Муайян кардани он ки кадом ҷузъҳои формулаҳои мураккаби гиёҳӣ ба таъсирҳои биологӣ саҳм мегузоранд, нисбат ба таҳлили доруҳои якҷузъӣ хеле душвортар аст. Як формулаи гиёҳӣ метавонад садҳо молекулаи гуногун дошта бошад; ин молекулаҳо аз рӯи қутбият, устуворӣ, миқдор, гузариш аз рӯда ва тарзи дучор шудан ба мубодилаи моддаҳо аз ҳам фарқ мекунанд.

Дар равишҳои анъанавии таҳлилӣ аввал таркиби кимиёвии формула муайян карда мешавад, сипас ҷузъҳои «прототипӣ», ки дар хун бетағйир пайдо мешаванд, ҷустуҷӯ мегарданд. Аммо пайдо нашудани як пайвастагӣ дар хун бо сохтори молекулавии аслии худ ҳатман маънои бетаъсир будани онро надорад. Баъзе пайвастагиҳо метавонанд аз ҷониби бактерияҳои рӯда таҷзия шаванд, қисми қандиашон хориҷ гардад, редуксия шаванд ё ба метаболитҳои дигар табдил ёбанд. Маҳсули ҳосилшуда метавонад нисбат ба пайвастагии модарӣ осонтар ҷаббида шавад ё хусусиятҳои биологии дигар дошта бошад.

Xi Chen ва ҳамкоронаш барои коҳиш додани ин нуқтаи кӯри таҳлилӣ ҷараёни корие таҳия карданд, ки микробиотаи рӯдаро мустақиман ба стратегияи интихоб ва филтркунии ҷузъҳо дохил мекунад. Усул ҳамчун таҳқиқоти исботи консепсия дар декоксияи нӯҳгиёҳии Qu-Zhuo-Tong-Bi, ё кӯтоҳаш QZTBD, ки анъанавӣ барои гиперурикемия ва подагра истифода мешавад, татбиқ гардид.

Дар марҳилаи аввал профили фарогири кимиёвии QZTBD бо UPLC-Q-TOF-MS^E муайян карда шуд ва дар маҷмӯъ 221 ҷузъ шиносоӣ ё муваққатан тавсиф гардид. Дар байни ин ҷузъҳо 51 терпен, 46 флавоноид, 32 алкалоид, 30 фенол, 11 липид, 9 аминокислота ва ҳосилаҳои онҳо, 9 кумарин, 5 стероид, 4 карбогидрат, 3 кислотаи органикӣ, 3 сапонин, 2 лигнан ва 16 ҷузъи дигар мавҷуд буданд.

Ҳангоми таҳлили зардоби калламушҳое, ки QZTBD гирифта буданд, аз 221 ҷузъ танҳо 42-тояш дар гардиши системавӣ дар шакли прототипии бетағйир ошкор карда шуд. Ба ибораи дигар, тақрибан 19 дарсади ҷузъҳои дар формула муайяншуда ҳамчун прототип дар зардоб дида шуданд, дар ҳоле ки 179 ҷузъ, ки тақрибан 81 дарсадро ташкил медиҳанд, дар шакли аслии худ ошкор нагардиданд.

Муҳаққиқон ба ҷойи он ки ин 179 ҷузъро бевосита «бетаъсир» шуморанд, онҳоро ба скрининги думарҳилавии микробиотаи рӯда ворид карданд. Дар марҳилаи аввал профилҳои наҷосати калламушҳои QZTBD-гирифтаи дорои микробиотаи муқаррарии рӯда бо калламушҳои QZTBD-гирифтае муқоиса шуданд, ки микробиотаи онҳо тавассути коктейли антибиотикҳои васеътаъсир кам карда шуда буд.

Дар наҷосати калламушҳои антибиотикгирифта сигнали 19 ҷузъ афзоиш ёфт. Муҳаққиқон ин ҷамъшавиро ҳамчун нишонае шарҳ доданд, ки дар шароити муқаррарӣ ин ҷузъҳо метавонанд аз ҷониби микроорганизмҳои рӯда истеъмол, таҷзия ё табдил дода шаванд. Ҳангоми кам шудани микробиота ин истифода ё табдилдиҳӣ коҳиш ёфта, ҷузъҳои модарӣ метавонанд дар наҷосат бештар боқӣ монда бошанд.

Дар марҳилаи дуюм ин 19 номзад бо микробиотаи наҷосатии 62 марди гирифтори подагра дар синни 25–47 сол дар муҳити анаэробӣ 72 соат инкубатсия карда шуданд. Ҳангоми муқоисаи муҳити дорои микробиота бо муҳити назоратии бидуни микроорганизм сигнали нӯҳ ҷузъ ба таври назаррас коҳиш ёфт.

Ин нӯҳ ҷузъ quercitrin, sweroside, hesperidin, 3-caffeoylshikimic acid, diosmin, avicularin, engeletin, 5-O-caffeoylshikimic acid ва dehydrocorydaline буданд. Аммо онҳо метаболитҳои микробии сохторашон муайяншуда нестанд. Таҳқиқот танҳо нишон медиҳад, ки сигнали пайвастагии модарӣ дар ҳузури микробиота коҳиш меёбад.

Аз байни ҳашт намояндае, ки ҳамчун прототип дар зардоб пайдо шуданд, ва ҷузъҳои номзад барои табдили микробиотавӣ, бо дарназардошти аҳамияти фармакологӣ ва мавҷудияти стандартҳои истинодӣ, 15 ҷузъ барои панели таҳлили миқдории ҳадафнок интихоб гардид. Ин панел аз engeletin, avicularin, corydaline, D-tetrahydropalmatine, proline betaine, quercitrin, astilbin, luteolin, diosmin, hesperidin, oxypeucedanin hydrate, palmatine, dioscin, sweroside ва dehydrocorydaline иборат буд.

Барои чен кардани ин 15 ҷузъ дар як таҳлил, дар дастгоҳи сегона-квадруполии LC-MS/MS усули мониторинги реаксияҳои сершумор, яъне MRM, таҳия карда шуд. Усул аз рӯи хосиятмандӣ, хаттият, ҳадди миқдорсанҷӣ, дақиқии асбоб, дақиқии дохилирӯзӣ ва байнирӯзӣ, такроршавандагӣ, барқароршавӣ ва устувории маҳлул дар давоми 24 соат арзёбӣ гардид.

Дар намунаҳои QZTBD ҷузъҳое, ки умуман бо миқдори баландтарин пайдо шуданд, astilbin, engeletin, quercitrin ва proline betaine буданд. Дар 15 намунаи Ҷадвали 2 барои astilbin тақрибан 107,203–315,430 µg/g, engeletin 22,925–105,325 µg/g, quercitrin 28,584–97,616 µg/g ва proline betaine 8,285–41,809 µg/g гузориш шудааст.

Дар марҳилаи охирини таҳқиқот саҳми микробиотаи рӯда ба таъсири фармакодинамикии QZTBD дар модели муши шабеҳ ба подагра, ки бо парҳези серравған ва кристаллҳои моносодий урат ба вуҷуд оварда шуда буд, омӯхта шуд. Истифодаи QZTBD кислотаи пешоб ва креатинини зардобро коҳиш дод ва бо беҳбудии нишондиҳандаҳои илтиҳоб, варами панҷа ва ҳассосияти механикӣ ба дард алоқаманд буд.

