Масъалаи асосии ин таҳқиқот он аст, ки оё хлорокин, ки дар табобати вараҷа истифода мешавад, барои истифодаи педиатрӣ қобили қабултар карда шуда метавонад ё не. Хлорокин дифосфат ҳамчун доруи муҳим дар табобати вараҷаи Plasmodium vivax, ки ба хлорокин ҳассос аст, истифода мешавад. Аммо таъми талхи дору, махсусан дар кӯдакон, метавонад табобатро душвор гардонад. Дар беморони кӯдак воя одатан мувофиқи вазни бадан танзим карда мешавад; вақте формулятсияи мувофиқи педиатрӣ вуҷуд надорад, амалҳо ба монанди шикастани таблетка, майда кардан ё аз шаклҳои сахти дору омода кардани моеъ ба миён меоянд. Ин амалҳо метавонанд таъми талхи доруро зиёд кунанд ва боиси он шаванд, ки кӯдак доруро туф кунад, қай кунад ё табобатро ба анҷом нарасонад.

Аҳамияти таҳқиқот маҳз дар ҳамин ҷо зоҳир мешавад: барои як доруи зидди вараҷа танҳо аз ҷиҳати биологӣ таъсирбахш будан кофӣ нест; махсусан дар кӯдакон дору бояд дар шакле пешниҳод шавад, ки онро гирифтан осон, таҳаммулпазир ва дастгиркунандаи риояи табобат бошад. Аз ин рӯ, рушди формулятсияи педиатрӣ танҳо масъалаи технологияи фармасевтӣ нест, балки аз нуқтаи назари саломатии ҷамъиятӣ низ муҳим аст.

Стратегияе, ки дар ин таҳқиқот истифода шудааст, комплекс кардани хлорокин бо як қатрони ивазкунандаи ион мебошад. Қатронҳои ивазкунандаи ион интиқолдиҳандаҳои полимерӣ мебошанд, ки метавонанд бо молекулаҳои доруи заряднок таъсир кунанд. Ин гуна қатронҳо метавонанд бо кам кардани ҳузури озоди доруҳои дорои таъми талх дар муҳити даҳон эҳсоси таъмро ниқоб кунанд. Мантиқ ба таври содда чунин аст: агар дору дар даҳон фавран озод нашавад, бо ретсепторҳои таъм камтар тамос мегирад; вақте ба муҳити монанди меъда, ки бештар кислотаӣ ва аз ҷиҳати ионҳо фарқкунанда аст, мерасад, аз қатрон ҷудо шуда барои ҷаббиш озод шуда метавонад.

Қатроне, ки дар таҳқиқот истифода шудааст, полакрилин калий аст ва бо номи тиҷоратии Amberlite IRP88 нишон дода шудааст. Комплекси хлорокин–қатрон бо таносуби дору/қатрон 1:1 омода карда шудааст. Реаксия дар муҳити кислотаӣ, дар фосилаи pH 4,5–5,0, дар ҳарорати хона ва бо муҳофизат аз рӯшноӣ, бо омехтакунии 24 соат анҷом дода шудааст. Сипас резинат бо филтратсияи вакуумӣ ҷудо карда шуда, дар 30 °C, бо фишори 1100 mbar, дар шкафи вакуумӣ 48 соат хушконида шудааст. Дар таҳқиқот миқдори хлорокини асосӣ дар комплекси CLQ-R %42,6 гузориш шудааст.

Ҳадафи ин комплекс танҳо ниқоб кардани таъм нест. Стратегияи идеалии ниқобкунии таъм бояд фаъолияти зидди вараҷаи доруро вайрон накунад, ҷаббиши онро ба таври ҷиддӣ тағйир надиҳад ва хавфи нави заҳролудиро ба вуҷуд наорад. Аз ин сабаб муҳаққиқон CLQ-R-ро аз чанд ҷиҳати гуногун арзёбӣ кардаанд: зиндамонии ҳуҷайраҳои Caco-2, фаъолияти in vitro зиддиплазмодиявӣ бар зидди P. falciparum, гемолиз дар ҳуҷайраҳои сурхи хуни инсон, профили консентратсия–замони плазма дар мушҳо, параметрҳои биохимиявӣ, фаъолияти in vivo зидди вараҷа дар мушҳои сироятшуда бо P. berghei ANKA, санҷиши recrudescence барои арзёбии бозпайдо шудани сироят ва санҷиши афзалияти таъм бо ду шиша.

Аввалин арзёбии муҳими in vitro дар таҳқиқот зиндамонии ҳуҷайраҳои Caco-2 мебошад. Ҳуҷайраҳои Caco-2, ҳарчанд аз аденокарсиномаи колоректалии инсон сарчашма мегиранд, дар таҳқиқоти фармасевтӣ вобаста ба монеаи эпителии рӯда бисёр истифода мешаванд. Дар таҳқиқот CLQ ва CLQ-R дар консентратсияҳои гуногун, дар фосилаи 0,01–100 µM санҷида шудаанд. Қатрон танҳо дар консентратсияи 74 µg/mL арзёбӣ шудааст. Бо санҷиши MTT сатҳи зиндамонии ҳуҷайраҳои метаболикӣ фаъол чен карда шудааст.

