
Паклитаксел, клетканын бөлүнүшүni таасирleyen жана рак дарылоосуnde колдонулган таксан классы бир bileşiktir. Баккатин III ise Паклитакселin жарым синтетикалык üretiminde kullanılabilen негизги таксан iskeletlerinden жана öncüllerinden biridir. бул bileşikler tarihsel катары айрыкча Taxus türleriyle ilişkilendirilmiş olsa da изилдөө, Паклитаксел жана Баккатин III’ün fındığın айырмалуу dokularında da bulunabileceği yönündeki araştırmaları негизги almaktadır.
Mohammad Sina жана изилдөө arkadaşları, beş İran фундук çeşidinin жалбырак, жашыл сырткы кабык, катуу кабык, чийки данек жана куурулган данек үлгүlerinde Паклитаксел менен Баккатин III деңгээлlerini incelemiştir. Araştırılan сорттор Segoush, Eshkevar, Nakhoni, Paraki жана Shirvani’dir. Böylece beş сорт менен beş айырмалуу matrisin birleşiminden oluşan 25 сорт-матрица örneği бааланган.
İç фундукların kavrulması 150°C’de бир саат süreyle gerçekleştirilmiştir. изилдөөnın маанилүү amaçlarından biri, куурууnın Паклитаксел жана Баккатин III’ün өлчөнүүчү өлчөмlarını değiştirip değiştirmediğini belirlemektir.
Analiz мурун өсүмдүк жана фундук matrisi ультраүн колдогон бир алдын ала экстракцияdan geçirilmiş, белокler жана polisakkaritler Carrez çözeltileriyle çöktürülmüş, ardından дисперсивдүү суюктук-суюктук микроэкстракция, yani DLLME uygulanmıştır. DLLME aşamasında etanol таратуучу эриткич, 1-oktanol ise экстракция эриткичи катары колдонулган.
борбордук композиттик дизайн жана жооп бетинин ыкмасыyle belirlenen DLLME koşulları 600 µL etanol, 60 µL 1-oktanol, 1 g NaCl жана pH 6,5 катары билдирилген. дагы жогорку etanol жана 1-oktanol hacimlerinde seyreltme таасирsinin, 1 gramın üzerindeki tuz өлчөмında ise aşırı doygunluk koşullarının ekstraksiyon yanıtını azalttığı ifade жасалган.
хроматографиялык analiz Agilent 1260 HPLC sistemi жана UV-Vis детекторüyle gerçekleştirilmiştir. Ayırmada 250 × 4,6 mm boyutlarında, 5 µm parçacıklı C18 kolon колдонулган. Mobil faz metanol жана deiyonize sudan 80:20 hacim/hacim катышında hazırlanmış; akış hızı 1,0 mL/dakika, algılama dalga boyu 230 nm катары аныкталган.
ыкма bölümüne ылайык Баккатин III болжол менен 3,0 dakikada, Паклитаксел ise болжол менен 4,5 dakikada elüe olmuştur. кошулма kimlikleri үлгү piklerinin sertifikalı standartların alıkonma zamanlarıyla karşılaştırılması yoluyla аныкталган.
изилдөөnın эң belirgin генel табылгаsu, Паклитаксел жана айрыкча Баккатин III’ün эң жогорку деңгээлlerinin фундук жалбыракlarında ölçülmesidir. Паклитаксел жалбырак үлгүlerinde 4,54–17,56 µg/g kuru салмак aralığında, Баккатин III ise Tablo 2’de 6.851,67–8.660 µg/g kuru салмак aralığında билдирилген.
Баккатин III үчүн маалыматlen жалбырак değerleri miligram cinsine çevrildiğinde болжол менен 6,85–8,66 mg/g kuru ağırlığa каршы gelmektedir:
\[ 1000\ \mu\mathrm{g/g} = 1\ \mathrm{mg/g} \]
ушул себептен Баккатин III’ün жалбыракlarda ölçülen деңгээлleri, Паклитаксел деңгээлlerinden yüzlerce kat дагы жогоркуtir. бирок бул жогорку натыйжаların гана HPLC-UV кармалуу убактысы eşleştirmesine dayanması, bağımsız жана yapısal катары дагы seçici бир ыкмаle doğrulanmalarını айрыкча маанилүү hâle getirmektedir.
Паклитаксел bakımından жалбыракlarda эң жогорку баа Segoush çeşidinde 17,56 ± 0,92 µg/g, эң төмөн баа Eshkevar çeşidinde 4,54 ± 0,24 µg/g катары билдирилген.
Баккатин III жалбырак натыйжаlarında metin менен tablo арасында бир raporlama farklılığı bulunmaktadır. натыйжа metni эң жогорку değeri Segoush үчүн 8.515,32 ± 408,7 µg/g катары tanımlarken Tablo 2 жана ısı haritasında Paraki çeşidi 8.660 ± 415,6 µg/g менен sayısal катары дагы жогоркуtir. Metinde Shirvani үчүн 6.921,07 µg/g yazılırken tabloda 6.851,67 µg/g берилген.
жашыл сырткы кабыкta Паклитакселin эң жогорку деңгээлi Shirvani çeşidinde 5,70 ± 0,28 µg/g, Баккатин III’ün эң жогорку деңгээлi yine Shirvani’de 6.662,37 ± 355,1 µg/g катары ölçülmüştür.
катуу кабыкta эң жогорку Паклитаксел değeri Shirvani çeşidinde 5,30 ± 0,29 µg/g, эң жогорку Баккатин III değeri yine Shirvani çeşidinde болжол менен 1.000,67 µg/g катары билдирилген.
чийки данек фундукta Паклитаксел деңгээлi Segoush çeşidinde 4,15 ± 0,17 µg/g менен эң жогорку değere ulaşmıştır. Paraki жана Eshkevar çeşitlerinde ise sırasıyla болжол менен 0,05 жана 0,04 µg/g деңгээлinde көп төмөн değerler ölçülmüştür.
чийки данек фундукta Баккатин III гана Segoush çeşidinde belirgin деңгээлde, 43,72 ± 1,56 µg/g катары saptanmıştır. Diğer dört çeşitte натыйжаlar ыкмаin аныктоо чегиnın астында kalmıştır. İstatistiksel analiz amacıyla бул saptanmayan натыйжаların yarı LOD değeri болгон 0,004 µg/g менен temsil edildiği түшүндүрүлгөн.
куурулган данек фундукta Паклитакселin эң жогорку деңгээлi Paraki çeşidinde 4,81 ± 0,23 µg/g, Баккатин III’ün эң жогорку деңгээлi ise Shirvani çeşidinde 67,22 ± 3,06 µg/g катары билдирилген.
изилдөөnın özeti жана натыйжа bölümü, куурулган данекlerde чийки данекlere ылайык дагы жогорку Паклитаксел жана Баккатин III өлчөмları bulunduğunu vurgulamaktadır. бирок сорт bazında incelendiğinde өсүү бардык үлгүlerde ошол эле yönde эмес.
Паклитаксел Segoush çeşidinde 4,15’ten 1,05 µg/g’a, Nakhoni çeşidinde 2,75’ten 2,46 µg/g’a төмөндөгөн. Eshkevar, Paraki жана Shirvani çeşitlerinde ise арткан. Баккатин III, чийки данекte saptanamadığı dört çeşitte кууруу кийин өлчөнүүчү hâle gelmiş; fakat Segoush çeşidinde 43,72’den болжол менен 23,90 µg/g’a төмөндөгөн.
ошондуктан маалыматler, куурууnın өлчөнүүчү таксан деңгээлlerini birçok çeşitte artırabildiğini fakat таасирnin bileşiğe жана фундук çeşidine байланыштуу болорун көрсөтөт. “кууруу бардык çeşitlerde таксан өлчөмını artırır” biçiminde evrensel бир натыйжа маалыматler тарабынан desteklenmemektedir.
изилдөөчүлөр кууруу кийин görülen artışı жаңы Паклитаксел sentezinin так kanıtı катары değerlendirmemiştir. Önerilen ачыкlamalar арасында клетка duvarlarının bozulması, байланыштуу veya erişilemeyen таксанların serbestleşmesi, çözücünün matrise дагы kolay girmesi, ekstraksiyon маалыматminin artması жана таксанları değiştiren endojen enzimlerin ısıyla таасирsizleşmesi bulunmaktadır.