Вақте ки микробиотаи рӯда бо антибиотикҳо кам карда шуд, як қисми ин беҳбудиҳо заиф гардид. Ин натиҷа дастгирӣ мекунад, ки таъсири QZTBD дар модели муш ҳадди ақал қисман метавонад бо микробиотаи рӯда алоқаманд бошад.

Бо вуҷуди ин, таҷрибаи антибиотикӣ нақши сабабии бактерия, фермент ё метаболити мушаххасро нишон намедиҳад. Антибиотикҳо метавонанд микробиотаро ба таври васеъ тағйир диҳанд ва ба физиологияи мизбон низ мустақиман таъсир расонанд. Ғайр аз ин, таҷрибае гузаронида нашудааст, ки дар он 15 ҷузъи интихобшуда ё маҳсулоти табдили микробӣ алоҳида ба ҳайвонот дода шуда, таъсири онҳо санҷида шавад.

Саҳми асосии таҳқиқот исботи клиникии табобати нави подагра нест; балки нишон додани он аст, ки дар формулаҳои мураккаби гиёҳӣ тамаркуз танҳо ба молекулаҳое, ки дар хун бетағйир дида мешаванд, метавонад нокифоя бошад ва эҳтимоли табдилёбӣ тавассути микробиотаи рӯда метавонад ба интихоби аналитикии ҷузъҳо дохил карда шавад.

Чаро дар формулаҳои мураккаби гиёҳӣ «ҷузъи фаъол»-ро ба осонӣ муайян кардан мумкин нест?

Дар доруе, ки танҳо як моддаи кимиёвии холис дорад, молекулаи асосии мавриди таҳлил маълум аст. Баръакс, як декоксияи гиёҳӣ метавонад аз инҳо иборат бошад:

• Аз зиёда аз як гиёҳ,
• Аз садҳо ҷузъи асосӣ ва дуюмдараҷа,
• Аз молекулаҳои дорои қутбияти гуногун,
• Аз гликозидҳои дорои гурӯҳҳои қандӣ,
• Аз алкалоидҳо, флавоноидҳо ва терпенҳо,
• Аз фраксияҳои дар об ҳалшаванда ва дар равған ҳалшаванда.

Миқдори зиёди як ҷузъ дар формула маънои онро надорад, ки он аз рӯда бетағйир ҷаббида мешавад. Баръакс, молекулае, ки дар формула ба миқдори кам мавҷуд аст, метавонад ҷаббиши баланд ё фаъолияти биологии қавӣ дошта бошад.

Хусусан гликозидҳо, сапонинҳо ва баъзе молекулаҳои хеле қутбӣ метавонанд аз пардаи рӯда дар шакли прототипӣ маҳдуд гузаранд. Вақте ки гурӯҳҳои қанди ин пайвастагиҳо аз ҷониби ферментҳои микроорганизмҳои рӯда хориҷ мешаванд, агликонҳои хурдтар ва липофилитар метавонанд ҳосил шаванд.

Аз ин рӯ се саволи алоҳида бояд аз ҳам ҷудо карда шаванд:

1. Дар формула кадом молекулаҳо мавҷуданд?
2. Кадоме аз ин молекулаҳо бетағйир ба хун мегузаранд?
3. Аз онҳое, ки бетағйир ба хун намегузаранд, кадомашон дар рӯда ба маҳсулоти аз нигоҳи биологӣ муҳим табдил ёфта метавонанд?

Даъвои навоварии таҳқиқот махсусан дар он аст, ки саволи сеюм ба ҷараёни кори таҳлилӣ дохил карда мешавад.

Фарқи байни ҷузъи прототипӣ ва пешгузаштаи табдил

«Ҷузъи прототипии ҷаббидашуда» молекулаест, ки дар зардоб бо ҳамон шакли кимиёвие, ки дар формула мавҷуд аст, ошкор карда мешавад. Масалан, агар массаи молекулавӣ, вақти нигоҳдорӣ ва намунаи пора-порашавии MS/MS-и молекула бо стандарти дар формула мувофиқат кунад, он ҳамчун прототип ҷаббидашуда ҳисобида мешавад.

«Ҷузъе, ки ҳамчун прототип ҷаббида нашудааст» молекулаест, ки гарчанде дар формула муайян шудааст, дар зардоб бо ҳамон шакл ошкор намегардад. Барои ин чанд сабаби эҳтимолӣ вуҷуд дорад:

• Тамоман аз рӯда ҷаббида нашудан,
• Аз ҷониби микроорганизмҳои рӯда табдил дода шудан,
• Дар ҳуҷайраҳои рӯда метаболизм шудан,
• Ба метаболизми гузариши аввал дар ҷигар дучор шудан,
• Бо наҷосат бетағйир хориҷ шудан,
• Аз ҳадди ошкоркунии таҳлилӣ поён мондан,
• Дар вақти гирифтани намуна дар зардоб мавҷуд набудан.

Аз ин рӯ натиҷаи «прототип дар зардоб нест» бо натиҷаи «саҳми фармакологӣ надорад» як маъно надорад.

Микроорганизмҳои рӯда молекулаҳоро чӣ гуна тағйир дода метавонанд?

Дар таҳқиқот таъкид мешавад, ки микробиотаи рӯда дорои репертуари васеи ферментҳо мебошад. Ба онҳо дохил мешаванд:

• β-глюкозидаза,
• β-глюкуронидаза,
• Нитроредуктаза,
• Редуктаза,
• Эстераза ва ферментҳои шабеҳи микробӣ.

Ин ферментҳо метавонанд пайвандҳои қандиро канда, эфирҳоро гидролиз кунанд ва баъзе гурӯҳҳои функсионалиро ба реаксияҳои редуксия ё оксидшавӣ ворид намоянд. Дар натиҷа андозаи молекулавӣ, ҳалшавандагӣ ва таъсири мутақобилаи пайвастагии модарӣ бо ҳадафҳои биологӣ метавонад тағйир ёбад.

Аммо таҳқиқоти ҷорӣ чен накардааст, ки кадоме аз ин ферментҳо кадом ҷузъи QZTBD-ро табдил медиҳад. Табдили тавассути микробиота бо такя ба тағйири сигнали ҷузъҳо барои афзалиятгузорӣ интихоб шудааст.

Декоксияи Qu-Zhuo-Tong-Bi аз кадом гиёҳҳо иборат аст?

QZTBD аз нӯҳ ҷузъи гиёҳӣ омода шудааст:

Гиёҳҳо аввал дар оби деионизатсияшуда ба ҳаҷми даҳкаратаи худ як соат тар карда шуда, 40 дақиқа ҷӯшонида шуданд. Пасмондаи гиёҳӣ баъдан бо ҳашт ҳаҷм об бори дуюм 30 дақиқа ҷӯшонида шуд. Ду филтрат якҷо, филтр ва консентратсия шуда, дар 4°C нигоҳдорӣ шуданд.