Мувофиқи Ҷадвали 1, дар консентратсияҳои паст ва миёна байни CLQ ва CLQ-R фарқи равшан гузориш нашудааст. Дар консентратсияи баландтарин, яъне 100 µM, зиндамонии ҳуҷайраҳо ба таври маънодор кам шудааст. Дар ҷадвал дар 100 µM барои CLQ зиндамонии ҳуҷайраҳо 68,1 ± 11 ва барои CLQ-R 61,1 ± 11 дода шудааст. Муаллифон коҳиши зиндамониро дар ин консентратсияи баланд бо таъсирҳои маълумии ҳуҷайравии хлорокин, махсусан ҷамъшавӣ дар лизосомаҳо, баланд кардани pH-и дохилилизосомалӣ ва халалдор кардани марҳилаҳои дерини аутофагия, алоқаманд донистаанд. Он ки қатрон танҳо ба зиндамонии ҳуҷайраҳо таъсири манфӣ надоштааст, дар таҳқиқот ҳамчун рафтори инертии қатрон дар ин модели ҳуҷайравӣ шарҳ дода шудааст.

Таъсири зидди вараҷаи хлорокин бо ҷамъшавии он дар вакуоли ҳозимаи паразит ва халалдор кардани детоксикатсияи пайвастагиҳои заҳролуде, ки ҳангоми ҳазми гемоглобин пайдо мешаванд, вобаста дониста мешавад. Дар таҳқиқот ин механизм бо таҷрибаҳои муфассал дубора исбот нашуда, балки дар заминаи тарзи таъсири дар адабиёт қабулшуда баҳс шудааст. Нишон додани IC₅₀-и баландтари CLQ-R нисбат ба хлорокини озод бо фарқияти кинетикаи озодшавии хлорокин аз комплекси қатрон шарҳ дода шудааст. Озодшавии хлорокин аз қатрон ба pH ҳассос аст; суст шудани озодшавӣ дар муҳитҳои наздик ба pH нейтралӣ метавонад вақти расидани доруи озодро ба паразит таъсир диҳад.

Дар таҳқиқоти паразитии in vitro штамми 3D7-и Plasmodium falciparum истифода шудааст. Паразитҳо дар марҳилаи ҳалқаи синхроншуда ба плитаҳои 96-чоҳакӣ кошта шудаанд; паразитемияи ниҳоӣ %0,5 ва гематокрит %2 тайёр карда шудааст. CLQ ва CLQ-R бо дилютсияҳои силсилавии дукарата аз 200 nM то 3,12 nM санҷида шудаанд. Пас аз инкубатсияи 72 соат, пролифератсияи паразит бо рангкунии DNA-и SYBR Safe чен карда шудааст.

Мафҳуми IC₅₀, ки дар таҳқиқот дода шудааст, чунин фаҳмида мешавад:

\[ IC_{50} \]

IC₅₀ консентратсияеро ифода мекунад, ки барои 50% боздоштани пролифератсияи паразит ё ҷавоби биологӣ дар шароити санҷидашуда лозим аст. Ҳар қадар арзиш пасттар бошад, дар он шароити таҷрибавӣ фаъолият ҳамон қадар қавитар ҳисобида мешавад. Дар ин таҳқиқот IC₅₀ барои CLQ 13 nM ва барои CLQ-R 30 nM гузориш шудааст. Гарчанде арзиши CLQ-R баландтар аст, азбаски он дар фосилаи наномолярӣ боқӣ мондааст, ба хулоса омадаанд, ки фаъолияти қавии зиддиплазмодиявӣ нигоҳ дошта шудааст.

Дар таҳқиқот инчунин санҷида шудааст, ки оё андозагириҳои флуорессенс аз ҷониби қатрон ба таври сунъӣ таъсир меёбанд ё не. Зеро дар усулҳои флуорессенсӣ, монанди SYBR Safe, агар маводи санҷидашуда сигналро зиёд ё кам кунад, шарҳи нодуруст мумкин аст. Муҳаққиқон гуфтаанд, ки қатрон дар консентратсияҳои истифодашуда халалрасонии флуорессенсиро дар сатҳи ночиз ба вуҷуд овардааст. Ин назорат барои дастгирӣ кардани он муҳим аст, ки таъсири зиддиплазмодиявии CLQ-R аз артефакти ченкунӣ сарчашма намегирад.