Баккатин III artışının бир bölümünün Паклитакселin yan zincir kaybı veya байланыштуу öncüllerin serbestleşmesiyle ilişkili olabileceği de tartışılmıştır. бирок изилдөөda кууруу öncesi жана sonrası химиялык dönüşüm ürünleri izlenmemiş, kütle dengesi kurulmamış жана Паклитакселin Баккатин III’e dönüştüğü түздөн-түз көрсөтүлгөн эмес.
Geliştirilen ыкма үчүн Паклитаксел кайтарып алууları yüzde 92,05–99,42, Баккатин III кайтарып алууları yüzde 92,59–98,53 aralığında билдирилген. салыштырмалуу стандарттык четтөө değerleri Паклитаксел үчүн yüzde 4,11–5,50, Баккатин III үчүн yüzde 3,59–5,33 aralığındadır.
Паклитаксел үчүн аныктоо чеги 1,86–2,17 ng/g, сандык аныктоо чеги 6,13–7,16 ng/g; Баккатин III үчүн аныктоо чеги 2,11–2,35 ng/g, сандык аныктоо чеги 6,96–7,75 ng/g катары берилген.
муну менен бирге doğrusal aralık konusunda изилдөө ичинде маанилүү farklılıklar бар. ыкма жана validasyon metni 1–1000 ng/g aralığını bildirirken Tablo 1’de 1–500.000 ng/g, karşılaştırma tablosunda ise 10–200.000 ng/g aralıkları yer almaktadır. ушул себептен ыкмаin doğrulanmış так изилдөө aralığı PDF’den tek жана tutarlı бир баа катары çıkarılamamaktadır.
Ayrıca Şekil 3’ün ачыкlaması birinci piki Паклитаксел, ikinci piki Баккатин III катары adlandırmaktadır. Buna каршы ыкма bölümünde 3,0 dakikadaki алгачкы pik Баккатин III’e, 4,5 dakikadaki ikinci pik Паклитакселe atanmıştır. бул ters etiketleme de kromatogram yorumunda ачыкlığa kavuşturulması gereken бир raporlama sorunudur.
изилдөө, fındığın veya куурулган fındığın yenmesinin kanseri önlediğini ya da tedavi ettiğini göstermemektedir. таксанların gıdadan emilimi, insan vücudundaki biyoyararlanımı, метаболизмsı, güvenliği, таасирli dozu veya klinik sonucu incelenmemiştir. Ölçülen bitkisel кошулма деңгээлleri, tıbbi Паклитаксел tedavisiyle eşdeğer kabul edilemez.
изилдөөnın негизги bilimsel problemi
Паклитаксел karmaşık молекулаer yapıya sahip бир таксанdır. изилдөөnın girişinde, doğal kaynağından elde edilmesinin жана karmaşık sentez süreçlerinin alternatif bitkisel булакlara yönelik araştırmaları teşvik ettiği belirtilmektedir.
фундук ağacının жалбырак, dış kabuk жана катуу кабык сыяктуу yenmeyen bölümlerinde таксанların bulunabileceği дагы мурун билдирилген. Buna каршы айырмалуу фундук çeşitlerinin жана dokularının ошол эле analitik ыкмаle karşılaştırılması, айрыкча de куурууnın iç фундукtaki Паклитаксел жана Баккатин III sinyalini кантип değiştirdiğinin araştırılması sınırlı kalmıştır.
изилдөө üç ana soruyu ele almaktadır:
- Паклитаксел жана Баккатин III fındığın кайсы dokularında дагы жогорку деңгээлde bulunmaktadır?
- Beş фундук çeşidi арасында таксан dağılımı değişmekte midir?
- 150°C’de бир saatlik кууруу, iç фундукta ölçülebilen Паклитаксел жана Баккатин III өлчөмlarını кантип таасирlemektedir?
Araştırmanın analitik tarafındaki ikinci problem ise yağ, белок, karbonhidrat жана başka өсүмдүк bileşenleri içeren karmaşık фундук matrisinden төмөн деңгээлdeki таксанların kısa sürede ayrılmasıdır.
Паклитаксел жана Баккатин III арасындаki ilişki
изилдөөda Паклитаксел түздөн-түз рак дарылоосуnde колдонулган бир таксан катары, Баккатин III ise Паклитакселin üretiminde yararlanılabilen бир прекурсор түзүлүш катары ele alınmaktadır.
Баккатин III, Паклитакселin бардык молекулаer yapısı эмес. Паклитакселin ayırt edici yan zincirlerinden bazılarını taşımayan негизги таксан çekirdeğidir. ушул себептен бир үлгүte жогорку Баккатин III bulunması, ошол эле өлчөмda Паклитаксел bulunduğu anlamına gelmez.
изилдөөda Баккатин III өлчөмlarının birçok matriste Паклитакселden көп дагы жогорку olması, фундук dokularının hazır Паклитакселden көп таксан öncülü veya ilişkili таксан iskeleti bakımından zengin olabileceğini düşündürmektedir. бирок biyosentetik akış veya dönüşüm hızı эксперименталдык түрдө өлчөнгөн эмес.
кайсы фундук çeşitleri жана dokuları incelendi?
үлгүler İran’ın Gilan bölgesindeki Roudsar kırsal alanlarından toplanmıştır. Beş фундук çeşidi şunlardır:
- Segoush,
- Eshkevar,
- Nakhoni,
- Paraki,
- Shirvani.
Her çeşitte beş матрица бааланган:
- жалбырак,
- жашыл сырткы кабык veya zuruf,
- Sert kahverengi kabuk,
- чийки данек фундук,
- куурулган данек фундук.
Böylece 25 сорт-матрица kombinasyonu oluşturulmuştur. PDF’de her çeşidin kaç айырмалуу ağaçtan, bahçeden veya bağımsız biyolojik үлгүten toplandığı ачык biçimde маалыматlmemektedir. Buna каршы her hazırlanmış örneğin üç kez cihaza enjekte edildiği belirtilmiştir.
Üçlü enjeksiyonlar cihaz жана analiz tekrarlanabilirliğini değerlendiren teknik tekrarlar sağlar. бирок bağımsız ağaç veya hasat үлгүleriyle ошол эле şey эмес. Bağımsız биологиялык кайталоо sayısının ачыкlanmaması, сорттор арасындаki doğal biyolojik değişkenliğin ne ölçüde temsil edildiğini belirsiz bırakmaktadır.
үлгүlerin kurutulması жана hazırlanması
жалбыракlar жана dış kabuklar oda sıcaklığında бир hafta kurutulmuştur. жалбыракlar öğütüldükten кийин 70 mesh, dış kabuklar ise 25 mesh elekten geçirilmiştir.
бардык фундукlar бир hafta oda sıcaklığında кургатылган, kalan nemi azaltmak үчүн ek катары 24 саат түздөн-түз güneş ışığına bırakılmıştır. чийки данекler ayrıldıktan кийин öğütülmüş, 25 mesh elekten geçirilmiş жана sonraki процессler үчүн 4°C’de saklanmıştır.
Güneşte kurutmanın таксан kararlılığı üzerindeki olası таасирsi ayrıca değerlendirilmemiştir. ушул себептен ölçülen өлчөмlar гана taze dokunun баштапкы деңгээлini эмес, kurutma жана depolama процессlerinden кийин kalan өлчөнүүчү деңгээлi temsil жасайт.
кууруу процессi кантип yapıldı?
Fırın 150°C’ye önceden ısıtılmış жана үлгүler бир саат boyunca куурулганtur. Isının eşit dağılması amacıyla үлгүlerin belirli aralıklarla karıştırıldığı belirtilmiştir.
кууруу кийин үлгүler oda sıcaklığına getirilmiş жана дагы кийин analiz жасалган. изилдөөda:
- İç ürün sıcaklığı,
- Nem kaybı,
- Su aktivitesi,
- Fırın içindeki температура dağılımı,
- кууруу sonunda түс veya kütle değişimi raporlanmamıştır.
ушул себептен 150°C жана бир саат nominal процесс koşullarıdır; her örneğin gerçekte ulaştığı iç температура veya termal doz bilinmemektedir.
алдын ала экстракция эмне үчүн matrislere ылайык değiştirildi?