Ҷараёни кори ҳамгирошудаи таҳқиқот

Таҳқиқот панҷ қабати асосии таҳлилӣ ва биологиро якҷо мекунад:

1. Профили фарогири кимиёвӣ: Муайян кардани ҳарчи бештари ҷузъҳои QZTBD бо UPLC-Q-TOF-MS^E.
2. Таҳлили дучоршавии зардобӣ: Интихоби ҷузъҳои прототипӣ, ки дар зардоби калламуш бетағйир пайдо мешаванд.
3. Скрининги табдили микробиота: Арзёбии ҷузъҳое, ки ҳамчун прототип дар зардоб пайдо намешаванд, тавассути таҷрибаи антибиотикӣ ва инкубатсияи микробиотаи наҷосати инсон.
4. Таҳлили миқдории ҳадафнок: Ченкунии ҳамзамони 15 ҷузъи интихобшуда бо усули LC-MS/MS-MRM.
5. Тасдиқи фармакодинамикӣ: Омӯхтани он ки кам кардани микробиота дар модели муши шабеҳ ба подагра таъсири QZTBD-ро тағйир медиҳад ё не.

Шакли 6A ин ҷараёни корро ба таври визуалӣ ҷамъбаст мекунад. Ҷузъҳои дар формула мавҷудбуда аввал ба прототипҳои ҷаббидашуда ва прототипҳои ҷаббида нашуда ҷудо мешаванд; гурӯҳи дуюм тавассути муқоисаи наҷосати калламуши зинда ва инкубатсияи микробиотаи инсон дар шароити лабораторӣ дубора филтр карда мешавад.

Чаро UPLC-Q-TOF-MS^E истифода шуд?

UPLC ҷузъҳоро дар сутун ҷудо мекунад, дар ҳоле ки спектрометри массаи Q-TOF таносуби масса/заряди ионҳоро бо дақиқии баланд чен мекунад.

Барои шарҳи мантиқи таҳқиқот, муносибати асосӣ дар спектрометрияи масса чунин нишон дода мешавад:

\[ m/z = \frac{\text{iyonun kütlesi}}{\text{iyonun yük sayısı}} \]

• m, массаи ионро,
• z, заряди электрикии ионро ифода мекунад.

Дар ҷамъоварии MS^E маълумоти энергияи бархӯрди паст ва баланд дар як таҳлил ба даст оварда мешавад. Маълумоти энергияи паст барои нишон додани иони асосӣ ва маълумоти энергияи баланд барои нишон додани маҳсулоти пора-порашавӣ кӯмак мекунад.

Ин хусусият дар омехтаҳои мураккаб муфид аст, зеро пешниҳоди сохторро на танҳо аз рӯи массаи молекулавӣ, балки бо назардошти рафтори пора-порашавӣ низ таҳия кардан мумкин аст.

Шароити UPLC-Q-TOF-MS^E

Тақсимоти кимиёвии 221 ҷузъ

Гуфта шудааст, ки хатои масса барои ионҳои пешгузаштаи пешниҳодшуда дар ҳудуди ±5 ppm боқӣ мондааст. Ин дақиқӣ пешниҳодҳои сохториро дастгирӣ мекунад, аммо маънои онро надорад, ки изомерҳои дорои формулаи молекулавии якхела танҳо бо массаи дақиқ ба таври қатъӣ аз ҳам ҷудо шудаанд.

Ҷузъҳое, ки бо стандарти истинодӣ муқоиса шудаанд, бо эътимоди бештар тасдиқ гардидаанд; қисми муҳими ҷузъҳои дигар бо истифода аз массаи дақиқ, намунаи пора-порашавӣ, пойгоҳи додаҳо ва муқоисаи адабиёт муваққатан тавсиф шудаанд.

Хроматограммаҳои Шакли 1 чиро нишон медиҳанд?

Дар Шакли 1 хроматограммаҳои шиддати қуллаи асосии намунаи QZTBD дар режимҳои иони мусбат ва манфӣ ҳамроҳ бо хроматограммаҳои маҳлули стандарти истинодӣ нишон дода шудаанд.

Мавҷудияти шумораи зиёди қуллаҳо, ки дар тамоми вақти таҳлил дар хроматограммаҳои QZTBD паҳн шудаанд, гуногунии кимиёвии формуларо нишон медиҳад. Хроматограммаҳои стандарти истинодӣ қуллаҳои камтар ва равшантар доранд. Ин муқоиса барои дастгирии минтақаҳои нигоҳдории баъзе ҷузъҳои ҳадаф дар дохили формулаи мураккаб истифода шудааст.

Рафтори пора-порашавии флавоноидҳо

Дар Шакли 2 спектрҳои MS/MS ва роҳҳои пешниҳодшудаи пора-порашавии luteolin, diosmin, astilbin ва engeletin оварда шудаанд.

Luteolin

Luteolin дар режими иони манфӣ иони пешгузаштаи m/z 285,0416 [M−H]⁻-ро додааст. Ионҳои m/z 151,0040 ва 133,0298 бо пора-порашавии Retro-Diels–Alder дар скелети флавон алоқаманд карда шудаанд.

Diosmin

Diosmin иони m/z 607,1671 [M−H]⁻-ро нишон додааст. Маҳсулоти m/z 299,0561 бо агликони diosmetin, ки пас аз хориҷ шудани гурӯҳи rutinoz ҳосил мешавад, алоқаманд карда шудааст.

Astilbin

Astilbin иони пешгузаштаи m/z 449,1098 [M−H]⁻-ро ба вуҷуд овардааст. Пас аз талафи ramnoz иони агликонии taxifolin дар m/z 303,0518; баъдан пас аз талафи об m/z 285,0413 ва бо пора-порашавии RDA иони m/z 151,0040 мушоҳида шудаанд.

Engeletin

Дар engeletin пас аз талафи ramnoz иони агликонии m/z 287,0561, пас аз талафи об m/z 269,0459 ва пора-порашавиҳои минбаъдаи RDA гузориш шудаанд.

Ин пора-порашавиҳо нишон медиҳанд, ки дар гликозидҳои флавоноидӣ ҷудо шудани гурӯҳи қандӣ чӣ гуна барои шиносоии сохтор маълумоти ташхисӣ медиҳад.

Рафтори пора-порашавии алкалоидҳо

Шакли 3 намунаҳои пора-порашавӣ дар режими иони мусбатро барои palmatine, dehydrocorydaline, corydaline ва D-tetrahydropalmatine нишон медиҳад.

• Palmatine: Аз иони пешгузаштаи m/z 352,1542 [M]⁺ бо талафоти CH₄ ва CO ионҳои m/z 336,1228 ва 308,1279 ҳосил шудаанд.
• Dehydrocorydaline: Аз иони m/z 366,1703 [M]⁺ маҳсулоти m/z 350,1393, 322,1441 ва 306,1136 гузориш шудаанд.
• Corydaline: Аз иони пешгузаштаи m/z 370,2014 [M+H]⁺ иони m/z 354,1703 ва иони ташхисии m/z 192,1019 ҳосил шудаанд.
• D-tetrahydropalmatine: Иони m/z 356,1861 [M+H]⁺ маҳсулоти m/z 324,1237, 192,1020 ва 176,0708-ро додааст.

Муҳаққиқон баррасӣ кардаанд, ки ин алкалоидҳо махсусан бо гиёҳи Yanhusuo алоқаманданд ва метавонанд дар байни ҷузъҳои эҳтимолии вобаста ба дард ва илтиҳоби формула арзёбӣ шаванд. Аммо дар ин таҳқиқот ин алкалоидҳо алоҳида дар озмоиши дард санҷида нашудаанд.

