Астма бемории якхелае нест, ки танҳо аз як навъи илтиҳоб иборат бошад. Дар қисми назарраси беморон эозинофилҳо ва посухи иммунии навъи 2 бартарӣ доранд, дар ҳоле ки дар баъзе шаклҳои астмаи вазнин нейтрофилҳо ва посухҳои Th1 ва Th17 бештар ба назар мерасанд ва табобати кортикостероидӣ наметавонад илтиҳоби роҳҳои ҳавоиро ба таври кофӣ фурӯ нишонад. Ин фенотипи ба стероид тобовар ҳам барои табобати клиникӣ ва ҳам барои таҳияи доруҳои нав мушкили муҳим аст.

Дар ин таҳқиқоти пешклиникӣ муҳаққиқон ҳадаф гузоштанд, ки бо якҷо кардани аллергени рекомбинантии Der p 38, ки аз навъи фулуси чанги хонагӣ Dermatophagoides pteronyssinus гирифта шудааст, бо сиклик ди-гуанозин монофосфат, яъне c-di-GMP, ки паёмрасони дуюмдараҷаи бактериявӣ ва ангезандаи масунияти луобпарда мебошад, модели нави муширо таҳия кунанд, ки астмаи нейтрофилии ба стероид тобоварро тақлид намояд.

Ҳангоми истифодаи танҳо Der p 38 дар шуши мушҳо илтиҳоби гранулоситии омехта, ки ҳам эозинофилҳо ва ҳам нейтрофилҳоро дар бар мегирифт, ҷамъшавии ҳуҷайраҳо дар атрофи роҳҳои ҳавоӣ ва афзоиши ҳуҷайраҳои бокалшакли тавлидкунандаи луоб ба вуҷуд омад. Қисми назарраси ин посухҳо бо табобати дексаметазон фурӯ нишонда шуданд.

Истифодаи Der p 38 якҷо бо c-di-GMP бошад, посухи иммуниро бештар ба самти меҳвари нейтрофил, IFN-γ ва IL-17A бурд. Дар гурӯҳи комбинавӣ илтиҳоби атрофи шуш, тавлиди луоб, посухҳои умумӣ ва хоси Der p 38-и антителагӣ ва ҳамчунин тавлиди IFN-γ ва IL-17A сарфи назар аз истифодаи дексаметазон идома ёфт.

Комбинатсияи Der p 38 бо c-di-GMP дар муқоиса бо истифодаи танҳо Der p 38 махсусан сатҳҳои IgG1 ва IgG2c-и хоси Der p 38-ро ба таври назаррас зиёд кард. Сатҳи IFN-γ дар моеъи шустани бронхоалвеолярӣ низ дар гурӯҳи комбинавӣ ба таври назаррас баландтар буд. Дар ҳоле ки IL-17A дар ҳар ду гурӯҳи аллергенӣ афзоиш ёфт, дексаметазон посухро дар гурӯҳи Der p 38 коҳиш дод, вале дар гурӯҳи комбинавӣ таъсири маҳдуд нишон дод.

Таҳқиқот платформаи таҷрибавиеро пешниҳод мекунад, ки баъзе хусусиятҳои иммунии астмаи вазнин ва ба стероид ҳассоснабударо дар бар мегирад. Бо вуҷуди ин, таҳқиқот дар инсонҳо гузаронида нашудааст; гиперреактивии роҳҳои ҳавоӣ ё механикаи шуш мустақиман чен нашудаанд, танҳо мушҳои мода истифода шудаанд ва гурӯҳҳо бо панҷ ҳайвон маҳдуд буданд. Аз ин рӯ, модел ҳамаи хусусиятҳои клиникии астмаи вазнинро аз нав эҷод намекунад, балки намунаи мушаххаси илтиҳоби нейтрофилӣ ва бо бартарии Th1/Th17-ро тақлид мекунад.

Чаро астмаи ба стероид тобовар мушкили муҳим аст?

Астма бемориест, ки бо илтиҳоби музмини роҳҳои ҳавоӣ, ҳассосияти аз ҳад зиёд, афзоиши тавлиди луоб ва маҳдудшавии тағйирёбандаи ҷараёни ҳаво тавсиф мешавад. Кортикостероидҳои нафаскашӣ асоси табобати астма мебошанд, зеро дар бисёр беморон бо коҳиш додани фаъолияти генҳои илтиҳобӣ аломатҳо ва авҷгириҳоро назорат мекунанд.

Бо вуҷуди ин, мувофиқи чаҳорчӯбаи дар таҳқиқот овардашуда, тақрибан дар yüzde 5-10-и беморон метавонад фенотипи вазнини астма бо посухи паст ба кортикостероидҳо инкишоф ёбад. Дар ин беморон:

• Илтиҳоби роҳҳои ҳавоӣ сарфи назар аз табобат метавонад идома ёбад.
• Авҷгириҳо метавонанд бештар рух диҳанд.
• Нейтрофилҳо метавонанд дар байни ҳуҷайраҳои роҳҳои ҳавоӣ бартарӣ пайдо кунанд.
• Посухи Th17 ва тавлиди IL-17A метавонад афзоиш ёбад.
• Стресси оксидшавӣ ва ихтилоли фаъолияти ретсептори глюкокортикоидӣ метавонанд ба вуҷуд оянд.
• Табобатҳои стандартии кортикостероидӣ метавонанд нокифоя бошанд.

Аз ин рӯ, барои моделҳои таҷрибавие, ки барои астмаи вазнин таҳия мешаванд, танҳо ба вуҷуд овардани эозинофилияи аллергӣ кофӣ нест. Модел ҳамчунин бояд бартарии нейтрофилҳо, самтгирии Th1/Th17 ва посухи паст ба табобати кортикостероидиро инъикос намояд.

Маҳдудияти моделҳои анъанавии астма дар мушҳо

Дар таҳқиқоти таҷрибавии астма сафедаи сафедаи тухм — овалбумин ва иқтибосҳои пурраи фулуси чанги хонагӣ ба таври васеъ истифода мешаванд. Ин моделҳо асосан илтиҳоберо ба вуҷуд меоранд, ки дар он эозинофилҳо ва посухи Th2 бартарӣ доранд ва нисбат ба кортикостероидҳо нисбатан ҳассос мебошанд.