Санҷиши гемолиз низ нишонаи муҳими бехатарӣ мебошад. Ҳуҷайраҳои сурхи хуни инсонии O+ дар шароите монанд ба шароити таҷрибаи пролифератсияи паразит бо CLQ-R ва қатрон инкубатсия карда шудаанд. Озодшавии гемоглобин бо андозагирии абсорбанс дар 545 nm арзёбӣ шудааст. Меъёри гемолиз бо формулаи зерин ҳисоб шудааст:

\[ \%\,hemoliz = \frac{A_{örnek} - A_{negatif\,kontrol}}{A_{pozitif\,kontrol} - A_{negatif\,kontrol}} \times 100 \]

Дар ин формула A_örnek абсорбанси дар намунаи санҷидашуда ченшударо; A_{negatif kontrol} абсорбанси назорати бе лизисро; A_{pozitif kontrol} бошад, абсорбанси назорати лизиси пурраро нишон медиҳад. Формула ба шакли фоиз нишон медиҳад, ки намуна ҳуҷайраҳои сурхи хунро то чӣ андоза мешиканад. Дар таҳқиқот CLQ-R ва қатрон танҳо фаъолияти пасти гемолитикӣ нишон додаанд ва арзишҳои гемолиз дар ҳамаи консентратсияҳои санҷидашуда аз %10 поён мондаанд. Ин натиҷа нишон медиҳад, ки формулятсия дар шароити in vitro ба ҳуҷайраҳои сурхи хун зарари равшан намерасонад.

Арзёбии фармакокинетикӣ барои фаҳмидани он анҷом дода шудааст, ки оё CLQ-R дар системаи меъдаву рӯда хлорокинро озод мекунад ва оё дар плазма марузияти монанд ба хлорокини озодро таъмин мекунад ё не. Ба мушҳо бо гаважи даҳонӣ CLQ, CLQ-R ё қатрон дода шудааст. Барои CLQ 15,6 mg/kg хлорокини асосӣ, барои CLQ-R 26 mg/kg хлорокини асосӣ ва барои қатрон 61 mg/kg, ки ба массаи қатрон дар табобати CLQ-R мувофиқ аст, истифода шудааст. Намунаҳои хун дар нуқтаҳои 0,08; 0,25; 0,5; 0,75; 1; 2; 4 ва 6 соат гирифта шудаанд.

Сатҳҳои хлорокин дар плазма бо усули LC-MS/MS чен шудаанд. Барои Chloroquine гузаришҳои массаи 319,8 > 246,9 ва барои стандарти дохилӣ карбамазепин 237,0 > 194,0 истифода шудаанд. Гуфта шудааст, ки усул дар фосилаи 10–2000 ng/mL тасдиқ гардида, мувофиқи меъёрҳои ANVISA параметрҳо ба монанди ҳассосият, дақиқӣ, тағйирёбии рӯзона ва байнирӯзона, хаттият, устуворӣ, carryover, таъсири матрикс ва интихобпазирӣ арзёбӣ шудаанд.

Дар ҷадвали фармакокинетикӣ дида мешавад, ки CLQ ва CLQ-R нисбат ба вояҳои нормализатсияшуда профилҳои наздик нишон медиҳанд. t_max барои CLQ 0,50 соат ва барои CLQ-R 0,75 соат аст. AUC_0-6h/Dose барои CLQ 2,33 ва барои CLQ-R 2,30 дода шудааст. AUC_∞/Dose барои CLQ 2,79 ва барои CLQ-R 3,31 мебошад. Нимумри хориҷшавӣ барои CLQ 2,34 соат ва барои CLQ-R 3,15 соат гузориш шудааст. Ин натиҷаҳо ҳамчун он шарҳ дода шудаанд, ки пайваст шудани хлорокин ба қатрон марузияти системиро ба таври равшан вайрон намекунад.

Яке аз мафҳумҳои муҳим дар фармакокинетика AUC аст. Мантиқи таҳқиқотро бо муносибати асосии зерин метавон фаҳмид:

\[ AUC = \int_{0}^{t} C(t)\,dt \]

Дар ин ҷо C(t) консентратсияи плазмавии дору дар давоми вақтро; AUC бошад, майдони зери каҷи консентратсия–замонро ифода мекунад. AUC барои фаҳмидани марузияти умумии организм ба дору истифода мешавад. Дар ин таҳқиқот наздик будани арзишҳои AUC барои CLQ ва CLQ-R дастгирӣ мекунад, ки комплекс пас аз истифодаи даҳонӣ хлорокинро ба гардиши системӣ расонда метавонад.