Намунаҳо аз синфҳои дигари сохторӣ

Дар Шакли 4 се синфи гуногуни сохторӣ нишон дода шудаанд:

• Sweroside: Гликозиди иридоидӣ; m/z 359,1341 [M+H]⁺ ва пас аз талафи глюкоза m/z 197,0807.
• Dioscin: Сапонини стероидӣ; m/z 869,4903 [M+H]⁺ ва бо талафоти пайдарпайи қандҳо m/z 723,4312, 577,3742 ва 415,3211.
• Oxypeucedanin hydrate: m/z 305,1021 [M+H]⁺; бо талафи C₅H₁₀O₂ m/z 203,0341 ва баъдан m/z 147,0340.

Дучоршавии прототипӣ дар зардоб чӣ гуна муайян карда шуд?

Профилҳои зардоби калламушҳои QZTBD-гирифта бо зардоби назоратӣ муқоиса шуданд. Барои он ки як ҷузъ ҳамчун прототип ҷаббидашуда қабул шавад, меъёрҳои асосӣ чунин буданд:

• Дар зардоби доругиранда мавҷуд будан ва ба ҳадди ақал ду баробари ҷавоби зардоби холӣ расидан,
• Вақти нигоҳдории мувофиқ бо ҷузъи дахлдор дар экстракти QZTBD,
• Мутобиқати массаи дақиқ ва формулаи молекулавӣ,
• Рафтори монанди пора-порашавии MS/MS.

Хроматограммаи зардоб дар Шакли 5 дар муқоиса бо сохтори хеле серқуллаи экстракти аслии QZTBD шумораи маҳдудтари ҷузъҳои прототипии муайяншударо нишон медиҳад.

42 ҷузъи прототипӣ аз кадом синфҳо иборат буданд?

• 10 терпеноид,
• 9 алкалоид,
• 8 флавоноид,
• 5 фенол,
• 4 кумарин,
• Яктоӣ кислотаи органикӣ, карбогидрат, аминокислота, стероид, антрахинон ва сапонин.

Бо дарназардошти дучоршавии зардобӣ, аҳамияти фармакологӣ ва мавҷудияти стандарти истинодӣ ҳашт намояндаи прототипӣ интихоб шуданд:

• Corydaline,
• D-tetrahydropalmatine,
• Palmatine,
• Astilbin,
• Luteolin,
• Oxypeucedanin hydrate,
• Proline betaine,
• Dioscin.

Таҷрибаи кам кардани микробиота бо антибиотик

Барои таҳлили ҷузъҳои зардоб ва наҷосат 24 калламуши наринаи SD ба чор гурӯҳ тақсим шуданд; дар ҳар гурӯҳ шаш ҳайвон буд:

Коктейли антибиотикӣ дар давоми 14 рӯз дар оби нӯшокӣ моддаҳои зеринро дар бар мегирифт:

• Vancomycin: 0,5 g/L,
• Ampicillin: 0,1 g/L,
• Neomycin: 1,0 g/L,
• Metronidazole: 1,0 g/L.

Дар тасвири иловагӣ лавҳаҳои кишти намунаҳои наҷосати калламуш ва муш дар ҳолати муқаррарӣ ва пас аз антибиотик муқоиса шудаанд. Дар гурӯҳҳои муқаррарӣ ташаккули зичи колонияҳо дида мешавад, дар ҳоле ки дар гурӯҳҳои антибиотикӣ коҳиши равшан вуҷуд дорад. Ин коҳиш ёфтани бактерияҳои қобили киштро дастгирӣ мекунад; аммо нишон намедиҳад, ки муҳити рӯда комилан стерил шудааст.

Чаро ҷузъҳои афзудаи наҷосат дар гурӯҳи антибиотикӣ муҳиманд?

Агар микробиотаи муқаррарӣ як ҷузъи модариро истеъмол ё ба маҳсулоти дигар табдил диҳад, вақте ки ин раванд бо антибиотик кам мешавад, ҷузъи модарӣ метавонад дар наҷосат бештар боқӣ монад.

Ин мантиқро чунин ҷамъбаст кардан мумкин аст:

\[ \text{Normal mikrobiyota: ana bileşen} \rightarrow \text{tüketim veya dönüşüm} \]

\[ \text{Mikrobiyota azaldığında: daha fazla dönüşmemiş ana bileşen} \]

Дар таҳқиқот муайян карда шуд, ки 19 ҷузъ дар наҷосати гурӯҳи ABX + QZTBD нисбат ба гурӯҳи муқаррарии QZTBD зиёд шудааст. Аммо сабаби афзоиш метавонад танҳо табдили микробӣ набошад; ҳаракати рӯда, ҷаббиш, таъсири антибиотикҳо ба метаболизми мизбон ё таркиби наҷосат низ метавонанд ба натиҷа таъсир расонанд.

Таҷрибаи in vitro бо микробиотаи наҷосати беморони подагра

Намунаҳои наҷосати инсон аз 62 иштирокчии марди 25–47-сола бо ташхиси артрити подагравӣ гирифта шуданд. Гуфта шудааст, ки аз иштирокчиён розигии огоҳона гирифта шуда, таҳқиқоти инсонӣ аз ҷониби кумитаи ахлоқ тасдиқ гардидааст.

Ҳангоми омода кардани суспензияи наҷосат:

• 200 mg наҷосат дар 800 µL PBS-и стерилӣ суспензия карда шуд.
• Зарраҳои калон бо сентрифуга дар 800 × g, дар 4°C, се дақиқа хориҷ карда шуданд.
• Суспензияи бактериявӣ бо муҳити BHI ба 3 × 10⁹ CFU/mL танзим карда шуд.

Се гурӯҳи инкубатсия ташкил карда шуд:

Намунаҳо дар муҳити анаэробии дорои 80 фоиз N₂, 10 фоиз H₂ ва 10 фоиз CO₂ дар 37°C барои 72 соат инкубатсия карда шуданд.

Дар гурӯҳи дорои микробиота сигнали нӯҳ ҷузъи модарӣ нисбат ба назорати бидуни микробиота ба таври назаррас коҳиш ёфт. Ин коҳиш дастгирӣ мекунад, ки ҷузъҳои мазкур метавонанд аз ҷониби микроорганизмҳо истеъмол ё табдил дода шуда бошанд.

Оё ин нӯҳ ҷузъ метаболитҳои микробӣ мебошанд?

Не. Дар таҳқиқот махсусан ҳамин фарқгузорӣ анҷом дода мешавад. Нӯҳ ҷузъ пайвастагиҳои модарии эҳтимолие мебошанд, ки ба ҳузури микробиотаи рӯда ҷавоб медиҳанд.

Таҳқиқот:

• Сохтори молекулавии метаболитҳои нави ҳосилшударо муайян накардааст.
• Нишон надодааст, ки кадом бактерия кадом ҷузъро табдил медиҳад.
• Ферменти масъули табдилро муайян накардааст.
• Ҷаббида шудан ё нашудани метаболити ҳосилшударо чен накардааст.
• Нишон надодааст, ки метаболит аз ҷузъи модарӣ фаъолтар аст.

Коҳиши сигнали ҷузъ метавонад ба чанд раванд, аз ҷумла биотрансформатсия, истеъмоли микробӣ, вайроншавии кимиёвӣ ё пайвастшавӣ ба ҳуҷайраҳо вобаста бошад. Назорати муҳити бидуни микробиота барои қисман ҷудо кардани вайроншавии худкор кӯмак мекунад, аммо ҳамаи механизмҳоро шарҳ намедиҳад.

Чаро аз нӯҳ номзад танҳо ҳафттояш ба панели ҳадафнок дохил шуд?

