-и хуноба,
• таҷрибаҳои miRNA mimic/inhibitor,
• Western blot-и CRISP2

-ро якҷо мекунад.

Ин шакл қавитарин қисми таҷрибавӣ барои иддаои miR-27b/CRISP2 мебошад. Бо вуҷуди ин, байни самтҳои муқоисаи Venn ва матни асосӣ масъалаи равшанӣ вуҷуд дорад.

Маънои техникии Шакли 4

Шакли 4 траекторияи рушд аз сперматогония то сперматид ва марҳилае, ки генҳо дар он баланд мешаванд, нишон медиҳад.

Дар гурӯҳи CTX ҳиссаи ҳуҷайраҳои марҳилаи дер кам шуд; дар гурӯҳи CP-1 барқароршавии қисман мушоҳида гардид. Crisp2 дар spermatocyte ва spermatid; генҳои protamine ва spermiogenesis-и дер бештар дар марҳилаи spermatid баланд шуданд.

Маънои техникии Шакли 5

Шакли 5 натиҷаҳои CP-1-ро дар стресси оксидативӣ ва илтиҳоб нишон медиҳад:

• кам шудани фаъолияти маҷмӯи генҳои ROS,
• кам шудани MDA,
• зиёд шудани SOD,
• зиёд шудани экспрессияи Prdx6b,
• кам шудани TNF-α, IL-1β ва IL-6.

Дар таҷрибаҳои биохимиявии ҳайвонот баъзе натиҷаҳо n = 5 мебошанд, дар ҳоле ки баъзе натиҷаҳои молекулавӣ ва фарҳанги ҳуҷайравии ин шакл n = 3 гузориш шудаанд.

Маънои техникии Шакли 6

Шакли 6 сатҳи тестостерон, inhibin B, FSH ва LH-и хунобаро нишон медиҳад.

Намунаи тестостерон ва inhibin B-и паст бо FSH ва LH-и баланд баъд аз CTX, пас аз CP-1 қисман беҳтар шуд. Вояи баланди CP-1 дар аксари ченакҳо аз вояи паст таъсири равшантар дошт.

Фарқи аз ҷиҳати техникӣ муҳим барои CP-1

Натиҷаҳои таҳқиқ нишон медиҳанд, ки бо CP-1 беҳбудии биологӣ вуҷуд дорад; аммо “CP-1” молекулаи ягона ва муайян нест.

Аз ин рӯ, таҷрибаҳои ҳозира робитаи зеринро нишон медиҳанд:

\[ \mathrm{CP\!-\!1\ karışımı} \rightarrow \mathrm{biyolojik\ sonuç} \]

Аммо ҳанӯз робитаи зеринро нишон намедиҳанд:

\[ \mathrm{belirli\ saf\ polisakkarit\ yapısı} \rightarrow \mathrm{miR\!-\!27b} \rightarrow \mathrm{CRISP2} \]

Маълум нест, ки кадом ҷузъи CP-1 ба ҳуҷайра мерасад, miR-27b-ро чӣ гуна тағйир медиҳад ва баъд аз истифодаи даҳонӣ дар кадом шакл ба хун ё хоя мерасад.

Маълум нест, ки кадом ҷузъи CP-1 ба ҳуҷайра мерасад, miR-27b-ро чӣ гуна тағйир медиҳад ва пас аз истифодаи даҳонӣ дар кадом шакл ба хун ё хоя мерасад.

Аз ҷиҳати техникӣ муҳимтарин натиҷа

Муҳимтарин натиҷаи таҳқиқ ин аст, ки талафоти ҳаракатнокии нутфа аз сиклофосфамидро на танҳо ҳамчун камшавии шумораи нутфа, балки ҳамчун блоки рушди spermatocyte–spermatid ва масъалаи танзими генӣ вобаста ба miR-27b/CRISP2 нишон медиҳад.

Дар мушҳои гирифтаи CP-1:

• ташаккули сперматид зиёд шуд,
• CRISP2 барқарор шуд,
• генҳои вобаста ба CatSper баланд шуданд,
• стресси оксидативӣ ва илтиҳобӣ кам шуд,
• намунаи гормонӣ қисман ислоҳ шуд,
• ҳаракатнокии нутфа зиёд гардид.

Ин натиҷаҳо механизми пешклиникии умедбахш пешниҳод мекунанд; аммо бинобар гурӯҳҳои хурди муш, омехтаи гетерогении CP-1 ва набудани маълумоти инсон набояд ҳамчун натиҷаи табобати клиникӣ тафсир шаванд.