фундук yaprağı, yeşil kabuk, катуу кабык жана iç фундук ошол эле химиялык yapıya sahip эмес. жалбырак lignoselülozik жана pigment açısından zengin olabilirken iç фундук жогорку yağ катышı taşıyan айырмалуу бир matrise sahiptir.
изилдөөчүлөр başlangıçtaki etanol өлчөмını her матрица үчүн tek değişkenli тажрыйбаlerle ayrı ayrı değerlendirmiştir. Her тажрыйбаde 0,5 g öğütülmüş үлгү kullanılmış; etanol hacmi 0 менен 4 mL арасында değiştirilmiştir.
| матрица | эң iyi баштапкы etanol hacmi | İlgili su hacmi |
|---|---|---|
| жалбырак | 3,0 mL | 7,0 mL |
| жашыл сырткы кабык | 1,0 mL | 9,0 mL |
| катуу кабык | 0,25 mL | 9,25 mL |
| чийки данек фундук | 0 mL | гана su |
| куурулган данек фундук | 0 mL | гана su |
бул натыйжаlar ошол эле экстракция эриткичиnün бардык matrislerde ошол эле маалыматmi sağlamadığını көрсөтөт. муну менен бирге генel mikroekstraksiyon protokolünde бардык үлгүlere 3 mL etanol eklendiği yazılmış, дагы sonraki натыйжа bölümünde ise matrislere özgü hacimlerin kullanıldığı belirtilmiştir. Uygulanan nihai protokolün yeniden üretilebilmesi үчүн бул iki ачыкlamanın uzlaştırılması gerekir.
ультраүн колдогон процесс
үлгү çözeltisi ultrasonik banyoda 40°C’de işlenmiştir. ыкма bölümünde ultrason süresi 30 dakika катары маалыматlmektedir. кууруу натыйжаlarının tartışıldığı bölümde ise “40°C’de 15 dakika” ifadesi колдонулган.
бул мөөнөт farklılığı ыкма aktarımı açısından маанилүүdir; çünkü ultrason süresi клетка parçalanmasını, ekstraksiyon маалыматmini жана olası кошулма değişimini таасирleyebilir.
Carrez çözeltileri эмне үчүн kullanıldı?
Ultrason процессinden жана алгачкы santrifüjden кийин üst sıvıya birer mililitre Carrez I жана Carrez II çözeltisi eklenmiştir. Amaç белок жана polisakkaritlerin çöktürülerek дагы temiz бир üst faz elde edilmesidir.
бирок çözelti hazırlama ачыкlamasında маанилүү бир belirsizlik бар. Carrez I үчүн potasyum heksasiyanoferrat kullanıldığı belirtilirken Carrez II үчүн de yine potasyum heksasiyanoferrat yazılmıştır. ошол эле malzeme bölümünde çinko asetat da satın alınan reaktifler арасында sayılmıştır.
ошондуктан Carrez II’nin gerçekten кайсы tuzla hazırlandığı PDF’den так катары belirlenememektedir. бул ayrıntı, белок çöktürme davranışı жана ыкмаin başka laboratuvarlarda tekrarlanması açısından ачыкlığa kavuşturulmalıdır.
DLLME ыкмаi кантип çalışıyor?
дисперсивдүү суюктук-суюктук микроэкстракцияda кичине hacimdeki экстракция эриткичи, үлгү çözeltisi ичинде таратуучу эриткич yardımıyla көп ince damlacıklar hâlinde yayılır. Damlacıkların toplam temas yüzeyi arttığı үчүн hedef bileşikler sulu үлгүten ekstraksiyon fazına hızlı biçimde geçebilir.
изилдөөda:
- таратуучу эриткич катары etanol,
- экстракция эриткичи катары 1-oktanol,
- Tuzlama таасирsi үчүн NaCl колдонулган.
Optimize edilmiş aşamada 600 µL etanol жана 60 µL 1-oktanol örneğe eklenmiş, karışım kuvvetli biçimde vortekslenmiş жана 9.000 rpm’de beş dakika santrifüj жасалган. Ayrılan 1-oktanol fazı HPLC sistemine берилген.
Tuzlama таасирsi
Örneğe 1 g NaCl eklenmesinin hedef bileşiklerin sulu fazdaki çözünürlüğünü azaltarak 1-oktanol fazına geçişini desteklediği kabul жасалган. бул генel mekanizma “salting-out” veya tuzla dışlama таасирsi катары adlandırılır.
изилдөөda 0–2 g NaCl aralığı değerlendirilmiş, эң iyi yanıtın 1 g деңгээлinde elde edildiği билдирилген. бир gramın üzerindeki өлчөмlarda aşırı doygunluk жана процесс performansında düşüş gözlenmiştir.
эмне үчүн 60 µL 1-oktanol kullanıldı?
экстракция эриткичиnün hacmi көп кичине olduğunda hedef bileşiklerin toplandığı faz дагы жогорку derişime ulaşabilir. Buna каршы hacim arttıkça ошол эле analit өлчөмı дагы чоң çözücü hacmine dağılarak seyrelebilir.
Araştırmada эң жогорку zenginleştirme yanıtı 60 µL 1-oktanol менен elde жасалган. дагы жогорку hacimlerde seyreltme таасирsinin baskın hâle geldiği ifade жасалган.
эмне үчүн 600 µL etanol seçildi?
Etanol, 1-oktanolün үлгү çözeltisi ичинде ince damlacıklar hâlinde dağılmasını sağlamaktadır. Etanol hacmi 600 µL’ye kadar yükseldiğinde үлгү менен ekstraksiyon fazı арасындаki temasın arttığı; дагы жогорку hacimlerde ise analitlerin çözeltide дагы fazla seyrelmesi себебинен yanıtın azaldığı билдирилген.
pH 6,5 seçiminin anlamı
Ekstraksiyon pH’sı 3–9 арасында değerlendirilmiş жана maksimum yanıt pH 6,5’te elde жасалган. изилдөө, дагы asidik veya дагы bazik koşullarda hedef analit yapılarının değişebileceğini жана ekstraksiyonun başarısız болорун ileri sürmektedir.
муну менен бирге asit veya baz koşullarında oluşan dönüşüm ürünleri ayrı катары analiz edilmemiştir. ошондуктан pH таасирsi, хроматографиялык yanıtın azalmasına dayalı operasyonel бир optimizasyon sonucudur.
борбордук композиттик дизайн жана жооп бетинин ыкмасы
DLLME’nin dört değişkeni beş деңгээлde бирге изилденген:
- Etanol hacmi: 300–1000 µL,
- 1-oktanol hacmi: 60–120 µL,
- pH: 3–9,
- NaCl өлчөмı: 0–2 g.
Toplam 30 тажрыйбаden oluşan борбордук композиттик дизайн колдонулган. Tek değişkenli optimizasyondan айырмалуу катары yanıt yüzeyi yaklaşımı değişkenlerin birbirleriyle таасирleşimlerini de değerlendirmektedir.
Kurulan ikinci dereceden model үчүн:
- F = 24,88,
- p < 0,0001,
- R² = 0,9587,
- Düzeltilmiş R² = 0,9202,
- Öngörülen R² = 0,8484,
- Yeterli такlik = 20,449 катары билдирилген.
Uyum eksikliği testi F = 0,53 жана p = 0,8135’tir. Anlamlı olmayan uyum eksikliği sonucu, modelin тажрыйбаsel маалыматlerde sistematik катары ачыкlayamadığı чоң бир түзүлүш bulunmadığı түрүндө yorumlanmıştır.
R² değerleri кантип okunmalı?
Belirleme katsayısı, modelin gözlenen yanıt değişiminin ne kadarını ачыкladığını gösterir:
\[ R^2 = 1 - \frac{\sum(y_i-\hat{y}_i)^2}{\sum(y_i-\bar{y})^2} \]
- \(y_i\), тажрыйбаde ölçülen yanıtı,
- \(\hat{y}_i\), modelin tahmin ettiği yanıtı,
- \(\bar{y}\), бардык тажрыйба yanıtlarının ortalamasını ifade eder.