Ба ҳашт ҷузъи прототипии аз зардоб интихобшуда ҳафт ҷузъ аз скрининги микробиота илова шуда, панели миқдории 15 ҷузъ ташкил карда шуд.

3-caffeoylshikimic acid ва 5-O-caffeoylshikimic acid, ки дар скрининги микробиота муайян шуда буданд, дар байни 15 ҷузъи ниҳоӣ ҷой надоранд. Азбаски яке аз меъёрҳои интихоби таҳқиқот мавҷудияти стандарти истинодӣ буд, ворид нашудани ин ду ҷузъ ба панели миқдории ҳадафнок бо ҳамин меъёр мувофиқ аст.

Ин ҳолат як маҳдудияти муҳимро нишон медиҳад: панели таҳлилӣ на танҳо аз рӯи аҳамияти биологӣ, балки инчунин аз рӯи дастрасӣ ба стандарти боэътимоди истинодӣ шакл гирифтааст.

Таҷрибаҳои хориҷ кардани гиёҳҳо чиро нишон доданд?

Барои арзёбии он ки ҷузъҳои интихобшуда аз кадом гиёҳ сарчашма мегиранд, декоксияҳои назорати манфӣ омода шуданд, ки дар онҳо аз формулаи пурраи QZTBD як гиёҳ хориҷ карда шуда буд.

Гиёҳҳои хориҷшуда:

• Tufuling,
• Bixie,
• Yiyiren,
• Yanhusuo,
• Foshou буданд.

Тибқи харитаи гармии Шакли 6E:

• Манбаи асосии Astilbin ҳамчун Tufuling муайян шудааст.
• Саҳмгузори асосии алкалоидҳое мисли Corydaline, D-tetrahydropalmatine ва dehydrocorydaline Yanhusuo мебошад.
• Ҳангоми хориҷ кардани Foshou миқдори Proline betaine ва баъзе флавоноидҳои вобаста ба ситрусҳо коҳиш ёфт.
• Баъзе флавоноидҳо ва гликозидҳо намунаи равшани хоси танҳо як гиёҳро нишон надоданд.

Коҳиши як ҷузъ пас аз хориҷ кардани як гиёҳ дастгирӣ мекунад, ки он гиёҳ манбаи муҳим аст; аммо қатъиян нишон намедиҳад, ки ҷузъ танҳо дар ҳамон гиёҳ мавҷуд аст. Якчанд гиёҳ метавонанд ҳамон ё пайвастагии монандро таъмин кунанд.

Ҳадафи усули ҳадафноки LC-MS/MS

UPLC-Q-TOF-MS^E барои скрининги фарогири садҳо ҷузъ истифода шудааст. Баръакс, системаи сегона-квадруполии LC-MS/MS барои ченкунии интихобӣ ва миқдории ҷузъҳои интихобшуда истифода гардид.

Дар усули MRM квадруполи аввал иони пешгузаштаи муайянро интихоб мекунад, ион дар ҳуҷайраи бархӯрд пора мешавад ва квадруполи сеюм иони маҳсулоти муайянро пайгирӣ мекунад. Ҳамин тавр барои ҳар ҷузъ гузариши «иони пешгузашта → иони маҳсулот» метавонад мисли изи ангушти таҳлилӣ истифода шавад.

Шароити таҳлили LC-MS/MS

Гузаришҳои MRM барои 15 ҷузъ

Валидатсияи усул чӣ гуна анҷом дода шуд?

Усули ҳадафноки LC-MS/MS аз рӯи меъёрҳои зерин арзёбӣ гардид:

• Хосиятмандӣ: Муқоисаи хроматограммаҳои стандарти омехта, намунаи QZTBD ва ҳалкунандаи холӣ.
• Хаттият: Ба график гузоштани масоҳати қулла нисбат ба консентратсияи таҳлилшаванда.
• LOQ: Арзёбии пасттарин сатҳе, ки дар он ченкунии боэътимоди миқдорӣ имконпазир аст.
• Дақиқии асбоб: Шаш тазриқи пайдарпайи ҳамон маҳлул.
• Дақиқии дохилирӯзӣ: Таҳлилҳои такрорӣ дар ҳамон рӯз.
• Дақиқии байнирӯзӣ: Таҳлилҳо дар се рӯзи пайдарпай.
• Такроршавандагӣ: Шаш такрори мустақилона омодашудаи ҳамон намуна.
• Барқароршавӣ: Илова кардани стандарт дар сатҳи паст, миёна ва баланд.
• Устуворӣ: Таҳлили дубораи ҳамон намуна пас аз 0, 2, 4, 8, 12 ва 24 соат.

Дар таҳқиқот барқароршавӣ бо формулаи зерин ҳисоб карда шудааст:

\[ \text{Geri kazanım (\%)} = \frac{\text{ölçülen toplam miktar} - \text{başlangıç miktarı}} {\text{eklenen standart miktarı}} \times 100 \]

Муаллифон гузориш кардаанд, ки усул аз ҷиҳати хаттият, ҳассосият, дақиқӣ, такроршавандагӣ, барқароршавӣ ва устуворӣ қаноатбахш буд. Аммо ҳамаи арзишҳои миқдории валидатсия барои ҳар як таҳлилшаванда дар матни асосӣ як ба як оварда нашудаанд; барои ҷузъиёт ба ҷадвалҳои иловагӣ ишора шудааст.

Диапазонҳои миқдори ченшуда дар 15 намуна

Диапазонҳои зерин аз пасттарин ва баландтарин арзишҳои миёнаи 15 намунаи QZTBD дар Ҷадвали 2 гирифта шудаанд. Воҳидҳо µg/g мебошанд ва набояд ҳамчун мушаххасоти универсалӣ барои ҳамаи истеҳсолоти QZTBD тафсир шаванд.

Ин тағйирёбии васеъ нишон медиҳад, ки дар формулаҳои мураккаби гиёҳӣ истифодаи танҳо як ё ду нишондиҳандаи миқдоран баланд метавонад тамоми сохтори кимиёвиро намояндагӣ накунад.

Оё ҷузъи аз ҳама фаровон муҳимтарин ҷузъ аст?

Не. Дар баъзе намунаҳо миқдори Astilbin ба садҳо µg/g мерасад, дар ҳоле ки баъзе алкалоидҳо аз 1 µg/g камтаранд. Бо вуҷуди ин, ҷузъи миқдоран кам метавонад фаъолияти биологии баланд дошта бошад ё ба осонӣ ҷаббида шавад.

Аз ҳамин сабаб панели пешниҳодшудаи таҳқиқот танҳо аз рӯи миқдор ташкил нашудааст. Ҳангоми интихоб инҳо якҷо арзёбӣ шудаанд:

• Синфи кимиёвӣ,
• Қутбият,
• Дучоршавии прототипӣ дар зардоб,
• Эҳтимоли табдил тавассути микробиота,
• Аҳамияти фармакологӣ,
• Мавҷудияти стандарти истинодӣ.

Тарҳи таҷрибаи фармакодинамикӣ дар муш

Дар маҷмӯъ 30 муши наринаи C57BL/6J ба панҷ гурӯҳ тақсим шуданд; дар ҳар гурӯҳ шаш муш буд:

Ба гурӯҳҳои модел парҳези серравған дода шуд ва ҳар 10 рӯз ба кафи пои қафои рост 1 mg кристалли моносодий урат дар дохили 40 µL PBS тазриқ карда шуд. Табобат шаш ҳафта давом кард.