Ин гуна моделҳо барои омӯзиши:

• Ҳассосшавии аллергӣ,
• Тавлиди IgE,
• Ҷамъшавии эозинофилҳо,
• Ситокинҳои навъи 2, аз ҷумла IL-4, IL-5 ва IL-13,
• Тавлиди луоб

муфид буда метавонанд. Аммо онҳо метавонанд муқовимат ба кортикостероидро, ки дар астмаи вазнини нейтрофилӣ мушоҳида мешавад, пурра инъикос накунанд.

Нуқтаи оғози таҳқиқоти нав он аст, ки Der p 38 ҳамчун аллергене, ки метавонад ҳам эозинофилҳо ва ҳам нейтрофилҳоро сафарбар кунад, қобилияти ба вуҷуд овардани фенотипи мураккабтари астмаро дорад.

Der p 38 чист?

Dermatophagoides pteronyssinus яке аз намудҳои фулуси чанги хонагӣ мебошад, ки бо бемориҳои аллергӣ дар инсонҳо алоқаманд аст. Der p 38, ки дар байни сафедаҳои ин фулус муайян шудааст, аллергение мебошад, ки метавонад системаи масуниятро ангезад.

Дар таҳқиқот ба ҷойи иқтибоси табиии фулус Der p 38-и рекомбинантӣ истифода шудааст. Қисми сафедаи баркамоли рамзкунандаи Der p 38:

1. Афзоиш дода шуд,
2. Ба вектори экспрессияи pETDuet-1 клон карда шуд,
3. Дар бактерияҳои Escherichia coli истеҳсол карда шуд,
4. Бо хроматографияи аффинитии никел тоза карда шуд,
5. Бо хроматографияи истиснои андоза ба тозакунии иловагӣ гузаронида шуд,
6. Дар ҳолати зарурӣ аз эндотоксин тоза карда шуд.

Истифодаи як аллергени муайяни рекомбинантӣ таъсири сафедаҳои сершумор ва ҷузъҳои тағйирёбандаро, ки дар иқтибоси пурраи фулуси чанги хонагӣ мавҷуданд, коҳиш дода, имкон медиҳад посухи марбут ба Der p 38 дар шароити бештар назоратшаванда арзёбӣ шавад.

Аммо наметавон фарз кард, ки сафедаи рекомбинантие, ки дар бактерияҳо тавлид шудааст, тамоми хусусиятҳои қатшавӣ ва тағйироти кимиёвии сафедаи табиии фулусро дақиқ такрор мекунад. Таҳқиқот таъсири ин фарқиятҳои сафедаиро ба посухи иммунологӣ алоҳида наомӯхтааст.

c-di-GMP чист ва чаро ба модел илова карда шуд?

Сиклик ди-гуанозин монофосфат, кӯтоҳаш c-di-GMP, молекулаи паёмрасони дуюмдараҷа дар бактерияҳо мебошад, ки рафтори ҳуҷайравиро танзим мекунад. Дар системаи масунияти ширхӯрон бошад, он метавонад роҳҳои масунияти модарзодиро фаъол кунад ва ҳамчун адъюванти луобпарда посухи пурқуввати илтиҳобиро ба вуҷуд оварад.

Муҳаққиқон бо истифодаи c-di-GMP якҷо бо Der p 38 ҳадаф доштанд, ки посухи иммуниро аз меҳвари классикии Th2-эозинофил ба меҳвари нейтрофил, Th1 ва Th17 равона кунанд.

Равиши консептуалии таҳқиқотро барои тавзеҳ чунин нишон додан мумкин аст:

\[ \mathrm{Der\ p\ 38} \rightarrow \mathrm{Karışık\ eozinofilik+nötrofilik\ inflamasyon} \]

\[ \mathrm{Der\ p\ 38+c\!-\!di\!-\!GMP} \rightarrow \mathrm{Nötrofil\ ağırlığı+Th1/Th17\ yönelimi+steroid\ direnci} \]

Ин ифодаҳо формулаҳои математикии нашршуда дар мақола нестанд. Онҳо танҳо нишондиҳандаҳои консептуалӣ мебошанд, ки мантиқи биологии модели таҷрибавиро ҷамъбаст мекунанд.

Ду протоколи гуногуни таҷрибавӣ чӣ гуна татбиқ шуданд?

Дар таҳқиқот мушҳои модаи C57BL/6-и шашҳафтаина истифода шуданд. Ҳайвонҳо дар шароити аз патогенҳои мушаххас озод нигоҳ дошта шуданд.

Протоколи астмаи гранулоситии омехта бо Der p 38:

• Ба мушҳо дар рӯзҳои 1 ва 14 ҳассоскунии intraperitoneal бо Der p 38 гузаронида шуд.
• Дар рӯзҳои 21-27 ҳар рӯз Der p 38 ба таври intranazal дода шуд.
• Дексаметазон дар рӯзҳои 22-27 бо вояи 3 mg/kg ба таври intraperitoneal дода шуд.

Модели ба стероид тобовар бо Der p 38 ва c-di-GMP:

• Дар рӯзҳои 1., 3. ва 5. бо 25 µg Der p 38 ва 5 µg c-di-GMP ба таври intranazal ҳассоскунӣ гузаронида шуд.
• Пас аз давраи истироҳати панҷрӯза ба истифодаи ангезандаҳо гузаштанд.
• Дар рӯзҳои 11., 18. ва 25. 25 µg Der p 38 бо 0,5 µg c-di-GMP якҷо intranazal дода шуд.
• Дар рӯзҳои 12., 13., 19., 20., 26. ва 27. танҳо Der p 38 истифода шуд.
• Дексаметазон дар рӯзҳои 11., 14., 17., 20., 23. ва 26. бо вояи 3 mg/kg intraperitoneal дода шуд.