R² = 0,9587, modelin тажрыйба yanıtındaki değişimin болжол менен yüzde 95,87’sini ачыкladığını көрсөтөт. Öngörülen R²’nin 0,8484’e düşmesi, жаңы koşulları tahmin etme performansının modelin mevcut маалыматye uyumundan дагы төмөн olmakla бирге hâlâ жогорку болорун düşündürmektedir.
Şekil 1 ne anlatıyor?
Şekil 1’in алгачкы panelinde model тарабынан tahmin edilen değerler менен gerçek тажрыйба натыйжаları салыштырылган. Noktaların diyagonal çizgi çevresinde kümelenmesi, tahminlerle gözlemler арасындаki uyumu көрсөтөт.
İkinci panel normalleştirilmiş artıkların olasılık grafiğidir. Noktaların чоң ölçüde doğrusal түзүлүш izlemesi, artıkların болжол менен normal dağıldığı yorumunu desteklemektedir.
Üçüncü panel Box-Cox dönüşüm grafiğidir. эң uygun lambda değeri 0,88; güven aralığı 0,65–1,05 катары берилген. Lambda = 1 güven aralığının ичинде kaldığı үчүн herhangi бир güç dönüşümüne ihtiyaç olmadığı sonucuna varılmıştır.
Alt sıradaki üç boyutlu yanıt yüzeyleri:
- NaCl менен etanol hacmi,
- pH менен etanol hacmi,
- NaCl менен 1-oktanol hacmi арасындаki таасирleşimleri көрсөтөт.
Yüzeylerde yanıtın 600 µL etanol, pH 6,5, 1 g NaCl жана 60 µL 1-oktanol çevresinde yükseldiği görülmektedir.
HPLC ayırma koşulları
| Parametre | изилдөөda bildirilen koşul |
|---|---|
| HPLC sistemi | Agilent 1260 serisi |
| Pompa | G1311C dörtlü pompa |
| Enjeksiyon | 20 µL manuel enjeksiyon döngüsü |
| детектор | G1314B UV-Vis детекторü |
| Kolon | VDSpher PUR C18-M-SE, 250 × 4,6 mm, 5 µm |
| Mobil faz | Metanol:deiyonize su, 80:20 hacim/hacim |
| Elüsyon | İzokratik |
| Akış hızı | 1,0 mL/dakika |
| Dalga boyu | 230 nm |
| Kolon sıcaklığı | Ortam sıcaklığı |
| Баккатин III alıkonma süresi | болжол менен 3,0 dakika |
| Паклитаксел alıkonma süresi | болжол менен 4,5 dakika |
Bileşiklerin kimliği ne kadar так doğrulandı?
Паклитаксел жана Баккатин III’ün tanımlanması, үлгү piklerinin sertifikalı standartlarla ошол эле кармалуу убактысыnda görülmesine dayanmaktadır. Ayrıca куурулган Eshkevar örneğine standart eklenerek piklerin yükselmesi gösterilmiştir.
бул yaklaşım analitik tanımlamayı destekler; бирок HPLC-UV кармалуу убактысы tek başına молекулаer yapıya özgü эмес. Karmaşık бир өсүмдүк veya gıda matrisinde benzer zamanda elüe болгон başka бир кошулма ошол эле dalga boyunda absorbans oluşturabilir.
изилдөөda:
- Kütle spektrometrisi,
- UV spektral saflık karşılaştırması,
- İkinci бир хроматографиялык kolon,
- айырмалуу mobil fazda doğrulama,
- Toplanan pikin NMR veya başka yapısal analizi kullanılmamıştır.
айрыкча жалбыракlarda bildirilen көп жогорку Баккатин III өлчөмlarının LC-MS/MS сыяктуу түзүлүш açısından дагы seçici бир ыкмаle bağımsız катары doğrulanması gerekir.
Kalibrasyon denklemleri
Kalibrasyonun негизги doğrusal modeli şöyledir:
[ y = mx + b ]
- \(y\), хроматографиялык pik alanını,
- \(x\), analit derişimini,
- \(m\), kalibrasyon eğiminin duyarlılığını,
- \(b\), y ekseni kesişimini ifade eder.
изилдөөda маалыматlen denklemler:
Паклитаксел:
\[ y = 18242x - 27{,}593 \]
\[ R^2 = 0{,}9997 \]
Баккатин III:
\[ y = 110{,}6x + 137{,}8 \]
\[ R^2 = 0{,}9991 \]
Her iki belirleme katsayısı da güçlü бир doğrusal ilişki көрсөтөт. бирок kalibrasyon aralığı metin жана tablolar арасында tutarlı эмес:
- ыкма жана validasyon metni: 1–1000 ng/g,
- Standart hazırlama bölümü: 1–10.000 ng/mL,
- Tablo 1: 1–500.000 ng/g,
- Tablo 3: 10–200.000 ng/g.
бул farklılıklar giderilmeden ыкмаin gerçekten кайсы aralıkta doğrulandığı так катары belirlenemez.
Algılama жана өлчөм tayin sınırları
изилдөөda аныктоо чеги, analit pikinin arka plan gürültüsünün üç katına; сандык аныктоо чеги ise on katına ulaşmasıyla tanımlanmıştır:
\[ S/N_{\mathrm{LOD}} = 3 \]
\[ S/N_{\mathrm{LOQ}} = 10 \]
Burada:
- \(S\), analit sinyalini,
- \(N\), хроматографиялык arka plan gürültüsünü ifade eder.
| Analit | LOD aralığı | LOQ aralığı |
|---|---|---|
| Паклитаксел | 1,86–2,17 ng/g | 6,13–7,16 ng/g |
| Баккатин III | 2,11–2,35 ng/g | 6,96–7,75 ng/g |
Tablo 3’ün karşılaştırma metninde ыкма үчүн “1 ng/mL LOD” ifadesi de kullanılmaktadır. бул баа, Tablo 1’deki ng/g cinsinden матрица özgü değerlerle ошол эле эмес жана birimlerin түздөн-түз karşılaştırılması mümkün эмес.
такlik: салыштырмалуу стандарттык четтөө
салыштырмалуу стандарттык четтөөnın негизги formülü şöyledir:
\[ \mathrm{RSD}(\%) = \frac{s}{\bar{x}} \times 100 \]
- \(s\), tekrar ölçümlerin standart sapmasını,
- \(\bar{x}\), ölçümlerin ortalamasını ifade eder.
Паклитаксел үчүн RSD değerleri yüzde 4,11–5,50; Баккатин III үчүн yüzde 3,59–5,33 aralığında табылган. бул натыйжаlar ыкмаin ошол эле koşullardaki tekrar ölçümlerinde болжол менен yüzde 3,6–5,5 деңгээлinde değişkenlik gösterdiğini belirtmektedir.
кайтарып алуу
кайтарып алуу, örneğe bilinen өлчөмda eklenen analitin ne kadarının бардык үлгү hazırlama жана analiz sürecinden кийин yeniden ölçülebildiğini gösterir. изилдөөnın mantığını ачыкlayan ilişki şöyledir:
\[ \mathrm{Geri\ kazanım}(\%) = \frac{C_{\mathrm{eklenmiş\ örnek}}-C_{\mathrm{başlangıç}}} {C_{\mathrm{eklenen}}} \times 100 \]
- \(C_{\mathrm{eklenmiş\ örnek}}\), standart eklenmiş үлгүte ölçülen toplam өлчөмı,
- \(C_{\mathrm{başlangıç}}\), örneğin doğal analit өлчөмını,
- \(C_{\mathrm{eklenen}}\), bilinen standart өлчөмını ifade eder.
| Analit | кайтарып алуу aralığı |
|---|---|
| Паклитаксел | %92,05–99,42 |
| Баккатин III | %92,59–98,53 |
эң төмөн Паклитаксел кайтарып алууı катуу кабыкta yüzde 92,05, эң жогорку баа жалбыракta yüzde 99,42 катары билдирилген. Баккатин III үчүн эң төмөн кайтарып алуу чийки данекte yüzde 92,59, эң жогорку кайтарып алуу катуу кабыкta yüzde 98,53’tür.