Ҷадвали 3 параметрҳои биохимиявиро медиҳад. Муҳаққиқон нишондиҳандаҳоеро ба монанди холестерин, кислотаи пешоб, AST, ALT, альбумин, сафедаи умумӣ, мочевина, фосфатазаи ишқорӣ, глюкоза ва креатинин пас аз 24 ва 48 соат арзёбӣ кардаанд. CLQ ва CLQ-R пас аз 48 соат боиси баландшавии сатҳи фосфатазаи ишқорӣ шудаанд. Дар гурӯҳи CLQ-R сатҳи креатинин нисбат ба гурӯҳи назорат баландтар ёфт шудааст. Аммо муаллифон қайд кардаанд, ки ин тағйирот аз доираҳои физиологии истинодии дар адабиёт гузоришшуда берун нарафтаанд. Аз ин рӯ, таҳқиқот баҳс мекунад, ки дар арзёбии кӯтоҳмуддати мушҳо сигнали равшани заҳролудии системии биохимиявӣ надидааст. Бо вуҷуди ин, ин натиҷа маънои бехатарии дарозмуддат ё бехатарӣ дар инсонҳоро надорад.

Барои самаранокии in vivo зидди вараҷа мушҳои C57BL/6, ки бо Plasmodium berghei ANKA GFP сироят шуда буданд, истифода шуданд. Ин модел ҳамаи ҷанбаҳои вараҷаи инсонро айнан тақлид намекунад; вале дар таҳқиқоти вараҷа ва скрининги пайвастагиҳои зидди вараҷа модели хояндагии васеъ истифодашаванда аст. Дар таҳқиқот ду санҷиши асосии in vivo иҷро шудааст: санҷиши чоррӯзаи фурӯнишонӣ ва санҷиши recrudescence, ки бозпайдо шудани сироят пас аз табобатро пайгирӣ мекунад.

Дар санҷиши чоррӯзаи фурӯнишонӣ, мушҳо ду соат пас аз сироят ба гурӯҳҳо ҷудо карда шуда, табобати ҳаррӯза бо CLQ, CLQ-R ё қатрон оғоз шудааст. Табобатҳо то рӯзи 4 идома ёфта, паразитемия бо ситометрияи ҷараён чен карда шудааст. Фаъолияти зиддиплазмодиявӣ бо формулаи зерин ҳисоб шудааст:

\[ Aktivite(\%) = 100 - \left(\frac{ortalama\,parazitemi_{tedavi}}{ortalama\,parazitemi_{tedavisiz}} \times 100\right) \]

Ин формула нишон медиҳад, ки паразитемияи миёна дар гурӯҳи табобатшуда нисбат ба гурӯҳи сироятшудаи бе табобат ба шакли фоиз то чӣ андоза кам шудааст. Агар паразитемия дар гурӯҳи табобатшуда хеле паст бошад, фоизи фаъолият баланд мебарояд. Дар таҳқиқот дар охири рӯзи 14 барои CLQ %99,84 ва барои CLQ-R %98,54 боздорӣ гузориш шудааст. Қатрон танҳо фаъолияти маънодори зидди вараҷа нишон надодааст.

Шакли 2 се натиҷаи асосии санҷиши фурӯнишонии in vivo-ро нишон медиҳад. Дар панели A таъсири табобатҳо ба вазни ҳайвонот арзёбӣ мешавад ва гуфта мешавад, ки CLQ, CLQ-R ё қатрон нисбат ба гурӯҳи сироятшудаи бе табобат тағйири равшани вазн ба вуҷуд наовардааст. Дар панели B каҷи паразитемия нишон дода мешавад; гурӯҳи сироятшудаи бе табобат ва гурӯҳи қатрон афзоиши паразитемия нишон медиҳанд, дар ҳоле ки дар гурӯҳҳои CLQ ва CLQ-R афзоиши паразит қавӣ фурӯ нишонда мешавад. Ҷадвали панели C фоизҳои фаъолияти зиддиплазмодиявиро дар рӯзҳои 4., 7. ва 14. медиҳад. Он ки CLQ-R дар рӯзи 4. %98,64, дар рӯзи 7. %99,72 ва дар рӯзи 14. %98,54 фаъолият нишон медиҳад, нигоҳ доштани самаранокии in vivo-и комплексро дастгирӣ мекунад.

Дар санҷиши recrudescence, мушҳо дар рӯзи 3-и сироят як вояи CLQ, CLQ-R ё қатрон гирифтаанд. Сипас паразитемия то 96 соат ва зиндамонӣ то рӯзи 22 пайгирӣ шудааст. Дар Шакли 3A, гурӯҳи сироятшудаи бе табобат ва гурӯҳи қатрон афзоиши паразитемия нишон медиҳанд, дар ҳоле ки дар гурӯҳҳои CLQ ва CLQ-R паразитемия паст мемонад. Дар Шакли 3B натиҷаҳои зиндамонӣ дар рӯзи 22 дода шудаанд: дар гурӯҳи сироятшудаи бе табобат ва гурӯҳи қатрон зиндамонӣ %0 аст; дар гурӯҳи CLQ %40 ва дар гурӯҳи CLQ-R %50 зиндамонӣ гузориш шудааст. Ин фарқ дар таҳқиқот ҳамчун он шарҳ дода шудааст, ки CLQ-R самаранокии зидди вараҷаи монанд ба хлорокини озодро нигоҳ доштааст.