Нуктаи муҳими методологӣ ин аст, ки модели Der p 38 ва модели Der p 38+c-di-GMP аз ҷиҳати роҳи ҳассоскунӣ, басомади истифода ва ҷадвали вақт комилан якхела нестанд. Аз ин рӯ, гуфтан мумкин нест, ки ҳамаи фарқиятҳои байни ду модел танҳо аз c-di-GMP ба вуҷуд омадаанд. Эҳтимол аст, ки фарқиятҳои ҷадвали татбиқ низ ба фенотипи иммунии мушоҳидашуда саҳм гузошта бошанд.

Чаро дексаметазон истифода шуд?

Дексаметазон як глюкокортикоиди пурқувват аст. Дар таҷриба ҳадафи он танҳо коҳиш додани илтиҳоб набуд, балки санҷидани он буд, ки посухи ба вуҷуд овардашуда ба кортикостероид ҳассос аст ё ба он тобовар.

Агар дар як модел илтиҳоб ва нишондиҳандаҳои иммунӣ бо дексаметазон ба таври назаррас кам шаванд, он модел ҳамчун ба стероид ҳассос арзёбӣ мешавад. Агар сарфи назар аз ҳамон воя ва нақшаи табобат илтиҳоб идома ёбад, далел ба фоидаи муқовимат ба стероид ба вуҷуд меояд.

Муқоисаи асосии дар таҳқиқот истифодашуда ба мантиқи зерин асос ёфта буд:

\[ \mathrm{Steroid\ duyarlılığı}=\mathrm{Tedavisiz\ yanıt}-\mathrm{Deksametazon\ sonrası\ yanıt} \]

Ин нишондиҳанда низ муодилаи ҳисобии дар таҳқиқот пешниҳодшуда нест. Он танҳо тарзи тафсири посух ба кортикостероидро шарҳ медиҳад.

Моеъи шустани бронхоалвеолярӣ чиро нишон медиҳад?

Моеъи шустани бронхоалвеолярӣ намунаест, ки бо шустани роҳҳои ҳавоии шуш бо моеъ гирифта мешавад. Дар таҳқиқот тавассути трахея панҷ шустани пайдарпай анҷом дода шуда, тақрибан 0,7 mL BALF ҷамъоварӣ шуд.

Дар BALF:

• Шумораи умумии ҳуҷайраҳо,
• Таносуби нейтрофилҳо,
• Таносуби эозинофилҳо,
• Ситокини Th1 — IFN-γ,
• Ситокинҳои Th2 — IL-4, IL-5 ва IL-13,
• Ситокини Th17 — IL-17A,
• IL-10, ки бо посухи танзимкунанда алоқаманд аст

чен карда шуданд.

Ҳуҷайраҳои умумӣ бо камераи ҳисобкунии Neubauer муайян карда шуданд. Таносуби навъҳои ҳуҷайраҳо баъд аз бо ситосентрифуга ба шиша гузаронидани намунаҳо ва рангкунии Diff-Quick ҳисоб карда шуд.

Натиҷаҳои BALF ҳуҷайраҳои ба ковокии роҳҳои ҳавоӣ муҳоҷираткарда ва ситокинҳои ҳалшавандаро нишон медиҳанд. Онҳо худ аз худ ҳамаи ҳуҷайраҳои иммунии бофтаи шуш ё ҳолати молекулавии ин ҳуҷайраҳоро ифода намекунанд.

Der p 38 танҳо чӣ гуна илтиҳоб ба вуҷуд овард?

Ҳангоми истифодаи танҳо Der p 38 шумораи умумии ҳуҷайраҳо дар BALF ба таври назаррас афзуд. Дар тақсимоти ҳуҷайраҳо ҳам эозинофилҳо ва ҳам нейтрофилҳо мавҷуд буданд. Аз ин рӯ, посух ҳамчун илтиҳоби гранулоситии омехта арзёбӣ шуд, на танҳо эозинофилӣ ё танҳо нейтрофилӣ.

Дар буришҳои шуш:

• Инфилтратсияи ҳуҷайравӣ дар атрофи бронхҳо,
• Ҷамъшавии ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ дар атрофи рагҳо,
• Афзоиши ҳуҷайраҳои бокалшакли PAS-мусбат,
• Афзоиши тавлиди луоб

мушоҳида шуд.

Дексаметазон дар гурӯҳи Der p 38 ҷамъшавии умумии ҳуҷайраҳо, посухи эозинофилӣ ва нейтрофилӣ ва ҳуҷайраҳои PAS-мусбати луобсозро ба таври назаррас коҳиш дод. Аз ин рӯ, илтиҳобе, ки танҳо Der p 38 ба вуҷуд овард, асосан ба стероид ҳассос буд.

Ҳангоми илова кардани c-di-GMP профили ҳуҷайравӣ чӣ гуна тағйир ёфт?

Ҳангоми истифодаи якҷояи Der p 38 ва c-di-GMP шумораи умумии ҳуҷайраҳои BALF ва нейтрофилҳо нисбат ба гурӯҳи Der p 38 баландтар менамуданд. Аммо муҳаққиқон ба таври возеҳ қайд карданд, ки ин фарқиятҳои рақамии байни ду гурӯҳи аллергенӣ дар ҳар таҳлил ба аҳамияти оморӣ нарасидаанд.

Бо ин вуҷуд, тақсимоти ҳуҷайраҳо дар гурӯҳи комбинавӣ намунаи бартарии нейтрофилҳоро нишон дод. Саҳми эозинофилҳо нисбат ба гурӯҳи Der p 38 маҳдудтар буд.

Сарфи назар аз истифодаи дексаметазон:

• Ҷамъшавии умумии ҳуҷайраҳо идома ёфт.
• Илтиҳоби нейтрофилӣ нигоҳ дошта шуд.
• Инфилтратсияи ҳуҷайравии перибронхиалӣ ва периваскулярӣ равшан боқӣ монд.
• Афзоиши ҳуҷайраҳои PAS-мусбати луобсоз фурӯ нишонда нашуд.

Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки протоколи дорои c-di-GMP илтиҳоби роҳҳои ҳавоиро ба вуҷуд овардааст, ки бо стероид ба қадри кофӣ фурӯ нишонда намешавад.

Гистологияи шуш чиро нишон дод?