байытуу фактору
изилдөөda байытуу фактору, экстракция эриткичиndeki analit деңгээлinin баштапкы үлгү çözeltisine катышı катары түшүндүрүлгөн:
\[ EF = \frac{C_{\mathrm{ekstraksiyon\ fazı}}}{C_{\mathrm{örnek\ çözeltisi}}} \]
Паклитаксел үчүн 9,70–12,31; Баккатин III үчүн 10,30–12,82 aralığında EF değerleri билдирилген. EF бир катыш olduğundan normalde boyutsuzdur. натыйжа metninde Баккатин III değerlerinin sonuna yüzde işareti eklenirken Tablo 1 bunları катыш катары көрсөтөт.
MANOVA натыйжаları: матрица mi, сорт mi дагы маанилүү?
Паклитаксел жана Баккатин III бирге bağımlı değişkenler катары ele alındığında:
- сорт таасирsi: Pillai’s Trace = 1,325; F(8,50) = 12,26; p < 0,001; kısmi η² = 0,662,
- матрица таасирsi: Pillai’s Trace = 1,819; F(8,50) = 62,63; p < 0,001; kısmi η² = 0,909,
- сорт × матрица таасирleşimi: Pillai’s Trace = 1,785; F(32,50) = 12,99; p < 0,001; kısmi η² = 0,893 катары билдирилген.
Kısmi η² değerlerine ылайык эң güçlü таасир матрица türüdür. сорт менен матрица арасындаki таасирleşim de көп büyüktür. бул натыйжа, belirli бир çeşidin жогорку veya төмөн таксан içeriğinin dokudan bağımsız sabit бир özellik olmadığını көрсөтөт.
Başka бир ifadeyle Shirvani dış kabuk жана катуу кабыкta жогорку değerlere ulaşırken, чийки данекte Паклитаксел bakımından Segoush öne çıkmakta; куурулган данекte ise Paraki эң жогорку Паклитаксел değerini vermektedir.
Şekil 2: Isı haritalarının anlattığı бөлүштүрүү
Şekil 2’nin solundaki Паклитаксел ısı haritası, жалбыракların генel катары эң жогорку деңгээлlere sahip болорун көрсөтөт. муну менен бирге bazı сорт-матрица birleşimleri бул генel desenden ayrılmaktadır:
- Segoush yaprağı 17,56 µg/g менен эң жогорку Паклитаксел değeridir.
- Shirvani dış kabuğu 5,70 µg/g, sert kabuğu 5,30 µg/g менен ilgili matrislerde öne çıkmaktadır.
- Paraki куурулган данекi 4,81 µg/g менен куурулган үлгүlerin эң жогорку değeridir.
- Eshkevar жана Paraki чийки данекlerinde Паклитаксел көп төмөн деңгээлdedir.
Sağdaki Баккатин III ısı haritasında жалбыракlar болжол менен 6.852–8.660 µg/g aralığıyla diğer бардык matrislerden belirgin biçimde ayrılmaktadır. Dış kabuk ikinci, катуу кабык üçüncü деңгээл grubunu oluşturmaktadır. İç фундукlardaki değerler bunlara ылайык көп дагы төмөнtür.
Isı haritası, Баккатин III үчүн dokunun çeşitten дагы baskın belirleyici болгону yönündeki MANOVA sonucunu görsel катары desteklemektedir.
жалбырак натыйжаları
| сорт | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| Segoush | 17,56 ± 0,92 µg/g | 8.515,32 ± 408,7 µg/g |
| Eshkevar | 4,54 ± 0,24 µg/g | 8.298,33 ± 398,3 µg/g |
| Nakhoni | 9,36 ± 0,49 µg/g | 8.370,66 ± 401,7 µg/g |
| Paraki | 14,05 ± 0,74 µg/g | 8.660 ± 415,6 µg/g |
| Shirvani | 11,42 ± 0,60 µg/g | 6.851,67 ± 316 µg/g |
Паклитаксел үчүн varyanslar eşit bulunmadığından Welch ANOVA kullanılmış жана сорттор арасында güçlü farklılık аныкталган: Welch F = 902,79; p < 0,001.
Баккатин III үчүн Welch F = 0,39 жана p = 0,81 катары билдирилген. Sayısal ortalamalar айырмалуу olsa da жогорку grup içi değişkenlik себебинен сорттор арасында istatistiksel катары anlamlı fark bulunmamıştır.
жашыл сырткы кабык натыйжаları
| сорт | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| Segoush | 4,96 ± 0,24 µg/g | 1.536,44 ± 81,9 µg/g |
| Eshkevar | 0,36 ± 0,01 µg/g | 1.681,11 ± 89,6 µg/g |
| Nakhoni | 5,08 ± 0,25 µg/g | 4.236,87 ± 225,8 µg/g |
| Paraki | 0,96 ± 0,04 µg/g | 5.067,26 ± 270,08 µg/g |
| Shirvani | 5,70 ± 0,28 µg/g | 6.662,37 ± 355,1 µg/g |
Паклитаксел жана Баккатин III үчүн эң жогорку dış kabuk değerleri Shirvani çeşidinde ölçülmüştür. Her iki analitte de сорт таасирsi anlamlıdır.
катуу кабык натыйжаları
| сорт | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| Segoush | 1,07 ± 0,05 µg/g | 725,81 ± 33,6 µg/g |
| Eshkevar | 0,18 ± 0,01 µg/g | 782,23 ± 36,3 µg/g |
| Nakhoni | 1,08 ± 0,10 µg/g | 505,63 ± 23,4 µg/g |
| Paraki | 0,33 ± 0,02 µg/g | 968,85 ± 44,9 µg/g |
| Shirvani | 5,30 ± 0,29 µg/g | 1.000,67 ± 46,4 µg/g |
Shirvani sert kabuğu her iki кошулма bakımından da эң жогорку değerleri göstermiştir. Баккатин III өлчөмı Паклитакселden yine көп дагы жогоркуtir.
чийки данек фундук натыйжаları
| сорт | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| Segoush | 4,15 ± 0,17 µg/g | 43,72 ± 1,56 µg/g |
| Eshkevar | 0,04 ± 0,01 µg/g | Saptanmadı |
| Nakhoni | 2,75 ± 0,11 µg/g | Saptanmadı |
| Paraki | 0,05 ± 0,002 µg/g | Saptanmadı |
| Shirvani | 1,20 ± 0,05 µg/g | Saptanmadı |
чийки данекte Баккатин III’ün гана Segoush çeşidinde belirgin деңгээлde saptanması, сорт менен матрица арасындаki güçlü таасирleşimin эң ачык үлгүlerinden biridir.
куурулган данек фундук натыйжаları
| сорт | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| Segoush | 1,05 ± 0,05 µg/g | 23,90 ± 1,09 µg/g |
| Eshkevar | 2,18 ± 0,10 µg/g | 7,00 ± 0,31 µg/g |
| Nakhoni | 2,46 ± 0,11 µg/g | 2,63 ± 0,12 µg/g |
| Paraki | 4,81 ± 0,23 µg/g | 6,25 ± 0,28 µg/g |
| Shirvani | 2,85 ± 0,13 µg/g | 67,22 ± 3,06 µg/g |
куурулган үлгүlerde Паклитаксел bakımından Paraki, Баккатин III bakımından Shirvani çeşidi öne çıkmıştır. İki analitin эң жогорку болгону çeşitlerin айырмалуу olması, кууруу таасирsinin tek бир ortak mekanizmayla ачыкlanamayabileceğini көрсөтөт.
Çiğ жана куурулган данекlerin түздөн-түз karşılaştırılması
| сорт | Паклитаксел: çiğ → куурулган | Yön | Баккатин III: çiğ → куурулган | Yön |
|---|---|---|---|---|
| Segoush | 4,15 → 1,05 µg/g | Azalma | 43,72 → 23,90 µg/g | Azalma |
| Eshkevar | 0,04 → 2,18 µg/g | өсүү | Saptanmadı → 7,00 µg/g | өлчөнүүчү hâle gelme |
| Nakhoni | 2,75 → 2,46 µg/g | Hafif azalma | Saptanmadı → 2,63 µg/g | өлчөнүүчү hâle gelme |
| Paraki | 0,05 → 4,81 µg/g | Belirgin өсүү | Saptanmadı → 6,25 µg/g | өлчөнүүчү hâle gelme |
| Shirvani | 1,20 → 2,85 µg/g | өсүү | Saptanmadı → 67,22 µg/g | Belirgin өсүү |
бул tablo, кууруу таасирsinin yönünün сорт жана analite байланыштуу болорун ачыкça көрсөтөт. изилдөөnın “өсүү yönü tutarlıydı” ifadesi, Segoush жана Nakhoni натыйжаlarıyla tam катары uyuşmamaktadır.