Ҷойгоҳи таҷрибаи ниқобкунии таъм дар таҳқиқот бисёр муҳим аст. Зеро ҳадафи воқеии формулятсияи CLQ-R беҳтар кардани қобили қабул будани таъми дору ҳангоми нигоҳ доштани самаранокӣ мебошад. Бо ин мақсад санҷиши афзалияти ду шишагӣ дар давоми 48 соат анҷом дода шудааст. Ба мушҳо ҳамзамон ду шиша пешниҳод шудааст: яке бо об ва дигаре бо маҳлули санҷидашаванда. Миқдори моеъи истеъмолшуда чен шуда, таносуби афзалият ҳисоб карда шудааст:

\[ PR(\%) = \frac{tadant\,alımı}{tadant\,alımı + su\,alımı} \times 100 \]

Дар ин формула PR таносуби афзалиятро ифода мекунад. Агар PR аз %50 поён бошад, қабул карда мешавад, ки ҳайвонот обро аз маҳлули санҷидашуда афзал медонанд, яъне нисбат ба маҳлули санҷидашуда нафрат нишон медиҳанд. Агар PR аз %50 боло бошад, он ҳамчун афзалият нисбат ба маҳлули санҷидашуда шарҳ дода мешавад.

Дар санҷишҳои пешакӣ гуфта шудааст, ки дар консентратсияҳои пасти хлорокин, яъне дар сатҳҳои 10^-5 mM ва 10^-2 mM, мушҳо нисбат ба маҳлули хлорокин нафрати равшан нишон надодаанд. Дар консентратсияи 10 mM бошад, истеъмоли маҳлули хлорокин нисбат ба об ба таври равшан кам шудааст. Аз ин сабаб 10 mM ҳамчун консентратсияи ҳаддии эҳсоси талхӣ барои таҷрибаҳои минбаъдаи ниқобкунии таъм интихоб шудааст.

Шакли 4 фарқи афзалияти таъм байни CLQ ва CLQ-R-ро нишон медиҳад. Дар маҳлули CLQ мушҳо обро бештар истеъмол кардаанд ва холҳои афзалият барои CLQ тақрибан %34,9 шудааст. Ин арзиш аз %50 паст аст ва нишон медиҳад, ки нисбат ба хлорокини озод нафрат вуҷуд дорад. Дар маҳлули CLQ-R бошад, холҳои афзалият тақрибан %50,4 дода шудааст. Ин арзиш нишон медиҳад, ки CLQ-R нисбат ба хлорокини озод таъмро беҳтар ниқоб карда метавонад. Қатрон танҳо бошад, тақрибан %59,17 холҳои афзалият нишон додааст; муаллифон ин ҳолатро ҳамчун он шарҳ додаанд, ки қатрон метавонад palatability-и маҳлулро каме зиёд карда бошад.

Ин натиҷа аз нуқтаи назари формулятсияи педиатрӣ маънои амалӣ дорад. Доруҳои талх метавонанд риояи табобатро дар кӯдакон душвор кунанд. Агар формулятсия таъми доруро ниқоб карда, самаранокиро нигоҳ дорад, он метавонад ҳамчун равиши номзади арзишманд барои рушди маҳсулоти даҳонии қобили қабултар хизмат кунад. Аммо санҷиши афзалияти таъм дар мушҳо ҷойгузини таҳқиқоти қобили қабул будан дар кӯдакони инсон нест. Дар кӯдакони инсон омилҳои сершумор ба монанди таъм, бӯй, матоъ, ҳаҷм, басомади воя, татбиқи волидайн ва омилҳои фарҳангӣ ворид мешаванд.

Ҷиҳатҳои қавии таҳқиқотро метавон дар чанд сарлавҳа ҷамъбаст кард. Аввалан, он танҳо бо иддаои физикохимиявии ниқобкунии таъм маҳдуд нашуда, фаъолияти фармакологиро низ санҷидааст. Дуюм, арзёбии бисёрқабата иҷро шудааст: модели in vitro-и P. falciparum, санҷиши гемолизи ҳуҷайраи сурхи хуни инсон, фармакокинетикаи муш, таҳлилҳои биохимиявӣ, модели in vivo-и P. berghei ва санҷиши рафтории таъм. Сеюм, назорат шудааст, ки қатрон танҳо пролифератсияи паразитро кам намекунад, андозагирии флуорессенсиро ба таври маънодор вайрон намекунад ва in vitro гемолиз ба вуҷуд намеорад. Чорум, бо маълумоти in vitro ва in vivo дастгирӣ шудааст, ки комплекс танҳо таъмро ниқоб карда, доруро беасар намекунад.