Шушҳо дар формалин собит карда шуданд, дар парафин ҷойгир ва бо ғафсии 5 µm бурида шуданд. Ду усули асосии рангкунӣ истифода шуд:

• Гематоксилин-эозин: Барои нишон додани инфилтратсияи ҳуҷайравӣ ва сохтори умумии бофтаи шуш.
• Кислотаи даврӣ-Шифф: Барои нишон додани луоб ва ҳуҷайраҳои бокалшакли луобсоз.

Гиперплазияи ҳуҷайраҳои бокалшакл бо низоми панҷзинавӣ баҳогузорӣ шуд:

Дар ҳар буриш ҳашт майдон арзёбӣ шуд ва миёнаи панҷ муш дар ҳар гурӯҳ ҳисоб карда шуд. Таҳлилҳои гистологӣ ба таври кӯр анҷом дода шуданд; яъне арзёбанда намедонист, ки кадом намуна ба кадом гурӯҳ тааллуқ дорад.

Дар гурӯҳи Der p 38 дексаметазон холҳои луобро ба таври назаррас коҳиш дод, дар ҳоле ки дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP фурӯнишонии равшан ба даст наовард.

Чаро посухҳои антителагӣ чен карда шуданд?

Астма танҳо аз ҳуҷайраҳое, ки ба шуш муҳоҷират мекунанд, иборат нест. Посухи антителагӣ ба аллерген низ ҷузъи муҳими фенотипи иммунӣ мебошад.

Муҳаққиқон дар хуноба ду навъи ченкуниро анҷом доданд:

1. Сатҳҳои умумии IgE, IgG1 ва IgG2c,
2. Сатҳҳои IgE, IgG1 ва IgG2c-и хоси аллерген, ки танҳо Der p 38-ро мешиносанд.

Ҳангоми чен кардани антителаҳои хоси Der p 38, табақчаҳои ELISA бо 0,05 mg/mL Der p 38 пӯшонида шуданд. Хуноба:

• Барои IgE бо таносуби 1:10,
• Барои IgG1 ва IgG2c бо таносуби 1:200

разбавка карда шуд. Антителаҳо бо истифода аз антителаи дуюмдараҷаи биотинишуда, streptavidin-HRP ва субстрати рангоранг чен карда шуданд. Абсорбанс дар 450 nm хонда шуд ва таҳлилҳо дар такрори дугона анҷом дода шуданд.

Дар сатҳҳои умумии антитела чӣ мушоҳида шуд?

Дар гурӯҳҳои Der p 38 ва Der p 38+c-di-GMP сатҳҳои умумии IgE, IgG1 ва IgG2c нисбат ба гурӯҳи назоратӣ афзоиш ёфтанд.

Дар гурӯҳи Der p 38 дексаметазон:

• Сатҳи умумии IgE-ро коҳиш дод.
• Сатҳи умумии IgG1-ро фурӯ нишонд.
• Сатҳи умумии IgG2c-ро коҳиш дод.

Дар гурӯҳи комбинавӣ бошад, ин посухҳои антителагӣ сарфи назар аз табобати дексаметазон баланд боқӣ монданд. Хусусан дар графикҳои умумии IgG1 ва IgG2c набудани коҳиши назаррас пас аз стероид дар гурӯҳи комбинавӣ нишон медиҳад, ки посухи гуморалии системавии иммунӣ низ метавонад муқовимат ба стероид нишон диҳад.

Посухҳои антителагии хоси Der p 38

Ҳар ду протоколи аллергенӣ тавлиди IgE, IgG1 ва IgG2c-и хоси Der p 38-ро зиёд карданд.

Комбинатсияи Der p 38+c-di-GMP:

• Сатҳи IgG1-и хоси Der p 38-ро нисбат ба гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас бештар зиёд кард.
• Сатҳи IgG2c-и хоси Der p 38-ро ба таври равшан тақвият дод.
• Фурӯнишонии ин антителаҳоро бо дексаметазон пешгирӣ кард.

Дар гурӯҳи Der p 38 IgE, IgG1 ва IgG2c-и хоси аллерген бо дексаметазон коҳиш ёфтанд, дар ҳоле ки сатҳҳо дар гурӯҳи комбинавӣ баланд боқӣ монданд.

Ин натиҷа нишон медиҳад, ки c-di-GMP на танҳо муҳоҷирати нейтрофилҳоро ба шуш зиёд кардааст, балки ҳамчунин посухи антителагии қавитар ва ба стероид тобовари хоси Der p 38-ро ба вуҷуд овардааст, ки метавонад хотираи гуморалӣ ё ҷавоби гуморалии қавитарро инъикос кунад.

Бо вуҷуди ин, таҳқиқот насанҷидааст, ки антителаҳо мустақиман сабаби илтиҳоби роҳҳои ҳавоӣ мебошанд ё не. Афзоиши антитела метавонад сабаб, натиҷа ё хусусияти иммунии ҳамзамон инкишофёбанда бошад.

Ситокинҳои Th2 чӣ гуна тағйир ёфтанд?

Ҳангоми истифодаи танҳо Der p 38 дар BALF сатҳҳои:

• IL-4,
• IL-5,
• IL-13

ба таври назаррас баланд шуданд.

Ин ситокинҳо бо посухҳои классикии аллергӣ ва эозинофилии астма алоқаманданд. Дексаметазон афзоиши IL-4, IL-5 ва IL-13-ро дар гурӯҳи Der p 38 фурӯ нишонд.

Дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP бошад, ин се ситокини Th2 ба андозаи гурӯҳи Der p 38 ба таври равшан баланд нашуданд. Аз ин рӯ, модели комбинавӣ ба ҷойи профили пурқуввати классикии Th2 посухи дорои бартарии Th1/Th17-ро ба вуҷуд овард.

Ин бозёфт нишон медиҳад, ки c-di-GMP на танҳо посухи иммуниро дар маҷмӯъ зиёд мекунад, балки сифати посухро низ тағйир медиҳад.

Чаро натиҷаҳои IFN-γ муҳим буданд?

IFN-γ дар таҳқиқот ҳамчун нишондиҳандаи асосии посухи иммунии ба самти Th1 нигаронидашуда арзёбӣ шуд.

Сатҳи IFN-γ:

• Дар гурӯҳи Der p 38 аз назорат баланд шуд.
• Дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP хеле бештар баланд гардид.
• Дар гурӯҳи комбинавӣ нисбат ба гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас баландтар буд.