кууруу gerçekten жаңы Паклитаксел oluşturdu mu?
изилдөө бул soruya так бир yanıt vermemektedir. кууруу кийин хроматографиялык катары дагы fazla analit ölçülmesi эң аз dört айырмалуу sürecin sonucu olabilir:
- клетка yapısının parçalanması жана ekstraksiyonun kolaylaşması,
- байланыштуу veya erişilemeyen таксан havuzlarının serbestleşmesi,
- таксанları parçalayan enzimlerin ısıyla таасирsizleşmesi,
- бир таксан türevinin başka бир таксанa химиялык dönüşümü.
Bunlara ek катары кууруу учурунда nem жана başka uçucu maddelerin kaybolması, kuru салмак başına bildirilen derişimin görünür biçimde yükselmesine katkı sağlayabilir. бирок изилдөө кууруу öncesi жана sonrası toplam kuru kütle veya nem dengesini vermediği үчүн бул таасирnin büyüklüğü hesaplanamamaktadır.
жаңы молекула oluşumunu göstermek үчүн кууруу öncesi жана sonrası бардык таксанların kütle dengesi, аралык ürünler жана bozunma ürünleri бирге izlenmelidir. Mevcut изилдөө гана Паклитаксел жана Баккатин III’ün акыркы өлчөнүүчү sinyallerini karşılaştırmaktadır.
Şekil 3: Standart ekleme kromatogramı
Şekil 3’te куурулган Eshkevar örneğinin standart eklenmeden önceki жана 50 ng/g karжарык standart eklendikten sonraki kromatogramları gösterilmektedir.
Standart eklemeden кийин iki hedef bölgede piklerin belirgin biçimde büyümesi, үлгү ичинде бул alıkonma zamanlarında ölçülen bileşenlerin hedef standartlarla uyumlu болорун desteklemektedir.
бирок şekil ачыкlaması pik 1’i Паклитаксел, pik 2’yi Баккатин III катары adlandırmaktadır. ыкма koşullarında ise Баккатин III’ün 3,0 dakikada, Паклитакселin 4,5 dakikada çıktığı belirtilmiştir. Şekilde birinci pik болжол менен 3,0, ikinci pik болжол менен 4,5 dakikadadır. ошондуктан ыкма metni esas alındığında pik etiketleri şekil ачыкlamasında ters yazılmış görünmektedir.
фундук жалбыракlarının olası булак değeri
изилдөө, эң жогорку таксан деңгээлlerinin жалбыракlarda bulunması себебинен фундук bahçelerindeki жалбырак biyokütlesini potansiyel бир doğal таксан kaynağı катары değerlendirmektedir.
бирок “жогорку analitik derişim” менен “endüstriyel катары uygun булак” ошол эле şey эмес. Endüstriyel değerlendirme үчүн ayrıca:
- Toplam жалбырак biyokütlesi,
- Hasat zamanı жана mevsimsel өзгөрүү,
- Saflaştırma маалыматmi,
- таксанların gerçek kimlik doğrulaması,
- Üretim maliyeti,
- Çevresel таасир,
- Partiler arası değişkenlik,
- Saflık жана farmasötik kalite ölçütleri değerlendirilmelidir.
бул изилдөө bunları ölçmemiştir; гана belirli үлгүlerdeki HPLC-UV sinyallerini karşılaştırmıştır.
фундук tüketimi жана kanser konusunda изилдөө ne gösteriyor?
Makalenin “pratik колдонуу” bölümünde Паклитаксел жана Баккатин III’ün kanser karşıtı özelliklerinden hareketle fındığın beslenme sepetinde yer almasının teşvik edilebileceği ifade edilmektedir.
бирок изилдөөda:
- İnsanlar veya тажрыйба hayvanları фундукla beslenmemiştir.
- Паклитакселin фундукtan emilimi өлчөнгөн эмес.
- Sindirim кийинki kararlılığı araştırılmamıştır.
- Kan veya dokudaki таксан деңгээлleri belirlenmemiştir.
- Kanser клеткаsi, tümör modeli veya klinik натыйжа incelenmemiştir.
- Beslenme güvenliği veya таасирli tüketim өлчөмı değerlendirilmemiştir.
ошондуктан бул маалыматlerden “фундук yemek Паклитаксел tedavisi sağlar”, “куурулган фундук kanseri önler” veya “таксан içeriği себебинен дагы fazla фундук tüketilmelidir” sonucu çıkarılamaz.
Araştırmanın gıda tüketimine ilişkin эмес, өсүмдүк dokularındaki analitik dağılıma ilişkin бир изилдөө болгону unutulmamalıdır.
изилдөөnın geçmiş açısından önemi
Önceki изилдөөlarda фундук yaprağı, катуу кабык жана iç kısımlarda таксанların varlığı konusunda birbirinden айырмалуу натыйжаlar билдирилген. Bazı araştırmalar iç фундукta Паклитаксел veya Баккатин III saptamamış; bazıları ise айрыкча kahverengi kabuklu iç fraksiyonlarda төмөн деңгээлler ölçmüştür.
Mevcut изилдөө, натыйжаlar арасындаki farklılıkların генetik сорт, үлгү matrisi, deri veya kabuk varlığı, ekstraksiyon tekniği жана analitik duyarlılıktan булакlanabileceğini savunmaktadır.
Bugün açısından önemi
изилдөөnın analitik katkısı, uzun süreli yağ giderme жана maserasyon процессleri yerine бир saatten kısa sürede tamamlanabildiği belirtilen ultrason-DLLME-HPLC yaklaşımını önermesidir.
кичине 1-oktanol hacmi sayesinde болжол менен 10–13 kat zenginleştirme sağlanması, UV детекторü сыяктуу kütle spektrometresinden дагы аз seçici жана дагы erişilebilir бир детекторle төмөн деңгээлlerin ölçülmesini kolaylaştırabilir.
муну менен бирге ыкмаin pratik üstünlüğü гана мөөнөт жана çözücü tüketimiyle эмес, yanlış pozitiflik riski, matrisler arası seçicilik жана başka laboratuvarlarda yeniden üretilebilirlikle бирге değerlendirilmelidir.
Gelecek изилдөөlar үчүн gereksinimler
- HPLC-UV натыйжаları LC-MS/MS менен bağımsız катары doğrulanmalıdır.
- Паклитаксел жана Баккатин III үчүн ürün iyonları жана iyon катышları gösterilmelidir.
- жалбыракlarda bildirilen көп жогорку Баккатин III değerleri айырмалуу laboratuvarlarda tekrar edilmelidir.
- Bağımsız ağaç, bahçe жана hasat sezonlarından биологиялык кайталооlar kullanılmalıdır.
- Kalibrasyon aralığı жана birimler бардык metin жана tablolarda tutarlı hâle getirilmelidir.
- Şekil 3’teki pik kimliği ачыкlığa kavuşturulmalıdır.
- Carrez II bileşimi ачыкça düzeltilmeli жана doğrulanmalıdır.
- Ultrason süresinin 15 mi yoksa 30 dakika mı болгону belirtilmelidir.
- Her матрица үчүн колдонулган баштапкы etanol hacmi nihai protokolde ачыкça yazılmalıdır.
- кууруу öncesi жана sonrası nem менен kuru madde kütle dengesi kurulmalıdır.
- Паклитаксел, Баккатин III жана ilişkili таксанların bütünsel kütle dengesi çıkarılmalıdır.
- кууруу учурунда oluşan veya kaybolan таксан türevleri hedeflenmemiş analizle araştırılmalıdır.
- айырмалуу температура жана sürelerin таасирsi ayrı ayrı incelenmelidir.
- Depolama sıcaklığı жана süresinin таксан kararlılığına таасирsi değerlendirilmelidir.
- Endüstriyel булак iddiası үчүн izolasyon, saflaştırma, maliyet жана çevresel таасир analizleri yapılmalıdır.
изилдөөnın güçlü yönleri
- Beş фундук çeşidi жана beş айырмалуу doku/матрица ошол эле araştırmada салыштырылган.
- Yenilebilir жана yenmeyen фундук bölümleri бирге бааланган.