Маҳдудиятҳои таҳқиқот низ бояд равшан гуфта шаванд. Аввалан, ин таҳқиқот preprint аст ва аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст. Дуюм, он таҳқиқоти клиникӣ нест; қобили истифода будан дар кӯдакон, дурустии воя, риояи табобат, бехатарии дарозмуддат ё самаранокии клиникӣ арзёбӣ нашудааст. Сеюм, моделҳои ҳайвонии истифодашуда ҳамаи хусусиятҳои бемории инсонро айнан инъикос намекунанд. Чорум, арзёбии таъм ба рафтори муш асос ёфтааст; ин барои қабули беморони кӯдак танҳо нишондиҳандаи пешакӣ буда метавонад. Панҷум, арзиши IC₅₀-и CLQ-R аз хлорокини озод баландтар аст; ин фарқ дар таҳқиқот бо озодшавии вобаста ба pH ва дастрасии дору алоқаманд дониста шудааст. Шашум, таҳлилҳои биохимиявӣ арзёбии кӯтоҳмуддат мебошанд; барои бехатарии истифодаи музмин, гурӯҳҳои синнии гуногун, вояҳои гуногун ё табобати такрорӣ таҳқиқоти фарохтар лозим аст.

Аз нуқтаи назари гузашта, хлорокин доруест, ки муддати дароз шинохта шудааст ва дар баъзе намудҳои муайяни вараҷа то ҳол муҳим аст. Аммо табдил додани доруҳои кӯҳна ба формулятсияҳои дӯстона барои кӯдакон, махсусан дар минтақаҳои дорои захираҳои маҳдуд, то ҳол масъалаи ҳалталаб мебошад. Аз нуқтаи назари имрӯз, ин таҳқиқот фикри қобили қабултар кардани як доруи мавҷударо бо стратегияи нави интиқолдиҳандаи фармасевтӣ дастгирӣ мекунад. Аз нуқтаи назари оянда, комплексҳои қатронӣ монанди CLQ-R метавонанд барои суспензияҳои даҳонии педиатрӣ, таблеткаҳои хоиданӣ ё шаклҳои вояи аз нав формулятсияшуда таҳия шаванд. Аммо барои он ки ин имкониятҳо ба маҳсулоти воқеӣ табдил ёбанд, бояд марҳилаҳои иловагӣ ба монанди устувории фармасевтӣ, истеҳсоли миқёспазир, якхелагии воя, таҳқиқоти таъм дар инсон, қобили қабул будан дар кӯдакон ва мувофиқати клиникӣ анҷом дода шаванд.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Усули таҳқиқот ба омода кардани комплекси хлорокин–қатрон ва сипас санҷидани он аз ҷиҳатҳои in vitro, in vivo, фармакокинетикӣ, биохимиявӣ ва эҳсоси таъм асос меёбад. Ҷадвали зерин ҷузъҳои асосии усулро ба таври муназзам ҷамъбаст мекунад.

Омодасозии комплекси CLQ-R: Хлорокин резинат бо усули batch, ки дар таҳқиқоти пешини гурӯҳи таҳқиқот тавсиф шудааст, омода карда шуд. Хлорокин ва қатрон бо таносуби дору/қатрон 1:1 истифода шуданд. Омехта дар муҳити кислотаии pH 4,5–5,0, дар ҳарорати хона, бо муҳофизат аз рӯшноӣ, 24 соат омехта карда шуд. Сипас филтратсияи вакуумӣ анҷом дода шуда, маҳсулот дар 30 °C 48 соат хушконида шуд. Самаранокии боркунии дору мувофиқи фарқи миқдори хлорокин дар супернатант пеш ва пас аз ташаккули комплекс бо спектрофотометрияи UV-visible ҳисоб шуд. Миқдори хлорокини асосии комплекс %42,6 гузориш шудааст.

Натиҷаҳои зиндамонии ҳуҷайраҳои Caco-2: CLQ ва CLQ-R дар консентратсияҳои 0,01; 0,1; 1; 10 ва 100 µM санҷида шуданд. Қатрон танҳо дар консентратсияи 74 µg/mL арзёбӣ шуд. Маълумоти Ҷадвали 1 чунин аст:

* p<0,05 ва ** p<0,01 ҳамчун маънодорӣ нисбат ба гурӯҳи назорат дода шудаанд. Ин ҷадвал нишон медиҳад, ки қатрон танҳо зиндамонии Caco-2-ро паст накардааст, аммо дар консентратсияи баланд CLQ ва CLQ-R зиндамониро маънодор кам кардаанд. Дар таҳқиқот баҳс шудааст, ки ин таъсир метавонад бо ҷамъшавии лизосомалии хлорокин ва таъсири он ба аутофагия мувофиқ бошад.