Кадом натиҷаҳо чен карда шуданд?

• Сатҳи кислотаи пешоб дар зардоб,
• Сатҳи креатинин дар зардоб,
• TNF-α,
• IL-6,
• IL-1β,
• NLRP3,
• Индекси варами пой,
• Ҳадди дарди механикӣ бо филаментҳои Von Frey,
• Индекси узвии ҷигар,
• Индекси узвии гурда.

Маънои асосии индекси варами пой дар таҳқиқот чунин аст:

\[ \text{Ayak şişliği indeksi} = \frac{\text{sağ ayak tabanı ölçümü}} {\text{sol ayak tabanı ölçümü}} \]

Пои рост тарафи тазриқи MSU мебошад. Баланд шудани таносуб зиёд шудани варамро дар тарафи рост нишон медиҳад.

Шакли 7 чиро нишон медиҳад?

Шакли 7 натиҷаҳои тамоми таҷрибаи фармакодинамикиро дар чанд панел пешниҳод мекунад:

• Дар гурӯҳи модел кислотаи пешоби зардоб баланд шудааст.
• Истифодаи QZTBD сатҳи кислотаи пешобро коҳиш додааст.
• Афзоиши креатинини зардоб, ки бо модел алоқаманд буд, бо QZTBD кам шудааст.
• Натиҷаҳои TNF-α, IL-6, IL-1β ва NLRP3 дастгирӣ кардаанд, ки илтиҳоб бо QZTBD саркӯб шудааст.
• Варами пой ва аллодинияи механикӣ дар гурӯҳи QZTBD беҳтар шудаанд.
• Беҳбудӣ дар гурӯҳи антибиотик + QZTBD нисбат ба гурӯҳи танҳо QZTBD заифтар боқӣ мондааст.
• Дар индексҳои узвии ҷигар ва гурда тағйироти манфии равшан дида нашудааст.

Заиф шудани таъсир пас аз антибиотик дастгирӣ мекунад, ки микробиотаи рӯда ҳадди ақал дар як қисми таъсири QZTBD нақш дорад. Аммо таъсир комилан аз байн нарафтааст; бинобар ин таҳқиқот намегӯяд, ки QZTBD танҳо тавассути микробиота таъсир мекунад.

Таҷрибаи антибиотикӣ сабабиятро то чӣ андоза нишон медиҳад?

Он ки гурӯҳи ABX + QZTBD нисбат ба гурӯҳи QZTBD ҷавоби заифтар додааст, барои саҳми микробиота натиҷаи муҳим аст. Бо вуҷуди ин, антибиотикҳои васеътаъсир:

• Ҳамзамон бисёр гурӯҳҳои бактерияро кам мекунанд,
• Метавонанд монеаи рӯдаро тағйир диҳанд,
• Метавонанд ба метаболизми кислотаҳои сафро ва энергия таъсир расонанд,
• Метавонанд ҷаббиши доруҳоро тағйир диҳанд,
• Метавонанд ба масунияти мизбон мустақиман таъсир расонанд.

Аз ин рӯ натиҷа нақши сабабии бактерия ё метаболити мушаххасро нишон намедиҳад. Барои натиҷаҳои дақиқтар интиқоли микробиота, колонизатсияи як бактерияи муайян, ингибиторҳои ферментҳои мушаххас ё истифодаи метаболитҳои муайяншуда лозим аст.

Аҳамияти таҳқиқот аз дидгоҳи гузашта

Фармакохимияи анъанавии зардобӣ ҷузъҳоеро, ки аз формула бетағйир ба хун мегузаранд, номзадҳои асосӣ барои моддаҳои эҳтимолии фаъол мешуморад. Ин равиш барои нишон додани прототипҳое, ки ба гардиши хун мерасанд, арзишманд аст; аммо метавонад қисми зиёди гликозидҳо ва пайвастагиҳои хеле қутбиро берун гузорад.

Ин таҳқиқот қисми ҷузъҳоеро, ки дар зардоб дида намешаванд, тавассути як канали дуюми таҳлилӣ, ки бо микробиотаи рӯда алоқаманд аст, арзёбӣ кардааст. Ҳамин тавр, он нисбат ба равиши «агар дар зардоб нест, хориҷ кун» чаҳорчӯбаи васеътари афзалиятгузориро пешниҳод мекунад.

Аҳамияти он барои имрӯз

Дар назорати сифати препаратҳои мураккаби гиёҳӣ одатан чанд нишондиҳандае интихоб мешаванд, ки чен карданашон осон аст ё ба миқдори зиёд мавҷуданд. Ин нишондиҳандаҳо на ҳамеша дучоршавии биологиро намояндагӣ мекунанд.

Панели дугонае, ки таҳқиқот пешниҳод мекунад:

• Ҷузъҳои прототипии мустақиман ҷаббидашаванда,
• Ҷузъҳои номзад барои табдил тавассути микробиотаи рӯдаро дар як усули миқдорӣ якҷо мекунад.

Ин равиш метавонад дар оянда ба интихоби нишондиҳандаҳои назорати сифат дар маҳсулоти ботаникӣ на танҳо аз рӯи фаровонии кимиёвӣ, балки инчунин аз рӯи роҳи истифодаи биологӣ мусоидат кунад.

Барои оянда кадом таҳқиқотҳо лозиманд?

• Метаболитҳои воқеии микробӣ, ки аз нӯҳ ҷузъи модарии коҳишёфта ҳосил мешаванд, бояд муайян карда шаванд.
• Метаболитҳо бояд бо метаболомикаи ҳадафнокнашудаи баландҳалшавӣ пайгирӣ шаванд.
• Навъҳои бактерия ва ферментҳои масъули табдил бояд муайян карда шаванд.
• Микросомаҳои ҷигар ва метаболизми ҳуҷайраҳои рӯда низ бояд ба скрининг илова карда шаванд.
• Ҷузъҳои модарии интихобшуда ва метаболитҳо бояд дар ҳайвонот алоҳида истифода шаванд.
• Бо фармакокинетика бояд чен карда шавад, ки оё табдили микробиота дучоршавии системавиро зиёд мекунад ё не.
• Пас аз истифодаи QZTBD дар инсон метаболомикаи зардоб, пешоб ва наҷосат бояд якҷо арзёбӣ шавад.
• Қобилияти табдилдиҳии микробии беморони подагра ва шахсони солим бояд муқоиса шавад.
• Шахсони дорои синну сол, ҷинс, ғизо ва таърихи антибиотикии гуногун бояд омӯхта шаванд.
• Панели 15 ҷузъ бояд дар лабораторияҳои мустақил ва партияҳои гуногуни истеҳсолӣ тасдиқ карда шавад.

Аз дидгоҳи ҳаёти ҳаррӯза ва саломатӣ онро чӣ гуна бояд хонд?

Таҳқиқот нишон намедиҳад, ки QZTBD барои инсон табобати клиникии исботшудаи подагра аст. Маълумоти фармакодинамикӣ аз модели муш гирифта шудааст ва вояҳои QZTBD-и истифодашуда мустақиман ба вояи инсон табдил дода намешаванд.