Дексаметазон тавлиди IFN-γ-ро дар гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас коҳиш дод, вале натавонист сатҳи баланди IFN-γ-ро дар гурӯҳи комбинавӣ фурӯ нишонад.

Муҳаққиқон баландшавии IFN-γ-ро ҳамчун яке аз ҷузъҳои эҳтимолии иммунологии муқовимат ба кортикостероид шарҳ доданд. Аммо таҳқиқот IFN-γ-ро безарар накардааст ва ретсептори IFN-γ-ро масдуд накардааст. Аз ин рӯ, исбот нашудааст, ки афзоиши IFN-γ сабаби мустақими муқовимат ба стероид аст.

IL-17A ва илтиҳоби нейтрофилӣ

IL-17A ситокинест, ки метавонад аз ҷониби ҳуҷайраҳои Th17 ва баъзе ҳуҷайраҳои дигари иммунӣ истеҳсол шавад ва тавлиди нейтрофилҳо ва муҳоҷирати онҳоро ба роҳҳои ҳавоӣ дастгирӣ мекунад.

Дар таҳқиқот IL-17A:

• Дар гурӯҳи Der p 38 афзоиш ёфт.
• Дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP ба сатҳҳои баландтар расид.
• Дар гурӯҳи Der p 38 бо дексаметазон коҳиш ёфт.
• Дар гурӯҳи комбинавӣ сарфи назар аз табобати стероид баланд боқӣ монд.

Ин натиҷа сигнали Th17-ро пешниҳод мекунад, ки бо бартарии нейтрофилҳо дар BALF мувофиқ аст.

Аммо дар таҳқиқот ҳуҷайраҳои Th17 бо цитометрияи ҷараёнӣ ҳисоб нашудаанд, манбаи ҳуҷайравии IL-17A муайян нашудааст ва таҷрибаи масдудкунии IL-17A гузаронида нашудааст. Аз ин рӯ, тафсири “посухи Th17” ба сатҳҳои ситокинҳо асос меёбад.

Чаро IL-10 дигар хел рафтор кард?

IL-10 ҳамчун ситокини танзимкунандае арзёбӣ шуд, ки метавонад посухҳои иммуниро маҳдуд кунад. Дар таҳқиқот байни гурӯҳҳо дар сатҳи IL-10 тағйироти назаррас мушоҳида нашуд.

Ин натиҷа нишон медиҳад, ки илтиҳоби шадиди гурӯҳи комбинавӣ танҳо бо паст шудани IL-10 шарҳ дода намешавад. Бо вуҷуди ин, шумора ё фаъолияти ҳуҷайраҳои T-и танзимкунанда ва дигар механизмҳои фурӯнишонанда чен карда нашудаанд.

Муқовимат ба стероид дар кадом сатҳҳо дида шуд?

Муқовимат ба стероид дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP ба як нишондиҳандаи ягона асос намеёбад. Беэффектӣ ё таъсири маҳдуди дексаметазон дар чанд сатҳ мушоҳида шуд:

Ин муқовимати чандсатҳа дастгирӣ мекунад, ки модел на танҳо аз ҷиҳати шумораи ҳуҷайраҳо, балки аз ҷиҳати тағйироти бофтавӣ, ситокинҳо ва посухи антителагии хоси аллерген низ ҳассосияти паст ба стероид нишон медиҳад.

Оё модел воқеан астмаро пурра тақлид мекунад?

Модел хусусиятҳои муҳими илтиҳобии марбут ба астмаро ба вуҷуд овардааст:

• Ҷамъшавии ҳуҷайраҳои илтиҳобӣ дар атрофи роҳҳои ҳавоӣ,
• Бартарии нейтрофилҳо,
• Афзоиши ҳуҷайраҳои бокалшакли луобсоз,
• Посухи антителагии хоси аллерген,
• Афзоиши IFN-γ ва IL-17A,
• Муқовимат ба дексаметазон.

Аммо гиперреактивии роҳҳои ҳавоӣ, ки яке аз хусусиятҳои муайянкунандаи физиологии астма мебошад, дар таҳқиқот мустақиман чен нашудааст. Посух ба метахолин, муқовимати роҳҳои ҳавоӣ, комплаенси шуш ё ченкуниҳои функсияи нафаскашӣ мавҷуд нестанд.

Аз ин рӯ, таҳқиқот модели қавии таҷрибавии илтиҳоби нейтрофилии роҳҳои ҳавоии ба стероид тобоварро пешниҳод мекунад; аммо худ аз худ исбот намекунад, ки тамоми фенотипи физиологии астма ба вуҷуд оварда шудааст.

Механизми иммунологии пешниҳодшудаи таҳқиқот

Мувофиқи натиҷаҳои муҳаққиқон, моделро метавон бо занҷири эҳтимолии зерин шарҳ дод:

\[ \mathrm{Der\ p\ 38+c\!-\!di\!-\!GMP} \rightarrow \mathrm{Doğuştan\ bağışıklık\ aktivasyonu} \]

\[ \mathrm{Doğuştan\ bağışıklık\ aktivasyonu} \rightarrow \mathrm{IFN\!-\!\gamma+IL\!-\!17A\ artışı} \]

\[ \mathrm{IFN\!-\!\gamma+IL\!-\!17A} \rightarrow \mathrm{Nötrofilik\ inflamasyon} \]

\[ \mathrm{Nötrofilik\ Th1/Th17\ yanıt} \rightarrow \mathrm{Deksametazona\ düşük\ yanıt} \]

Ин занҷир гипотезаест, ки барои шарҳи натиҷаҳои таҳқиқот пешниҳод шудааст. Дар таҳқиқот ба ретсептори ҳуҷайравии c-di-GMP, роҳи сигналии IFN-γ, ретсептори IL-17A ё ретсептори глюкокортикоидӣ дахолати сабабӣ анҷом дода нашудааст.