Фаъолияти in vitro зиддиплазмодиявӣ: CLQ ва CLQ-R дар паразитҳои P. falciparum 3D7 бо санҷиши флуорессенсии асосёфта ба SYBR Safe арзёбӣ шуданд. Дар Шакли 1A каҷи воя–ҷавоб, дар Шакли 1B муқоисаи IC₅₀ ва дар Шакли 1C маълумоти гемолиз нишон дода шудааст. Барои CLQ IC₅₀ 13 nM ва барои CLQ-R 30 nM гузориш шудааст. Гарчанде арзиши CLQ-R аз ҷиҳати оморӣ баландтар аст, он фаъолияти қавиро дар сатҳи наномолярӣ нигоҳ доштааст.

Натиҷаҳои фармакокинетикӣ: Профилҳои консентратсияи плазмавии CLQ ва CLQ-R пас аз як истифодаи даҳонӣ муқоиса шуданд. Параметрҳои ба воя нормализатсияшуда дар Ҷадвали 2 дода шудаанд:

Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки CLQ-R пас аз истифодаи даҳонӣ хлорокинро ба гардиши системӣ бурда метавонад ва профили умумии марузияти фармакокинетикии он ба CLQ-и озод наздик аст. Муаллифон мегӯянд, ки вақте CLQ-R ба меъда мерасад, хлорокин ба сабаби ионҳои рақобаткунанда ва муҳити кислотаии моеъҳои меъда аз матритсаи полимерӣ ҷудо мешавад.

Параметрҳои биохимиявӣ: Дар параметрҳои биохимиявии пас аз 24 ва 48 соат ченшуда, дар маҷмӯъ тағйире гузориш нашудааст, ки аз фосилаҳои истинодии физиологӣ берун равад. Дар охири 48 соат дар гурӯҳҳои CLQ ва CLQ-R баландшавии фосфатазаи ишқорӣ, ва дар гурӯҳи CLQ-R баландшавии креатинин аз ҷиҳати оморӣ маънодор ёфт шудааст; аммо гуфта шудааст, ки ин тағйирот аз фосилаҳои истинодӣ берун нарафтаанд. Ин натиҷа ҳамчун набудани сигнали равшани заҳролудии биохимиявӣ дар таҷрибаи кӯтоҳмуддати мушҳо шарҳ дода шудааст.

Санҷиши чоррӯзаи фурӯнишонии in vivo: Мушҳои C57BL/6 бо P. berghei ANKA GFP сироят карда шуда, бо CLQ, CLQ-R ё қатрон табобат шуданд. Паразитемия бо ситометрияи ҷараён пайгирӣ карда шуд. Арзишҳои фаъолияти зиддиплазмодиявии дар Шакли 2C додашуда чунинанд:

DPI маънои рӯзи пас аз сироятро дорад. Ин ҷадвал нишон медиҳад, ки CLQ ва CLQ-R паразитемияро қавӣ фурӯ нишон додаанд; қатрон бошад, танҳо фаъолияти зидди вараҷа нишон надодааст.

Санҷиши recrudescence ва зиндамонӣ: Дар Шакли 3A паразитемия пас аз табобат ва дар Шакли 3B маълумоти зиндамонӣ дар рӯзи 22 нишон дода шудааст. Гурӯҳи сироятшудаи бе табобат ва гурӯҳи қатрон дар рӯзи 22 %0 зиндамонӣ нишон додаанд. Дар гурӯҳи CLQ зиндамонӣ %40 ва дар гурӯҳи CLQ-R %50 гузориш шудааст. Ин натиҷа нишон медиҳад, ки CLQ-R дар маҳдуд кардани дубора боло рафтани сироят таъсири монанд ба хлорокини озод дошта метавонад.

Ниқобкунии таъм ва санҷиши афзалият: Дар санҷиши афзалияти ду шишагӣ дар 48 соат ба мушҳо об ва маҳлули санҷидашаванда якҷо пешниҳод шуд. Дар Шакли 4 холҳои истеъмол ва афзалият барои CLQ, CLQ-R ва қатрон нишон дода шудаанд. Барои CLQ холҳои афзалият тақрибан %34,9, барои CLQ-R %50,4 ва барои қатрон %59,17 дода шудааст.

Афзоиши холҳои афзалияти CLQ-R нисбат ба CLQ чунин ҳисоб карда мешавад:

[ 50.4 - 34.9 = 15.5 ]

Ин арзиш нишон медиҳад, ки CLQ-R нисбат ба хлорокини озод 15,5 нуқта холҳои афзалияти баландтар нишон додааст. Ин натиҷа муҳимтарин натиҷаи амалии таҳқиқот аз нуқтаи назари формулятсияи педиатрӣ мебошад; аммо санҷиши рафтории афзалият дар мушҳо барои қабули таъм ё риояи табобат дар кӯдакони инсон далели мустақими клиникӣ нест.