- Çiğ жана куурулган данекler түздөн-түз салыштырылган.
- DLLME değişkenleri борбордук композиттик дизайн жана жооп бетинин ыкмасыyle optimize жасалган.
- Etanol, 1-oktanol, pH жана tuz değişkenleri арасындаki таасирleşimler изилденген.
- Matrislere özgü баштапкы çözücü ihtiyaçlarının ошол эле olmadığı gösterilmiştir.
- ыкма үчүн LOD, LOQ, RSD, кайтарып алуу жана байытуу фактору билдирилген.
- сорт, матрица жана сорт × матрица таасирleşimi MANOVA менен бирге бааланган.
- Varyans eşitliği sağlanmadığında Welch ANOVA жана Games-Howell testleri колдонулган.
- Standart eklemeli kromatogramla hedef pik bölgelerindeki sinyal artışı gösterilmiştir.
- натыйжаlar бардык matrisler жана сорттор үчүн sayısal tablo hâlinde sunulmuştur.
изилдөөnın чектөөları
- изилдөө hakem değerlendirmesinden geçmemiş бир preprinttir.
- кошулма kimliği негизги катары HPLC-UV кармалуу убактысы karşılaştırmasına dayanmaktadır.
- LC-MS/MS veya başka bağımsız yapısal doğrulama uygulanmamıştır.
- көп жогорку Баккатин III değerleri ortogonal бир teknikle тастыкталган эмес.
- Bağımsız biyolojik үлгү sayısı ачыкça belirtilmemiştir.
- Üçlü enjeksiyonların teknik tekrar mı yoksa bağımsız үлгү mi болгону istatistiksel yorum açısından yeterince ачыкlanmamıştır.
- үлгүler гана İran’ın belirli бир bölgesinden toplanmıştır.
- Hasat yılı, olgunluk evresi жана ağaç yaşı ayrıntılı biçimde маалыматlmemiştir.
- Güneşte kurutmanın таксан өлчөмına таасирsi değerlendirilmemiştir.
- кууруу учурунда үлгүlerin gerçek iç sıcaklığı жана nem kaybı өлчөнгөн эмес.
- кууруу tek температура жана tek süreyle sınanmıştır.
- Паклитаксел жана Баккатин III artışının жаңы oluşum mu yoksa дагы iyi ekstraksiyon mu болгону түздөн-түз belirlenmemiştir.
- кууруу sonrası bozunma жана dönüşüm ürünleri analiz edilmemiştir.
- кууруу таасирsi бардык çeşitlerde ошол эле yönde эмес.
- Metin менен Tablo 2 арасында bazı konsantrasyon değerleri farklıdır.
- ыкма bölümündeki alıkonma zamanları менен Şekil 3 ачыкlamasındaki pik isimleri ters görünmektedir.
- Doğrusal aralık metin жана tablolar арасында чоң ölçüde değişmektedir.
- LOD үчүн ng/g жана ng/mL birimleri айырмалуу bölümlerde karışmaktadır.
- Carrez II çözeltisinin bileşimi ачык эмес.
- Ultrason süresi бир bölümde 30, başka бир bölümde 15 dakika катары yazılmıştır.
- генel ekstraksiyon protokolü менен матрица özgü etanol hacimleri арасында ачыкlama farklılığı бар.
- маалымат kullanılabilirliği bölümündeki “araştırmada маалымат kullanılmadı” ifadesi, sunulan тажрыйбаsel маалыматlerle uyumlu эмес.
- фундук tüketimi, biyoyararlanım veya klinik kanser sonucu incelenmemiştir.
изилдөө ne söylüyor?
- Паклитаксел жана Баккатин III sinyalleri beş İran фундук çeşidinin айырмалуу dokularında ölçülmüştür.
- матрица türü, iki таксанın dağılımında сорт таасирsinden дагы güçlü бир belirleyicidir.
- жалбыракlar her iki кошулма үчүн генel катары эң жогорку деңгээлleri göstermiştir.
- Баккатин III birçok dokuda Паклитакселden көп дагы жогорку өлчөмda билдирилген.
- жашыл сырткы кабык жана катуу кабык da өлчөнүүчү таксан içermektedir.
- чийки данек фундукtaki таксан өлчөмları çeşide ылайык чоң ölçüde değişmiştir.
- кууруу birçok сорт-кошулма birleşiminde өлчөнүүчү өлчөмı artırmıştır.
- кууруу таасирsi çeşide жана hedef bileşiğe байланыштууdır.
- 600 µL etanol, 60 µL 1-oktanol, 1 g NaCl жана pH 6,5 DLLME үчүн эң uygun koşullar катары билдирилген.
- Önerilen ыкма болжол менен yüzde 92–99 кайтарып алуу жана болжол менен 10–13 kat zenginleştirme sağlamıştır.
изилдөө ne söylemiyor?
- фундук yemenin kanseri önlediğini veya tedavi ettiğini göstermemektedir.
- фундукtaki Паклитакселin sindirim sistemi тарабынан emildiğini göstermemektedir.
- куурулган fındığın çiğ фундукtan sağlık açısından üstün болорун kanıtlamamaktadır.
- куурууnın her çeşitte Паклитаксел жана Баккатин III’ü artırdığını göstermemektedir.
- кууруу учурунда жаңы Паклитаксел sentezlendiğini түздөн-түз kanıtlamamaktadır.
- Баккатин III artışının Паклитаксел dönüşümünden булакlandığını такleştirmemektedir.
- Ölçülen piklerin kimliğini kütle spektrometrisiyle doğrulamamaktadır.
- фундук жалбыракlarının экономикалык катары uygulanabilir farmasötik булак болорун göstermemektedir.
- İran’daki beş çeşidin натыйжаlarının бардык dünya фундук çeşitlerine uygulanabileceğini göstermemektedir.
- Önerilen ыкмаin başka laboratuvarlarda bağımsız biçimde doğrulandığını göstermemektedir.