Фарқ аз дигар моделҳои астмаи ба стероид тобовар

Дар таҳқиқот бо баъзе моделҳои қаблан истифодашуда муқоиса карда шудааст:

• Модели овалбумин ва липополисахарид метавонад муқовимати стероидии марбут ба нейтрофилҳо ва Th17-ро ба вуҷуд оварад.
• Модели фулуси чанги хонагӣ ва poly(I:C) метавонад посухи омехтаи Th1/Th17 ба вуҷуд оварад.
• Моделҳои фулуси чанги хонагӣ ва c-di-GMP метавонанд илтиҳоби нейтрофилӣ ва ҳассосияти паст ба стероид ба вуҷуд оваранд.
• Роҳҳое ба монанди IL-27 ва инфламмасомаи NLRP3 метавонанд механизмҳои гуногуни муқовимат ба стероидро модел кунанд.

Ҷиҳати фарқкунандаи модели Der p 38+c-di-GMP истифодаи аллергени муайяни фулуси чанги хонагӣ ва ба вуҷуд овардани посухи антителагии қавии хоси аллерген ва ба стероид тобовар дар баробари илтиҳоби нейтрофилӣ мебошад.

Муҳаққиқон ин системаро ҳамчун модели иловагӣ арзёбӣ мекунанд, ки дар он гузариш аз астмаи гранулоситии омехта ба астмаи вазнини нейтрофилӣ омӯхта мешавад.

Ҷиҳатҳои қавии таҳқиқот

• Ба ҷойи иқтибоси пурраи фулуси чанги хонагӣ аллергени муайяни рекомбинантии Der p 38 истифода шудааст.
• Ҳассосият ба стероид дар модел мустақиман бо истифодаи дексаметазон санҷида шудааст.
• Илтиҳоби роҳҳои ҳавоӣ ҳам бо шумориши ҳуҷайраҳои BALF ва ҳам бо гистологияи шуш арзёбӣ шудааст.
• Тақсимоти эозинофилҳо ва нейтрофилҳо алоҳида омӯхта шудааст.
• Тавлиди луоб бо рангкунии PAS чен карда шуда, арзёбӣ ба таври кӯр анҷом дода шудааст.
• Антителаҳои умумӣ ва антителаҳои хоси Der p 38 алоҳида таҳлил шудаанд.
• Меҳварҳои ситокинии Th1, Th2, Th17 ва танзимкунанда якҷо чен карда шудаанд.
• Муқовимат ба стероид дар сатҳи ҳуҷайравӣ, гистологӣ, ситокинӣ ва антителагӣ нишон дода шудааст.
• Маълумот барои панҷ муш дар ҳар гурӯҳ ҳамчун миёна ва инҳирофи стандартӣ пешниҳод шудааст.

Маҳдудиятҳои таҳқиқот

Preprint будан: Таҳқиқот аз арзёбии мустақили илмии ҳамтоён нагузаштааст.

Модели ҳайвонот: Илтиҳоби ба вуҷуд овардашуда дар мушҳо тамоми гуногунии генетикӣ, муҳитӣ ва клиникии астмаи вазнини инсонро ифода намекунад.

Ҳаҷми хурди намуна: Графикҳои асосӣ ба панҷ муш дар ҳар гурӯҳ асос меёбанд. Ҳаҷми хурд ҳассосиятро ба фарқиятҳои инфиродӣ ва қиматҳои канорӣ зиёд мекунад.

Танҳо мушҳои мода: Маълум нест, ки дар ҳайвоноти нар ҳамон посухи иммунӣ ва стероидӣ ба вуҷуд меояд ё не.

Гиперреактивии роҳҳои ҳавоӣ чен нашудааст: Азбаски посух ба метахолин ва механикаи шуш арзёбӣ нашудаанд, ҷузъи физиологии астма тасдиқ нашудааст.

Протоколҳо якхела нестанд: Моделҳои Der p 38 ва Der p 38+c-di-GMP роҳҳои гуногуни ҳассоскунӣ, барномаҳои воя ва ҷадвалҳои вақт доранд. Фарқиятҳоро танҳо ба c-di-GMP нисбат додан мумкин нест.

Назорати c-di-GMP танҳо вуҷуд надорад: Илтиҳобе, ки c-di-GMP бидуни аллерген ба вуҷуд меорад, дар гурӯҳи алоҳида арзёбӣ нашудааст.

Як кортикостероид ва як воя: Танҳо 3 mg/kg дексаметазон истифода шудааст. Глюкокортикоидҳо ё вояҳои дигар санҷида нашудаанд.

Муқовимати молекулавии стероид чен нашудааст: Ифодаи ретсептори глюкокортикоидӣ, интиқоли он ба ядро, фаъолияти HDAC2 ё генҳои посух ба стероид омӯхта нашудаанд.

Ҳуҷайраҳои Th мустақиман ҳисоб нашудаанд: Тафсири Th1 ва Th17 ба ченкуниҳои IFN-γ ва IL-17A асос меёбад. Ҳуҷайраҳои тавлидкунандаи ситокинҳо муайян нашудаанд.

Фаъолияти нейтрофилҳо омӯхта нашудааст: Фаъолшавии нейтрофилҳо, давомнокии ҳаёт, ташаккули домҳои берунҳуҷайравӣ ё механизмҳои осеби бофта чен карда нашудаанд.

Пайгирии дарозмуддат вуҷуд надорад: Тағйироти музмини роҳҳои ҳавоӣ, тағйироти доимии луоб ё муқовимати дарозмуддати стероид арзёбӣ нашудаанд.

Нақши сабабии антителаҳо номаълум аст: Санҷида нашудааст, ки IgG1 ва IgG2c-и афзуда илтиҳобро нигоҳ медоранд ё не.

Тасдиқи инсонӣ вуҷуд надорад: Бо профилҳои нейтрофил, ситокин ё антителаи беморони астмаи вазнин, ки ба Der p 38 ҳассосанд, муқоисаи мустақим анҷом дода нашудааст.

Таҳқиқот чӣ мегӯяд ва чӣ намегӯяд?

Аҳамият аз нигоҳи гузашта, имрӯз ва оянда

Аз нигоҳи гузашта: Моделҳои анъанавии астмаи аллергӣ асосан посухҳои эозинофилӣ ва ба стероид ҳассосро тақлид мекарданд. Ин таҳқиқот кӯшиш мекунад, ки аз аллергени муайяни фулуси чанги хонагӣ сар карда, модели мураккабтар ва дорои бартарии нейтрофилҳоро ба вуҷуд орад.