Натиҷаҳои умумии таҳқиқот:

• Комплекси CLQ-R бо таносуби дору/қатрон 1:1 омода шуда, миқдори хлорокини асосии %42,6 нишон додааст.
• Қатрон танҳо зиндамонии Caco-2-ро паст накардааст.
• Дар 100 µM ҳам CLQ ва ҳам CLQ-R зиндамонии ҳуҷайраҳои Caco-2-ро ба таври маънодор кам кардаанд.
• CLQ-R бар зидди P. falciparum 3D7 бо арзиши 30 nM IC₅₀ фаъолияти қавии зиддиплазмодиявиро дар сатҳи наномолярӣ нигоҳ доштааст.
• CLQ-R ва қатрон дар ҳуҷайраҳои сурхи хуни инсон фаъолияти пасти гемолитикӣ нишон додаанд; арзишҳои гемолиз аз %10 поён мондаанд.
• Параметрҳои фармакокинетикии CLQ-R ба CLQ-и озод наздик ёфт шудаанд.
• CLQ-R дар модели муши P. berghei ANKA паразитемияро қавӣ фурӯ нишон додааст.
• Дар санҷиши чоррӯзаи фурӯнишонӣ фаъолияти зиддиплазмодиявии рӯзи 14-и CLQ-R %98,54 дода шудааст.
• Дар санҷиши recrudescence зиндамонии рӯзи 22 дар ҳайвоноти табобатшуда бо CLQ-R %50 гузориш шудааст.
• Дар санҷиши афзалияти таъм бо ду шиша CLQ-R нисбат ба хлорокини озод холи афзалияти баландтар нишон додааст.
• Таҳқиқот нишон медиҳад, ки CLQ-R барои рушди формулятсияи даҳонии дӯстона ба педиатрия потенсиал дорад; аммо он таҳқиқоти клиникӣ нест.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Ин муҳтаво бар асоси таҳқиқоти бо номи “Functional Assessment of Chloroquine–Resin Complexes for Improved Oral Antimalarial Formulations”, ки аз ҷониби Tatiana A. Pádua, Mariana X. V. Passos, Ellen D. Mascarenhas, Thadeu Estevam M. M. Costa, Gabriel P. E. Silveira, Douglas P. Pinto, Ramayana M. M. Brito, Alexander G. Maier, Lilian L. Bueno, Eduardo G. R. de Sousa, Elaine C. Rosas ва Thiago F. Guimarães омода шудааст, таҳия гардидааст.

Навъи манбаъ мақолаи таҳқиқотии preprint мебошад. Дар матн ба таври равшан ибораи “This preprint research paper has not been peer reviewed” ҷой дорад. Аз ин рӯ, таҳқиқот аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст. DOI, қабули ниҳоии маҷалла ё маълумоте, ки анҷоми раванди ҳамтоарзёбиро нишон диҳад, аз рӯи матн тасдиқ карда намешавад.

Шарҳҳои дар ин мақола овардашуда бар усулҳо, ҷадвалҳо, шаклҳо, маълумоти фармакокинетикӣ, натиҷаҳои таҷрибаҳои in vitro ва in vivo, санҷиши афзалияти таъм ва хулосаҳои муаллифон дар таҳқиқот асос ёфтаанд. Иддаоҳои дар PDF набуда, аз қабили муваффақияти клиникӣ, самаранокии мустақим дар беморони кӯдак, маҳсулоти иҷозатномадор, кафолати табобат, кафолати бехатарӣ ё тавсияи истифода дар инсонҳо илова карда нашудаанд.

Таҳқиқот клиникӣ нест. Дар кӯдакони инсон қабули таъм, риояи табобат, фармакокинетика, бехатарӣ ё самаранокӣ арзёбӣ нашудааст. Дар қисми in vitro паразитҳои P. falciparum 3D7, ҳуҷайраҳои Caco-2 ва ҳуҷайраҳои сурхи хуни инсон истифода шудаанд. Дар қисми in vivo мушҳои Swiss Webster ва C57BL/6 истифода шудаанд. Самаранокии зидди вараҷа бо модели муши P. berghei ANKA арзёбӣ шудааст. Таъсири ниқобкунии таъм бошад, дар мушҳо бо санҷиши афзалияти ду шишагӣ омӯхта шудааст.

Ба хулоса омадан мумкин аст, ки комплекси CLQ-R аз нуқтаи назари рушди формулятсияи дӯстона ба педиатрия потенсиал дорад; аммо барои табдил ёфтани ин потенсиал ба маҳсулоти воқеии педиатрӣ таҳқиқоти иловагӣ дар бораи устувории фармасевтӣ, дурустии воя, миқёспазирии истеҳсол, таҳқиқоти таъм дар инсон, қобили қабул будан дар кӯдакон, бехатарӣ ва самаранокии клиникӣ заруранд. Ба сабаби мақоми preprint бояд ба назар гирифт, ки натиҷаҳо пас аз арзёбии ҳамтоён метавонанд тағйир ёбанд ё тасдиқи иловагӣ талаб кунанд.