Саҳми умумитарини таҳқиқот барои ҳаёти ҳаррӯза нишон додани он аст, ки микробиотаи рӯда муҳите нест, ки маҳсулоти мураккаби даҳонӣ танҳо аз он ба таври ғайрифаъол гузаранд. Микроорганизмҳои рӯдаи одамон метавонанд ҳамон як ҷузъи гиёҳиро ба тарзҳои гуногун табдил диҳанд. Ин ҳолат метавонад дар оянда барои омӯзиши ҷавобҳои фарди-ба-фарди гуногун муҳим бошад.

Аммо таҳқиқоти ҷорӣ ҷавоби табобатии байни шахсон, вояи инфиродӣ ё муваффақияти клиникиро наомӯхтааст.

Ҷиҳатҳои қавии таҳқиқот

• Профили кимиёвӣ, дучоршавии зардобӣ, таҳлили наҷосат, инкубатсияи микробиотаи инсон, таҳлили миқдории ҳадафнок ва таҷрибаи фармакодинамикӣ дар як чаҳорчӯба муттаҳид карда шуданд.
• Дар QZTBD 221 ҷузъ ба таври фарогир тавсиф карда шуданд.
• Режимҳои иони мусбат ва манфӣ якҷо истифода шуданд.
• Пешниҳодҳои сохторӣ бо массаи дақиқ ва роҳҳои пора-порашавии MS/MS дастгирӣ шуданд.
• Ҷузъҳои прототипии дар зардоб мавҷуд ва ҷузъҳои мавҷуднабуда равшан ҷудо карда шуданд.
• Дар скрининги вобаста ба микробиота ҳам муқоисаи калламуши зинда ва ҳам микробиотаи инсон in vitro истифода шуданд.
• Гурӯҳи антибиотикӣ воситаи муқоисавӣ барои мавҷудияти микроорганизмҳо фароҳам овард.
• Назорати муҳити бидуни микробиота барои ҷудо кардани тағйироти худкори кимиёвӣ кӯмак кард.
• 15 ҷузъ диапазони васеи қутбият ва сохторро фаро мегиранд.
• Усули ҳадафноки LC-MS/MS бо бисёр меъёрҳои валидатсия арзёбӣ шуд.
• Бо таҷрибаҳои хориҷ кардани гиёҳҳо манбаъҳои эҳтимолии ҷузъҳо дар дохили формула омӯхта шуданд.
• Таҷрибаи фармакодинамикӣ саҳми микробиотаи рӯдаро ба таъсири QZTBD дар сатҳи функсионалӣ санҷид.
• Таҳқиқот номзадҳоро на ҳамчун «моддаҳои фаъоли қатъӣ» ё «метаболитҳои исботшуда», балки ҳамчун ҷузъҳои эҳтимолии афзалиятдодашуда пешниҳод кард.

Маҳдудиятҳои таҳқиқот

• Таҳқиқот preprint мебошад ва аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст.
• Ҳамаи 221 ҷузъ бо стандарти истинодӣ ба таври қатъӣ тасдиқ нашудаанд.
• Барои изомерҳое, ки массаи молекулавии якхела доранд, таъини муваққатии сохтор метавонад номуайянӣ дошта бошад.
• Аз 179 ҷузъе, ки дар зардоб пайдо нашуданд, танҳо нӯҳтояш ҳамчун номзади табдили микробиота барои афзалиятгузорӣ интихоб шудаанд.
• Роҳҳои ҷигарӣ, ҳуҷайраҳои рӯда ё дигар роҳҳои метаболикии 170 ҷузъи боқимонда арзёбӣ нашудаанд.
• Коҳиши ҷузъи модарӣ дар наҷосат сохтори метаболити ҳосилшударо нишон намедиҳад.
• Ҷаббиш ё фармакокинетикаи метаболитҳои микробӣ чен карда нашудааст.
• Фаъолияти биологии метаболитҳо алоҳида санҷида нашудааст.
• Навъҳои бактерия ё ферментҳои масъули табдил муайян нашудаанд.
• Истифодаи антибиотик на микробҳои мушаххас, балки қисми васеи ҷомеаи микробиро тағйир додааст.
• Таъсирҳои мустақими антибиотикҳо ба мизбонро пурра истисно кардан мумкин нест.
• Таҳқиқоти наҷосати инсон танҳо беморони марди подаграи 25–47-соларо фаро гирифтааст.
• Бо микробиотаи наҷосати шахсони солим муқоиса анҷом дода нашудааст.
• Наҷосати инсон танҳо дар инкубатсияи in vitro истифода шудааст; ба инсон QZTBD ҳамчун табобат дода нашудааст.
• Тасдиқи фармакодинамикӣ ба модели муш такя мекунад.
• Модели шабеҳ ба подагра дар муш ҳамаи хусусиятҳои подаграи инсонро намояндагӣ намекунад.
• Ҳеҷ яке аз 15 ҷузъи интихобшуда барои санҷиши таъсир алоҳида истифода нашудааст.
• Панели 15 ҷузъ аз дастрасии стандартҳои истинодӣ таъсир гирифтааст.
• Ду номзади caffeoylshikimic acid берун аз панели миқдорӣ мондаанд.
• Натиҷаҳои муфассали миқдории валидатсия барои ҳамаи таҳлилшавандаҳо дар матни асосӣ пешниҳод нашудаанд.
• Миқдори баъзе ҷузъҳо байни намунаҳои QZTBD ба таври назаррас тағйир ёфтааст.
• Бетағйир мондани индексҳои узвии ҷигар ва гурда далели фарогири амнияти токсикологӣ нест.
• Токсикияти дарозмуддат, токсикияти репродуктивӣ ё амнияти инсон арзёбӣ нашудааст.

Таҳқиқот чӣ мегӯяд?

• Дар QZTBD 221 ҷузъ тавсиф ё муваққатан шарҳ дода шудааст.
• Аз ин ҷузъҳо танҳо 42-тояш дар зардоби калламуш дар шакли прототипӣ ошкор шудааст.
• Таҳлили прототипии зардоб қисми зиёди ҷузъҳои формуларо фаро намегирад.
• Ҳангоми кам кардани микробиота бо антибиотик 19 ҷузъ дар наҷосат ҷамъ шудааст.
• Аз ин 19 ҷузъ сигнали нӯҳтояш ҳангоми инкубатсия бо микробиотаи аз беморони подагра гирифташуда коҳиш ёфтааст.
• Нӯҳ ҷузъ номзадҳои ҷузъҳои модарии табдилёбандаи вобаста ба микробиотаи рӯда мебошанд.
• 15 ҷузъи намояндагӣ дар ҳамон усули LC-MS/MS чен карда шудаанд.
• Astilbin, engeletin, quercitrin ва proline betaine нисбатан ба миқдори баланд пайдо шудаанд.
• QZTBD дар модели муши шабеҳ ба подагра нишондиҳандаҳои кислотаи пешоб, илтиҳоб, варам ва дардро беҳтар кардааст.
• Ҳангоми кам шудани микробиота як қисми ин таъсирҳо заиф шудааст.
• Микробиотаи рӯда метавонад ба интихоби ҷузъҳои эҳтимолии биоактив дар формулаҳои мураккаби гиёҳӣ дохил карда шавад.

Таҳқиқот чӣ намегӯяд?