Аз нигоҳи имрӯз: Модел метавонад имкон диҳад, ки муқовимат ба стероид на танҳо дар сатҳи ҷамъшавии ҳуҷайраҳои шуш, балки дар сатҳи тавлиди луоб, ситокинҳои Th1/Th17 ва посухи антителагии хоси аллерген омӯхта шавад.

Аз нигоҳи оянда: Модел метавонад барои таҳқиқоти зерин истифода шавад:

• Санҷиши табобатҳои масдудкунандаи IFN-γ ё IL-17A,
• Пайгирии мустақими ҳуҷайраҳои Th17,
• Ҳадафгирии роҳҳои муҳоҷирати нейтрофилҳо,
• Омӯзиши фаъолияти ретсептори глюкокортикоидӣ,
• Муайян кардани сенсорҳои иммунии c-di-GMP,
• Санҷиши таъсири сабабии антителаҳои хоси Der p 38 ба беморӣ,
• Арзёбии доруҳои нави биологӣ ё молекулаҳои хурд,
• Илова кардани функсияи шуш ва гиперреактивии роҳҳои ҳавоӣ,
• Муқоисаи ҳайвоноти нар ва мода,
• Тасдиқи молекулавӣ бо намунаҳои астмаи вазнини инсон.

Маъно барои зиндагии рӯзмарра ва табобати клиникӣ

Таҳқиқот нишон медиҳад, ки астмаи вазнине, ки ба табобати кортикостероидӣ ба қадри кофӣ посух намедиҳад, танҳо маънои “аллергияи бештар”-ро надорад. Дар баъзе шаклҳои беморӣ ҳуҷайраҳо, ситокинҳо ва намунаҳои антителагии бартаридошта метавонанд аз астмаи классикии эозинофилӣ фарқ кунанд.

Ин фарқият метавонад барои фаҳмидани он кӯмак кунад, ки чаро як дору дар ҳамаи беморон натиҷаи якхела намедиҳад. Табобати кортикостероидӣ, ки дар илтиҳоби дорои бартарии Th2-эозинофил муассир аст, метавонад дар муҳити иммуние, ки IFN-γ, IL-17A ва нейтрофилҳо бартарӣ доранд, маҳдудтар бошад.

Аммо таҳқиқоти мавҷуда табобати навро дар инсонҳо пешниҳод намекунад. Санҷиши Der p 38, истифодаи c-di-GMP ё антителаҳои ченшуда воситаҳои ташхиси клиникӣ нестанд. Таҳқиқот танҳо моделеро пешниҳод мекунад, ки метавонад барои санҷидани номзадҳои нави табобатӣ дар таҷрибаҳои назоратшавандаи ҳайвонот кӯмак кунад.

Усул ва натиҷаҳои таҳқиқот

Хулосаи техникии тарҳи таҳқиқот

Муқоисаи биологии гурӯҳҳои таҷрибавӣ

Нишондиҳандаҳои иммунии ченшуда

Тафсири техникии Шакли 1

Дар Шакли 1 ду протоколи гуногуни ҳассоскунӣ ва ангезиш якҷо бо натиҷаҳои ҳуҷайраҳои BALF ва гистологияи шуш нишон дода шудаанд.

• Der p 38 ҳуҷайраҳои умумии BALF-ро зиёд карда, ҳам эозинофилҳо ва ҳам нейтрофилҳоро баланд кардааст.
• Дексаметазон афзоиши ҳуҷайраҳоро дар гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас фурӯ нишонд.
• Дар гурӯҳи Der p 38+c-di-GMP посухи ҳуҷайравӣ ба сӯи бартарии нейтрофилҳо гузашт.
• Дар гурӯҳи комбинавӣ дексаметазон ҳуҷайраҳои умумӣ ва нейтрофилҳоро ба қадри кофӣ коҳиш надод.
• Дар тасвирҳои H&E гурӯҳи комбинавӣ инфилтратсияи равшан дар атрофи роҳҳои ҳавоӣ ва рагҳоро нишон дод.
• Дар тасвирҳои PAS дар ҳар ду гурӯҳи аллергенӣ афзоиши луоб мавҷуд буд.
• Дексаметазон минтақаи PAS-мусбатро дар гурӯҳи Der p 38 коҳиш дод, вале дар гурӯҳи комбинавӣ таъсирбахш набуд.

Тафсири техникии Шаклҳои 2 ва 3

Дар графикҳои антителаҳои умумӣ IgE, IgG1 ва IgG2c дар ҳар ду модел зиёд шуданд. Дексаметазон посухи антителагиро дар гурӯҳи Der p 38 коҳиш дод, аммо сатҳҳои баланд дар гурӯҳи комбинавӣ нигоҳ дошта шуданд.

Дар графикҳои антителаҳои хоси Der p 38:

• IgE-и хос дар ҳар ду гурӯҳи аллергенӣ афзоиш ёфт.
• IgG1-и хос дар гурӯҳи комбинавӣ нисбат ба гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас баландтар буд.
• IgG2c-и хос дар гурӯҳи комбинавӣ ба таври равшан тақвият ёфт.
• Дексаметазон антителаҳои хосро дар гурӯҳи Der p 38 коҳиш дод, вале дар гурӯҳи комбинавӣ коҳиш надод.

Тафсири техникии Шаклҳои 4 ва 5

Ситокинҳои Th2 — IL-4, IL-5 ва IL-13 — дар гурӯҳи Der p 38 афзоиш ёфта, бо дексаметазон фурӯ нишонда шуданд. Дар гурӯҳи комбинавӣ афзоиши пурқуввати Th2 мушоҳида нашуд.

Натиҷаҳои IFN-γ ва IL-17A самти баръакс нишон доданд:

• Ҳар ду ситокин дар гурӯҳҳои бо аллерген табобатшуда афзоиш ёфтанд.
• IFN-γ дар гурӯҳи комбинавӣ нисбат ба гурӯҳи Der p 38 ба таври назаррас баландтар буд.
• Дексаметазон сатҳҳои IFN-γ ва IL-17A-ро дар гурӯҳи Der p 38 коҳиш дод.
• Дар гурӯҳи комбинавӣ ҳар ду ситокин сарфи назар аз табобати стероид баланд боқӣ монданд.
• Барои IL-10 байни гурӯҳҳо фарқи назаррас нишон дода нашуд.