Эзоҳи манбаъ ва усул

Ин муҳтаво ба таҳқиқ бо унвони “Black-bean-processed Polygonati Rhizoma Crude Polysaccharide 1 (CP-1) alleviates cyclophosphamide-induced asthenozoospermia via the miR-27b/CRISP2-associated sperm motility” асос ёфтааст.

Номи муаллифон, муассисаҳо ва маълумоти тамоси муаллифи масъул дар PDF-и боршуда ҷой надорад. Аз ин рӯ, рӯйхати муаллифон аз PDF тасдиқ нашудааст ва аз берун ном илова нашудааст.

Таҳқиқ таҳқиқи пешклиникии ҳайвонот ва in vitro мебошад, ки модели астенозооспермияи сиклофосфамидӣ дар мушҳои наринаи C57BL/6J, ҳуҷайраҳои сперматоситии GC-2spd(ts), RNA-seq-и якҳуҷайрагӣ, гистология, таҳлили нутфа, ченкунии гормон ва мудохилаи miRNA-ро якҷо мекунад.

Ин таҳқиқи клиникии инсон нест. Намунаи семени инсон, бемори безурётӣ, натиҷаи ҳомиладорӣ ё маълумоти таваллуди зинда вуҷуд надорад.

Дар матн ошкоро “This preprint research paper has not been peer reviewed” ва “Preprint not peer reviewed” омадааст. Аз ин рӯ, таҳқиқ аз баррасии ҳамсолон нагузаштааст. Дар PDF қабули маҷалла, DOI ё нашри ниҳоии баррасишуда тасдиқ нашудааст.

Гуфта шудааст, ки таҷрибаҳои ҳайвонот аз ҷониби Shenzhen Huateng Biopharmaceutical Technology Co., Ltd. бо рақами B202501-3 тасдиқ шудаанд.

Гузориш шудааст, ки таҳқиқ аз ҷониби Guangdong Province Guangdong–Shenzhen Joint Key Project, Shenzhen Medical Research Fund, National Natural Science Foundation of China, Shenzhen Science and Technology Program ва Guangdong Basic and Applied Basic Research Foundation дастгирӣ шудааст. Дар матн бархӯрди манфиатҳо вуҷуд надорад гуфта шудааст.

CP-1 моддаи поки доруии яксохторӣ нест. Он омехтаи хоми полисахаридӣ бо тақсимоти васеи массаи молекулавӣ мебошад. Номи навъи манбаи растанӣ дар бахшҳои гуногун ҳамчун Polygonatum sibiricum ва Polygonatum cyrtonema ба таври гуногун навишта шудааст.

Дар таҷрибаҳои якҳуҷайрагӣ шумораи ҳайвоноти мустақил ва китобхонаҳо барои ҳар гурӯҳ нишон дода нашудааст. Аз ин рӯ, муайян кардан мумкин нест, ки омори аз шумораи зиёди ҳуҷайраҳо ҳисобшуда то чӣ андоза такрорҳои биологии мустақилро намояндагӣ мекунад.

Дар Шакли 1D вояи пасти CP-1 ҳамчун 40 mg/kg нишон дода шудааст, аммо дар усулҳо ва графикҳои дигар 20 mg/kg навишта шудааст. Самтҳои муқоисаи Venn-и генҳои фарқкунанда низ бо шарҳи матни асосӣ пурра мувофиқ нестанд.

Монанд будани ALT ва AST танҳо нишондиҳандаи маҳдуди кӯтоҳмуддати ҷигар аст. Таҳқиқ кафолати бехатарии умумӣ, бехатарии гурда, заҳролудии дарозмуддат, бехатарии DNA-и нутфа ё набудани ҳамкории доруӣ бо химиотерапияро намедиҳад.

Таҳқиқ истифодаи CP-1, маҳсулоти Polygonati Rhizoma ё иловаҳои монандро дар одамони химиотерапиягиранда тавсия намедиҳад. Таъсири эҳтимолӣ ба фаъолияти зиддитумории сиклофосфамид арзёбӣ нашудааст.

Ин мақола танҳо бар асоси усулҳо, графикҳо, тасвирҳои гистологӣ, таҳлилҳои якҳуҷайрагӣ, маълумоти иловагӣ ва тафсирҳои муаллифон дар PDF-и боршуда таҳия шудааст. Ягон иддаои самаранокии инсон, табобати клиникӣ, кафолати фертилитет, вояи бехатар ё тавсияи маҳсулот, ки дар PDF набуд, илова нашудааст.