• Нишон намедиҳад, ки QZTBD дар инсон табобати клиникии исботшудаи подагра аст.
• Исбот намекунад, ки 15 ҷузъи интихобшуда моддаҳои фаъоли қатъӣ мебошанд.
• Шиносоии метаболитҳое, ки аз ҷониби микробиота ҳосил мешаванд, пешниҳод намекунад.
• Қатъӣ намекунад, ки коҳиши нӯҳ ҷузъи модарӣ танҳо аз биотрансформатсия ба вуҷуд омадааст.
• Нишон намедиҳад, ки як навъи муайяни бактерия барои таъсири QZTBD масъул аст.
• Нишон намедиҳад, ки QZTBD бе микробиотаи рӯда комилан бетаъсир аст.
• Нишон намедиҳад, ки вояҳои дар муш истифодашуда барои инсон бехатар ё мувофиқанд.
• Бетағйир мондани индексҳои узвиро ҳамчун кафолати пурраи амният пешниҳод намекунад.
• Нишон намедиҳад, ки панели 15 ҷузъ барои ҳамаи маҳсулоти QZTBD стандарти сифат аст.
• Аз рӯи фарқиятҳои микробиота байни одамон тавсияи табобати инфиродӣ пешниҳод намекунад.

Усул ва Натиҷаҳои Таҳқиқот

Хулосаи техникии гурӯҳҳои таҷрибавӣ

Хулосаи миқдории марҳилаҳои филтркунии таҳлилӣ

Паёмҳои асосии илмии шаклҳо

Хулосаи муназзами натиҷаҳои асосӣ

• Бо UPLC-Q-TOF-MS^E 221 ҷузъ ба синфҳои кимиёвӣ ҷудо карда шуд.
• Хатоҳои масса дар ҳудуди ±5 ppm нигоҳ дошта шуданд.
• Дар зардоб танҳо 42 ҷузъ ҳамчун прототип пайдо шуд.
• 179 ҷузъ берун аз таҳлили прототипии зардоб монд.
• Пас аз антибиотик 19 ҷузъ дар наҷосат ҷамъ шуд.
• Ҳангоми инкубатсия бо микробиотаи подаграи инсон сигнали нӯҳтои онҳо коҳиш ёфт.
• Барои 15 ҷузъи намояндагӣ усули 28-дақиқагии LC-MS/MS-MRM сохта шуд.
• Ҳадафҳо диапазони васеи миқдор аз 0,013 µg/g то 315,430 µg/g-ро фаро гирифтанд.
• QZTBD дар мушҳо кислотаи пешоби зардоб ва аломатҳои илтиҳобии шабеҳ ба подаграро коҳиш дод.
• Мудохилаи антибиотикӣ ин таъсирҳои QZTBD-ро қисман заиф кард.
• Натиҷаҳо нишон доданд, ки ворид кардани табдили микробиота ба афзалиятгузории таҳлилӣ татбиқшаванда аст.

Ёддошт оид ба Манбаъ ва Усул

Ин мундариҷа ба таҳқиқоти Xi Chen, Yi Zhao, Siyue Song, Fei Luo, Xixian Kong, Yu Lou, Ye Xu, Fusen Chen, Yanfang Bai, Kaiyue Shi, Yuqing Wang, Yutong Hua ва Tiejuan Shao бо номи “A microbiota-informed UPLC-Q-TOF-MS^E and LC-MS/MS strategy for prioritizing potential bioactive constituents from complex herbal formulas: Application to Qu-Zhuo-Tong-Bi decoction” асос ёфтааст.

Таҳқиқот як мақолаи таҷрибавии preprint мебошад, ки барои афзалиятгузории ҷузъҳои эҳтимолан аз нигоҳи биологӣ муҳим дар формулаи мураккаби гиёҳӣ профили кимиёвии баландҳалшавӣ, зардоби калламуш, наҷосати калламуш, кам кардани микробиота бо антибиотик, инкубатсияи in vitro бо микробиотаи наҷосати инсон, таҳлили миқдории ҳадафноки LC-MS/MS ва модели муши шабеҳ ба подаграро муттаҳид мекунад.

Дар матн огоҳии равшани “This preprint research paper has not been peer reviewed” мавҷуд аст. Аз ин рӯ таҳқиқот аз арзёбии ҳамтоён нагузаштааст. Дар PDF маълумот дар бораи қабули мақола аз ҷониби маҷаллаи ҳамтосанҷ ё нашри ниҳоии тасдиқшуда вуҷуд надорад.

Таҳқиқот озмоиши клиникии табобатӣ дар инсон нест. Аз иштирокчиёни инсон танҳо намунаҳои наҷосат гирифта шуда, микробиотаи аз ин намунаҳо ҳосилшуда дар шароити лабораторӣ бо QZTBD инкубатсия шудааст. Ба инсон QZTBD дода нашудааст ва кислотаи пешоби зардоб ё натиҷаи клиникии подагра чен карда нашудааст.

Натиҷаҳои фармакодинамикӣ ба модели муши шабеҳ ба подагра, ки бо парҳези серравған ва кристалли MSU ба вуҷуд оварда шудааст, такя мекунанд. Таъсирҳо дар муш набояд ҳамчун кафолати муваффақияти табобат, амнияти воя ё самаранокии клиникӣ дар инсон тафсир шаванд.

Ибораи «ҷузъи табдилёбанда аз ҷониби микробиота» ба тағйири сигнали пайвастагии модарӣ дар муқоисаҳои антибиотикӣ ва инкубатсияи in vitro асос ёфтааст. Метаболитҳои микробии ҳосилшуда аз ҷиҳати сохторӣ муайян карда нашудаанд.

Аз 221 ҷузъе, ки бо UPLC-Q-TOF-MS^E шарҳ дода шудаанд, як қисми онҳо бо стандарти истинодӣ тасдиқ шуда, боқимонда бо истифода аз массаи дақиқ, намунаи пора-порашавӣ, пойгоҳи додаҳо ва муқоисаи адабиёт муваққатан таъин шудаанд.

Усули ҳадафноки LC-MS/MS барои чен кардани 15 ҷузъ дар ҳамон таҳқиқот валидатсия шудааст. Бо вуҷуди ин, тамоми диапазони хаттӣ, LOQ, RSD ва арзишҳои барқароршавии муфассал барои ҳар як таҳлилшаванда дар матни асосӣ ҷой надоранд; барои ҷузъиёт ба ҷадвалҳои иловагӣ ишора шудааст.

Таҷрибаҳои ҳайвонот аз ҷониби кумитаи ахлоқии Zhejiang Chinese Medical University бо рақами IACUC-20240219-15; таҳқиқоти намунаи наҷосати инсон бошад бо рақами 20240329-6 тасдиқ шудааст. Гуфта шудааст, ки аз иштирокчиён розигии огоҳона гирифта шудааст.

Муаллифон изҳор кардаанд, ки бархӯрди манфиатҳо вуҷуд надорад. Таҳқиқот аз ҷониби National Natural Science Foundation of China, Zhejiang Provincial Natural Science Foundation ва Zhejiang Provincial Special Support Program for High-Level Talents дастгирӣ шудааст.

Ин мақолаи тоҷикӣ танҳо бар асоси протоколҳои таҷрибавӣ, хроматограммаҳо, схемаҳои пора-порашавӣ, ҷадвалҳо, маълумоти ҳайвонот ва муҳокимаи муаллифон дар PDF-и боршуда омода шудааст. Даъвое дар бораи муваффақияти клиникии табобат, моддаи фаъоли қатъӣ, метаболити микробии тасдиқшуда, амнияти инсон ё самаранокии маҳсулоти тиҷоратӣ, ки дар PDF вуҷуд надорад, илова нашудааст.