Таҳлили оморӣ

• Маълумот ҳамчун миёна ± инҳирофи стандартӣ гузориш дода шудааст.
• Барои муқоисаи ду гурӯҳи мустақил Student t-test-и ҷуфтнашуда истифода шудааст.
• Барои муқоисаи зиёда аз ду гурӯҳ one-way ANOVA истифода шудааст.
• Муқоисаҳои сершумор бо Tukey post hoc test анҷом дода шуданд.
• Ҳадди аҳамияти оморӣ P < 0,05 муайян карда шуд.
• Таҳлилҳо бо SPSS 10.0 анҷом дода шуданд.

Натиҷаи техникӣ

Дар шароити таҷрибавии таҳқиқот Der p 38 танҳо илтиҳоби гранулоситии омехтаеро ба вуҷуд овард, ки бо стероид фурӯ нишонда мешуд. Истифодаи Der p 38 дар протоколи дорои c-di-GMP бошад, фенотипи иммуниеро ба вуҷуд овард, ки бартарии нейтрофилҳо, баландшавии IFN-γ ва IL-17A ва фурӯнишонии нокифоя бо дексаметазонро нишон медод.

Хулосаи асосии модел чунин аст:

\[ \mathrm{Der\ p\ 38} \rightarrow \mathrm{Eozinofil+nötrofil+Th2/Th1/Th17} \rightarrow \mathrm{Steroid\ duyarlı} \]

\[ \mathrm{Der\ p\ 38+c\!-\!di\!-\!GMP} \rightarrow \mathrm{Nötrofil+IFN\!-\!\gamma+IL\!-\!17A+güçlü\ antikor\ yanıtı} \rightarrow \mathrm{Steroid\ dirençli} \]

Ин натиҷа дастгирӣ мекунад, ки платформаи пешклиникӣ барои омӯзиши механизмҳои иммунии астмаи вазнини нейтрофилӣ ва номзадҳои нави табобатӣ таҳия шудааст. Аммо хусусиятҳои физиологии астма ва мувофиқати модел бо бемории инсон бояд дар таҳқиқоти иловагӣ тасдиқ карда шаванд.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Ин мундариҷа ба таҳқиқоти “A Novel Murine Model of Steroid-Resistant Neutrophilic Asthma Induced by Dermatophagoides pteronyssinus Allergen 38”, ки аз ҷониби Min Hwa Hong, Yujin Hong, In Sik Kim ва Ji-Sook Lee таҳия шудааст, асос ёфтааст.

Манбаъ як мақолаи таҳқиқотии preprint мебошад, ки дар SSRN ҷойгир аст. Дар матн ба таври возеҳ ибораи “This preprint research paper has not been peer reviewed” мавҷуд аст. Аз ин рӯ, таҳқиқот аз арзёбии мустақили илмии ҳамтоён нагузаштааст. Дар матн қабули маҷалла ё DOI-и мақола тасдиқ карда намешавад.

Ин таҳқиқот озмоиши клиникӣ дар инсонҳо нест. Он таҳқиқоти пешклиникӣ, in vivo ва таҳияи модели беморӣ мебошад, ки дар мушҳои модаи C57BL/6-и шашҳафтаина анҷом дода шудааст. Натиҷаҳо далели самаранокии табобат, механизми беморӣ ё муқовимати клиникии кортикостероидҳо дар инсонҳо нестанд.

Дар таҳқиқот ҳамаи хусусиятҳои астмаи вазнин арзёбӣ нашудаанд. Гиперреактивии роҳҳои ҳавоӣ, муқовимати шуш, қобилияти нафаскашӣ, тағйироти дарозмуддати роҳҳои ҳавоӣ ва ченкуниҳои клиникии аломатҳо мавҷуд нестанд.

Азбаски дар моделҳои Der p 38 ва Der p 38+c-di-GMP протоколҳои гуногуни ҳассоскунӣ ва ангезиш истифода шудаанд, ҳамаи фарқиятҳои мушоҳидашударо танҳо ба c-di-GMP нисбат додан мумкин нест. Илова бар ин, гурӯҳи назоратие, ки c-di-GMP-ро танҳо гирифта бошад, гузориш нашудааст.

Муқовимат ба дексаметазон бо як воя ва як барномаи татбиқ арзёбӣ шудааст. Таҳқиқот нишон намедиҳад, ки ҳамаи кортикостероидҳо, вояҳои баландтар ё давомнокии дигари табобат бетаъсиранд.

Баландшавии IFN-γ ва IL-17A бо муқовимат ба стероид алоқаманд карда шудааст; аммо таҷрибаҳои сабабие, ки ин ситокинҳоро масдуд мекунанд, анҷом дода нашудаанд. Ҳуҷайраҳои Th1 ва Th17 мустақиман ҳисоб нашудаанд ва манбаи ҳуҷайравии ситокинҳо муайян нашудааст.

Гуфта шудааст, ки таҷрибаҳои ҳайвонот аз ҷониби Institutional Animal Care and Use Committee-и Донишгоҳи Eulji бо рақами EUIACUC23-05 тасдиқ шудаанд. Ҳамчунин гуфта шудааст, ки таҳқиқот соли 2026 аз ҷониби Донишгоҳи Wonkwang дастгирӣ шуда, муаллифон бархӯрди манфиатҳо эълон накардаанд.

Ин мақола танҳо дар асоси протоколҳои таҷрибавӣ, шаклҳо, тасвирҳои гистологӣ, натиҷаҳои ELISA, арзёбиҳои оморӣ, маҳдудиятҳо ва тафсирҳои муаллифон дар preprint-и боршуда омода шудааст. Даъвоҳои клиникӣ, механизми қатъии беморӣ, санҷиши ташхисӣ ё муваффақияти табобат, ки дар PDF вуҷуд надоранд, илова нашудаанд.