изилдөөnın ыкмаi жана табылгаları
тажрыйба tasarımının teknik özeti
| Başlık | изилдөөda uygulanan yaklaşım |
|---|---|
| өсүмдүк türü | Corylus avellana L. |
| сорттор | Segoush, Eshkevar, Nakhoni, Paraki жана Shirvani |
| Toplama bölgesi | Roudsar, Gilan, İran |
| Matrisler | жалбырак, жашыл сырткы кабык, катуу кабык, чийки данек жана куурулган данек |
| сорт-матрица kombinasyonu | 25 |
| кууруу | 150°C, 1 саат, aralıklı karıştırma |
| Analitler | Паклитаксел жана Баккатин III |
| Ön процесс | ультраүн колдогон ekstraksiyon, Carrez çöktürmesi жана filtrasyon |
| Mikroekstraksiyon | DLLME |
| Kromatografi | HPLC-UV |
| Enjeksiyon tekrarı | Her үлгү үчүн üç enjeksiyon |
Optimize edilmiş DLLME koşulları
| Değişken | İncelenen aralık | Seçilen баа |
|---|---|---|
| Etanol hacmi | 300–1000 µL | 600 µL |
| 1-oktanol hacmi | 60–120 µL | 60 µL |
| NaCl өлчөмı | 0–2 g | 1 g |
| pH | 3–9 | 6,5 |
Yanıt yüzeyi modelinin istatistikleri
| Ölçüt | натыйжа |
|---|---|
| Model F değeri | 24,88 |
| Model p değeri | < 0,0001 |
| Uyum eksikliği F değeri | 0,53 |
| Uyum eksikliği p değeri | 0,8135 |
| R² | 0,9587 |
| Düzeltilmiş R² | 0,9202 |
| Öngörülen R² | 0,8484 |
| Yeterli такlik | 20,449 |
| Box-Cox lambda | 0,88; güven aralığı 0,65–1,05 |
HPLC ыкмаinin validasyon özeti
| Ölçüt | Паклитаксел | Баккатин III |
|---|---|---|
| R² aralığı, Tablo 1 | 0,9981–0,9997 | 0,9978–0,9993 |
| RSD | %4,11–5,50 | %3,59–5,33 |
| LOD | 1,86–2,17 ng/g | 2,11–2,35 ng/g |
| LOQ | 6,13–7,16 ng/g | 6,96–7,75 ng/g |
| кайтарып алуу | %92,05–99,42 | %92,59–98,53 |
| байытуу фактору | 9,70–12,31 | 10,30–12,82 |
Matrislere ылайык генel бөлүштүрүү
| матрица | Паклитаксел deseni | Баккатин III deseni |
|---|---|---|
| жалбырак | генel катары эң жогорку; 4,54–17,56 µg/g | ачык biçimde эң жогорку; болжол менен 6.851,67–8.660 µg/g |
| жашыл сырткы кабык | 0,36–5,70 µg/g | 1.536,44–6.662,37 µg/g |
| катуу кабык | 0,18–5,30 µg/g | 505,63–1.000,67 µg/g |
| чийки данек | 0,04–4,15 µg/g | Dört çeşitte saptanmadı; Segoush’ta 43,72 µg/g |
| куурулган данек | 1,05–4,81 µg/g | 2,63–67,22 µg/g |
ANOVA жана MANOVA натыйжаlarının özeti
| Analiz | таасир | натыйжа |
|---|---|---|
| MANOVA | сорт | Pillai = 1,325; F(8,50) = 12,26; p < 0,001; kısmi η² = 0,662 |
| MANOVA | матрица | Pillai = 1,819; F(8,50) = 62,63; p < 0,001; kısmi η² = 0,909 |
| MANOVA | сорт × матрица | Pillai = 1,785; F(32,50) = 12,99; p < 0,001; kısmi η² = 0,893 |
| İki yönlü ANOVA | Паклитакселde сорт | F = 94,55; p < 0,001 |
| İki yönlü ANOVA | Паклитакселde матрица | F = 593,51; p < 0,001 |
| İki yönlü ANOVA | Паклитакселde таасирleşim | F = 46,57; p < 0,001 |
| İki yönlü ANOVA | Баккатин III’te сорт | F = 4,57; p = 0,007 |
| İki yönlü ANOVA | Баккатин III’te матрица | F = 380,37; p < 0,001 |
| İki yönlü ANOVA | Баккатин III’te таасирleşim | F = 7,12; p < 0,001 |
Şekillerin teknik mesajları
| Şekil | İçerik | негизги mesaj |
|---|---|---|
| Şekil 1 | Tahmin-gerçek баа grafiği, artık normalliği, Box-Cox жана üç yanıt yüzeyi | DLLME değişkenleri үчүн kurulan ikinci dereceden modelin uyumunu жана optimum bölgeyi көрсөтөт. |
| Şekil 2 | Паклитаксел жана Баккатин III ısı haritaları | матрица таасирsinin baskın болорун; жалбыракların, айрыкча Баккатин III bakımından diğer dokulardan ayrıldığını көрсөтөт. |
| Şekil 3 | куурулган Eshkevar örneğinin standart ekleme öncesi жана sonrası kromatogramı | Hedef alıkonma bölgelerindeki piklerin standart eklenmesiyle büyüdüğünü көрсөтөт; бирок pik isimleriyle alıkonma süreleri арасында raporlama uyuşmazlığı bulunmaktadır. |
Teknik табылгаların toplu değerlendirmesi
- İki таксанın деңгээлleri үстүндө эң güçlü faktör фундук dokusu veya matrisi olmuştur.
- сорт таасирsi айрыкча Паклитаксел үчүн belirgindir.
- сорт менен матрица арасындаki güçlü таасирleşim, tek бир “эң жогорку таксанlı сорт” tanımlanmasını engellemektedir.
- жалбыракlar да Паклитаксел да Баккатин III bakımından эң жогорку генel деңгээлleri göstermiştir.
- Баккатин III өлчөмları жалбырак, dış kabuk жана катуу кабыкta Паклитакселden көп дагы жогоркуtir.
- чийки данекlerde Паклитаксел жана Баккатин III деңгээлleri çeşitlere ылайык чоң ölçüde değişmiştir.
- кууруу кийин üç çeşitte Паклитаксел artmış, iki çeşitte азайган.
- Баккатин III dört çeşitte saptanamaz деңгээлden өлчөнүүчү деңгээлe çıkmış; Segoush’ta азайган.
- маалыматler куурууnın таасирsinin tek yönlü жана бардык çeşitlerde ошол эле olmadığını көрсөтөт.
- DLLME-HPLC ыкмаi kısa үлгү hazırlama süresi жана болжол менен 10–13 kat zenginleştirme sağlamıştır.
- ыкма validasyon натыйжаları kabul edilebilir analitik performans bildirmektedir; бирок ыкма ayrıntılarındaki tutarsızlıklar yeniden üretilebilirliği sınırlandırmaktadır.
булак жана ыкма Notu
бул içerik, Mohammad Sina, Seyedeh Zahra Nasirifar, Sahar Shamsifar, Seyede Marzieh Hosseini, Marzieh Kamankesh жана Abdorreza Mohammadi тарабынан hazırlanan “Monitoring of Paclitaxel and Baccatin III in different hazelnut matrices and varieties: Investigation of roasting effects in hazelnut kernel using an efficient microextraction method coupled with liquid chromatography” başlıklı изилдөөya dayanmaktadır.
изилдөө; beş İran фундук çeşidinin жалбырак, жашыл сырткы кабык, катуу кабык, чийки данек жана куурулган данек үлгүlerinde Паклитаксел менен Баккатин III деңгээлlerini ölçen тажрыйбаsel бир preprint araştırma makalesidir.
Metinde ачыкça “This preprint research paper has not been peer reviewed” uyarısı bulunmaktadır. ошондуктан изилдөө hakem değerlendirmesinden geçmemiştir. PDF’de hakemli бир dergi kabulü veya doğrulanmış nihai yayın bilgisi bulunmamaktadır.
Analiz, ультраүн колдогон алдын ала экстракция, Carrez çöktürmesi, дисперсивдүү суюктук-суюктук микроэкстракция жана HPLC-UV ölçümüne dayanmaktadır. кошулма tanımlaması esas катары sertifikalı standartlarla кармалуу убактысы karşılaştırması жана standart ekleme тажрыйбаleriyle yapılmıştır.
изилдөөda kütle spektrometrisi veya başka бир bağımsız түзүлүш doğrulama ыкмаi uygulanmamıştır. ушул себептен айрыкча жалбыракlarda bildirilen жогорку Баккатин III натыйжаlarının LC-MS/MS сыяктуу дагы seçici ыкмаlerle doğrulanması gerekir.
ыкмаin doğrusal aralığı, bazı кармалуу убактысы/pik etiketleri, Carrez II bileşimi, ultrason süresi жана баштапкы etanol hacimleri konusunda PDF’nin айырмалуу bölümleri арасында tutarsızlıklar bulunmaktadır.
кууруу тажрыйбаi 150°C’de бир saatlik tek koşulla sınırlıdır. кууруу кийинki artışların жаңы таксан oluşumu, байланыштуу bileşiklerin serbestleşmesi, enzim таасирsizleşmesi, nem kaybı veya дагы kolay ekstraksiyon mekanizmalarından hangisine байланыштуу болгону түздөн-түз belirlenmemiştir.
изилдөө klinik araştırma эмес. фундук tüketen insanlarda Паклитаксел emilimi, kanser riski, tedavi yanıtı veya güvenlik değerlendirilmemiştir. Ölçülen таксан деңгээлleri, fındığın рак дарылоосу veya koruyucu gıda катары kullanılabileceğini kanıtlamamaktadır.
авторлор çıkar çatışması bulunmadığını bildirmiştir. Makalenin dil, sözcük seçimi жана okunabilirliğinin iyileştirilmesinde ChatGPT kullanıldığı; bilimsel içerik, маалымат analizi жана натыйжаların авторлор тарабынан oluşturulup gözden geçirildiği түшүндүрүлгөн.
бул Türkçe makale гана yüklenen preprintteki тажрыйба protokolleri, tablolar, şekiller, sayısal натыйжаlar жана авторлорın tartışmasına dayanarak даярдалган. изилдөөda bulunmayan klinik fayda, kanserden korunma, tüketim önerisi, endüstriyel üretim başarısı veya doğrulanmış farmasötik булак iddiası eklenmemiştir.

Пикир калтырыңыз
E-mail дарегиңиз жарыяланбайт. Милдеттүү талаалар * менен белгиленген